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Qumica Experimental L3, Turma 02, Experimento N02, 2010.2.

CROMATOGRAFIA
Ivan Mendes Dionzio.

Departamento de Qumica Fundamental, Universidade Federal de Pernambuco, CEP 50.740-540, Cidade Universitria,
Recife PE, Brasil.
Professor: Jefferson Luiz Princival
E-mail: ivanmendes.ufpe@gmail.com
Realizado em 17/09/2010; Apresentado em 01/10/2010

Introduo
Um dos problemas que continuamente desafiam os
qumicos a separao e a purificao de um ou mais
compostos de uma mistura complexa. Cromatografia
um processo fsico de separao, no qual os componentes
a serem separados distribuem-se em duas fases: fase
estacionria e fase mvel. A fase estacionria pode ser
um slido ou um lquido disposto sobre um suporte
slido com grande rea superficial. A fase mvel, que
pode ser gasosa, lquida ou ainda um fluido supercrtico,
passa sobre a fase estacionria, arrastando consigo os
diversos componentes da mistura.
De maneira mais completa, a tcnica baseia-se no
princpio da adsoro seletiva (que no deve ser
confundida com absoro), um tipo de adeso. A tcnica
foi descoberta em 1906 pelo botnico italiano
naturalizado russo Mikahail Tswett, mas no foi
largamente utilizada at os anos 30. Tswett separou
pigmentos de plantas (clorofilas) adicionando um extrato
de folhas verdes em ter de petrleo sobre uma coluna
com carbonato de clcio em p em um tubo de vidro
vertical. Enquanto a soluo percolou atravs da coluna
os componentes individuais da mistura migraram para
baixo em taxas diferentes de velocidades e ento a coluna
apresentou-se marcada com gradientes horizontais de
cores. A esse gradiente deu-se o nome de cromatograma.
Portanto, um cromatograma o resultado de um
mtodo de separao de misturas e identificao de seus
componentes. Esta separao depende da diferenna
entre o comportamento dos analitos entre a fase mvel e
a fase estacionria. A interao dos componentes da
mistura com estas duas fases influnciado por
diferentes foras intermoleculares, incluindo inica,
bipolar, apolar, e especficos efeitos de afinidade e
solubilidade.
Tcnicas de Cromatografia
Existem quatro tipos principais de cromatografia:
cromatografia em papel, cromatografia de camada fina,
cromatografia gasosa e cromatografia lquida de alta
eficincia. A seleo do tipo de cromatografia adequada
depende dos materiais a serem isolados e,
freqentemente, diversos mtodos cromatogrficos
podem ser usados seqencialmente para que seja obtido
um composto na forma pura.
H uns cem tipos de cromatografia em papel; a
maior parte de interesse, mas tambm so possveis
separaes inorgnicas que esto recebendo atenes
crescentes. Seria possvel, em princpio, delinear um
sistema completo, de anlise qualitativa inorgnica,

baseado em separaes cromatogrficas, especialmente


fazendo uso de papel de filtro impregnado com vrios
reagentes. Na prtica, entretanto, esse mtodo melhor
quando combinado com outras tcnicas, por ser mais
vantajoso em algumas separaes que em outras.
Cromatografia em Papel
Como uma alternativa da tcnica em coluna, pode
realizar a cromatografia em uma folha ou tira de papel
adsorvente. Para vrias finalidades, deve-se preferir papel
de filtro celulose. to hidrfilo que normalmente
mantm um revestimento de gua (totalmente
imperceptvel) adsorvida do ar. Portanto a cromatografia
em papel de filtro quase sempre uma partio, um
exemplo de cromatografia lquido-lquido.
Essa uma tcnica de partio que utiliza dois
lquidos (lquido-lquido) sendo um fixado em um
suporte slido (papel de filtro). til em separao de
compostos polares. Encontra-se bastante difundida
devido sua facilidade experimental e ao seu baixo
custo.
A cromatografia em papel (CP) uma das tcnicas
mais simples e que requer menos instrumentos para sua
realizao, porm a que apresenta as maiores restries
para sua utilizao em termos analticos.
Neste tipo de cromatografia, uma amostra lquida
flui por uma tira de papel adsorvente disposto
verticalmente. O papel composto por molculas de
celulose que possuem uma forte afinidade pela gua
presente na mistura de solvente, mas muito pouca
afinidade pela fase orgnica, atuando como suporte inerte
contendo a fase estacionria aquosa (polar). medida
que o solvente contendo o soluto flui atravs do papel,
uma partio deste composto ocorre entre a fase mvel
orgnica (pouco polar) e a fase estacionria aquosa. Desta
forma, parte do soluto deixa o papel e entra na fase
mvel. Quando a fase mvel alcana uma seo do papel
que no contm soluto, o fenmeno de partio ocorre
novamente, s que agora o soluto transferido da fase
mvel para a fase estacionria. Com o fluxo contnuo de
solvente, o efeito desta partio entre as fases mvel e
estacionria possibilita a transferncia do soluto do seu
ponto de aplicao no papel, para um outro ponto
localizado a alguma distncia do local de aplicao no
sentido do fluxo de solvente.
Essa tcnica permite ao aluno entrar em contato com
vrios conceitos envolvidos, desde a extrao de
compostos de plantas com o auxlio de solventes at a
cromatografia do extrato obtido. Conceitos como
solubilidade, polaridade, coeficiente de partio,
adsoro e fator de reteno (Rf) podem ser abordados

