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Inmunologa
Laura Berzal Plaza
Inmunologa
2013/14
Agentes patgenos:
Virus
Bacterias
Hongos
Parsitos: helmintos, protozoos o artrpodos
Segn la localizacin de los agentes patgenos se activan diferentes componentes del
sistema inmune. Los agentes patgenos pueden ser intracelulares (ej. Virus y bacterias
que se dejan fagocitar) o extracelulares.
HISTORIA
Los historiadores atribuyen al ateniense Tucdides la primera mencin a la inmunidad frente a
una infeccin que l llam peste. El trmino inmune se utilizaba para referirse a aquellas
personas que no contraan la enfermedad
La inmunologa, en su forma moderna, es una ciencia experimental, en la que las explicaciones
de los fenmenos inmunitarios se basan en observaciones experimentales y en las
conclusiones extradas de ellas. La evolucin de la inmunologa como disciplina experimental
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RESPUESTA INMUNE
La respuesta frente a los microbios est mediada por dos tipos de reacciones:
-
La inmunidad innata (tambin llamada inmunidad natural o nativa) constituye la primera lnea
de defensa contra los agentes extraos. Consta con mecanismos de defensa celulares y
bioqumicos que existen incluso antes que la infeccin, permitiendo responder con rapidez a
ella. Estos mecanismos reaccionan generalmente con patrones moleculares microbianos, y en
menor medida con productos de clulas daadas. La especificidad de la respuesta inmune
innata es alta: el nmero de componentes diferentes que se pueden reconocer es de 103.
Los mecanismos de la inmunidad innata son especficos frente a estructuras que son comunes
a grupos de microbios relacionados. Estos mecanismos pueden no distinguir diferencias ligeras
entre microbios.
Los principales componentes de la inmunidad innata son:
-
Natural killer
Conjunto de protenas que se activan en cascada
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Los receptores especficos sern o bien linfocitos T o bien inmunoglobulinas secretadas por linfocitos B.
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Secuencia de aa
Parte de una protena, como por ejemplo, un bucle.
Pero tambin hay otras sustancias que pueden funcionar como antgenos: determinados
azcares, lpidos, autacoides y hormonas, y macromolculas como glcidos complejos,
fosfolpidos y cidos nucleicos
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COMPONENTES
ADAPTATIVO
CELULARES
DEL
SISTEMA
INMUNITARIO
Las principales clulas del sistema inmunitario adaptativo son los linfocitos, las clulas
presentadoras de antgenos y las clulas efectoras.
El inicio de la respuesta inmunitaria adaptativa y su desarrollo requiere la captacin de los
antgenos y su exposicin ante unos linfocitos especficos. Las clulas que cumplen esta
funcin se denominan clulas presentadoras de antgenos (APC). Entre ellas, las ms
especializadas son las clulas dendrticas, encargadas de atrapar los antgenos que penetran
desde el medio externo, trocearlos, transportarlos hacia los rganos linfticos y presentar los
eptopos a linfocitos T vrgenes para desencadenar las respuestas inmunitarias. Los macrfagos
tambin son capaces de llevar a cabo est funcin.
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Memoria inmunitaria
La activacin inicial de los linfocitos genera clulas de memoria longevas, que pueden
sobrevivir durante aos despus de la infeccin. Las clulas de memoria representan una
reserva expandida de linfocitos especficos frente al antgeno. Esta es una de las bases de la
vacunacin.
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De estirpe celular
CD3: linfocito T
CD19: linfocito B
Estado de diferenciacin
CD1: linfocitos T inmaduros
Estado de activacin:
CD25: Receptor de IL-2
LINFOCITOS
Los linfocitos son las clulas ms caractersticas de la inmunidad adaptativa, que expresan
receptores especficos para el antgeno.
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LINFOCITOS T
Los linfocitos T, los mediadores de la inmunidad celular, se nombraron as porque sus
precursores, que surgen en la mdula sea, migran al timo y maduran all. Todos los linfocitos
T son CD3+. Los dos principales subgrupos de linfocitos T son:
-
Linfocitos B foliculares
Linfocitos B de la zona marginal
Linfocitos B B-1.
CLULAS NK
Los linfocitos citolticos naturales fueron descritos por primera vez por Moller. Son linfocitos
distintos de los linfocitos T y B que desempean funciones importantes en las respuestas
inmunitarias innatas, sobre todo contra virus y bacterias intracelulares. Los linfocitos NK
constituyen del 5 al 15% de las clulas mononucleares de la sangre y el bazo. Los linfocitos NK
surgen de precursores de la mdula sea y aparecen como linfocitos grandes con numerosos
grnulos citoplsmicos. Pueden identificarse en la sangre por la expresin de CD56 y la falta de
CD3. No expresan ni TCRs ni Igs.
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La activacin del linfocito NK est regulada por un equilibrio entre seales generadas por
receptores activadores (KAR) y receptores inhibidores (KIR). Cuando un linfocito NK
interacciona con otra clula, el resultado viene determinado por la integracin de las seales
generadas por la serie de receptores activadores e inhibidores que expresa el linfocito NK y
que interactan con los ligandos de otra clula.
La mayora de los linfocitos NK expresan receptores inhibidores que reconocen molculas del
MHC-I. Esto es til porque las clulas normales expresan molculas de la clase I del MHC. De
este modo, los linfocitos NK interpretan la presencia de molculas de la clase I del MHC como
marcadores de lo propio normal y sano, y su falta como una indicacin de infeccin o dao.
Los linfocitos Nk no recibirn seales inhibidoras de las clulas infectadas o daadas.
Los receptores activadores de los linfocitos NK reconocen un grupo heterogneo de ligandos,
algunos de los cuales pueden expresarse en clulas normales y otros, sobre todo, en clulas
que hayan sufrido estrs, estn infectadas por microbios o se hayan transformado
Matar clulas infectadas: los linfocitos NK tienen grnulos que contienen protenas
mediadoras de la muerte de las clulas diana. Cuando los linfocitos NK se activan, los
grnulos se exocitan y las protenas quedan adyacentes a las clulas diana. Una
protena del grnulo del linfocito NK, llamada perforina, facilita la entrada de otras
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FAGOCITOS
Los fagocitos son clulas con capacidad de ingerir, capturar y digerir sustancias. Entre ellos
encontramos neutrfilos (polimorfonucleares), macrfagos (mononucleares) y clulas
dendrticas (mononucleares). Adems, tanto los macrfagos como las clulas dendrticas
tienen un papel muy importante en la presentacin de antgenos.
CLULAS DENDRTICAS (DC)
A partir de la clula troncal hematopoytica localizada en la mdula sea surgen un progenitor
mieloide comn y un progenitor linfoide comn.
Del progenitor mieloide comn se desarrollan:
-
Existe otro grupo de clulas dendrticas cuyo origen no es hematopoytico. Son las
denominadas clulas dendrticas foliculares. Son clulas dendrticas que se encuentran
entremezcladas entre cmulos especializados de linfocitos B activados, llamados centros
germinales, en los folculos linfticos de los ganglios linfticos, el bazo y los tejidos linfticos de
las mucosas (rganos linfoides secundarios). Las clulas dendrticas foliculares no endocitan ni
proteolizan los antgenos, sino que los muestran en su superficie.
Una clula virgen es una clula que todava no ha tenido ningn contacto con el antgeno
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MACRFAGOS
A partir del progenitor mieloide comn surge el monoblasto. El monoblasto se incorpora al
torrente sanguneo, donde se transforma en monocito. Una vez que penetran en los tejidos,
los monocitos maduran y se transforman en macrfagos. Los macrfagos de diferentes tejidos
reciben diferentes nombres:
-
FUNCIONES
-
NEUTRFILOS
Los neutrfilos, tambin llamados leucocitos polimorfonucleares6, son la poblacin ms
abundante de leucocitos circulantes y median las primeras fases de las reacciones
inflamatorias. El ncleo de un neutrfilo est segmentado en tres a cinco lbulos conectados.
El citoplasma contiene grnulos de dos tipos:
-
Una vez que se produce la interaccin entre receptor y ligando, el macrfago internaliza el
agente infeccioso, crendose un fagosoma. El fagosoma se fusiona con el lisosoma,
obtenindose as el fagolisosoma. En el fagolisosoma se activan sistemas microbicidas:
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-
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NADPH oxidasa
xido ntrico sintasa
Parte de los fragmentos proteolticos proteicos son presentados por los macrfagos a
linfocitos T efectores.
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rganos linfticos primarios o centrales: los linfocitos expresan por primera vez
receptores para el antgeno y consiguen la madurez fenotpica y funcional. En ningn
caso entran en contacto con el antgeno. Los rganos linfticos primarios son el timo y
la mdula sea, para los linfocitos T y B respectivamente
rganos linfticos secundarios o perifricos: se inician y desarrollan las respuestas del
linfocito a antgenos extraos. Los rganos linfticos secundarios son los ganglios
linfticos, el bazo y el tejido linfoide difuso. Dentro del tejido linfoide difuso
encontramos:
MALT: componentes del sistema inmunitario asociados a la mucosa digestiva y
bronquial
Sistema inmunitario asociado a la piel
Sistema inmunitario asociado a la mucosa de la faringe
Sistema inmunitario asociado a la mucosa de la boca
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Pulpa roja: compuesta sobre todo por sinusoides vasculares llenos de sangre
Pulpa blanca: rica en linfocitos
El seno marginal forma el lmite entre la pulpa roja y la pulpa blanca. En este seno marginal
hay:
-
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GANGLIOS LINFTICOS
Los ganglios linfticos estn situados a lo largo de los conductos linfticos. Estn especializados
en recoger antgenos procedentes del epitelio y del lquido intersticial de la mayora de los
tejidos.
Los ganglios linfticos estn rodeados por una cpsula fibrosa. Entre la cpsula fibrosa y la
corteza se localiza el seno subcapsular. Los linfticos aferentes se vacan en el seno
subcapsular. Por los linfticos aferentes pueden llegar o bien antgenos solubles, o bien
antgenos capturados por clulas dendrticas. Una vez en el seno subcapsular, los antgenos
solubles son capturados por macrfagos o clulas dendrticas.
Por debajo del seno subcapsular encontramos la corteza. La corteza externa contiene
agregados de linfocitos B denominados folculos. Algunos folculos contienen zonas centrales
llamadas centros germinales. Los folculos sin centros germinales se denominan folculos
primarios, y los que tienen centros germinales son los folculos secundarios. En la zona
interfolicular o parafolicular se localizan los linfocitos T. La segregacin anatmica de los
linfocitos B y T en diferentes zonas del ganglio depende de gradientes quimotcticos que
dirigen la migracin. En los ganglios linfticos predominan los linfocitos T.
Las sustancias transportadas por la linfa que entran en el seno subcapsular del ganglio se
clasifican por su tamao molecular:
-
Los virus y otros antgenos de masa molecular alta son captados por los macrfagos y
presentados a los linfocitos B corticales
Los antgenos solubles de masa molecular baja son transportados fuera del seno por
los tubos FRC hasta las clulas dendrticas corticales. Las clulas dendrticas presentan
los antgenos a los linfocitos T.
Las clulas producidas durante esta estimulacin antignica pasan a la linfa por el vaso
linftico eferente7.
Los linfocitos t y B vrgenes estn constantemente recirculando y visitando ganglios. Es la
forma de patrullaje/vigilancia ms eficiente.
CENTROS GERMINALES
En los centros germinales de los folculos secundarios las clulas dendrticas foliculares presentan
antgenos a los linfocitos B en proceso de maduracin. Los linfocitos B, que hasta entonces solo son
capaces de producir IgM, comienzan a generar otras clases de inmunoglobulinas. Se consiguen as
anticuerpos mejores y ms neutralizantes.
En los centros germinales los linfocitos B tambin adquieren memoria inmunolgica.
Ante una estimulacin antignica de gran intensidad, los vasos eferentes se cierran y se favorece la
llegada de clulas por los linfticos aferentes. Los ganglios se hinchan. Al cabo de 5-6 das las clulas
producidas durante la estimulacin pasan a la circulacin.
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TRACTO DIGESTIVO: las dos formaciones de linfocitos ms importantes son las placas
de Peyer (en el intestino delgado) y las amgdalas (en la faringe). En el tracto digestivo
contamos con millones de comensales (bacterias) que facilitan el transcurso de la
digestin. Los acmulos de linfocitos son sobre todo rganos de tolerancia. Las
citoquinas y los factores solubles inmuno-reguladores adquieren gran importancia. Ha
de mantenerse un equilibrio con los microorganismos beneficiosos. Cuando el
equilibrio se rompe (deja de secretarse interleuquina B y los linfocitos t reguladores
funcionan inadecuadamente), aparecen enfermedades.
Los linfocitos de las mucosas del tracto digestivo son los encargados de producir IgA.
La mayor parte de la IgA se localiza en estas formaciones y no en la sangre.
PIEL: al igual que en el tracto digestivo, en la piel existen muchos microorganismos
beneficiosos para el ser humano. Debemos de distinguir y tolerar los microorganismos
inocuos de los agentes patgenos.
- La epidermis consiste en mltiples capas de epitelio escamoso estratificado,
compuestas casi por completo de clulas especializadas llamadas
queratinocitos. Adems de formar una barrera fsica, los queratinocitos
responden a los microorganismos patgenos y a lesiones, produciendo
pptidos antimicrobianos (matan a los microbios) y varias citocinas
(promueven y regulan las respuestas inmunitarias
- Normalmente hay varias poblaciones de CD (clulas dendrticas) en la piel que
contribuyen a las respuestas inmunitarias innatas y al inicio de las respuestas
de los linfocitos T a lso antgenos microbianos y ambientales que entran en el
cuerpo a travs de la piel
- La piel humana normal contiene muchos linfocitos T, el 95% de los cuales
tienen un fenotipo de memoria: Th1, Th2,Th17 y T reguladores.
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RECIRCULACIN
Los linfocitos vrgenes son linfocitos T o B maduros que residen en los rganos linfticos
secundarios o se encuentran circulando de uno a otro. Nunca se han encontrado con un
antgeno extrao. Los linfocitos vrgenes se denominan linfocitos en reposo, porque no se
dividen activamente ni estn realizando ninguna funcin efectora.
Cuando un linfocito virgen entra en contacto con el antgeno en un rgano secundario se
detiene, se activa y se expande clonalmente, dando lugar a linfocitos efectores y clulas de
memoria. Los linfocitos efectores cambian su patrn de migracin: no circulan por los rganos
linfticos secundarios, si no que se dirigen a los tejidos perifricos para encontrarse con el
antgeno en sus vas de entrada.
Por qu las clulas vrgenes migran de un ganglio a otro?
En los ganglios existe una estructura conocida como endotelio alto especializado (HEV). Los
linfocitos vrgenes se unen a la dirigina vascular de las vnulas del endotelio alto gracias a
receptores Homing (selectina L).
Cuando los linfocitos vrgenes entran en contacto con el antgeno y se activan, pierden este
receptor y adquieren otros diferentes que les capacitan para migrar al tejido perifrico.
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Estos productos microbianos son, a menudo, esenciales para la supervivencia de los microbios.
Esta caracterstica del reconocimiento inmunitario innato es importante, porque asegura que
los microbios no puedan deshacerse de las dianas de la inmunidad innata con el fin de intentar
evitar ser reconocidos por el anfitrin.
