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Inicialmente
se
produce
una
disminucin de sustrato, o aparicin de
producto, que es lineal con el tiempo.
Este comportamiento cintico es conocido como curva de saturacin hiperblica por el sustrato
denominado enzimas michaelianos. Como principal desviacin, algunos enzimas muestran
curvas sigmoides de saturacin por el sustrato.
La enzima bromelina se inhibe por derivados mercuriales como el p-CMB (Acido pcloromercuribenzoico) lo que demuestra que los grupos SH reactivos son necesarios para la
actividad. Esta prdida de actividad puede ser recuperada con concentraciones crecientes de
cistena. El agente nuclefilo es el tomo de azufre de la cistena que formara un intermediario
covalente durante la reaccin.
SUSTRATO
La eficiencia cataltica de la bromelina se determin usando casena como sustrato.
El proceso de estudio para la actividad enzimtica sobre la casena se llev de la siguiente
manera:
Concentracin de enzima 4,5e-5 M.
Se prepararon 100 mL de una solucin acuosa de casena al 2% en peso, dando una
concentracin de 8e-4. Lo ms relevante para esta medicin es que la concentracin de
sustrato sea mayor que la enzima.
Preparacin de solucin buffer fosfato 0,1M pH 6 y una solucin de cido actico 1M.
Se hicieron pequeas mezclas de las soluciones de enzima y sustrato en presencia de buffer,
3mL de cada una y 1,5mL de buffer. Se adiciono a la mezcla 3mL de la solucin cido actico 1M
con el objetivo de parar la reaccin. Este ltimo componente se coloc cada 30seg hasta
completar 8 muestras.
ACTIVIDAD ENZIMATICA
Se comprob el pH ptimo de la bromelina mezclando 3 mL de solucin de casena 8e-4 y 3mL
de solucin de enzima 4,4e-5M, en presencia de 1,5mL de buffer fosfato 0,1M. como se puede
observar en la figura, el rango de pH de la enzima es de 6 a 8.
Bajo la accin del mismo buffer y deteniendo de nuevo la reaccin con cido actico 1M, se
puede hallar la velocidad expresada en unidades pticas por segundo dividiendo la absorbancia
ptica entre el tiempo (180seg) en todas las muestras.
Se puede observar que la velocidad mxima con que acta la bromelina corresponde
aproximadamente a 9,8e-4 U.O/seg. Segn la cintica de Michaelis, la interpolacin al eje de las
abscisas del valor correspondiente a la mitad de la velocidad es equivalente a Km.
El valor de Vmax/2 equivale a 4,912e-4 U.O/seg, dato que da como resultado una constante de
Michaelis con el valor de 7,962e-4M.
APLICACIONES
La bromelina extiende su uso a la industria crnica, cervecera, vincola, cosmtica, farmacutica,
eso sin contar las amplias aplicaciones clnicas en la que se ha visto exitosamente aplicada.
La enzima se utiliza principalmente como ablandador de carne (tiene buena actividad sobre los
tendones y el tejido conectivo rico en elastina) y para hidrolizar protenas solubles de la cerveza
que pudieran precipitar y causar opacidad por el enfriamiento.
La Bromelina tiene una actividad hidroltica sobre el tejido conectivo, lo que hace que estas
enzimas tengan la capacidad de proporcionar un rpido ablandamiento de la carne vacuno
adulto. La aplicacin para degradar el material fibroso de los crnicos, tanto la cascara, como la
pulpa y el corazn de la pia contienen bromelina para ejercer un efecto ablandador sobre las
carnes.
En la industria cervecera, la bromelina es usada como aclaradora de tal bebida, se aplica sobre
el producto en la instancia final de su fabricacin para que hidrolice ciertos complejos proteicos
formados durante la fermentacin de la bebida. Resulta ser una enzima ideal para la fabricacin
de cerveza ya que las protenas hidrolizadas por la bromelina dejan como residuos polipptidos
que dan sabor a la cerveza y le proporcionan adems la capacidad de generar espuma.
En la industria de los aceites vegetales se utiliza para refinar aceites y otros productos grasos. Al
aplicar la bromelina, esta es capaz de degradar impurezas del producto y producen por medio
de una floculacin que los residuos floten sobre el producto, siendo fcil separarlos por
decantacin o filtracin.
BIBLIOGRAFA