durante a execuo do experimento, que tambm


proporciona ao aluno o conhecimento de uma poderosa
tcnica de anlise empregada cotidianamente em
laboratrios de pesquisa e em algumas indstrias, como a
farmacutica.
A ordem de separao das substncias depende das
combinaes de solvente utilizadas. Sob condies
constantes de temperatura, sistema de solventes e
adsorvente, qualquer soluto (uma droga, um corante, um
esteride etc.) move-se com uma razo constante em
relao frente do solvente. Esta razo conhecida como
valor Rf (frente relativa ou fator de retardamento) onde
distncia percorrida pelo componente

Rf =

_________________________________________________________

distncia percorrida pela frente do solvente


Pode-se entender essa tcnica pelo uso de grandes
quadrados de papel de filtro de 15 a 30 cm de lado.
Aplica-se a amostra em um ponto prximo a um canto e
suspende-se o papel de modo que uma extremidade
mergulhe no solvente. Os constituintes da amostra se
movem para cima como antes. Aps essa etapa, o papel
secado, girado de 90 e suspenso com a outra
extremidade adjacente ao canto contendo a amostra
mergulhada em um segundo solvente, no qual os valores
de Rf so diferentes. Isso far com que as manchas se
movam, atravs do papel, em uma direo em ngulo reto
em relao ao primeiro movimento e assim produziram
um cromatograma bidimensional correspondentemente
com melhor separao de uma mistura complexa.
Recipientes de vidro retangulares so convenientes para
esse trabalho e podem-se tratar varias folhas
simultaneamente.
Descrevendo-se a tcnica do solvente ascendente;
tambm possvel realizar uma preparao
cromatogrfica em papel com solvente descendente.
Pendura-se o papel em um tanque com solvente e montase o conjunto todo em um recipiente fechado, onde se
satura o ar com vapor do solvente, para evitar a
evaporao. Os cromatogramas em papel podem-se
traduzir quantitativamente em um grfico de absorbncia
ptica em funo da posio da mancha no papel,
medindo-se a transmisso de comprimentos de onda
selecionados diretamente atravs do papel. Planejaram-se
vrios fotmetros de filtro especificamente para essa
aplicao; alm disso, dispe-se de adaptadores
prendedores de papel para vrios espectrofotmetros
comerciais.
Fatores Importantes em Cromatografia
A cromatografia funciona graas ao fato das
molculas possurem uma propriedade chamada
polaridade em comum e tenderem a se atrair
mutuamente. Uma molcula polar simplesmente aquela
que possui uma regio rica em eltrons e uma outra
regio que pobre em eltrons. Estas regies s vezes
so representadas como sendo negativamente e
positivamente carregadas, respectivamente. Molculas
polares so unidas por foras de atrao entre cargas
opostas de molculas diferentes. Molculas de gua tm
regies ricas em eltrons nos tomos de oxignio e
regies pobres em eltrons nos tomos de hidrognio.
Assim, as molculas de gua so polares e, por
conseguinte organizam-se de maneira que a regio de

