FACULTAD DE INGENIERA INDUSTRIAL

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA

AGROINDUSTRIAL E INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

ASIGNATURA: BIOQUIMICA GENERAL

DOCENTE: CESAR TORRES

AUTORES: SILVA MORENO, Mara Alexandra

NUEZ ESPINOZA, Marycielo
VALLADOLID SAMPERTEGUI, Julio

SULLANA- PERU
2015

INTRODUCCIN:
La enzima glucosa oxidasa es una oxidorreductasa que cataliza la oxidacin de la
glucosa para formar perxido de hidrgeno y D-glucono--lactona. En las clulas
contribuye a degradar los azcares hacia sus metabolitos.
La glucosa oxidasa es ampliamente utilizada para la determinacin y cuantificacin de
glucosa libre en los fluidos biolgicos, tales como sangre y orina, en materia prima
vegetal y en la industria de los alimentos. Tiene adems muchas aplicaciones en
biotecnologa, y se utiliza para la fabricacin de biosensores sensibles a glucosa.
La glucosa oxidasa es ampliamente utilizada acoplada a una reaccin mediada por la
peroxidasa que permite visualizar colorimtricamente el H2O2 formado, de este tipo son
los ensayos para la determinacin de glucosa libre en el suero o plasma sanguneo
utilizados con finalidades diagnsticos. La reaccin es adaptable a procedimientos
manuales utilizando un espectrofotmetro o a tcnicas automatizadas, e incluso para su
utilizacin en ensayos rpidos como los de las tiras reactivas de orina.1 2 Ensayos
similares permiten monitorear los niveles de glucosa en procesos de fermentacin,
biorreactores, y el control de niveles de glucosa en materia prima vegetal y productos
alimentarios
En la industria manufacturera, la GOx se utiliza como aditivo debido a sus efectos
oxidantes.
OBJETIVOS:
Demostrar que la temperatura influye en la concentracin de glucosa.
Determinar si los valores de PH influyen en la concentracin de glucosa

MARCO TEORICO:
La glucosa oxidasa es un ejemplo de enzima con diversas aplicaciones. La glucosa
oxidasa, (Gox) (E.C.1.1.3.4), es una enzima que cataliza la oxidacin de la -D glucosa,
por la va del D-glucano- -lactona, hacia cido glucnico y perxido de hidrgeno,
usando el oxgeno molecular como aceptor final de electrones
(Fiedurek y Gromada, 2000).
Las enzimas son protenas que se producen en los organismos vivos. Tiene la capacidad
de facilitar y acelerar las reacciones qumicas que se realizan en los tejidos y clulas,
actan sobre las molculas llamadas Substratos, las cuales se convierten en diferentes
compuestos a los que se les conoce como Productos. De acuerdo a la reaccin que
llevan a cabo, las enzimas se clasifican en: oxidoreductasas, hidrolasas, transferasas,
isomerasas, liasas o sintasas y ligasas o sintetasas.
(Eichenseer et al., 1999).
Se han encontrado algunas bacterias productoras de Gox pertenecientes al gnero
Bacillus (Thongkantha et al., 2000). Adems se ha obtenido esta enzima mediante la
mutacin de cepas de Pseudomonas Aeruginosa.
(Patankar, 2012).
La Gox es ampliamente utilizada a nivel industrial para la conservacin de alimentos y
forma parte de los reactivos para la determinacin de glicemia y otros parmetros
clnicos. Tambin es empleada en el procesamiento de alimentos para la determinacin
cuantitativa de glucosa en los procesos de fermentacin y en la produccin de cido
glucnico.
(Patankar, 2012).

Las enzimas son susceptibles de muchas aplicaciones en diversos tipos de industrias,

entre las que destaca la alimenticia. En algunos casos, como en la obtencin de yogur, o
la produccin de cerveza o de vino, la fermentacin se debe a las enzimas presentes en
los microorganismos que intervienen en la produccin.
(Caridis et al., 1991).
A pH 7, la glucosa est presente en solucin en forma de hemiacetal cclico, siendo un
63,6% -D-glucopiranosa y un 36,4% -D-glucopiranosa (la proporcin de molculas
lineales y de furanosa es despreciable). La glucosa oxidasa se une especficamente a la
-D-glucopiranosa y no interacciona con -D-glucopiranosa. Es capaz de oxidar toda la
glucosa en lasolucin, dado que el equilibrio entre los anmeros y es conducido hacia
la forma conforme sta va siendo consumida en la reaccin.1
La glucosa oxidasa cataliza la oxidacin de -D-glucosa enD-glucono-1,5-lactona, que es
hidrolizada a cido glucnico.
(Caridis et al., 1991).
Para cada enzima existe un ptimo de pH en el que se crean las condiciones ms
favorables para el mantenimiento de la conformacin funcionalmente activa de la
molcula.
Los grupos amino y carboxilo de los restos de aminocidos ionizados a una magnitud de
pH determinada, participan en el mantenimiento de la conformacin de la molcula
protenica necesaria para la confrontacin de los censos catalticos de la enzima y
favorecen tambin a su ligacin con el sustrato.
A magnitud del pH distinta se altera la ionizacin de los grupos correspondientes, y como
resultados se rompen los enlaces que aseguran la formacin de los centros catalticos, y
la enzima se inactiva. A los valores del pH muy altos o muy bajos las enzimas se
desnaturalizan.
(Patankar, 2012).