El sistema inmunitario innato tambin reconoce molculas endgenas que producen o liberan
clulas daadas o que se estn muriendo. Estas sustancias se llaman patrones moleculares
asociados a la lesin (DAMP, del ingls damage-associated molecular patterns). Los DAMP
pueden producirse como resultado del dao celular causado por infecciones, pero tambin
pueden indicar otro tipo de lesiones celulares causadas por quemaduras, traumatismos o
disminucin del riesgo sanguneo. Las clulas que mueren por apoptosis no suelen liberar
DAMP.
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RECEPTORES
El sistema inmunitario innato usa varios tipos de receptores celulares, presentes en diferentes
localizaciones en las clulas, que reconocen PAMP y DAMP. Estos receptores de
microorganismos patgenos y de molculas asociadas a la lesin se llaman a menudo
receptores para el reconocimiento del patrn.
Estos receptores se localizan en:
-
La membrana plasmtica
La membrana endosmica
Citoplasma
Adems, hay muchas protenas en la sangre y en los lquidos extracelulares que reconocen
PAMP.
La mayora de los tipos celulares expresan receptores para el reconocimiento del patrn. Los
fagocitos (neutrfilos y macrfagos) y als clulas dendrticas expresan la mayor variedad y
cantidad de estos receptores.
TIPOS DE RECEPTORES Y LOCALIZACIN
TIPO DE RECEPTOR
LOCALIZACIN
Membrana plasmtica y
membrana endosmica de
clulas dendrticas, fagocitos,
clulas endoteliales de
linfocitos B
Citoplasma de fagocitos,
clulas epiteliales y otras
clulas
Citoplasma de fagocitos
Membrana plasmtica de
fagocitos
Membranas plasmticas de
fagocitos
Peptidoglucanos de la pared
celular bacteriana (flagelina,
dipptido muramilo, LPS) y
productos de clulas daadas
(cristales de urato
ARN vrico
Glcidos de superficie
microbiana con glucosa y
manosa terminales y
glucanos presentes en
paredes celulares de hongos
Pptidos que contienen Nformilmetionil.
RECEPTORES TOLL
Los receptores de tipo toll (TLR) reconocen productos de una amplia variedad de microbios.
Toll se identific originariamente en Drosophila como un gen implicado en el establecimiento
del eje dorsoventral durante la embriogenia de la mosca de la fruta. Despus se descubri que
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Las HPS y las HMGB1 suelen ser intracelulares, pero pueden hacerse extracelulares cuando las liberan
clulas daadas o muertas.
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Todos los receptores, a excepcin de TRF3, envan las seales a travs de MyD88 y son capaces
de activar NF-B y de inducir una respuesta inflamatoria.
Los TLR endosomales que han de dar lugar a una respuesta antiviral (TRF 4, 7 y 9) inducen
factores de respuesta a interfern.
RESPUESTA INFLAMATORIA
La principal va por la que el sistema inmunitario innato se enfrenta a las infecciones y a la
lesin tisular es estimulando la inflamacin aguda. Una de las principales citoquinas
proinflamatorias es la IL-1.
La principal fuente celular de Il-1 son los fagocitos mononucleares activados, es decir, los
macrfagos. La IL-1 tambin puede ser producida por neutrfilos, las clulas epiteliales y las
clulas endoteliales.
La produccin de Il-1 suele precisar de dos seales distintas: una que activa la transcripcin
gnica y la produccin de un precursor polipeptidico de 33 kD (proleucina) y una segunda seal
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que activa al inflamosoma para que escinda mediante protelisis al precursor para generar una
protena madura de 17 kD.
FAGOCITOSIS
La fagocitosis es un proceso activo de engullido de partculas que precisa energa:
-
En primer lugar, los neutrfilos y los macrfagos expresan receptores que reconocen
de forma especfica microbios.
Una vez que el microbio se une al receptor, la membrana plasmtica del fagocito
comienza a redistribuirse y extiende una proyeccin en forma de copa alrededor del
microbio
Se forma una vescula intracelular, conocida con el nombre de fagosoma, que contiene
la partcula extraa y se desprende de la membrana plasmtica.
La fusin de las vacuolas fagocticas (fagosomas) con los lisosomas da lugar a la
formacin de fagolisosomas, donde se concentran la mayora de los mecanismos
microbicidas
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ANTGENOS Y ANTICUERPOS
Un antgeno es cualquier sustancia capaz de ser reconocida de forma especfica por algn
anticuerpo o por el receptor de las clulas T (BCR o Igs y TCR)
Un anticuerpo es cualquier protena capaz de reconocer y unirse a los antgenos.
Distinguimos tres tipos de receptores de antgenos:
-
ANTGENOS
Los antgenos son muy heterogneos:
-
Protenas: son las que tienen mayor inmunogenicidad (aquellas mayores de 4kDa).
Polisacridos de alto peso molecular
Lpidos y cidos nucleicos: son poco inmunognicos, salvo cuando van asociados a
protenas.
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Haptenos: son molculas de bajo peso molecular (como frmacos o metales pesados)
que pueden ser antgenos, pero son incapaces de generar respuesta inmune si no es
en presencia de un acarreador (de naturaleza proteica).
Inmungeno: cualquier sustancia capaz de ser reconocida por TCR, BCR o Igs y que
genere una respuesta inmune
Tolergeno: cualquier sustancia capaz de ser reconocida por TCR, BCR o Igs y que
genere tolerancia
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INTERACCIN ANTGENO/ANTICUERPO
Las inmunoglobulinas cuentan con una regin especfica encargada de reconocer los
antgenos. Existe una complementariedad estrica entre ambos que hace que el encuentro sea
eficiente. Pero adems, la interaccin est mediada por fuerzas de unin. Todo ello permite un
encuentro reversible pero con cierta estabilidad.
Los tipos de interaccin Ag-Ac son enlaces dbiles no covalentes. Los ms comunes son las
interacciones electrstaticas que permiten una unin estable entre eptopo y partopo (que
es lugar especfico de unin del eptopo al ancitcuerpo):
-
Carga-Dipolo
Dipolo inducido
Dispersin (van der Waals)
Puentes de Hidrgeno
Afinidad por la unin Ag-Ac: define la fuerza con la que un nico sitio de unin en un
anticuerpo se une al eptopo del antgeno. Esta afinidad se mide por una constante de
disociacin Kd(10-7-10-11). A Kds ms bajas, mayor afinidad en la interaccin del
complejo Ag-Ac. Por tanto, la afinidad ser el resultado de la suma de las fuerzas de
atraccin y repulsin entre el eptopo y el partopo.
Avidez: define la capacidad sumatoria que tiene un anticuerpo para unir un antgeno.
La avidez es mayor que la afinidad, ya que un anticuerpo tiene al menos dos sitios de
unin a antgenos (pues tienen forma de Y). Avidez= Afinidad x Valencia*
Especificidad: un anticuerpo reconoce un antgeno concreto y cualquier cambio
estructural en el antgeno hace que no sea reconocido por ese mismo anticuerpo.
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La especificidad de ambas Igs es la misma siempre que procedan de un mismo clon de linfocito
B.
Cuentan con una porcin extracelular, transcelular e intracelular, donde se localiza una cola
citoplasmtica muy pequea (que por s misma genera una sealizacin poco eficiente). Es por
ello que suelen ir acoplados a co-receptores que refuercen la seal que activa al linfocito B.
*Los CDs son molculas que se expresan en la superficie de las clulas inmunes y que nos
permiten determinar en qu linaje celular las clasificamos, pero adems actan como coreceptores. Muchos de los CDs pertenecen a la familia de las Igs.
RECEPTOR DE LINFOCITOS B
Se trata de una Ig de membrana cuya funcin es unir especficamente un antgeno. Dispone de
una cola citoplasmtica pequea e interacciona con el co-receptor CD79, para reforzar la
seal y activar el linfocito B.
ESTRUCTURA
Las Igs se estructuran en lminas antiparalelas (polipptidos antiparalelos). Los dos
extremos de la Y presentan las regiones determinantes de complementariedad (CDR), que
son aquellas que deben quedar expuestas para el reconocimiento especfico del antgeno.
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Todas las cadenas (ligeras con pesadas, y pesadas entre s) estn unidas mediante puentes
disulfuro (S-S) tremendamente estables. Uniendo las cadenas pesadas y las ligeras
encontramos una especie de horquilla (hinge) que proporciona flexibilidad de reconocimiento
al anticuerpo. As, ambos brazos pueden abrirse o cerrarse para adaptarse a los antgenos de la
superficie celular.
En la regin N-terminal de las cadenas pesadas y ligeras de las Igs radica la especificidad, es
decir, son las regiones de reconocimiento del antgeno. Para que un anticuerpo sea capaz de
reconocer varios antgenos, esta regin N-terminal debe variar, por lo que se considera un
dominio variable.
La regin C-terminal siempre tiene la misma secuencia, no obstante ejerce diferentes
funciones efectoras en funcin del antgeno que se encuentre-. Se trata de un dominio
constante.
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REGIONES HIPERVARIABLES
La mayora de las diferencias en la secuencia y la variabilidad entre diferentes anticuerpos se
limitan a tres secuencias cortas en la regin V de la cadena pesada y a tres secuencias en la
regin V de la cadena ligera. Estas se llaman regiones hipervariables (CDR1, CDR2 y CDR3). En
una molcula de anticuerpo, las tres regiones hipervariables de un dominio VL y las tres del
dominio VH se unen para formar una superficie de unin antgeno (son las determinantes del
reconocimiento antignico). Esto es posible gracias a la organizacin de las cadenas de
inmunoglobulinas en lmina beta antiparalela, que dejan expuestos los loops donde residen
las regiones hipervariables.
Estas regiones cuentan con un menor plegamiento en el DNA, porque son las que van a estar
ms expuestas y van a entrar en contacto con el antgeno. Por tanto las regiones hipervariables
determinan la especificidad. Un linfocito B con una especificidad antignica, va a producir Igs
con la misma especificidad igual regin variable.
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Una secuencia muy conservada y rica en AT que se llama nonmero
Las enzimas especficas que catalizan el proceso son el complejo de las VDJ recombinasas. Las
especficas en linfocitos son RAG-1 y RAG-2.
El proceso de recombinacin se puede dividir en cuatro fenmenos que suceden de forma
secuencial:
1. Sinapsis: dos segmentos codificadores seleccionados con
sus SSR adyacentes son aproximados por un fenmeno de
formacin de un bucle y se mantienen en esta posicin
para su posterior escisin, procesamiento y unin.
2. Escisin: se generan roturas enzimticas en la doble
cadena en las uniones entre las SSR y las secuencias
codificantes. Muchas veces estas roturas son asimtricas
3. Codificacin y procesamiento: los extremos codificadores
rotos (pero no los extremos SSR) son modificados
mediante la adicin o eliminacin de nucletidos P
(palindrmicos) y N. Los nucletidos P son aadidos por la
DNA polimerasa para corregir las roturas asimtricas. Los
nucletidos N son aadidos por la TdT para alargar y unir
los extremos codificantes rotos.
4. Unin: los extremos codificadores rotos, as como los
extremos
seal,
son
aproximados y ligados por un
proceso conocido como unin
de extremos no homlogos,
mediado por ligasas.
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Una vez reorganizados, los segmentos VDJ quedan localizados por delante de un segmento C
y un segmento C. Las cadenas pesadas C dan lugar a una IgM, mientras que las cadenas
pesadas C dan lugar a una IgD. Es por esto que los linfocitos B inmaduros de la mdula sea
inicialmente expresan IgM y, posteriormente, son capaces de expresar IgD gracias al splicing
alternativo (eliminacin del segmento C)
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C1: IgA1
C2: IgA2
C: IgE
C1, C2, C3, C4: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, respectivamente.
AUMENTO DE LA AFINIDAD
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ISOTIPOS DE Ig
Los diferentes isotipos vienen definidos por la cantidad de hidratos de carbono unidos a la
regin constante de la cadena pesada de las inmunoglobulinas.
LAS REGIONES CONSTANTES DE LAS CADENAS PESADAS SON LAS RESPONSABLES DE LAS
FUNCIONES EFECTORAS DE LAS Ig. Los hidratos de carbono determinan la capacidad de las
inmunoglobulinas de activar el sistema de complemento y de unirse a los receptores Fc. Los
receptores Fc se encuentran localizados sobre todo en clulas del sistema innato.
Cuantos ms isotipos distintos sea capaz de generar un linfocito B, mayor ser el nmero de
funciones efectoras que pueda llevar a cabo.
IgG: representa entre el 80-85% del total de las Igs. Es la Ig ms abundante en suero. Es la
nica Ig que se puede transmitir al feto a travs de la placenta (transferencia pasiva de la
respuesta inmune). Es el anticuerpo ms importante en la respuesta secundaria a
antgenos timo-dependientes.
Entre sus funciones efectoras encontramos:
Neutralizacin del antgeno
Fijacin del complemento
Interaccin con receptores Fc
SECRECIN DE IgA: el proceso de secrecin est mediado por un pptido secretor. La IgA y el pptido
se secretan en vesculas. Una vez en el exterior, el pptido se elimina.
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recin nacido (se transmite al recin nacido durante la lactancia). Entre sus funciones
efectoras encontramos:
Neutralizacin de antgenos en las mucosas
Inmunologa
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Inmunologa
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Investigacin:
Deteccin, cuantificacin y aislamiento de protenas
Activacin de enzimas
Soporte molecular: se utilizan para estabilizar otras molculas
Clnica:
Pruebas analticas y de diagnstico: deteccin de partculas tales como
marcadores tumorales, molculas de superficie
Uso teraputico: en enfermedades autoinmunes, cncer, transplantes,
enfermedades infecciosas Por ejemplo hay anticuerpos especficos que
bloquean receptores de molculas angiognicas
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Inmunologa
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Mdula sea:
Todos los pre-linfocitos B que no expresan un pre-receptor IgM en su
membrana son eliminados
Todos los linfocitos b maduros que no expresan tanto el receptor IgM como
IgD son eliminados
Los linfocitos B maduros que reconocen un autoantgeno con especificidad alta
sufren seleccin negativa12. Estos linfocitos no mueren, si no que quedan en
un estado de anergia clonal. Durante este periodo, el linfocito es capaz de
reorganizar nuevamente su receptor.
Podemos encontrar fenmenos de seleccin negativa en otros rganos linfoides.
Cuando se producen fallos en la seleccin negativa una vez que los linfocitos ya han
salido de la mdula, pueden generarse enfermedades autoinmunes.
Debido a la seleccin negativa, solo pasan a la circulacin el 5-10% del total de linfocitos que se
producen en un da.
10
En la mdula sea, la maduracin del linfocito es independiente del antgeno y del linfocito T
La maduracin del linfocito en los rganos linfoides secundarios es dependiente del antgeno y de los
linfocitos T.
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Los procesos de seleccin negativa y positiva son dependientes de autoantgeno
11
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Inmunologa
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ANTGENOS
No todos los antgenos son igual de inmunognicos. Los polisacridos son menos
inmunognicos que las protenas; y las protenas pequeas son menos inmunognicas que las
protenas grandes.
