DESARROLLO DE PRACTICA 01

1. Investigue acerca de la simbologa de bioseguridad y anexe a su

protocolo los principales smbolos y su significado.

RIESGO BIOLGICO

2. GLOSARIO DE TERMINOS

Radiacin oxidante
Accin o efecto de oxidar. Emanacin de sustancias radioactivas.

Radiaciones ultravioleta germicidas

Son aquellas radiaciones emitidas por lmparas de radiacin ultravioleta, las cuales
tienen accin germicida sobre agentes microbiolgicos presentes en el aire y las
superficies. La mxima emisin se produce a una longitud de onda de 2537 nm.

Riesgo
Es la posibilidad o probabilidad de que ocurra un dao a la salud de las personas
causado a travs de accidentes, enfermedades, incendios, etc.

Sustancias alergizantes.
Son agentes qumicos que por contacto, inhalacin o ingestin, provocan una reaccin
sensibilizante de tipo alrgico en un nmero significativo de personas.

Sustancias corrosivas.
Son agentes qumicos que causan destruccin visible o alteraciones irreversibles en el
lugar de contacto con los tejidos.

Sustancias explosivas.

Son sustancias que por una reaccin qumica exotrmica, producen gases ovapores qu
e involucran un rpido aumento de volumen y liberacin de energa; enconsecuencia,
se producen ondas expansivas de sonido y calor. Estas reacciones se desencadenan
por percusin, inflamacin o chispa.

Sustancias incompatibles
Son sustancias que al estar en contacto, pueden reaccionar en forma violenta con
desprendimiento de calor y produccin de productos inflamables y txicos.

Sustancias infecciosas
Son aquellas que contienen microorganismos viables, incluidas bacterias, virus,
rickettsias, parsitos, hongos o recombinantes, hbridos o mutantes que pueden causar
enfermedades tanto en el hombre como en los animales. Se excluye toxinas, que no
contienen sustancias infecciosas

Sustancias inflamables.
Son sustancias qumicas que producen gases o vapores que a una temperatura dada,
alcanzan una concentracin en el aire que les permite inflamarse sobre el envase o
recipiente.

Sustancias irritantes.
Son agentes qumicos que provocan una alteracin primaria sobre la piel, mucosas y
ojos.

Sustancias txicas.
Son agentes qumicos que al introducirse al organismo por va oral, inhalacin,
contacto con la piel, producen dao al ser humano por accin de mecanismos fsicos,
qumicos o fisiolgicos (enzimticos) o por combinacin de ambos.

REFERENCIAS:

Manual de bioseguridad para laboratorios clnicos, Republica de honduras

secretaria de salud departamento de laboratorio nacional de vigilancia de la
salud.2009.

DESARROLLO DE PRACTICA 02

1. Reactivos en biologa molecular:

VA-044
En biologa molecular se utiliza para la separacin de las protenas
la electroforesis en gel de poliacrilamida. Esta tcnica conocida
como PAGE por sus siglas en ingls, polyacrylamide gel
electrophoresis, se basa en que las diferentes protenas migrarn a
una velocidad distinta en un medio cargado elctricamente. lVA044 (2,2' - Azobis [2- (2-imidazolin-2-il) propano]dihidrocloruro) es
un iniciador de la polimerizacin de la acrilamida, soluble en agua.
Las condiciones en que se produce la polimerizacin usando este
iniciador son suaves, a una baja temperatura y usando agua como
disolvente.
Entre las aplicaciones del VA-044 estn la polimerizacin de la
acrilamida y de otros monmeros. Cuando se compara con otros
iniciadores hidrosolubles en la polimerizacin de la acrilamida se
observa que es un producto recomendado para llevar a cabo esta
reaccin. Este reactivo puede ser usado para el mtodo de anlisis
cerebral desarrollado por Chung y colaboradores que permite
realizar una exploracin estructural y molecular de los sistemas
biolgicos intactos.
TAPS
Otro buffer comercializado por Wako es el cido N[tris(hidroximetil)metil]-3-aminopropanosulfnico (TAPS). El TAPS
tiene capacidad reguladora entre pH 7.7 y 9.1. Puede ser usado
para electroforesis capilar de ADN, como fase mvil para
cromatografa y en otras tcnicas de biologa molecular.