PROCEDIMIENTO:
En tres tubos de ensayo se agrega 1 ml de reactivo, el tubo 1 se lleva a temperatura
de 0, el tubo 2 se lleva a temperatura de 37 y el tubo 3 se lleva a temperatura de
70 respectivamente.
Luego se agrega la glucosa a cada tubo y se incuba por 10 min respectivamente.
Los valores de absorbencia se determinan por la temperatura. Se mide mediante un
equipo de ESTIQUEOMETRIA.
CALCULOS Y RESULTADOS:

EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA GLUCOSA OXIDASA

I
RT

II

III

1
TC

37

70

GLUCOSA

20

20

20

INCUBAR, t=min

10

10

10

LECTURA DE
ABSORVANCIA

0.21

0.29

0.19

PROCEDIMIENTO:

 En tres tubos de Ensayo se agrega 1 um de reactivo respectivamente, al tuvo 3 Se le

agrega 0.1N de NaOH.
El tubo 2 se le agrega 0.1N de Hcl.
Luego se agrega la glucosa a cada tubo y se incuba por 10 min respectivamente a
una temperatura de 37 respectivamente.
Los valores de absorbencia se determinan por la temperatura. Se mide mediante un
equipo de ESTIQUEOMETRIA.

CALCULOS Y RESULTADOS:

EFECTO DEL PH SOBRE LA GLUCOSA OXIDASA

II

III

RT

NaOH(ml) 0.1N

0.1

Hcl(ML) 0.1N

0.1

GLUCOSA

20

20

20

TC

37

37

37

INCUBAR t:min

10

10

10

LECTURA DE
ABSORVANCIA

0.28

0.40

0.27

CALCULOS Y RESULTADOS:

EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE SUSTRATO SOBRE LA GLUCOSA

OXIDASA

II

III

IV

RT

GLUCOSA

10

20

30

40

TC

37

37

37

37

INCUBAR: t
min
LECTURA DE
ABSORVANCIA

10

10

10

10

0.23

0.30

0.31

0.37

SUSTRATO GLUCOSA:
E.Z: Glucosa Oxidasa
Peroxidasa
T: 0C

0,20
0,21

37C

0,28

T1

T2

0,29

70C

0,26
0,19

PH: HCL

0,35
0,40

NAOH

0,35
0,27

T3

0,23

[G]: 10 ul

0,21

20 ul
0,30
0,31

30 ul

0,31
0,32

40 ul
0,42
0,37

[G]: Fx Abs T problema:

100 mg/ dl

F= |.| ST ( glucosa )

F=

Concentracin de Glucosa

100 mg/dl
0. 36

F= 277.77 mg/dl

[ G ] 0C ( T 1)= F . AbsTe

=277.77 mg/ dl x 0.20

= 55.54 mg/ dl

[ G ]37 C ( T 2 )=F . AbsTe

=277.77 mg/dl x 0.28

= 77.75 mg/dl

[ G ]70 C (T 3)=F . AbsTe

277.77

mg/ dl

= 72.22 mg/dl

x 0.26

[ G ] 0C ( T 1)

F . AbsTe

= 277.77

mg/dl

x 0.21

= 58,31 mg/dl

[ G ] 37 C (T 2)

F . AbsTe

=277.77

mg/dl

x 0.28

= 77.75 mg/ dl

[ G ] 37 C (T 2)

F . AbsTe

= 277.77

mg/dl

x 0.29

=80.533 mg/ dl
CONCLUSION:
Concentracin de glucosa en cada compuesto.
De acuerdo a las mesclas homogenizadas se puede concluir que a ms color de la
mescla en el tubo de ensayo se determina ms concentracin de glucosa.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
Bioqumica, Lenynger
Bioqumica Ilustrada, Harper
LINKGRAFIA:
http://www.buenastareas.com/ensayos/Efectos-Del-Ph-Sobre-La

Glucosa/54169625.html