I.1.

PREPARACIN DE MEDIOS:
La

preparacin

de

medios

para

el

desarrollo

de

procesos

de

fermentacin es una etapa fundamental para asegurar la productividad

de los mismos.
Los componentes de los medios constituyen los efectores externos de
naturaleza qumica que desempean un rol esencial en los procesos ya
que deben cumplir con los requerimientos del crecimiento y de
formacin de productos y adems suministrar energa para la sntesis de
metabolitos y para el mantenimiento celular.

Condiciones de Asepsia
Cuando se trabaja con cultivos microbianos, la tcnica asptica se utiliza
para prevenir la introduccin de organismos adicionales al cultivo.
Diagrama 01.

I.1.1.Preparacin del medio de mantencin, segn la TABLA 01

para el cultivo de Pichia stipitis NRRL Y-7124.

Se inicia teniendo en cuenta la referencia de composicin de medios de

cultivo de mantencin para Pichia stipitis NRRL Y-7124. Diagrama
02

Diagrama 01

ROTULAR
Mechero bunsen

Los Matraces

ENCENDER

SOSTENER

FLAMEAR

Matraz
-Nombre de cepa.
-Fecha.
Nombre del grupo.
Previamente desinfectado el rea
de trabajo con alcohol de 96
Si los matraces tienen un tapn
de algodn, aflojar un poco de
manera que no est muy
apretado
La boca de ambos matraces para matar
cualquier microorganismo presente en el
aire y que pueda contaminar en la
prctica.

RETIRAR

FLAMEAR

MANTENER
Inculo

SEMBRAR

FLAMEAR

Tapar con el meique

La Boca de ambos
matraces
Posicin inclinada (riesgo
de contaminacin sea
mnimo)
Matraz
estril

Boca
de
los
matraces
taparlos
de nuevo

Inculo

MEZCLAR

FLAMEAR

Matraces en el caldo
sembrado

Los tapones antes que

los coloques en los
matraces.

Diagrama 02
Agua destilada

MEDIR

En una matraz de
250 ml.

PESAR

Cantidades de cada
compuesto.

Agua destilada

MEDIR

CALENTAR

AGITAR

Hasta llegar a los 50

ml que se requiere.

En un Mechero Bunsen
(lograr
una
coloracin
celeste),
Constantemente con un
varilla por un minuto
(aparicin de la primera

PREPARAR

5 tubos de ensayo con

tapa.

AGREGAR

6-7 ml de la mezcla en
caliente a cada tubo de
ensayo, con pipeta de 10
ml.

ENFRIAR

Una vez tapados los tubos

de ensayos, por 1 hora.

COLOCAR

CALENTAR

COLOCAR

En un vaso precipitado, y
llevarlos a la olla a presin
(auto clave).
121 C

/ 20 min

A posicin inclinada a
Temp. Ambiente.

I.1.2. Preparacin del medio de activacin, segn la TABLA 02

para el cultivo de Pichia stipitis NRRL Y-7124.
Componentes para el medio de la
tabla N02

PESAR

Por separado.

ESTERELIZAR

Extracto de levadura en una

matraz.
Glucosa en un matraz de
125 ml.
Las sales en un tubo de

DISOLVER

ALISTAR

Sales
minerales

AGREGAR

Por separado los

componentes.

El volumen de las sales

minerales.

Al matraz que contiene el

extracto de levadura, con
la ayuda de la micro
pipeta.

AJUSTAR

EL pH a 7 de la solucin
que contiene glucosa y
xilosa.

ESTERELIZAR

121C 15 min.

MEZCLAR

I.1.3. Preparacin del medio de fermentacin, segn la TABLA

03 para el cultivo de Pichia stipitis NRRL Y-7124
Componentes para el medio de la
tabla N03

PESAR

Cada compuesto en agua

destilada:
Glucosa en un matraz de 1 L con agua
destilada.

DISOLVER

(NH4)2SO4 en un matraz con agua

destilada
Solucin

de

sales,

KH2

PO4,

(MgSO4).7H2O en un matraz con agua

Co
co
am
nt
bie
n

ESTERELIZAR

ENFRIAR

Las disoluciones por separado.