HEPES

El HEPES (4-(2-hidroxietil)-1-piperaznetanosulfnico) es uno de los

tampones zwitterinicos ms usados en experimentos biolgicos.
Tiene capacidad reguladora entre los valores de pH de 6.8 y 8.2 y
su pKa vara con la temperatura, disminuyendo la disociacin a
temperaturas ms bajas, caracterstica que no tienen otros
tampones con grupos funcionales como el fosfato y el carbonato y
por esto se usa para mantener las enzimas a bajas temperaturas,
se comporta igual que el agua en este aspecto. Por su baja
toxicidad y no interaccin con sustratos metlicos es el buffer de
eleccin para muchos cultivos de rganos y tejidos (donde adems
mantiene el cultivo sin cambios de pH debidos a la liberacin de
dixido de carbono que se produce), para tcnicas de deposicin
de protenas en microscopa electrnica y cuando son usadas
disoluciones de Hanks y Earle.

Bis-Tris

Bis-Tris es la forma abreviada de llamar al bis(2-hidroxietil)aminotris(hidroximetil)metano usado en biologa molecular para gran
cantidad de ensayos. En su estructura qumica se encuentra una
amina terciaria que es la encargada de mantener el equilibrio
cido base que le confiere capacidad reguladora a esta sustancia
en el rango de pH de 5.8 a 7.3. Puede ser usado en el ensayo de la
creatina quinasa, como medio protector de biomolculas
refrigeradas y en la biosntesis de muchas otras molculas de
inters en la investigacin biomdica.

mRNA Cloning Kit Wako

Este reactivo de laboratorio es til para la amplificacin del ARN

mensajero cuando se cuenta con pocas molculas de este. Est
especialmente diseado para utilizar con los anticuerpos
monoclonales anti Ago2comercializados por Wako. Puede ser
usado para cuantificar la cantidad de ARN etiquetado que est
presente en un cultivo. Adems se ha visto que es una
herramienta muy til para clonar ADN complementario obtenido a
partir de ARN mensajero asociado al complejo RISC (complejo
silenciador
inducido
por
el
ARN,
en
ingls:
RNAinducedsilencingcomplex).
PIPES
El nombre comn del PIPES es cido piperazn-N,N-bis(2etanosulfnico) y se usa tambin como tampn en ensayos
biolgicos. Es uno de los buffers estudiados por Good y
colaboradores en la dcada de los 60. Este tampn cido tiene una
constante de equilibrio cercana al pH fisiolgico por lo que es muy
til en experimentos que precisan del cultivo de clulas, resiste el
paso por la autoclave, lo que le confiere una ventaja adicional para
ser seleccionado como tampn cido en estudios que requieren la
fijacin de clulas.
ACES
ACES o cido N-(2-acetamido)-2-aminoetanosulfnico es un
tampn zwiterinico con capacidad reguladora en el rango de pH
entre 6.4 y 7.4. Es til para la separacin de protenas por
electroforesis de enfoque isoelctrico (IEF) en dos dimensiones.
ADA
El cido N-(Carbamoilmetil)iminodiactico o ADA es un tampn
biolgico til en el rango de pH entre 6.4 y 7.4, usado para la
preparacin de gradientes de pH con sustratos inmovilizados, por
ejemplo en una columna capilar monoltica.

BES

El tampn conocido como BES es el cido N,N-Bis(2-hidroxietil)-2aminoetanosulfnico, este buffer biolgico tiene utilidad en mucho
procesos dependientes del pH, entre los que se encuentra la
separacin por electroforesis capilar.
GoldMAN
GoldMAN es una solucin de nanopartculas magnticas de
hierro con coloides de oro. Estas nanopartculas pueden utilizarse
para transferir biomolculas como ADN, ARN y oligonucletidos a
las clulas. Permite lograr la sensibilizacin directa de los vectores
vricos en la regin de oro de la nanopartcula, una alta eficiencia
en la transferencia de genes a las clulas sin que contengan el
receptor del virus y pueden utilizarse para separar por
magnetismo y purificar aquellas clulas donde se han expresado
los genes del virus. Adems no presentan citotoxicidad y se
pueden usar en varios tipos de clulas.
TES
El cido N-[tris(hidroximetil)metil]-2-aminoetanosulfnico, conocido
como TES que es usado, entre otras aplicaciones, para el
crecimiento de clulas epidrmicas a pH entre 7.4 y 7.9. Es
tambin un buffer de Good.
Bicine
El bicine, nombre con el que se conoce a la N,N-bis(2hidroxietil)glicina es un tampn recomendado para ensayos
bioqumicos que se realicen a bajas temperaturas. Tiene un pKa de
8.35 y ha sido usado en ensayos de cristalografa, determinacin
cuantitativa de biomolculas y muchos otros experimentos de
biologa molecular.
Tricine
La N-tris-(hidroximetil)metilglicina conocido como Tricine es un
buffer usado en el rango de pH de 7.4 a 8.8. Este buffer se usa en
la separacin de pptidos y protenas de bajo peso molecular, por
la tcnica de electroforesis, en gel y de membrana. Su gran fuerza
inica causa mayor movilidad de las especies inicas y una menor
velocidad de migracin de las protenas. Adems es usado con
gran eficacia en los ensayos de biologa molecular que utilizan
luciferasa para cuantificar la expresin de un vector de expresin
transfectado mediante la catlisis de la reaccin del ATP con la
luciferina.
MES