Los antgenos se pueden clasificar en dos grupos:
Antgeno
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RESPUESTA PRIMARIA
IgM en pequeas cantidades
RESPUESTA SECUNDARIA
IgG en grandes cantidades
Afinidad reducida
Se necesita un periodo de
tiempo largo, pues no hay
clulas de memoria
Gran afinidad
Se necesita un periodo de
tiempo corto gracias a la
existencia de clulas de
memoria
Una pequea dosis de
antgeno es capaz de generar
la respuesta del SI
Se requieren grandes
cantidades de antgeno
Inmunologa
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7. COMPLEMENTO
El sistema del complemento est constituido por un conjunto de protenas: en su mayora son
protenas plasmticas, aunque tambin las hay ancladas a la membrana. El sistema del
complemento juega un papel primordial tanto en la inmunidad innata como en la inmunidad
adaptativa (es uno de los principales efectores de la inmunidad humoral). Las protenas del
complemento se activan por protelisis secuencial slo cuando se unen a una superficie celular
o a un complejo antgeno anticuerpo. En solucin, se inactivan por hidrlisis.
Tras la protelisis de las protenas del complemento, siempre surgen dos fragmentos: el
fragmento grande y el fragmento pequeo.
NOMENCLATURA DEL COMPLEMENTO
El sistema del complemento puede ser activado por 3 vas diferentes: la va clsica, la va
alternativa y la va de las lectinas. La nomenclatura es diferente para cada va:
-
Va clsica: las protenas se designan con la letra C, seguida de un nmero (ej.C1, C2).
Tras la protelisis, los fragmentos grandes se denominan con la letra b, mientras que
los pequeos con la letra a (ej. De la protelisis de C4 obtenemos C4a, C4b).
Va alternativa: las protenas se designan con letras maysculas (ej. B o C). Tras la
protelisis, los fragmentos grandes se denominan con la letra b, mientras que los
pequeos con la letra a (ej. Bb o Cb).
Va de las lectinas: en esta va estn implicadas lectinas de unin a manosa y ficolinas y
MASPs.
VA CLSICA
La va clsica es activada por anticuerpos. Los isotipos ms eficaces a la hora de activar esta va
son IgM, IgG1 y IgG3. Hay determinados isotipos, como por ejemplo IgG4, que no son capaces
de activar este sistema.
La va clsica se inicia con la protena C1. C1 es un complejo protenico multimrico grande,
formado por 3 subunidades:
-
Cada regin Fc de una Ig tiene un nico sitio de unin a C1q y cada molcula de C1q debe
unirse a dos cadenas pesadas de Ig para activarse. Aunque las IgM libres (circulantes) son
pentamricas, no se unen a C1q porque las regiones Fc de las IgM libres son inaccesibles. La
unin de IgM a un antgeno induce un cambio conformacional que expone los sitios de unin a
C1q. Por su estructura pentamrica, una sola molcula de IgM puede unirse a dos C1q.
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Dado que cada molcula de IgG solo tiene una regin Fc, deben acercarse mltiples molculas
de IgG para que se pueda unir C1q. Mltiples anticuerpo de IgG quedan agrupados nicamente
cuando se unen a la superficie de un antgeno.
La unin de C1q a dos regiones Fc produce la activacin de C1r y C1s. El C1s activado escinde la
siguiente protena de la cascada, C4, generando C4b y C4a. C4b queda unido covalentemente a
los complejos antgeno-anticuerpo o a la superficie de una clula (ej. Una bacteria). C2 forma
entonces un complejo con C4b unido a la superficie celular. C1s escinde C2, generando C2a y
C2b. C2b permanece unido a C4b. El complejo C4b2b resultante es la C3-convertasa de la va
clsica. La C3-convertasa de la va clsica escinde C3, dando lugar a C3a y C3b. C3b se une a la
convertasa, formando el complejo C4b2b3b. Este complejo, conocido como C5-convertasa de
la va clsica, escinde C5.
A partir de aqu, comienza la formacin del complejo de ataque a la membrana (CAMP). C5b
mantiene transitoriamente una conformacin capaz de unirse a las protenas siguientes de la
cascada, C6 y C7. C7 es hidrfobo, y se inserta en la doble capa lipdica de las membranas
celulares, donde se convierte en un receptor de alta afinidad para una molcula de C8. La
formacin del CAMP completamente activo se alcanza tras la unin de C9. C9 es una protena
srica que polimeriza formando poros en la membrana plasmtica. Finalmente, se produce un
desequilibrio electroltico y la lisis celular.
VA ALTERNATIVA
Los nombres de va clsica y va alternativa surgieron porque la va clsica se descubri y
describi en primer lugar, aunque la va alternativa es fisiolgicamente ms antigua, y
responsable de la activacin del complemento en el 80-90% de los casos.
La va alternativa de activacin del complemento da lugar a la protelisis de C3 y la unin
estable de su producto de degradacin, C3b, a las superficies microbianas, sin participacin de
los anticuerpos. La va alternativa tambin se puede desencadenar a partir del C3b de las
membranas generado por medio de la va clsica.
C3 es una protena plasmtica que se hidroliza constantemente de forma espontnea dando
lugar a C3H2O. C3H2O es capaz de unirse a una protena plasmtica denominada factor B. El
factor B unido a C3H2O es escindido por una proteasa plasmtica denominada factor D. se
generan dos fragmentos: Ba y Bb. Bb permanece unido a C3H2O. El complejo C3H2O-Bb es la
denominada C3-convertasa de fase lquida de C3
La C3-convertasa de fase lquida de C3 escinde una nueva protena C3, generando C3a y C3b. El
C3b queda anclado en la superficie de la clula. Este C3b recluta un factor B. El factor B es
escindido por el factor D. Bb queda unido a C3b, formando el complejo C3b-Bb, conocido como
C3-convertasa de la va alternativa.
La funcin de la C3-convertasa de la va alternativa es escindir ms molculas de C3,
consiguiendo as una amplificacin secuencial. Se genera C3a y C3b. C3b se une a la propia
convertasa de la va alternativa. Esto da lugar a la formacin de un complejo conocido como
C5-convertasa de la va alternativa.
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VA DE LAS LECTINAS
La va de las lectinas se desencadena sin la necesidad de anticuerpos.
-
1. OPSONIZACIN Y FAGOCITOSIS
Los anticuerpos unidos a los eptopos de la superficie de una bacteria son capaces de activar el
complemento. Entre otras cosas, se forma C3b, que queda anclado a la superficie bacteriana.
El C3b es reconocido por el receptor CR1 de los fagocitos. Este reconocimiento favorece que
los fagocitos engloben la bacteria y la eliminen.
2. LISIS BACTERIANA
La lisis bacteriana se lleva a cabo gracias a la formacin del complejo de ataque a la
membrana, cuya formacin tiene lugar mediante las vas explicadas anteriormente.
3. ELIMINACIN DE INMUNOCOMPLEJOS Y CLULAS APOPTTICAS
La unin de C1q a dos regiones Fc de un inmunocomplejo produce la activacin de la va
clsica. Se genera C3b. El C3b es reconocido por un CR1 de la membrana de un eritrocito. El
eritrocito capta el inmunocomplejo y lo conduce hasta el bazo o el hgado, rganos donde
existe una importante red de macrfagos tisulares. Los macrfagos, que tambin tiene
receptores CR1, fagocitan y destruyen el inmunocomplejo. Si los inmunocomplejos no se
eliminan debido a fallos en el complemento, se depositan en determinadas zonas del
organismo (ej. Glomrulo renal) produciendo patologas importantes.
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Las protenas plasmticas diferencian las clulas normales del husped de las clulas bacterianas
porque en las superficies bacterianas hay menor cantidad de cido silico. Se depositan en las
superficies de clulas normales para evitar la activacin del complemento y la destruccin de dichas
clulas
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Adems de regulacin negativa, existe una regulacin positiva: la properdina se deposita sobre
todo en la superficie de las bacterias y activa de forma crnica la va alternativa
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Las APC exponen los fragmentos peptdicos en su membrana. Una vez que un clon de linfocito
T reconoce estos fragmentos, se produce la expansin clonal de dicho linfocito y la activacin
de otras clulas del sistema inmune.
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Estas cadenas estn codificadas por mltiples segmentos gnicos que sufren reordenamientos
somticos durante la maduracin de linfocitos T. Aunque los genes del TCR estn presentes en
todas las clulas, solo los linfocitos T son capaces de llevar a cabo la reorganizacin gentica.
-
Las recombinasas Rag1 y Rag2 se encargan de reorganizar los segmentos de las regiones
variables. En la reorganizacin de los segmentos tambin se produce un aumento de
variabilidad gracias a:
-
Cortes asimtricos
Adicin de nucletidos N y P. Al incluir nuevos nucletidos se originan cambios en la
fase de lectura: estos cambios pueden dar lugar a receptores aberrantes o a nuevos
receptores funcionales.
Aproximadamente
somos
capaces de generar 1016 TCR
diferentes
La regin hipervariable CDR3
queda localizada en la zona
de unin de los VJ de las
cadenas alfa y en la zona de
unin de los VDJ de las
cadenas beta. Es en esta
regin hipervariable donde
se
genera
mayor
variabilidad.
MHC
Las protenas del MHC estn formadas por dos cadenas polipeptdicas. Cada MCH consta con
una hendidura extracelular encargada de unirse a los pptidos. Existen dos tipos de MCH
-
MHC1: formado por una cadena y una cadena 2. La hendidura queda delimitada
por dos dominios de la cadena , el dominio 1 y el dominio 2
MHC2: formado por una cadena y una . La hendidura queda delimitada por el
dominio 1 (localizado en la cadena ) y el dominio 1 (localizado en la cadena )
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Las regiones CDR1 de las cadenas y quedan en contacto con los extremos del
pptido
Las regiones CDR2 se unen al MHC
Las regiones CDR3 interaccionan con el centro del pptido.
TRANSDUCCIN DE SEALES
Las protenas CD3 y se asocian de forma no covalente al TCR. Cuando el TCR reconoce
antgenos, estas protenas asociadas transducen las seales, permitiendo la activacin del
linfocito T.
-
CORRECEPTORES
CD4 y CD8 son protenas capaces de unirse a molculas del MHC. Transducen seales que,
junto con las seales emitidas por el complejo TCR (TCR+CD3+ ), inician la activacin de los
linfocitos T.
CD4 y CD8 son glucoprotenas transmembrana:
-
La transduccin de seales est mediada por una tirosina kinasa (Lck) que se asocia de manera
no covalente, pero intensa, a las colas citoplasmticas de CD4 y CD8. Cuando el linfocito T
reconoce un complejo pptido-MHC mediante el TCR, la interaccin simultnea de CD4 o CD8
con el MCH acerca el correceptor unido a la LcK al complejo TCR. La Lck fosforila las tirosinas
de los dominios ITAM de las protenas CD3 y , inicindose la cascada de sealizacin.
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COESTIMULADORES
La familia mejor estudiada y ms importante de receptores coestimuladores de los linfocitos T
es la familia ce CD28. El CD28 interacciona con las protenas B71 y B72 de clulas
presentadoras de antgenos.
Cuando el linfocito T interacciona con el antgeno, comienza a expresar CTLA4. El CTLA4
compite con el CD28. CD28 no puede interaccionar con B71 y B72, atenundose as la
respuesta del linfocito T.
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9. COMPLEJO PRINCIPAL DE
HISTOCOMPATIBILIDAD
El complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) est presente en todos los vertebrados. En
cada especie, recibe un nombre diferente. En los seres humanos, nos referimos a l con las
siglas HLA. Las protenas que forman parte del HLA estn codificadas por genes HLA. Existen
numerosos alelos HLA en la poblacin, por lo que existen bastantes variaciones entre los
individuos.
Los linfocitos CD8+ reconocen las molculas pertenecientes al MHC1, mientras que los CD4+
reconocen las molculas del MHC2.
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MHC1: VA ENDGENA
Las molculas del MCH1 se encargan de la presentacin de antgenos intracelulares (virus o
bacterias) la mayora de los cuales han sido sintetizados por la propia clulas (protena vrica).
Son molculas que informan al SI de la salud de la clula.
En el interior de la clula, la protena antignica es marcada por una serie de molculas,
quedando destinada a ser degradada por el proteosoma. El proteosoma es una estrucutra
tubular formada por una serie de anillos proteicos yuxtapuestos. Los anillos proteicos de los
extremos estn constituidos por protenas reguladoras, mientras que los de la regin central,
por proteasas. Las proteasas se encargan de digerir las protenas antignicas para dar lugar a
pptidos de un tamao menor de 20 aa.
Simultneamente al procesamiento de protenas antignicas, los ribosomas del RE sintetizan
protenas del MHC1. La cadena y la cadena son sintetizadas por separado. Una vez
formadas, las chaperonas las acompaan y median su ensamblaje. Entre las cadenas alfa y
beta no se establecen enlaces covalentes.
Los pptidos generados por el proteosoma se transportan hacia el RE. All, la protena TAP se
encarga de su transporte15 hacia la luz del RE. Los pptidos translocados hacia el interior del RE
se fijan a las molculas del MHC116. Estas ltimas estn unidas al transportador TAP a travs de
una protena denominada tapasina.
El complejo formado por el MCH1-pptido pasa del RE al aparato del Golgi, donde es
glicoxilado. Una vez lleva a cabo la glicoxilacin, las molculas del MHC1 con pptidos unidos se
expresan en la superficie celular. Los linfocitos T CD8+ reconocen especficamente estos
antgenos peptdicos matan las clulas infectadas, eliminando los reservorios de la infeccin.
CUNDO SE LLEVA A CABO ESTE PROCESO?
Se trata de un proceso continuo. La clula no es capaz de diferenciar sus propias protenas de
las protenas virales o bacterianas. Por tanto, est continuamente presentando pptidos
unidos a molculas del MCH1. Estos pptidos derivarn de sus propias protenas (cuando no
hay infeccin) o de un antgeno (cuando hay infeccin).
QU CELULAS LLEVAN A CABO ESTE PROCESO?
Todas las clulas del organismo, a excepcin de los hemates y alguna otra excepcin, expresan
molculas del MCH unidas a sus pptidos.
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MHC2
Las MCH2 estn presentes en los siguientes tipos celulares:
-
Adems de expresar MCH2, todos los tipos celulares anteriores expresan MCH1.
Las molculas del MCH2 se encargan de la presentacin de antgenos extracelulares. Informan
al SI de la salud del entorno en el que se encuentran las clulas.
En primer lugar, el antgeno protenico extracelular ha de introducirse en la APC mediante:
-
Fagocitosis
Pinocitosis (antgenos solubles)
Endocitosis mediada por receptores. Por ejemplo, las Ig de membrana de linfocitos B
son capaces de reconocer e internalizar antgenos.
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que bloquea el sitio de unin MHCII al pptido. Es la HLA-DM la encargada de eliminar este
ltimo residuo. La HLA-DM es una molcula MCH2 especial, encargada de facilitar los
intercambios entre el residuo de la cadena invariable y el pptido. No sigue la ruta de
membrana, est fija en el MIIC.
Finalmente, los complejos estables pptido-MHC2 son transportados en vesculas hasta la
membrana de las APC.
CUNDO SE LLEVA A CABO ESTE PROCESO?
Es un proceso continuo:
-
EXCEPCIN
La activacin de los linfocitos CD8+ solo puede ser llevada a cabo por una clula dendrtica.
Esto constituye un especial problema, porque los antgenos que estos linfocitos reconocen se
producen en cualquier tipo de clula infectada, no necesariamente en una clula dendrtica.
Algunas clulas dendrticas especializadas tienen la capacidad de ingerir clulas infectadas y de
presentan antgenos de estas clulas unidos a sus MHC1 a los linfocitos T CD8+. Este proceso se
llama presentacin cruzada o cebado cruzado.
