AISLAMIENTO DE ENTEROBACTERIA

I.

OBJETIVO

Aislar enterobacterias en medios adecuados y desarrollar la

prueba de IMVIC.

II.

FUNDAMENTO TERICO
la familia enterobacteriaceae, est formada por bacterias patgenas
y no patgenas, su morfologa es en forma de pequeos bastones ,
son gram y fermentan la glucosa. Las que tienen mayor
importancia son las de los gneros Escherichia, Shigella y
Salmonella.
En el gnero Escherichia o coliformes se considera como indicador a
E. coli de origen fecal, por su frecuencia. Son lactosa positivos,
crecen a 37C a pH = 2- 7,4.
Las bacterias del gnero Salmonella son lactosas negativas, crecen a
37C a pH = 7- 2,6.
A 65C mueren en 15 min y a 100C en forma instantnea.

III.

EQUIPOS Y MATERIALES
Estufa
Autoclave
Mechero
Asas bacteriolgicas
Placas Petri, con medio de cultivo (EBM. BPLS, VRBA, VRBA,
GLUCOSADO y SS).
Tubos con caldos de enriquecimiento BRILA y Tetrationato
inoculados.
Medios de cultivo para la prueba de IMVIC.

IV.

PROCEDIMIENTO
Sembrar en estra del caldo Brila al VRBA y EBM.
Sembrar en estra del caldo tetrationato al BPLS y SS.
De ambos caldos pueden sembrar al VRBA Glucosado.
Luego de incluir a las temperaturas y tiempos adecuados
realizar la prueba de IMVIC para una colonia representativa de
E. coli.
Prueba de Indol

Inocular en tubos con caldo peptonado o triptosa.

Incubar por 24 horas adicionar de 2 a 3 gotas de reactivo
de kovacs por las paredes.

Dejar los tubos en reposo y observar la formacin de un

anillo de color rojo para el resultado positivo, o anillo color
amarillo para negativo.

Prueba del rojo de metilo

Inocular los tubos contenidos caldo MR VP.

Incubar los tubos por 72 horas a 37C.
Despus de las 72 horas adicionar a 5 gotas de solucin
Rojo de metilo y agitar.
Anotar como el Rojo de metilo positivo, la aparicin de un
color rojo, y como negativo la operacin de un color
amarillo.

Prueba de Voges Proskauer

Inocular los tubos de caldo MR VP.

Incubar a 37C por 48 horas.
A 1 ml de cultivo aadir 0.6ml de solucin de alfa naftol y
0.2ml de sol KOH 40%. Agitar. Dejar reposar de 2 a 4 horas.
Reaccin positiva: coloracin rosada o carmes.

Prueba del citrato

Inocular los tubos de citrato de Simmons.

Incubar a 37C por 24 horas.
Anotar como positivo un crecimiento visible, acompaado
de un cambio de color verde al azul.

MEDIOS DE CULTIVO
EMB agar- eosina - azul de metileno lactosa sacarosa
COLONIAS
MICROORGANISMOS
TRANSPARENTES,
DE
COLOR Salmonella y Shigella
AMBARINO
Verdosas con brillo metlico a la luz E.coli
reflejada, con el centro negro
azulado a la luz transmitida.
Ms grandes que las E.coli, Entrobacter, klebsiella y otros
mucosas, confluentes, con el centro
pardo grisceo a la luz transmitida.
MEDIOS DE CULTIVO
VRBA agar violeta cristal rojo neutro bilis
COLONIAS
MICROORGANISMOS
Rojas con halo de precipitacin Enterobacterias lactosa positivas:
rojizo de 1- 2 mm de dimetro.
coliformes, E.coli

Colonias con punta de alfiler

rosadas.
Ms grandes que las E.coli,
mucosas, confluentes, con el centro
pardo grisceo a la luz transmitida.

Enterococos
klebsiella
Enterobacteriaceas
negativas

eventualmente
lactosa

MEDIOS DE CULTIVO
BPLS agar verde brillante rojo de fenol lactosa sacarosa
COLONIAS
MICROORGANISMOS
Rojo rosadas con halo rojo
Lactosa negativas y sacarosa
negativos: Salmonella y otros.
Verde amarillentas con halo verde Lactosa positivos o sacarosa
amarillento
positivos:
E. coli, Citrobacter, Proteus vulgaris,
Klebsiella y otros.
No obstante a veces inhibicin
completa.
MEDIOS DE CULTIVOS
SS agar para salmonella y shigella
COLONIAS
MICROORGANISMOS
Transparentes, incoloras
Shigella y la mayora de Salmonella
Transparentes con centro negro
E.coli
Rosadas hasta rojas
Entrobacter, klebsiella y otros
Mayores que las E.coli rosada de Enterobacter aerogenes
color cremoso blanquecinas
opacas, mucosas.
V.
VI.
VII.

RESULTADOS
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
BIBLIOGRAFIA