El buffer preparado con MES (cido 4-morfolnetanosulfnico) es

til para el cultivo celular de plantas en el rango de pH entre 5.8 y
6.5. Es usado como fase mvil para aislar la tubulina de cerebro
por cromatografa de gel. Como otros tampones biolgicos de los
denominados buffers de Good presenta alta solubilidad en agua y
poca en otros disolventes, fcil de sintetizar, es estable y tiene
poca absorcin en el visible.
Vector de expresin de protenas fluorescentes
bsicas Evrogen (TagFP)
El marcaje o etiquetado de protenas u otras biomolculas con
compuestos fluorescentes es necesario para diversos estudios
moleculares. Wako es distribuidor del vector de expresin de
protenas fluorescentes desarrollado por Evrogen (empresa rusa
liderada por cientficos que se dedican a producir productos para
biologa molecular y celular). Se puede realizar el etiquetado de las
protenas de inters con otras que fluorescen a diferentes
longitudes de onda, lo que posibilita hacer estudios de localizacin
e interaccin de estas. El hecho de contar con protenas que
fluorescen en todo el rango del espectro visible hace que se
puedan marcar diferentes estructuras subcelulares con varios
colores para diferenciarlas entre s.

.
CAPS
Se
conoce
como
CAPS
al
cido
3-(ciclohexilamino)-1propanosulfnico, buffer utilizado en experimentos de biologa
molecular, de naturaleza zwiterinica, que puede usarse en el
rango de pH entre 7.9 y 11.1. Entre otras aplicaciones se
encuentra el secado de protenas, la secuenciacin y anlisis de
aminocidos y todos aquellos experimentos donde la glicina puede
actuar como interferente.
CHES
El cido 2-(ciclohexilamino)etanosulfnico (CHES) es un tampn
muy utilizado en enzimologa. Puede ser usado como buffer en el
rango de pH entre 8.6 y 10, por lo que es til en procesos que
ocurren en medio bsicos o cuando se quiere estudiar un proceso
determinado a varios valores de pH para conocer su dependencia
con el pH.
EPPS
El EPPS (cido 3-[4-(2-hidroxietil)-1-piperazinil]propanosulfnico),
tambin conocido como HEPPS, tiene un pKa de 8. Es usado como

buffer en la regin entre 7.6 y 8.6, comnmente en enfoque

isoelctrico ultrafino.
MOPS
Se conoce como MOPS al cido 3-(N-morfoln)propanosulfnico. Es
un buffer cuyo pKa es de 7.2, por lo que se usa en muchos
experimentos biolgicos que se realizan a un pH cercano al pH
neutro. Este buffer se recomienda para la electroforesis en gel de
acrilamina. Es uno de los tampones que componen la disolucin de
corrida para el fraccionamiento del ARN.
pEBMulti
El pEBMulti es un vector de expresin de genes para ser usado en
primates y tambin en lneas celulares provenientes de perros.
Entre las ventajas que reporta la utilizacin de este producto se
encuentra el menor tiempo que se necesita para lograr una lnea
celular estable.
Adems permite la eliminacin de plsmidos transfectados de las
lneas celulares y no es necesario llevar a cabo la confirmacin de
que el vector se ha integrado correctamente en el genoma
hospedero como en el caso de otros vectores de expresin.
REFERENCIAS:
http://www.wakolatinamerica.com/blog-reactivos/post/20reactivos-de-laboratorio-para-biologia-molecular/

DESARROLLO DE PRACTICA 03
1. Determinar el peso molecular de cada reactivo empleado en
la prctica y antelos en su protocolo.
Tris HCl

EDTA
NaCl
SDS
TBE
NaOH
ETANOL
HCl
KOH

157,56 g/mol
292,24 g/mol
58,44 g/mol
288,372 g/mol
475.21g/mol
39,997 g/mol
46,06844 g/mol
36,46094 g/mol
56,1056 g/mol

2. Investigar acerca de los diferentes materiales (o equipos) que

pueden emplearse para la medicin de volmenes en funcin
de la precisin y exactitud requeridas en biologa molecular.
Anxelo a su protocolo.