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-
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MHC1
Las molculas de clase I estn formadas por dos cadenas polipeptdicas ( y 2m18) unidas de
forma no covalente. La cadena presenta mayor longitud que la , y est anclada a la
membrana plasmtica. La cadena no tiene un dominio transmembranario. Al igual que en las
molculas de MHC2, existen puentes disulfuro intracatenarios que estabilizan la estructura de
las cadenas.
Dominios de la cadena :
-
Dominios de la cadena :
La cadena no atraviesa la membrana plasmtica. Esta cadena en s misma constituye un
nico dominio.
ESTREUCTURA DE LAS HENDIDURAS DEL MHC
La hendidura de las MHC presenta un suelo y dos paredes laterales. El suelo est formado por
8 lminas antiparalelas. Las paredes, sin embargo estn constituidas por hlices . En estos
surcos, los pptidos se alojan desnaturalizados, extendidos, no se pliegan.
En las molculas del MHC2, las hlices de una y otra pared estn alejadas entre s. La
hendidura no est cerrada en sus extremos (en la regin central queda cerrada por las lminas
). Los pptidos pueden entrar o salir por estos extremos.
Las molculas del MHC 2 pueden albergar pptidos mucho ms largos que las del MHC1. En
muchos casos, se unen pptidos a medio cortar, que terminan de ser procesados una vez en la
hendidura.
Las molculas del MHC2 admiten mayor variacin entre los pptidos que las del MHC1.
Dependiendo el tipo de aa que encontramos en el surco (bsicos, cidos, polares), se podrn
unir unos pptidos u otros. Por ejemplo, si los aa son hidrofbicos, y el pptido contiene
prolina (tambin hidrofbica), se va a producir la unin. Pero si la hendidura contiene
asprticos y glutmicos, y en el pptido hay prolina, se producir una repulsin.
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2m: 2 microglobulina.
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Inmunologa
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A base de mutaciones al azar, los microorganismos pueden generar protenas que no tengan
ninguna secuencia apropiada para las molculas del MHC. Por ejemplo, si un virus muta de
forma que ninguna molcula del MHC es capaz de reconocerlo, el virus se vuelve invisible. En
general, esto sucede en seres vivos con MHC simples. Sin embargo, en los seres humanos no se
produce este fenmeno. Nuestro MHC es complejo. Para entender est complejidad hay que
conocer la gentica del MHC
MHC2
Tenemos 3 tipos diferentes de molculas de clase 2:
-
HLA-DP: la cadena est codificada por el gen DPA y la cadena por el DPB1
HLA-DQ: la cadena est codificada por el gen DQA1 y la cadena por el DQB1
HLA-DR: la cadena est codificada por el gen DRA1 y la cadena por el DRB1
Existen copias adicionales de los genes de las MHC2 (ej. DPA2, DPB2). En general, estas
copias no funcionan, no generan una cadena proteica, son pseudogenes. Sin embargo, existen
3 excepciones: el DRB3, DRB4 y DRB5 son funcionales.
En la zona centromrica del brazo corto del cromosoma 6, adems de los genes para las
cadenas y de las MHC2, encontramos:
- Los genes que codifican para la molcula DM: DMA (codifica para la cadena ) y DMB
(para la )
- Los genes que codifican para las dos cadenas del transportador TAP
- El gen de la tapasina.
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Inmunologa
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MHC1
Tenemos 3 tipos diferentes de molculas de clase 1:
-
HLA-A
HLA-B
HLA-C
La cadena es idntica para todas las molculas de clase 1. Est codificada por un nico gen
localizado en el cromosoma 15. Los genes que codifican para las cadenas son los siguientes:
-
En la zona centromrica del brazo corto del cromosoma 6, adems de los genes para las
cadenas de las MHC1 encontramos:
-
Genes que codifican para las cadenas de molculas del MHC1 no clsicas:
o HLA-E
o HLA-F
o HLA-G
Genes que codifican para HFE, molculas que se utilizan en muchos procesos distintos,
como por ejemplo, el metabolismo del hierro. Cuando estos genes se ven afectados
por mutaciones, el individuo tiende a acumular hierro en su organismo.
Genes HLA no funcionales.
Genes que codifican para MICA, MICB y ULBP: protenas que se expresan solo en
condiciones patolgicas (la clula est infectada, tiene una desregulacin
metablica). Estas protenas no presentan pptidos, ellas mismas son la seal de
alerta.
Genes para CD1 : cadena proteica que dimeriza con la cadena 2m. La molcula
resultante de esta dimerizacin es capaz de presentar lpidos a linfocitos T especiales.
Genes que codifican para FcRN: molcula encargada del transporte de IgG.
VARIABILIDAD
Como ya hemos explicado, existen 3 molculas diferentes de clase 1 y tres molculas
diferentes de clase 2. Este hecho incrementa muchsimo nuestra capacidad de reconocer
pptidos diferentes.
Adems, somos organismos diploides. Heredamos un alelo del padre y un alelo de la madre.
Cada cadena de una molcula del MHC estar codificada en dos genes distintos. Si la secuencia
de aa es ligeramente diferente entre un gen y otro, podremos duplicar el nmero de molculas
distintas del MHC (polimorfismo). Los alelos que se reciben del padre y de la madre son
codominantes (ambos se expresan).
Normalmente, los genes que codifican para las molculas del MHC se transmiten juntos a la
descendencia: son haplotipos, raramente se produce recombinacin.
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Inmunologa
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DESEQUILIBRIO DE LIGAMIENTO
En los seres humanos, determinados alelos HLA presentes en diferentes locus, se heredan
conjuntamente con ms frecuencia de lo que cabra esperar por una asignacin al azar. Por
ejemplo, imaginemos dos alelos diferentes, uno codifica para HLA-A y otro para HLA-B. La
frecuencia de cada uno de estos alelos es de un 20%. Por azar, cabra esperar que estos alelos
apareciesen juntos en un 4% de los individuos. Sin embargo, este porcentaje es mucho mayor.
Se dice entonces que los alelos estn ligados. Este fenmeno es muy frecuente en el sistema
HLA, no solo para dos alelos, sino para muchos ms. El conjunto de alelos que suelen
heredarse juntos se denomina haplotipo. Los diferentes haplotipos son caractersticos de
distintas poblaciones del mundo.
RESPUESTA ALOGNICA
Es una respuesta inmunitaria frente a clulas/tejidos u rganos de otro individuo de la misma
especie.
-
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Inmunologa
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En el ser humano tienen lugar ambos procesos. En la respuesta alognica tambin participan
los linfocitos B y las clulas NK. Como consecuencia de esta respuesta, los trasplantes de
clulas, tejidos u rganos pueden ser rechazados por el organismo aceptor.
RESPUESTA ALOGNICA Y EMBARAZO
El embrin presenta genes HLA heredados de la madre, pero tambin genes HLA heredados del padre. En la
madre, se general anticuerpos contra las molculas HLA extraas del embrin. No obstante, es una respuesta
inmune contenida y controlada, que no causa ningn problema.
HLA-E: se expresa en la mayora de las clulas de nuestro organismo. Las HLA son
protenas de membrana. Toda protena de membrana est precedida por un pptido
seal. Una vez que lleva a cabo su funcin, el pptido es escindido. Las molculas HLAE se unen a los pptidos seal procedentes de otras molculas de HLA. Sin embargo,
no son capaces de interaccionar con su propia secuencia seal. Las molculas de HLA-E
informan de que la sntesis del resto de molculas HLA es correcta.
Existen determinados patgenos capaces de sabotear la expresin de HLA de clase 1.
Ej. CMV (citomegalovirus). En la actualidad, el 95% de los adultos estn infectados por
este virus. Es un virus complejo, que en general no causa patologa. El genoma del
CMV codifica para protenas que interfieren en las sntesis de HLA de clase 1. Las HLA
de clase 1 son retenidas en el retculo y devueltas al citosol, donde se produce su
degradacin.
HLA-F
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Las clulas NK expresan una serie de receptores inhibidores capaces de reconocer las
molculas del MHC1. En mamferos se han descrito 4 tipos de receptores inhibidores. No
obstante, el ser humano solo presenta 3 de estos 4 tipos de receptores:
-
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CD3 y
Correceptores CD4+ y CD8+
Coestimulador CD28
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MDULA
CONVERSIN DE UN LINFOCITO DOBLE POSITIVO (DP) EN UN LINFOCITO SINGLE POSITIVE
En la mdula tmica encontramos dos tipos de clulas:
-
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Clulas del estroma: clulas presentadoras de antgenos que expresan molculas del
MHC1 y MHC2 unidas a pptidos propios.
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3. FASE EFECTORA
Cuando las clulas adquieren sus propiedades efectoras, pasan a dar lugar a la fase efectora
de la respuesta inmune. En el caso de las CD4, la interaccin con otras clulas del sistema
inmune; y en el caso de las CD8, la lisis de clulas infectadas.
4. CLULAS MEMORIA
Algunos linfocitos T no se transforman en linfocitos T efectores, sino que se diferencian en
clulas memoria. Estas clulas tienen caractersticas que les van a permitir reaccionar
rpidamente en el caso de que aparezca posteriormente, la misma infeccin. Esta reaccin
se denomina respuesta T secundaria.
Los linfocitos T vrgenes o naive van a encontrar siempre el antgeno en los rganos linfoides
secundarios o perifricos, ya que estn continuamente recirculando entre la sangre y la linfa.
Estos rganos linfoides estn especializados para que se produzca en ellos el encuentro entre
antgeno y los propios linfocitos T naive. Los linfocitos T requieren para su activacin, la
interaccin con el antgeno tras ser presentado por una
clula presentadora de antgenos, bien sea una clula
dendrtica o un macrfago que migran al rgano linfoide
desde la zona de infeccin. Esto provoca que los linfocitos
T se activen y se diferencien en clulas efectoras y en
clulas de memoria, que pueden permanecer en los
rganos linfticos o migrar hacia tejidos no linfticos. En
los focos infecciosos, los linfocitos efectores vuelven a
activarse por los antgenos y realizan muchas de sus
funciones, tales como la activacin de los macrfagos.
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Sin embargo, este conjunto de molculas que mandan esta seal hacia el interior del linfocito
son incapaces de activar un linfocito T naive.
2. Fase de activacin de linfocitos T naive: co estimulacin
La activacin de los linfocitos T se inicia en los
rganos linfoides perifricos.
Para que un linfocito T naive se active requiere una
seal adicional. Esta seal adicional viene dada por la
interaccin de una molcula en la membrana del
linfocito, CD28.
CD28 es una molcula co-estimuladora homodimrica
de membrana cuyas subunidades tienen un dominio
extracelular tipo Ig. Esta molcula interacciona con
dos ligandos que estn presentes en la membrana de
las APCs: B7-1 y B7-2, que son dos molculas coestimuladoras expresadas nicamente por APCs
profesionales.
Por tanto, para la activacin completa de un linfocito
T naive se requieren dos seales:
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Es posible que, tras el reconocimiento antignico, los linfocitos T expresen CD40L incluso sin
coestimulacin, aunque para una expresin mantenida de CD40L se precisa la coestimulacin
B7
41BB, que interacciona con un ligando 41BBL, que se expresa en las CPA.
NFAT: NFAT-L, es un ligando de membrana que interacciona con NFAT en las clulas a
las que se enfrenta el linfocito T. NFAT se expresara tanto en APC como en clulas
diana. La interaccin de NFAT-L con NFAT lo que induce es muerte por apoptosis.
Esta fase sirve para, a partir de un clon que expresa un nico receptor, tener muchos clones
con ese mismo receptor. Lo que hace proliferar a los linfocitos T es una citoquina, la
interleucina-2.
La interleucina-2 interacciona y media su proceso de induccin
de la proliferacin a travs de un receptor de membrana
formado por tres subunidades distintas: , y . Las subunidades
y funcionan tambin como receptor de interleucina pero de
baja afinidad y no es capaz de inducir la proliferacin de linfocitos
T.
Los linfocitos T naive expresan en la membrana de forma
constitutiva el receptor de baja afinidad y no produce
interleucina-2. Cuando se produce la activacin a travs del TCR,
la cascada de seales determina la expresin de:
- El gen de la interleucina-2 que se secreta al medio.
- La subunidad del receptor de alta afinidad de la interleucina-2.
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o
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TH1: son linfocitos capaces de activar la funcin efectora de ciertas clulas que estn
infectadas por microorganismos intracelulares que se localizan en vesculas, bien
porque infectan a la clula en estas vesculas, o bien porque han llegado ah por
procesos de fagocitosis de clulas infectadas o de bacterias que se encuentran en el
medio extracelular. Contribuyen a regular lo que se denomina respuesta efectora T
celular. Su activacin se produce en presencia de IL-12 e IFN y se activan en
infecciones bacterianas, las cuales, activan a los macrfagos.
TH2: son linfocitos que tambin reconocen MHC de clase II, pero interaccionaran
fundamentalmente con linfocitos B y regulan la produccin de ciertos tipos de Ig.
Contribuyen a regular lo que se denomina respuesta efectora T humoral. Su
activacin se produce en presencia de IL-4 e IL-5 y se activa en infecciones por
parsitos.
Los distintos tipos de molculas efectoras que producen estos linfocitos T pueden ser o bien
molculas solubles, o bien molculas que se expresan o bien molculas de membrana.
Las molculas que se expresan pueden ser citotoxinas, especializadas en la lisis celular,
como perforina y granzima.
Las molculas solubles son las citoquinas, que producen distintos tipos de respuestas
celulares: interfern- (IFN) y la interleucina-4. El IFN- define muy bien la subpoblacin
de linfocitos TH1, mientras que la interleucina-4 se utiliza para definir las poblaciones de
linfocitos TH2. No obstante, tanto TH1 como TH2 pueden producir otros tipos de
citocinas.
Molculas de membrana: entre las cuales hay que destacar al ligando de NFAT, que es
muy importante para la funcin de las CD8 y para la funcin de algn tipo de linfocitos
de CD4.
Otra caracterstica importante es que hay posibilidad de regulacin cruzada entre poblaciones
TH1 y TH2, puesto que si tenemos un linfocito TH2 que produce TGC- e IL-10, a travs de
ambas citocinas, los linfocitos TH2 son capaces de inhibir la diferenciacin hacia TH1:
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A su vez, las clulas TH1 producen IFN-, que es una citocina capaz de inhibir la diferenciacin
hacia TH2.
Una vez que se ha establecido un tipo de diferenciacin, las citocinas que se producen son
capaces de bloquear la diferenciacin en el otro sentido. De manera que, en muchos tipos de
respuesta, se puede producir una mezcla de las dos respuestas, TH1 y TH2.
En otros casos, en funcin del estmulo inicial, se inicia la diferenciacin hacia un lado o hacia
otro y el propio proceso, por un lado se produce una retroalimentacin positiva ya que TH1
potencia diferenciacin hacia TH1 y TH2 potencia diferenciacin hacia TH2, y por otro lado
inhibirn la diferenciacin en el sentido contrario.
Por lo tanto, lo que determina que la diferenciacin vaya en un sentido u otro es el tipo de
infeccin.
Cuando tenemos infecciones bacterianas que activaran los macrfagos que expresaran
INF e IL-2 lo que potencia la diferenciacin hacia TH1.