carga positiva de uma molcula atrada pela regio de


carga negativa de outra.
Quando a soluo dos componentes da mistura passa
ao longo da fase estacionria (suporte slido) esses
componentes tm atraes (interaes) diferentes com a
fase estacionria e, portanto, os componentes passaro
pelo slido com velocidades diferentes, de forma que um
composto polar passar com uma velocidade menor que
um composto no polar ao longo de uma fase
estacionria polar, e justamente este fato que nos
permite utilizar a cromatografia como mtodo de
separao.
Na cromatografia em papel algumas vezes, devem-se
preferir outros tipos de papel em substituio celulose.
O papel feito de fibra de vidro permite a localizao de
substncias orgnicas atravs de uma pulverizao com
cido sulfrico concentrado, o que produz manchas
carbonizadas facilmente visveis na superfcie branca.
Dispe-se de papis em que se adicionaram resinas de
troca inica para usar com substncias inicas.
O termo coeficiente de partio ou coeficiente de
distribuio normalmente usado para descrever a forma
pela qual um composto se distribui entre duas fases
imiscveis.
Em cromatografia, conveniente usar o termo para
descrever a distribuio de um soluto entre duas fases
quaisquer. Por exemplo, o coeficiente de distribuio de
uma substncia entre lcool e alumina pode ser 0,1,
significando que a concentrao da substncia em lcool
(em peso por volume - p/v) 1/10 de sua concentrao
em alumina (em p/v). Assim, o coeficiente de distribuio
do lcool etlico entre o ar (em p/v) e a gua (tambm em
p/v) a 30C de 3,05 . 10-4, por que 1 litro de ar conter
3,05.10-4 vezes tanto lcool etlico do que um litro de
gua com a qual est em equilbrio. O coeficiente de
distribuio (K) ser sempre expresso, para propsitos
cromatogrficos, como a concentrao na fase mvel
dividido pela concentrao na fase estacionria.
A tcnica de cromatografia em papel foi quase
completamente superada pela cromatografia em camada
fina nos laboratrios analticos, embora seja ainda til
para fins demonstrativos (como misturas de corantes, por
exemplo). A qumica legal tem sido muito beneficiada
pelo desenvolvimento da cromatografia em camada fina,
por causa de seu uso extensivo na anlise preliminar de
drogas. Particularmente importantes so as aplicaes
especializadas no estudo da composio de pontas de
fibras de canetas, de fitas de mquinas de escrever e de
impressoras de computador.

Procedimento Experimental
Cortou-se um papel de filtro com a forma de um
cogumelo, para que a parte superior fosse dobrvel e
sustentasse o papel de filtro no bquer. Com lpis grafite, fez-se
uma linha reta a aproximadamente 1,5cm da extremidade
inferior do papel. Depois, tomou-se um capilar e colocamos um
ponto da soluo de FeCl3 sobre a linha, formado uma mancha
bem definida. Tal procedimento tambm foi realizado com as
solues (previamente fornecidas) de CuSO4 e NiSO4.
Depois de as manchas estarem secas, colocamos o
papel em um bquer. Tal bquer continha uma mistura de
acetona e cido clordrico 3M na proporo de 8:2. O trao de
papel com as manchas das solues em anlise ficou sobre o
menisco do lquido. Por fim, cobriu-se o bquer com uma placa
de Petri.Quando o solvente se aproximou do topo do papel, o
procedimento foi finalizado.
A mancha que j estava visvel a olho nu foi
contornada com lpis. Depois, pegou-se o papel de filtro

colocando-o sobre uma soluo de amnia, entrando em contato


com o vapor da mesma. A segunda mancha passa a ser visvel,
que posteriormente foi tambm contornada com lpis. Por fim,
molhou-se um chumao de algodo numa soluo de
dimetilglioxima sobre a faixa cromtica, que revelou mais uma
mancha. A mesma tambm foi contornada com lpis.
Depois, tal processo foi repetido com diferentes
propores da mesma mistura: acetona/cido clordrico 3M
95:5 e 6:4.
Por fim, foi realizada a anlise cromatogrfica da
soluo-problema, seguindo os mesmos passos descritos no
procedimento acima.

complexo dimetilglioxima de nquel, cuja reao


esboada a seguir:
Ni2+ + 2H2DMG Ni(HDMG)2 (s) + 2H+

(O DMG a sigla para a dimetilglioxima, cuja


estrutura mostrada a seguir):

Resultados e Discusso

Figura 2. Frmula da dimetilglioxima

Os valores de x (distncia percorrida por cada


componente), y (distncia percorrida pela frente do
solvente) e do Rf (razo entre as duas medidas anteriores)
so especificados a seguir:
y (cm)

x (Fe),
cm

x (Cu),
cm

x (Ni),
cm

1
3,25
2,15
1,95
1,8
Soluo
2
4,1
2,1
0,2
0
Soluo
3
4,1
2,9
1,85
1,85
Soluo
Tabela 1. Valores de y e de x para as vrias misturas
envolvidas, em centmetros
Rf (Fe)
Rf (Cu)
Rf (Ni)
1 Soluo
0,66
0,60
0,55
2 Soluo
0,51
0,05
0
3 Soluo
0,71
0,45
0,45
Tabela 2. Valores do fator de reteno para as vrias
misturas envolvidas
1.