Matraz Erlenmeyer

Es un recipiente que permite contener sustancias o calentarlas.

Matraz Aforado

En qumica, un matraz volumtrico o aforado es un recipiente con forma de pera, fondo

plano y un cuello largo y delgado. Suelen fabricarse en materiales como vidrio, vidrio
borosilicatado o polipropileno. Algunos tienen una marca grabada alrededor del cuello
que indica cierto volumen de lquido que es el contenido a una temperatura concreta
(usualmente 20C),

Pipetas Normal y Volumetrica

Son utensilios que permiten medir volmenes. Las hay en dos presentaciones:
o

Pipetas graduada: Es un elemento de vidrio que sirve para dar

volmenes exactos, con esta pipeta, se pueden medir distintos
volmenes de lquido, ya que lleva una escala graduada.

Pipeta volumtrica: Es un elemento de vidrio, que posee un

nico valor de medida, por lo que slo puede medir un volumen.

Las pipetas graduadas permiten medir volmenes intermedios, pues estn graduadas,
mientras que las pipetas vulumtricas slo miden el volmen que viene indicado en
ellas.

Probeta Normal y Graduada

Es un utensilio que permite medir volmenes estn hechas normalmente de vidrio pero
tambin las hay de plstico. As mismo las hay de diferentes tamaos (volmenes).

Bureta

Es un utensilio que permite medir volmenes, es muy til cuando se realizan

neutralizaciones.

Vasos de precipitado

Son utensilios que permiten calentar sustancias hasta obtener precipitados.

3. Elabore una tabla con las ecuaciones empleadas en los

clculos para preparacin. Anxela a su protocolo.

REFERENCIAS:

http://portalecuador.ec/module-Pagesetter-viewpub-tid-2-pid-14.php

http://www.uia.mx/campus/publicaciones/quimanal/pdf/formulari
o.pdf

DESARROLLO DE PRACTICA 04
1. Investigue acerca de las funciones que cumplen cada uno de los
reactivos empleados en la extraccin de ARN, segn el protocolo
desarrollado.
TRIZOL: El Trizol es un lquido rosa brillante o rosa translucido. El olor del
fenol es extremadamente fuerte. El TRIzol mantiene la integridad de los
cidos nucleicos durante la homogeneizacin del tejido. Adems rompe
clulas y componentes celulares. La homogenizacin del tejido tiene que
hacerse en frio para evitar la degradacin del ADN o el ARN, pero una vez
aadido el Trizol su degradacin se ve seriamente reducida.
CROROFORMO: afina la interfase y disuelve lpidos
ISOPROPANOL: precipita el ARN.
2. Investigue acerca de las funciones que cumplen cada uno de los
reactivos empleados en la extraccin de ADN, segn el protocolo
desarrollado.
FENOL: El fenol es, naturalmente, un poco soluble en agua, y da una
interfaz difusa, que se afila por la presencia de cloroformo y alcohol
isoamlico reduce la formacin de espuma. La mayora de las soluciones
tambin tienen un antioxidante, como oxidado daos fenol los cidos
nucleicos. Para la purificacin de ARN, el pH se mantiene a alrededor de 4,
que retiene ARN en la fase acuosa preferentemente. Para la purificacin
del ADN, el pH es por lo general cerca de 7, momento en el que todos los
cidos nucleicos se encuentran en la fase acuosa.
CROROFORMO: afina la interfase y disuelve lpidos
ISOPROPANOL: precipita el ADN.
SDS: se utiliza para purificacin en eliminacin de membranas.
3. Foto de resultados :

REFERENCIAS:
o

https://biologiamolecularinteractiva.files.wordpress.com/2013/01
/practica-no-3-extraccion-de-arn.pdf

o
o

http://www.fbmc.fcen.uba.ar/materias/ingen/practicos/arn/clases
/Extraccion%20ARN.pdf
http://biologia.laguia2000.com/tecnicas-en-biologia/trizol