En el caso de que la infeccin este provocado por un helminto (parsito muy grande que el
macrfago no puede fagocitar) se induce la respuesta de tipo TH2, por lo que se secretan
IL-4 e IL-5. El TH2 sintetiza IL4 que induce la sntesis de IgE para potenciar la granulacin de
los mastocitos y activar a los eosinfilos para poder matar pero extracelularmente.
Luego el tipo de microorganismo, a travs de su efecto en las clulas del sistema inmune
innato, es capaz de condicionar el que se produzca un tipo de respuesta que va a eliminar
dicho microorganismo.
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El encuentro entre el linfocito efector y la clula diana se produce, teniendo lugar una serie de
interacciones mediante molculas de adhesin. El linfocito T efector tiene un TCR que
reconoce el MHC - pptido, por lo que se produce la interaccin y adems, se produce una
relocalizacin de los receptores de clulas T hacia la zona de contacto con la clula diana.
Se relocalizara tambin el citoesqueleto de actina, el centro organizador de
microtbulos y la maquinara de secrecin de la clula, as como algunos de los Ag de las
molculas de membrana importantes para la funcin efectora. Todo esto se polariza hacia la
clula diana, de manera que la funcin de las molculas de membrana que determinan la
funcin efectora del linfocito T va a estar restringida hacia la clula diana.
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Zona T del ganglio linftico: Las APC presentan antgenos extraos unidos a sus MHC2
a los linfocitos T CD4+. Los linfocitos T activados expresan CD40L y receptores para
citoquinas.
Zona B del ganglio linftico (folculos primarios): los antgenos solubles se unen a las
IgM de membrana del linfocito B. Las IgM poseen colas citoplasmticas muy cortas.
Por ello se asocian con CD79: protena transmembrana formada por una cadena y
una . CD79 presenta unas colas intracelulares con dominios ITAM. Los dominios ITAM
son ricos en tirosina. La transduccin de la seal se inicia por fosforilacin de tirosinas
de los dominios ITAM. Gracias a esta primera fase de activacin:
Aumenta la supervivencia del linfocito B: se promueve la proliferacin y se
inhibe la apoptosis.
El linfocito B comienza a expresar receptores para citoquinas (CCR7)
Una vez activados, ambos linfocitos migran hacia el lmite entre las zonas B y T del ganglio
linftico gracias al gradiente de citoquinas.
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El pptido unido al MHC2 del linfocito B es idntico al pptido presentado por la APC al linfocito T en
la zona T.
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FOLCULOS SECUNDARIOS
En el centro germinal de los folculos secundarios se produce la maduracin de la afinidad de
los linfocitos B que ya han sido activados por los linfocitos T y son capaces de producir un
swich de Igs contra un antgeno determinado.
En los centros germinales podemos distinguir dos zonas:
-
Los linfocitos B de la zona oscura sufren mutaciones de las regiones V de las cadenas pesadas y
ligeras con una frecuencia sumamente alta. Estas mutaciones pueden producir:
-
Un aumento de afinidad
Prdida de afinidad
Igs aberrantes que no se unan al antgeno
Nada
Si el clon de linfocito B, despus de haber pasado por la mutacin somtica reconoce con la
misma o ms afinidad al antgeno sobrevive. Pero si el clon de linfocito B no expresa
anticuerpo, no tiene afinidad o reconoce con baja eficacia al antgeno, muere por apoptosis.
Por ello, en la zona clara hay menor celularidad.
Los clones de linfocitos B que han sido seleccionados positivamente se diferencian a:
-
Clulas de memoria
Clulas plasmticas especializadas en la produccin de anticuerpos. Las clulas
plasmticas sufren una expansin del RER.
Los antgenos que promueven esta cooperacin entre linfocitos T y B son antgenos proteicos
denominados antgenos timo-dependientes. No obstante, existen otro tipo de antgenos no
proteicos (antgenos timo-independientes) capaces de activar al linfocito B sin necesidad de
que interaccione con el linfocito T. Estos antgenos timo-independientes son capaces de unirse
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CLULAS NK
La activacin del linfocito NK est regulada por un equilibrio entre seales generadas por
receptores activadores y receptores inhibidores. Estos receptores reconocen molculas de la
superficie de las clulas y generan seales activadoras o inhibidoras que promueven o inhiben
las respuestas NK.
-
La mayora de los receptores inhibidores reconocen molculas del MHC1, expresadas por casi
todas las clulas sanas del cuerpo. Los linfocitos NK interpretan la presencia de MHC1 como
marcador de lo propio, normal y sano; y su falta, como una indicacin de infeccin o dao.
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No sabe con exactitud el tipo de ligando que reconocen los receptores activadores, pero s
podemos afirmar que estos ligandos se expresan en mayor cantidad en clulas infectadas o
estresadas que en clulas sanas.
-
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Muerte de la clula diana: los linfocitos NK tienen grnulos que contienen protenas
mediadoras de la muerte de las clulas diana. Cuando los linfocitos NK se activan, se
produce la exocitosis de los grnulos y la liberacin de las protenas al exterior de la clula.
A partir de este punto, existen varias teoras:
- Una protena del grnulo, llamada perforina, forma poros en la membrana de la
clula diana. Estos poros permiten la entrada al citoplasma de la clula de otras
protenas del grnulo: las granzimas. Las granzimas inician una cascada de
sealizacin que causan la muerte de las clulas diana por apoptosis
- Antes de entrar en la clula, las perforinas y granzimas forman complejo. Los
complejos son reconocidos por receptores de la clula diana. Se inicia un proceso
de endocitosis. Una vez en el interior, la vescula endoctica se rompe y la granzima
se libera al citosol. Se inicia una cascada de sealizacin que causan la muerte de
las clulas diana por apoptosis
- En ,los grnulos existen tres protenas: perforina, granzima y protena SG. Se
forman complejos de las tres protenas que penetran en la clula por endocitosis.
Una vez en el interior, la vescula endoctica se rompe y la granzima se libera al
citosol. Se inicia una cascada de sealizacin que causan la muerte de las clulas
diana por apoptosis
La liberacin de grnulos debe producirse de forma muy controlada. Esto requiere un buen
reconocimiento de la clula diana y la sinapsis de las membranas de la clula diana y la clula
NK.
Activacin de macrfagos (loop positivo): cuando se produce una infeccin, los macrfagos
son capaces de liberar IL-12. La IL-12 es capaz de actuar sobre los linfocitos NK, que
comienzan a secretar interfern gamma (IFN-). El IFN- acta nuevamente sobre los
macrfagos, activndolos para que destruyan los microbios fagocitados. Adems, el IFN-
producido por los linfocitos Nk de los ganglios linfticos tambin puede dirigir la
diferenciacin de los linfocitos T vrgenes en linfocitos Th1. Los linfocitos Th1 a su vez se
encargan de:
- La activacin de los macrfagos. Gracias a su TCR son capaces de reconocer
complejos MHC2-pptido extrao de la superficie de los macrfagos.
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-
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LINFOCITOS T CD8+
Los linfocitos T CD8 + se encargan de la lisis de las clulas que expresan MHC1 unido a pptidos
extraos. El mecanismo de la citotoxicidad mediada por CD8+ es prcticamente el mismo que
el de los linfocitos NK. Los CD8+ tienen grnulos que contienen protenas mediadoras de la
muerte de las clulas diana. Cuando los linfocitos NK se activan, se produce la exocitosis de los
grnulos y la liberacin de las protenas al exterior de la clula. Las protenas actan sobre la
clula diana segn las tres teoras explicadas anteriormente.
Adems, los linfocitos CD8+ son capaces de mediar una lisis granulo-independiente. Cuando el
TCR interacciona con el complejo MHC2-pptido extrao, se induce la expresin de FAS-L (FAS
ligando) en el linfocito T. FAS ligando interacciona con la protena FAS, que se expresa de
manera constitutiva en la clula diana. Esta interaccin produce la apoptosis de la clula diana.
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14. CITOQUINAS
Las citoquinas son protenas producidas y secretadas por muchos tipos celulares. Actan como
mediadores solubles, permitiendo a las clulas del SI comunicarse entre s. Regulan todos los
aspectos de la inmunidad innata y adaptativa.
Las citoquinas no se almacenan en el interior de las clulas, en cuanto se sintetizan, son
secretadas al exterior. Su sntesis se inicia gracias a una activacin celular que permite la
transcripcin de un gen hasta el momento silenciado. La activacin de la transcripcin es
transitoria.
La mayora de las citoquinas actan o bien sobre la misma clula que secreta la citoquina
(accin autocrina) o bien sobre una clula cercana (accin paracrina). Cuando se producen en
grandes cantidades pueden entrar en la circulacin y actuar a distancia (accin endocrina). Las
citoquinas se unen a receptores localizados en las clulas diana. La afinidad del receptor por la
citoquina es elevadsima.
Las citoquinas comparten las siguientes caractersticas:
-
Pleitropismo: las citoquinas son capaces de actuar sobre diferentes tipos de clulas y
tener mltiples efectos biolgicos
Redundancia: muchas citoquinas pueden desempear la misma accin
Efectos antagnicos: producen efectos contrarios.
Hay muchas formas distintas de clasificar las citoquinas. Para poder estudiarlas, nosotros
emplearemos la siguiente clasificacin:
-
A continuacin iremos desarrollando los diferentes tipos de citoquinas. Para ello se tendr en
cuenta:
-
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INMUNIDAD INNATA
Factor de necrosis tumoral (TNF)
FUENTE
El TNF lo producen los macrfagos, las clulas dendrticas y los neutrfilos
ESTMULO
La produccin de TNF es estimulada por:
PAMP: Ej. LPS
Interfern , producido por clulas NK en un primer momento, y despus por
los linfocitos T que llegan al foco inflamatorio.
CLULA DIANA
Los receptores para TNF estn presentes en la mayora de tipos celulares.
EFECTO
Inicia una cascada de sealizacin intracelular que finaliza con:
- La activacin del factor de transcripcin NF-B. Se induce as la expresin gnica
- La activacin de caspasas que provocan la apoptosis de la clula diana.
Cuando se incrementan los niveles de TNF, se producen una serie de efectos sistmicos:
-
El TNF reduce la contractilidad miocrdica y el tono del msculo liso vascular, lo que
produce una reaccin acentuada de la presin arterial
El TNF provoca trombosis intravascular, sobre todo como resultado de la prdida de
las propiedades anticoagulantes normales del endotelio.
La produccin prolongada de TNF causa prdida del apetito, con la consiguiente
prdida de clulas musculares y adipocitos. El paciente entra en un estado de
caquexia.
El TNF produce hipoglucemia.
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Interleuquina 1 (IL-1)
FUENTE
La IL-1 es producida por macrfagos, neutrfilos, clulas epiteliales y clulas endoteliales.
ESTMULO
La produccin de IL-1 es estimulada por:
PAMP: Ej. LPS
Interfern , producido por clulas NK en un primer momento, y despus por
los linfocitos T que llegan al foco inflamatorio.
CLULA DIANA
Clulas endoteliales, clulas epiteliales y linfocitos.
EFECTO
Inicia una cascada de sealizacin intracelular que finaliza con la activacin de los factores
de transcripcin NF-B y AP-1. Se induce as la expresin gnica
NF-B
Tanto el TNF como la IL-1 son capaces de iniciar una cascada de sealizacin que finaliza con la activacin del factor de
transcripcin NF-B.
Cuando NF-B se activa en clulas endoteliales, stas comienzan a expresar molculas de adhesin (selectinas e
integrinas). Las molculas de adhesin frenan a las clulas que circulan por el torrente sanguneo (leucocitos). Estas
clulas salen por diapdesis de los vasos y se dirigen al foco de infeccin.
Interfern de tipo 1
Los interferones de tipo 1 son citoquinas que median la respuesta inmunitaria innata
temprana frente a las infecciones vricas. Existen varios interferones de tipo 1. Los ms
importantes son:
-
IFN
IFN
FUENTE
- IFN: secretado por macrfagos, neutrfilos y clulas dendrticas
- IFN: secretado por varios tipos celulares
ESTMULO
Los estmulos ms potentes capaces de activar la sntesis de interfern de tipo 1 son los
cidos nucleicos vricos. Ej. Receptores de tipo RIG presentes en el citoplasma de las
clulas, reconocen cidos nucleicos vricos e inician vas de transmisin de seales que
finalizan con la transcripcin de IFN.
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*En la inmunidad adaptativa, los linfocitos T activados son capaces de estimular a los
macrfagos para que sinteticen interfern de tipo 1.
CLULA DIANA
El receptor de los interferones tipo 1, es un heterodmeros expresado por todas las clulas
nucleadas.
EFECTO
- Los interferones de tipo 1 activan la transcripcin de genes que confieren a las clulas
que an no han sido infectadas resistencia frente a la infeccin vrica ESTADO
ANTIVRICO. Por ejemplo, el IFN activa la sntesis de RNA-asas que rompen las cadenas
de RNA vricas.
- Aumentan la expresin de MHC1 en clulas infectadas, incrementando as la
probabilidad de que sean reconocidas por CD8+
- Provocan el secuestro de linfocitos vrgenes en los ganglios linfticos, lo que maximiza
sus oportunidades de encontrarse con el antgeno microbiano y activarse.
Normalmente, los linfocitos estn circulando por los ganglios linfticos a la espera de
ser activados. Est circulacin se produce gracias a un gradiente de esfingosina 1
fosfato. La esfingosina 1 fosfato es ms abundante en la linfa que en los ganglios. Los
linfocitos (que expresan receptores para la esfingosina 1 fosfato), salen de los ganglios
a favor de gradiente de concentracin.
Cuando se produce la infeccin, el interfern de tipo 1 induce la expresin de CD69
por parte del linfocito. El CD69 reduce la expresin en superficie del receptor para la
esfingosina 1 fosfato. Es por ello que los linfocitos quedan retenidos en los ganglios.
Los interferones de tipo 1 aumentan la citotoxicidad de los linfocitos NK y de los CTL
CD8+. Adems, promueven la diferenciacin de los linfocitos T vrgenes en el subgrupo
Th1 de linfocitos T cooperadores.
FUENTE
La IL-12 es secretada por macrfagos y clulas dendrticas
ESTMULO
Las clulas dendrticas y los macrfagos expresan CD40. La interaccin entre este CD40 y el
CD40L de los linfocitos T induce la sntesis de IL-12
CLULA DIANA
Las clulas diana son diferentes clulas implicadas en la inmunidad adaptativa: CD4+, CD8+
y clulas NK
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EFECTO
- Estimula la diferenciacin de los linfocitos T CD4+ en linfocitos efectores Th1.
- Aumenta la capacidad citotxica de linfocitos CD8+ y clulas NK
- Produce un crculo de activacin entre los macrfagos y los linfocitos NK y CD8+:
La IL-12 induce la expresin de IFN por parte de CD8+ y clulas NK.
El IFN impacta sobre los macrfagos, incrementando la sntesis de IL-12
INMUNIDAD ADAPTATIVA
Interleuquina 2 (IL-2)
FUENTE
La IL-12 es producida por los linfocitos T, sobre todo los CD4+
ESTMULO
Interaccin del linfocito T con el antgeno y coestimuladores
CLULA DIANA
La IL-12 acta sobre el propio linfocito T que la produce (respuesta autocrina) o sobre
linfocitos T adyacentes (respuesta paracrina)
EFECTO
- Estimula la supervivencia, proliferacin y diferenciacin de los linfocitos T activados
por el antgeno
- Es necesaria para la supervivencia y funcin de los linfocitos T reguladores (iTreg).