ANLISE DA COLORAO

As diferentes coloraes acusam a existncia e


formao de novos compostos (alguns deles complexos),
que apresentam a caracteristica de emitir luz no visvel. O
primeiro composto formado, que apresentava colorao
natural castanho-avermelhada, trazia ons de Fe+3, que
apresentam tal colorao caracterstica.
A segunda e a terceira mancha trazem consigo
dois compostos no-visveis a olho nu (e que, portanto,
no emitem luz em comprimentos de onda situados na
faixa do visvel, aproximadamente 400 700nm).
Indiretamente foram revelados compostos complexos
destes ons que tm suas coloraes caractersticas.
A segunda mancha, que apresentou uma
colorao azul aps o contato com o vapor de amnia,
caracterstica da existncia do on complexo
tetraaminocupreto (II), [Cu(NH3)4]2+ , cuja representao
colocada a seguir.

Figura 1. Representao de Lewis para o on complexo


[Cu(NH3)4]2+
A terceira mancha, que apresentou uma
colorao rsea aps o contato com uma soluo de
dimetilglioxima, caracterstica da formao do

Na soluo-problema, foram observadas apenas


as manchas de colorao azul e rsea, o que indica que
tal composto apresenta em sua estrutura o on complexo
[Cu(NH3)4]2+ e o complexo dimetilglioxima de nquel.
2.

ANLISE
DAS
DIFERENTES
MISTURAS E SEU EFEITO NO FATOR
DE RETENO

De acordo com a literatura, a faixa ideal para o


fator de reteno estaria entre 0,4 e 0,6. Tal resultado
mdio reflexo do somatrio de todas as maiores ou
menores interaes (baseadas na polaridade) que
envolvem a fase estacionria e a soluo dos
componentes do sistema.
De acordo com este critrio, a melhor mistura
seria a primeira, formada por acetona/cido clordrico 3M
na proporo 8:2. Tal fato foi utilizado ainda na prtica
para realizar a anlise dos componentes da terceira
amostra.
Pelo fato de que (comparativamente) a acetona
teria uma maior polaridade frante ao HCl (visto ser o
oxignio mais eletronegativo em relao ao cloro),
poderamos afirmar que a acetona mais responsvel
pelo transporte dos ons no papel. Ela, entretanto, no
pode ser considerada a nica: necessria uma interao
com o cido clordrico (tal fato atestado pela segunda
mistura, acetona/HCl 95:5, onde uma proporo muito
alta de acetona no eficaz para a separao dos
componentes estudados).

Concluso
Atravs desta prtica, foi observada e analisada
a maneira atravs da qual podem ser separados os
diversos componentes de uma mistura pela cromatografia
em papel.
Observou-se que nem sempre possvel fazer
uma determinao direta dos componentes que
constituem tal mistura atravs da colorao que os
mesmos apresentam, j que muitos dos ons
simplesmente no apresentam colorao. Assim, deve-se
partir para tcnicas indiretas para a caracterizao de tais
compostos que formam a mistura estudada.
Por fim, foi analisado o fator de reteno para
diferentes propores de solvente, levando em conta o
fator polaridade, base para entender de que forma as
substncias so separadas na cromatografia em papel. Os
resultados obtidos corroboraram o que foi observado em
sala: uma boa interao entre solventes reflete bons
resultados para o fator de reteno.

Questes
1- Qual o on que visvel a olho nu?
O on visvel a olho nu o on de Fe 3+, que apresenta
uma colorao castanho-avermelhada.

2- Qual o on revelado pela amnia? Qual a


colorao observada neste teste e que complexo
formado pela reao da amnia com o on metlico?
O on revelado pela amnia o on de Cu 2+, que se
coordena com quatro molculas de amnia para formar o on

complexo tetraaminocupreto
colorao azul.

(II),

[Cu(NH 3)4]2+, de

3- Qual o on revelado pela dimetilglioxima? Qual o

complexo formado neste caso?


O on revelado pela dimetilglioxima o on de Ni 2+,
que se coordena com 2 molculas de dimetilglioxima
(C4H8N2O2) para a formao do composto complexo
dimetilglioxima de nquel, Ni(HDMG)2.

Referncias Bibliogrficas
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