FUENTE
El IFN es producido por linfocitos Th1 CD4+, clulas NK y linfocitos CD8+
ESTMULO
- Los linfocitos NK secretan interfern gamma en respuesta a ligandos activadores
localizados en la superficie de clulas infectadas o estresadas, o en respuesta a la IL-12
- Los linfocitos T producen interfern gamma en respuesta al reconocimiento del
antgeno. La produccin de interfern gamma por parte del linfocito aumenta gracial a
IL-12 y la IL-18
CLULA DIANA
Macrfagos, linfocitos B y linfocitos T CD4+
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EFECTO
- Activa a los macrfagos para que maten a microbios fagocitados.
- Promueve el cambio de isotipo en los linfocitos B
- Promueve la diferenciacin de los linfocitos T CD4+ en el subgrupo Th1.
Interleuquina 4 (IL-4)
FUENTE
La IL-4 es producida por mastocitos, basfilos y linfocitos Th2 activados
ESTMULO
Procesos alrgicos (unin de IgE a receptores Fc) o infecciones producidas por helmintos.
CLULA DIANA
Linfocitos Th2
EFECTO
- Inhibe la diferenciacin hacia los subgrupos Th1 y Th17
- Promueve la diferenciacin del CD4+ ha Th2. *En la diferenciacin hacia Th2 es muy
importante la IL-10. La IL-10 acta sobre los macrfagos, inhibiendo la sntesis de IL-12.
CITOQUINAS HEMATOPOYTICAS
Las citoquinas hematopoyticas son aquellas que regulan la generacin de diferentes tipos de
clulas inmunitarias a partir de los precursores presentes en la mdula sea. En el timo, la
hiperproliferacin de precursores procedentes de la mdula sea, est mediada por una
citoquina hematopoytica, la IL-17.
QUEMOQUINAS
Las Quemoquinas regulan la migracin de clulas del SI. Las Quemoquinas CCL-19 y CCL-21
permiten:
-
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El CD2 de los linfocitos (glicoxilado) reconoce las protenas CD58 y CD48 (tambin
glicoxiladas) presentes en la APC.
La integrina LFA-1 del linfocito interacciona con la protena ICAM-3 presente en la
APC. Por norma general, las integrinas median interacciones de alta afinidad. Sin
embargo, en los linfocitos T podemos encontrar integrinas en 2 conformaciones: una
de baja y otra de alta afinidad.
Han de ser interacciones ntimas: las membranas del linfocito T y la APC han de
quedar yuxtapuestas para que los TCR y los complejos MHC2-pptido extrao queden
prximos entre s e interaccionen en caso de que el contacto sea productivo
Han de ser reversibles. Si el contacto no es productivo, estas uniones han de poder
disolverse sin demasiado gasto de energa. El 99,5% de los contactos entre linfocitos T
y APC son rpidos e improductivos. Los linfocitos T se mueven locamente entorno a las
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Adems de estas dos cascadas de sealizacin, una hacia la membrana y otra hacia el ncleo,
tiene lugar otro proceso: trfico de informacin gentica entre el linfocito T y la APC.
El linfocito t secreta una serie de vesculas en cuyo interior encontramos micro-RNAs. Estas
vesculas llegan hasta el interior de la APC. No se sabe exactamente que funcin cumple este
trfico de informacin gentica desde el linfocito T hasta la APC.
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Entre las migraciones de clulas del SI que tienen lugar en el ser humano cabe destacar:
-
En caso de tumor, el micro-entorno tumoral es capaz de engaar a las clulas del SI. Las
citoquinas tumorales provocan la transformacin de las clulas dendrticas en macrfagos de
tipo II. Los macrfagos de tipo II secretan citoquinas que favorecen la proliferacin de clulas
tumorales y que impiden la entrada de leucocitos agresivos en el foco del tumor.
EXTRAVASACIN
Durante la clase de hoy vamos a explicar:
-
Rodamiento: los leucocitos ruedan sobre el endotelio de los vasos sanguneos, cada
vez a menor velocidad. Esta primera etapa est mediado por selectinas.
Adhesin: los leucocitos se frenan por completo, gracias a integrinas
Diapdesis: el leucocito sale del vaso sanguneo para dirigirse al foco de inflamacin.
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RODAMIENTO
Tanto los leucocitos como las clulas endoteliales expresan en su membrana selectinas y
ligandos para selectinas.
-
El leucocito expresa:
L-selectina
Ligando ESL-1
Las clulas endoteliales expresan:
E-selectina y P-selectina (reconoce el ligando ESL-1 expresado por el leucocito)
Ligandos PSGL-1, GlyCAM1, CD34, MAdCAM1 (estos ligandos son reconocidos
por la L-selectina del leucocito).
En la fase de rodamiento, los leucocitos se acercan al endotelio, de modo que las selectinas
interaccionan con sus ligandos. Los ligandos de las selectinas son protenas glicoxiladas. Por
tanto, estas interacciones se consideran interacciones de baja afinidad.
*Deficiencia del enzima -3-fucosil transferasa: este enzima participa en la glicoxilacin de los
ligandos para selectinas. Si se produce una deficiencia de este enzima, se expresarn los
ligandos sin glicoxilar. Estos ligandos no glicoxilados NO SON RECONOCIDOS por las selectinas.
No se produce el rodamiento y, en consecuencia, no hay respuesta inflamatoria. Para tratar
esta inmunodeficiencia se suministra al paciente fucosa oral.
ADHESIN
Los leucocitos se frenan por completo, gracias a integrinas. Para que se produzca este frenado
es necesario que las integrinas pasen de un estado de baja afinidad a un estado de alta
afinidad. Este proceso se conoce como transactivacin de integrinas.
La transactivacin de integrinas est mediada por quimiocinas. Las quimiocinas se expresan en
la superficie luminal de las clulas endoteliales. Estas quimiocinas son reconocidas por
receptores con 7 dominios transmembrana acoplados a protenas G, localizados en los
leucocitos. Durante el rodamiento, los receptores de los leucocitos interaccionan con las
quimiocinas del endotelio. Gracias a las selectinas, que frenan progresivamente los leucocitos
durante el rodamiento, aumenta el tiempo de interaccin quimiocina-receptor.
La interaccin quimiocina-receptor genera una serie de seales que se propagan por la
membrana del leucocito e inducen el cambio conformacional de las integrinas: estas protenas
pasan de tener una conformacin de baja afinidad a tener una conformacin de alta afinidad.
Las integrinas de alta afinidad son capaces de interaccionar con sus ligandos, localizados en el
endotelio. Por ejemplo, la integrina VLA-4 interacciona con VCAM-1; y la integrina FLA-1
interacciona con ICAM-1
No obstante, el frenado del leucocito no solo depende de la afinidad, sino tambin de la
avidez.
-
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Las integrinas son protenas heterodimricas, formadas por una cadena y una .
Existen entre 15-20 cadenas y entre 10-15 cadenas diferentes.
No todas las combinaciones entre las diferentes cadenas y son posibles: por ejemplo,
la cadena 1 solo es capaz de interaccionar con la cadena 1.
Hay dos combinaciones importantes que es necesario saberse:
4-1: integrina VLA-4
L-2: integrina FLA1
DIAPDESIS
Una vez que el linfocito est bien adherido, explora el endotelio gracias a sus pseudpodos con
el objetivo de encontrar un punto dbil por donde poder extravasarse.
Durante el proceso de diapdesis, el endotelio no acta de forma pasiva, sino que colabora en
la extravasacin del linfocito.
Existen dos tipos de rutas:
-
Ruta paracelular: el linfocito sale del vaso sanguneo abrindose espacio entre dos
clulas endoteliales. Este proceso requiere rotura transitoria y reversible de las
uniones adherentes entre clulas endoteliales. Las encargadas de romper estas
uniones son las metaloproteasas localizadas en la punta de los pseudpodos del
leucocito. Por otro lado, este proceso se ve favorecido por el TNF y la trombina
secretados en el foco inflamatorio. Ambas molculas producen la contraccin del
endotelio. Al contraerse, las clulas endoteliales se separan y dejan espacios entre
ellas, permitiendo la salida del leucocito.
Ruta transcelular: la clula endotelial acta como una clula fagoctica. Engulle al
linfocito por el dominio apical y lo libera por el basolateral.
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Inmunologa
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NEUTRFILOS
- Fase de rodamiento:
Expresan L-selectina, que se une al ligando PSGL-1 expresado por el
endotelio
Expresan el ligando ESL-1, reconocido por las P-selectinas y E-selectinas del
endotelio
- Fase de adhesin
Expresan receptores de quimiocinas:
CXCR1: se une a IL-8
CXCR2: se une a IL-8
Expresan integrinas
LFA-1 y Mac-1: se unen a ICAM-1
MONOCITOS
- Fase de rodamiento:
Expresan L-selectina, que se une al ligando PSGL-1 expresado por el
endotelio
Expresan el ligando ESL-1, reconocido por las P-selectinas y E-selectinas del
endotelio
- Fase de adhesin
Expresan receptores de quimiocinas:
CCR2: se une a CCL2
CX3CR1: se une a fractalquina
Expresan integrinas
LFA-1: se unen a ICAM-1
VLA-4: se une a VCAM-1
LINFOCITOS T EFECTORES
- Fase de rodamiento:
Expresan L-selectina, que se une al ligando PSGL-1 expresado por el
endotelio
- Fase de adhesin
Expresan receptores de quimiocinas:
CCR5: se une a CCL5
CXCR3: se une a CXCL3
Expresan integrinas
LFA-1: se unen a ICAM-1
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Inmunologa
2013/14
Fase de rodamiento:
Expresan L-selectina, que se une al ligando PSGL-1 expresado por el
endotelio
Fase de adhesin
Expresan receptores de quimiocinas:
CCR7: se une CCL19 y CCL21
Expresan integrinas
LFA-1: se unen a ICAM-1
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Inmunologa
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HISTORIA
A lo largo de la historia se han llevado a cabo varios estudios acerca de la tolerancia:
-
En los aos 40, los dos conceptos anteriores se unificaron: se llevaron a cabo una serie de
trasplantes de piel entre cepas distintas de ratones. Al trasplantar piel de un ratn adulto de la
cepa A a un ratn adulto de la cepa B, se generaba respuesta inmunolgica y rechazo. Se
seleccionaron entonces ratones neonatos de la cepa B y se les inyect linfocitos de la cepa A.
Los ratones neonatos generaron tolerancia a estos linfocitos (microquimerismo20). A
continuacin se volvi a llevar a cabo el trasplante de piel de la cepa A a la cepa B. No se
produjo rechazo.
20
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Inmunologa
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Los linfocitos T que reconocen antgenos propios con una avidez muy baja, o que ni
siquiera los reconocen, mueren por apoptosis
Los linfocitos T que reconocen antgenos propios con alta avidez o bien son
eliminados, o bien evolucionan a linfocitos T reguladores (tolerancia). Los linfocitos T
reguladores son un linaje especial de linfocitos que siguen una va de maduracin no
convencional. Tienen una funcin esencial en la tolerancia perifrica.
21
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Inmunologa
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TOLERANCIA PERIFRICA
Los mecanismos de tolerancia perifrica son los responsables de la tolerancia del linfocito T a
antgenos propios especficos de tejidos, que no abundan o no estn presentes en el timo.
Existen tres mecanismos de tolerancia perifrica:
-
2. Anergia
La exposicin de linfocitos T maduros a un antgeno sin coestimulacin provoca la inactivacin
funcional de los linfocitos.
En este proceso, las clulas autorreactivas no mueren, sino que pierden su capacidad de
responder al antgeno. La activacin completa de los linfocitos T requiere el reconocimiento
del antgeno por el TCR y por coestimuladores. CD28 (localizado en el linfocito T) es un
coestimulador encargado de reconocer B7-1 y B7-2 (localizados en la APC)
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Inmunologa
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El CTLA4 tambin se une a las molculas B7-1 y B7-2. El CTLA-4 tiene ms afinidad por las
molculas B7 que el CD28. As impide que las molculas B71 y B72 de la APC se unan al CD28.
Adems de secuestrar el B7, inhibiendo las seales de coestimulacin, el CTLA4 es capaz de
inhibir las seales producidas por el TCR. El CTLA-4 presenta una cola citoplasmtica con
tirosinas que se fosforilan y reclutan fosfatasas (no es un dominio ITIM). Estas fosfatasas
inhiben las seales del TCR.
En caso de infeccin grave, las clulas presentadoras de antgenos expresan B7 en mayores
cantidades. Se satura el CTLA4 y el B7 es capaz de unirse a los CD28.
Las clulas tumorales expresan grandes cantidades de CTLA-4 evitando as que los linfocitos T
reconozcan eptopos tumorales. En ensayos clnicos con anticuerpos anti-CTLA4 para inducir
respuestas inmunitarias frente al cncer, algunos de los pacientes tratados sufrieron
manifestaciones de autoinmunidad con inflamacin de varios rganos.
Existen otros receptores que actan de forma similar a CLA4, como por ejemplo PD1.
3. Linfocitos reguladores
Los linfocitos T reguladores son un linaje de linfocitos encargados de suprimir las respuestas
inmunitarias frente a lo propio.
Las caractersticas fenotpicas de los linfocitos T reguladores son las siguientes:
-
En el timo
Algunos linfocitos T nave (linfocitos T vrgenes) de la periferia son capaces de
convertirse en linfocitos T reguladores por mecanismos que an no se conocen con
exactitud. Estos linfocitos reciben el nombre de linfocitos T reguladores inducibles.
Linfocitos T reguladores CD4+: por ejemplo, Tr1 y Th1. Tr1 y Th1 se encargan de la
tolerancia en las mucosas. Las rutas de tolerancia oral dependen absolutamente de
estas poblaciones.
Linfocitos T reguladores CD8+: destruyen linfocitos autorreactivos (citotoxicidad
celular)
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Inmunologa
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Secuestro metablico: los linfocitos T efectores requieren Il-2 para proliferar. Los
linfocitos T reguladores secuestran la Il-2, impidiendo la proliferacin de los linfocitos T
efectores.
Adems, los T reguladores secretan adenosina. La adenosina sale a travs de un
complejo formado por CD39-CD76, interacciona con el receptor de adenosina del
linfocito T efector y activa fosfatasas. El linfocito T efector entra en un estado de
anergia.
Contacto clula a clula: los linfocitos T reguladores son pegajosos. Se unen a los
linfocitos T efectores y les inyectan AMPc. La saturacin con AMPc genera un bloqueo
metablico.
Secrecin de citoquinas supresoras:
Il-10: es un inhibidor de los macrfagos y las clulas dendrticas activados:
Inhibe la produccin de Il-12 por parte de los macrfagos y las clulas
dendrticas. Il-12 es un estmulo fundamental para la produccin de
IFN
Inhibe la expresin de coestimuladores (B71 y B7222) y molculas
MHC2 en las clulas dendrticas y los macrfagos. Al inhibir la
expresin de molculas MHC2, inhibe la activacin de linfocitos T
TGF-: inhibe la proliferacin y funciones efectoras de los linfocitos
Il-35
Edicin del receptor: cuando los linfocitos B inmaduros de la mdula sea reconocen
antgenos propios con elevada afinidad, el BCR enva una seal suficientemente
intensa como para activar las recombinasas Rag1 y Rag2. Las recombinasas Rag1 y rag2
inician una nueva ronda de recombinacin VJ en el locus de la cadena ligera. Se
expresa una nueva cadena ligera, lo que da lugar a un receptor de linfocito B con una
nueva especificidad.
Eliminacin: si la edicin fracasa, los linfocitos B inmaduros mueren por apoptosis
Anergia: linfocitos B inmaduros que reconocen antgenos propios con una avidez muy
baja.
TOLERANCIA PERIFRICA
-
22
Anergia
Apoptosis
Receptores inhibidores: el receptor CD22 (localizado en los linfocitos B) acta de la
misma forma que CTLA4
B71=CD80; B72=CD86
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Inmunologa
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AUTOINMUNIDAD
El SI de un sujeto reacciona contra antgenos propios. La autoinmunidad se debe a un fracaso
de los mecanismos de tolerancia frente a lo propio:
-
Propensin gentica: entre los genes asociados a la autoinmunidad, cabe destacar los
genes que codifican para las molculas del MHC.
Infecciones:
Activacin de las APC: los microbios activan las APC. En caso de padecer
enfermedad autoinmune, esta se ve agravada por presencia de microbios
Determinados agentes patgenos expresan eptopos semejantes a antgenos
propios. Ej: el estreptococo expresa un eptopo bacteriano muy similar a la
miosina cardaca. El organismo genera anticuerpos que atacan tanto al
microbio como al corazn. Se genera miocarditis.
Disrupcin del privilegio inmune: invasin de zonas que cuentan con barreras
fsicas que impiden el paso de linfocitos (ojo y el SNC). Algunas infecicones so
capaces de producir daos en estas barreras fsicas.
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Inmunologa
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18. HIPERSENSIBILIDAD I
Las reacciones de hipersensibilidad son reacciones inmunes anmalas, excesivas o crnicas,
que generan lesiones tisulares y enfermedades.
Las reacciones de hipersensibilidad pueden estar provocadas por:
-
Reacciones de autoinmunidad
Reacciones contra antgenos extraos.
HIPERSENSIBILIDAD DE TIPO II
La hipersensibilidad de tipo II est causada por anticuerpos (IgM e IgG) que reconocen
antgenos de membrana o de la matriz celular. Los anticuerpos reconocen antgenos
especficos de determinadas clulas o tejidos. Estas enfermedades no son, por tanto,
sistmicas.
Los anticuerpos contra antgenos tisulares producen enfermedades por tres mecanismos
principales:
-
Inmunologa
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Agonistas: los anticuerpos se unen a los receptores para TSH presentes en las
clulas epiteliales de la glndula tiroides. Se produce una hiperactivacin de la
glndula HIPERTIROIDISMO
Antagonistas: interaccionan con el receptor de acetilcolina de las clulas
musculares. Se interponen en la sinapsis neuromuscular MIASTENIA
GRAVIS, enfermedad que cursa con parlisis.
Inmunologa
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que se suministran tienen una vida media muy corta y no son capaces de atravesar la
placenta.
-
HIPERSENSIBILIDAD DE TIPO 3
Enfermedades causadas por inmunocomplejos circulantes que se depositan en diferentes
rganos. Los inmunocomplejos pueden depositarse en cualquier rgano. Se trata, por tanto,
de enfermedades sistmicas.
Los inmunocomplejos pueden componerse de anticuerpos unidos a antgenos propios o a
antgenos extraos. La sintomatologa de las enfermedades no depende del tipo de antgeno,
sino del lugar donde se deposite el inmunocomplejo.
La acumulacin de inmunocomplejos puede deberse a:
-
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Inmunologa
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Patogenia
Los inmunocomplejos se depositan y activan el complemento. La liberacin de fragmentos
pequeos favorece la llegada de leucocitos y aumenta la permeabilidad vascular. Al aumentar
la permeabilidad vascular, los inmunocomplejos son capaces de pasar el tejido del glomrulo o
de la sinovia, donde siguen activando el complemento. Adems, los NK y fagocitos tisulares
reconocen las regiones Fc de las Ig del inmunocomplejo, activndose. Todo ello conlleva a
dao tisular.
Enfermedad del suero: fue descrita en el ao 1911 por el doctor Clemens von Pirquet.
En aquella poca, la difteria se trataba con suero procedente de caballos inmunizados
con la toxina diftrica. El suero de los caballos contena anticuerpos antitoxnicos que
bloqueaban la accin de la toxina. Von Pirquet observ que, al cabo de varios das, los
pacientes que haban sido tratados con el suero equino, desarrollaban artritis,
vasculitis e insuficiencia renal. Von Pirquet lleg a la conclusin de que los pacientes
generaban inmunocomplejos complejos que se depositaban en las articulaciones, los
vasos sanguneos y el rin.
Hoy en da, la enfermedad del suero es provocada por diferentes antgenos exgenos.
ENFERMEDADES AUTOINMUNES
-
104
Susceptibilidad gentica
Exposicin a la luz UV
Dficit en la eliminacin de cuerpos apoptticos. Existe un exceso de
autoantgenos (DNA de doble cadena) procedentes de los cuerpos apoptticos
que no son eliminados por el complemento. Los linfocitos B autorreactivos
LAURA BERZAL PLAZA
Inmunologa
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generan anticuerpos contra estos autoantgenos. Los anticuerpos
generalmente reconocen ribonucleoprotenas e histonas del DNA de doble
cadena.
Crioglobulinemia
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Inmunologa
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19. HIPERSENSIBILIDAD II
HIPERSENSIBILIDAD DE TIPO IV
La hipersensibilidad de tipo IV est mediada por linfocitos T de memoria y macrfagos. Las
reacciones inflamatorias estn desencadenas por:
-
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Inmunologa
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Inmunologa
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memoria. El linfocito CD8+ lisa las clulas del husped provocando una reaccin
inflamatoria que conocemos como eccema.
-
HIPERSENSIBILIDAD DE TIPO I
La hipersensibilidad de tipo I est mediada por IgEs unidas a la membrana de mastocitos,
basfilos y eosinfilos. Es una hipersensibilidad inmediata, que tiene lugar en pocos minutos
tras la exposicin al antgeno.
La mayora de las reacciones alrgicas (aunque no todas) estn mediadas por hipersensibilidad
de tipo I. No obstante, en este tema utilizaremos la palabra alrgeno para referirnos a los
antgenos responsables de las reacciones de hipersensibilidad inmediata.
Antes de continuar con los mecanismos efectores, vamos a explicar dos conceptos
importantes:
-
FASE DE SENSIBILIZACIN
Primera exposicin del paciente al alrgeno. Las clulas dendrticas del epitelio a travs del
cual entran los alrgenos capturan los antgenos, los transportan a los ganglios linfticos y se
los presentan a los linfocitos T vrgenes CD4+. Los linfocitos T se diferencian entonces a
linfocitos Th2. Los Th2 secretan Il-4 e Il-3.
Los linfocitos B reconocen ambas citocinas, sufren un cambio de isotipo de cadena pesada y
comienzan a secretar IgE.
Las IgE recin sintetizadas se unen a los receptores Fc de mastocitos, basfilos y eosinfilos.
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Inmunologa
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Fase tarda: mediada por citocinas producidas por los Th2, mastocitos, basfilos y
eosinfilos. Estas citocinas producen reacciones inflamatorias al cabo de varias horas:
Mecanismo genticos
Mecanismos ambientales
Caractersticas de los propios alrgenos.
FACTORES GENTICOS
Existen muchos polimorfismos de diferentes genes que aumentan la predisposicin a padecer
hipersensibilidad:
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Inmunologa
-
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Polimorfismos que afectan a genes que codifican para la Il-4, Il-5 e Il-13. La IL-5 est
implicada en la activacin de eosinfilos, mientras que las otras dos en la
diferenciacin hacia Th2.
Polimorfismos que afectan a genes que codifican para el MHC2.
Polimorfismos que afectan a genes que codifican para los receptores de IgEs de la
superficie de macrfagos, basfilos y eosinfilos.
AMBIENTALES
Teora de la higiene: en los pases desarrollados, la incidencia de infecciones ha disminuido
mucho, gracias a la utilizacin de vacunas y antibiticos. Al no haber situaciones
proinflamatorias de vez en cuando, se favorece la diferenciacin hacia Th2. Cuanta ms
higiene, menos condiciones proinflamatorias.
CARACTERSTICAS DE LOS ALRGENOS.
No todas las molculas son capaces de actuar como alrgenos. Para que una molcula pueda
ser considerada un alrgeno, capaz de provocar una hipersensibilidad de tipo I, ha de tener las
siguientes caractersticas:
-
Muchos de los alrgenos son enzimas (por ejemplo, las proteasas del veneno de algunos
insectos).
Para que se desencadene una reaccin de hipersensibilidad, es necesaria la exposicin
repetida al alrgeno.
Inmunologa
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RECEPTOR DE IgE
Los receptores para IgE estn formados por 1 subunidad , una subunidad y dos subunidades
(las dos cadenas gamma son idnticas entre s).
-
La cadena presenta dos colas citoplasmticas: una de ellas con un dominio ITAM y la otra
unida a una tirosn-kinasa denominada Lyn. Las cadenas presentan 1 nica cola
citoplasmtica cada una, con dominios ITAM.
La cascada de sealizacin tiene lugar de la siguiente forma:
-
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Inmunologa
-
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Los tres componentes anteriormente descritos, estn presentes en los grnulos de mastocitos,
basfilos y eosinfilos. Adems, los grnulos de eosinfilos contienen:
-
Ambos componentes tienen poco que ver con la hipersensibilidad de tipo I. Estn implicados
en la eliminacin de helmintos.
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Las patologas cutneas ms frecuentes son la dermatitis atpica y la urticaria. Ambas cursan
con edema, picor y enrojecimiento de la piel. La dermatitis atpica afecta principalmente a
nios y cursa en brotes.
ALERGIA A ALIMENTOS
La reaccin de hipersensibilidad tiene lugar a nivel del intestino. Cursa con aumento del
peristaltismo y con edema. Los sntomas son: dolor clico, vmitos y diarrea.
ASMA
El asma es una enfermedad inflamatoria que produce la obstruccin intermitente y reversible
de los bronquios e hiperreactividad bronquial a los broncoconstrictores. Los pacientes sufren
insuficiencia respiratoria aguda.
Las aminas vasoactivas no cumplen un papel importante en este tipo de reaccin de
hipersensibilidad; los realmente implicados son los leucotrienos.
Los Th2, eosinfilos y mastocitos perpetan los sntomas.
SHOK ANAFILCTICO
El shok anafilctico se debe a la presencia del antgeno en el torrente sanguneo. La anafilaxia
est caracterizada por el aumento de la permeabilidad vascular y el consiguiente edema de
muchos tejidos. Debido a la salida de plasma se produce una bajada de la volemia. Esta bajada
del volumen sanguneo puede provocar un fallo cardaco, a menudo mortal.
Solo algunos alrgenos son capaces de provocar un shok anafilctico. Ej: veneno de insectos
antibiticos y algunos alimentos (frutos secos o mariscos).
TRATAMIENTO
-
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Inmunologa
-
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Inmunologa
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1. BARRERA EPITELIAL
Los epitelios actan no solo actan como una barrera mecnica, sino tambin como una
barrera qumica, gracias a su pH bajo y a la produccin de determinadas sustancias que
inhiben el crecimiento de microorganismos (enzimas y defensinas). Las defensinas son
pptidos antibacterianos sintetizados por las propias clulas epiteliales. La produccin de
estas defensinas puede ser:
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Inmunologa
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Constitutiva: se producen siempre
Inducida: por unin de patrones bacterianos a toll-like receptors.
Entre otras funciones, las defensinas: rompen la pared bacteriana, actan como sustancias
quimiotcticas para los macrfagos e inducen la maduracin de las clulas dendrticas.
2. INMUNIDAD INNATA
Constituye la primera lnea de defensa contra los agentes extraos. Consta con
mecanismos de defensa celulares y bioqumicos que existen incluso antes que la infeccin,
permitiendo responder con rapidez a ella. En ella participan los fagocitos, clulas
dendrticas, clulas NK, complemento, citocinas y quimiocinas.
3. INMUNIDAD ADAPTATIVA
Inmunidad celular: mediada por linfocitos T
CD4+: Th1, Th2 y Th17
CD8+
Inmunidad humoral: mediada por linfocitos B que producen anticuerpos que
circulan por el torrente sanguneo.
La inmunidad adaptativa cuanta con memoria inmunolgica. Los linfocitos T y B
responden de forma ms rpida y eficaz en la segunda entrada del microorganismo. La
memoria inmunolgica es la base de la vacunacin.
No todos estos mecanismos del SI se activan en todas las infecciones por microorganismos. La
respuesta depende sobre todo del sitio de replicacin del microorganismo (intracelular o
extracelular). *Aunque sean intracelulares, todos los patgenos presentan una fase
extracelular.
BACTERIAS EXTRACELUALRES
MECANISMOS DE DEFENSA DEL ANFITRIN
1. RESPUESTA INNATA
- Complemento: activacin de la va clsica (se deposita C3 en la superficie de la
bacteria) y de la va de las lectinas (las lectinas de unin a manosa reconocen los
residuos de manosa de la superficie bacteriana). La va clsica participa de forma
retardada, pues su activacin requiere de un anticuerpo.
- Fagocitosis: los fagocitos poseen muchos receptores capaces de reconocer
antgenos bacterianos. Una vez fagocitada, la bacteria es destruida en el
fagolisosoma. Adems, los macrfagos activados secretan citocinas
proinflamatorias (TNF, Il-1, Il-8, Il-6, Il-12) que favorecen el reclutamiento de
leucocitos
- Reaccin inflamatoria
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Inmunologa
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2. RESPUESTA ADAPTATIVA
- Inmunidad humoral: anticuerpos secretados por los linfocitos B. Los anticuerpos
llevan a cabo las siguientes funciones:
Neutralizacin
Opsonizacin y fagocitosis
Activacin de la va clsica del complemento
Inmunidad celular: mediada por linfocitos T CD4+
MECANISMOS DE EVASIN DE LAS BACTERIAS
A lo largo de la historia, las bacterias han ido desarrollando diferentes mecanismos con el
objetivo de evadir la accin del SI. Algunos de estos mecanismos son:
-
BACTERIAS INTRACELUALRES
MECANISMOS DE DEFENSA DEL ANFITRIN
1. RESPUESTA INNATA:
- Fagocitos: neutrfilos y macrfagos. Los macrfagos secretan Il-12, citocina
encargada de activar a las clulas NK
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Inmunologa
-
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2. RESPUESTA ADAPTATIVA
- Inmunidad celular: mediada por linfocitos T tanto CD4+ como CD8+.
- La inmunidad humoral es inefectiva, pues las bacterias estn en el interior de las
clulas, fuera del alcance de los anticuerpos.
MECANISMOS DE EVASIN DE LAS BACTERIAS
-
Bacterias que no infectan APC. Al no infectar APC, estas no pueden presentar los
antgenos a los linfocitos T
Ruptura del fagolisosoma (Ej.Listeria): las sustancias microbicidas del fagolisosoma
se pierden en el citoplasma
Inhibicin de la formacin del fagolisosoma.
Induccin de anergia de linfocitos T
Alteracin del MHC de las PC, impidiendo as la correcta presentacin del
antgeno.
VIRUS
Los virus son patgenos intracelulares obligados.
MECANISMOS DE DEFENSA DEL ANFITRIN
1. RESPUESTA INNATA:
- Citocinas especficas: interferones de tipo 1 (IFN e IFN). Entre las funciones de
los IFN de tipo 1 encontramos:
o Inhibicin de la replicacin vrica (tiene lugar en el interior de las clulas)
o Aumento de la expresin de MHC1 de las clulas presentadoras de
antgenos
o Activacin de las clulas NK.
- Clulas NK
2. RESPUESTA ADAPTATIVA:
- Inmunidad celular: linfocitos T, tanto CD4+ como CD8+.
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Inmunologa
-
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PARSITOS
La mayora de los parsitos tienen ciclos vitales complejos y suelen provocar infecciones
crnicas, debido a que en cada una de las etapas de su ciclo, el parsito tiene una composicin
antignica distinta.
MECANISMOS DE DEFENSA DEL ANFITRIN
1. RESPUESTA INNATA:
- Fagocitos: muchas veces, los parsitos son ms grandes que el fagocito. En estos casos,
la fagocitosis es ineficaz.
- Citocinas: IFN-. Las funciones de esta citocina son:
Activacin macrofgica
Toxicidad directa
Diferenciacin hacia Th1
Favorece la produccin de radicales libres
Induce la sntesis de molculas proapoptticas como FAS y FASL
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Inmunologa
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2. RESPUESTA ADAPTATIVA:
- Respuesta celular: linfocitos T CD8+
- Respuesta humoral: mediada por anticuerpos
Se ha desarrollado un tipo de inmunidad adaptativa especfica frente a helmintos. Se pone en
marcha un tipo de citotoxicidad especfico, mediado por IgE.
Los antgenos de los helmintos favorecen la diferenciacin hacia Th2. Las respuestas Th2
inducen la produccin de IgE. Las IgE se unen a los antgenos de superficie de los parsitos. A
continuacin, son reconocidas por mastocitos, basfilos y eosinfilos, que liberan sus grnulos
sobre el helminto. La protena catinioca y la protena bsica principal, liberadas por
eosinfilos, son especialmente relevantes.
MECANISMOS DE EVASIN DE LOS PARSITOS
-
HONGOS
Los diferentes hongos que afectan al ser humano pueden ser intra o extracelulares. Por lo
tanto, las respuestas inmunitarias frente a ellos suelen ser combinaciones de las inducidas por
las bacterias intracelulares y extracelulares.
*Poco importante. No caer en el examen.
120
Inmunologa
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21. INMUNODEFICIENCIAS
Denominamos inmunodeficiencias a trastornos causados por defectos de uno o ms
componentes del SI. El SI deja de proteger al organismo frente a infecciones y procesos
cancerosos. Los pacientes que sufren inmunodeficiencias presentan:
-
Alta susceptibilidad a padecer infecciones. Adems, una vez que contraen una
infeccin, esta se hace crnica.
Alta susceptibilidad a padecer determinados tipos de tumores
Reacciones autoinmunes
Reacciones de hipersensibilidad.
Existe otro modo de clasificar las inmunodeficiencias, atendiendo al componente del SI que se
ve afectado
Alteracin de linfocitos T
Alteracin de linfocitos B
Defectos combinados de ambos tipos celulares (linfocitos T y linfocitos B)
Defectos en la interaccin entre la APC y el linfocito T
Alteracin de fagocitos
121
Inmunologa
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INMUNODEFICIENCIAS CONGNITAS
Los pacientes con inmunodeficiencias congnitas son ms susceptibles a las infecciones. Estas
infecciones se vuelven crnicas y graves. Los antibiticos solo las resuelven parcialmente.
Con frecuencia, estn causadas por patgenos oportunistas, que no producen enfermedad en
individuos inmunocompetentes.
Si una vez valorado esto, la sospecha contina, se lleva a cabo una valoracin del sistema
inmune:
1. En primer lugar, se llevar a cabo una valoracin general. Se pide un anlisis de sangre que
contenga la siguiente informacin:
Cuantificacin de Igs
Cuantificacin de linfocitos y fagocitos (hemograma). No se cuantifican los
linfocitos en general, sino las distintas subpoblaciones por separado (CD4+,
CD8+, linfocitos B y linfocitos NK). *La cuantificacin de linfocitos se lleva a
cabo por citometra de flujo.
2. A continuacin se realiza una avaluacin de la funcin de las clulas. No se evala la
funcin de todos los tipos celulares del SI. Solo se evaluarn las clulas que se sospecha
que puedan estar alteradas.
Linfocitos T.
Estimulacin con mitgenos (fitohemaglutinina y PHA): se comprueba as
la correcta proliferacin de linfocitos T
Valoracin de respuesta especfica a un antgeno: se evoca una reaccin de
hipersensibilidad de tipo IV. Por ejemplo, mediante la prueba de la
122
Inmunologa
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tuberculina. Si la funcin de los linfocitos T est alterada, no se producir
la reaccin de hipersensibilidad.
Linfocitos B
Nefelometra: cuantificacin de Igs a nivel general. Los niveles de Igs
incrementan con la edad: que un recin nacido tenga niveles de
anticuerpos bajos es perfectamente normal.
Cuantificacin de Igs especficas para un antgeno:
Cuantificacin de isohemaglutininas: anticuerpos que se sintetizan
de forma natural contra los grupos sanguneos que no son el
propio.
Anticuerpos que se generan contra determinadas toxinas con las
que previamente se ha vacunado al paciente. *Hay que tener
cuidado on las vacunaciones de pacientes inmunodeprimidos,
pues pueden resultar potencialmente mortales.
Fagocitos
Valoracin del Burst respiratorio mediante citometra de flujo. Se lleva a
cabo gracias al test de dihidrorodamina-rodamina. Si la actividad de
fagocitos es normal, tras ser estimulados, fabrican radicales libres de
oxgeno, que oxidan la dihidrorodamina a rodamina. Mientras que la
dihidrorodamina no es fluorescente, la rodamina s lo es, pudindose
cuantificar mediante citometra de flujo.
Valoracin de la capacidad quimiotctica y de migracin: se lleva a cabo
por citometra de flujo, centrndonos solo en las molculas de adhesin de
la superficie de los fagocitos.
Complemento
Hemolisis: se incuban eritrocitos con anticuerpos dirigidos contra los
antgenos de los propios eritrocitos. Se vierte el suero del paciente: si hay
complemento, se unir a los Igs y lisar los eritrocitos. Si los niveles de
protenas del complemento son bajos, o directamente no hay
complemento, no hay lisis
Nefelometra y tcnicas de biologa celular: nos permiten conocer con
exactitud qu componente del complemento es el que est afectado.
DEFICIENCIAS DE LINFOCITOS T
Estn provocadas por alteraciones de molculas que participan en distintas etapas de la
activacin de los linfocitos T
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Los pacientes con fallos en los linfocitos T sufren infecciones muy graves desde las pocas
semanas o meses de vida.
DEFICIENCIAS DE LINFOCITOS B
GAMMA GLOBULINEMIA
Enfermedad ligada al cromosoma X. Se produce un bloqueo en la maduracin de los linfocitos
B, de forma que estos quedan en la mdula sea en el estado de pre-B. Este bloqueo en la
maduracin se debe a un defecto del gen que codifica para la Btk (torisina-kiansa).
Los pacientes carecen de linfocitos B maduros y anticuerpos en sangre perifrica. Sufren
especialmente infecciones provocadas por bacterias extracelulares, como estafilococos y
estreptococos. En nios son frecuentes las bronquitis y neumonas de repeticin, incluso
infecciones graves como encefalitis.
Los pacientes con gamma globulinemia tambin suelen padecer parasitosis por Giardia
Lamblia: cursa con enteritis y malabsorcin).
DFICIT SELECTIVO DE IgA
Es la inmunodeficiencia congnita ms frecuente. Se debe a la falta de maduracin de
linfocitos B hacia clulas plasmticas productoras de IgA.
El nmero de linfocitos B y T es normal, al igual que los niveles de IgM e IgG.
En general, se trata de sujetos asintomticos. En caso de manifestarse algn tipo de trastorno
seran: infecciones del tracto intestinal y respiratorio y enfermedades autoinmunes (lupus,
enfermedad celaca).
INMUNODEFICIENCIA COMN VARIABLE
Conjunto heterogneo de trastornos provocados por dficit de IgM, IgG e IgA. Estos dficits
pueden deberse a:
Dficit de linfocitos B
Fallos en la interaccin entre el linfocito B y el linfocito T: en este caso, el nmero de
linfocitos B circulantes es perfectamente normal, aunque se trata de linfocitos B
alterados.
Las enfermedades causadas por una inmunodeficiencia comn variable aparecen en la infancia
o comienzo de la edad adulta: malabsorcin, diarrea, linfomas, enfermedades autoinmunes
SNDROME HIPER IgM
Ligado al cromosoma X. Est provocado por una alteracin del gen que codifica para el CD40L
de los linfocitos T. Esto conlleva a un bloqueo en la interaccin entre el linfocito B y el linfocito
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Inmunologa
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T. No se produce el cambio isotpico del linfocito B, de forma que este sintetiza exclusivamente
IgM. Si llevamos a cabo una cuantificacin de anticuerpos veremos que los niveles de IgM
estn aumentados, mientras que los de IgA e IgG estn disminuidos.
Los pacientes que padecen este sndrome padecen infecciones por bacterias extracelulares.
Dficit de tipo 1: defecto del gen que codifica para el CD18 (una de las cadenas de la
integrina LFA1). Queda bloqueada la etapa de adhesin firme.
Dficit de tipo 2: ausencia de molculas en el linfocito T capaz de unirse a las
selectinas expresadas por el endotelio. Queda bloqueada la etapa de rodamiento.
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Dficit de C3. C3 es el punto de conversin de las tres vas del complemento. Los
dficits de C3 provocan depsitos de inmunocomplejos y susceptibilidad a padecer
infecciones bacterianas.
No solo se ven afectados los componentes que participan de forma activa en el sistema del
complemento, sino que tambin pueden verse afectadas las protenas encargadas de la
regulacin.
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Inhibidor de C1. Este inhibidor no solo se encarga de la regulacin de C1, sino tambin
de la regulacin de proteasas (participan en el sistema de coagulacin) y quininas. Las
quininas producen vasodilatacin. En ausencia de C1, se produce una enfermedad
denominada angioedema hereditario: cursa con aumento de la permeabilidad
vascular y edema de la mucosa intestinal y respiratoria. Los pacientes presentan
vmitos y diarreas, o insuficiencia respiratoria.
Tratamientos citotxicos: no solo acaban con las clulas tumorales, sino tambin con
clulas sanas del husped, incluidas las del SI
Radioterapia
Quimioterapia
Frmacos inmunosupresores: corticoides utilizados para combatir enfermedades
autoinmunes y evitar el rechazo de rganos tras un trasplante.
Extirpacin del bazo: produce inmunodeficiencias secundarias contra determinados
agentes patgenos, como por ejemplo el neumococo.
Malnutricin
Cnceres que afectan a tejidos hematopoyticos
Infeccin de las clulas del SI: ej. VIH.
VIH
El VIH pertenece a la familia de los retrovirus y a la subfamilia de los lentivirus.
Se han identificado tres tipos de VIH:
-
ESTRUCTURA
-
El VIH presenta dos cadenas idnticas de RNA, asociadas a una serie de enzimas
Retrotranscriptasa/ transcriptasa inversa
Proteasas
Integrasas
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Inmunologa
-
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Estas dos cadenas, junto con las enzimas, quedan envueltas por una cpside formada
por protenas P24. El conjunto de la cpside, las dos cadenas de RNA y las enzimas
recibe el nombre de core.
El core queda a su vez recubierto por una matriz formada por protenas P17. A esta
matriz se anclan las protenas gp41 y gp120.
La matriz queda envuelta por una bicapa lipdica derivada de la membrana de la clula
husped. Las protenas gp41 y gp120 ancladas a la matriz, atraviesan la bicapa lipdica
quedando incluidas en ella.
Adems de estos tres genes, existen genes adicionales que aseguran la infeccin celular y al
replicacin eficiente.
CICLO VITAL DEL VIRUS
El VIH afecta a las clulas del SI que expresan receptores CD4: linfocitos T CD4+ (de memoria
preferentemente), monocitos y clulas dendrticas.
El contagio del VIH puede producirse por dos vas:
-
Una vez en el organismo, el virus se introduce en aquellas clulas del sistema inmune con
receptores CD4. Adems de receptores CD4, los monocitos, clulas dendrticas y linfocitos T
CD4+ expresan receptores para quimiocinas.
El VIH es un virus fusognico: la membrana viral se fusiona con la clula del husped:
-
Inmunologa
-
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Imaginemos que comienza la transcripcin del DNA proviral que est insertado en el genoma
de la clula del husped. Se sintetiza:
-
RNA viral
Enzimas virales
Protenas de la cpside y de la matriz
Protenas gp120 y gp41. *Las protenas gp120 y gp41 no solo se anclan a la matriz del
virus, sino que comienzan a expresarse en la superficie de la clula del husped. Las
clulas del husped que expresan estas protenas son capaces de fusionarse con otras
clulas con receptores CD4. As, algunos virus infectan nuevas clulas sin necesidad de
pasar al espacio extracelular.
Una vez sintetizados todos los elementos necesarios, se ensamblan los nuevos virus. Los virus
salen de la clula, rodendose de parte de la bicapa lipdica de la misma.
Qu receptores de quimiocinas son los que participan?
CCR5: se expresa en los tres tipos celulares, pero son ms abundantes en los linfocitos
T CD4+ y en los monocitos
CXCR4: se expresa en los tres tipos celulares, pero es ms abundante en linfocitos T
CD4+ y clulas dendrticas.
En las primeras etapas de la infeccin, hablamos de virus M-trpicos: virus con afinidad por los
receptores CCR5. En la fase de sida (ltima fase de la enfermedad), hablamos de virus Ctrpicos, con mayor afinidad por receptores CXCR4.
Existen sujetos con una mutacin del gen que codifica para el CCR5 (mutacin 32 CCR5 delta)
que presentan una inmunidad natural contra el VIH
*En la actualidad se utilizan frmacos que impiden la unin de las protenas gp41 y gp120 a
CCR5
FASES DE LA ENFERMEDAD DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA
1. FASE DE INFECCION AGUDA: el VIH infecta los linfocitos T CD4+, las clulas dendrticas y los
macrfagos de las mucosas. Las clulas dendrticas conducen el virus hacia los ganglios
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linfticos. En los ganglios linfticos el virus infecta multitud de linfocitos T CD4+. Si produce
una replicacin muy activa (aumenta la viremia/carga viral). Cuando los linfocitos T CD4+
pasan al torrente sanguneo la infeccin se disemina. *Una clula infectada es capaz de
infectar otras 20 clulas ms. En esta fase se pierde gran cantidad de linfocitos T de
memoria.
2. FASE DE LATENCIA: suele durar aos. El SI controla relativamente la replicacin viral,
gracias a linfocitos T CD8+ y anticuerpos dirigidos contra antgenos del virus. Baja la
viremia/carga viral. La prdida de linfocitos T CD4+ contina, aunque de forma ms
progresiva. El virus provoca tambin alteraciones funcionales de clulas dendrticas y
monocitos. Es muy importante tener en cuenta que, como en cualquier otra infeccin, se
producen citocinas proinflamatorias, que favorecen la replicacin del virus.
3. FASE DE SIDA: los pacientes tienen una gran predisposicin a padecer patologas debido a
la escasez de linfocitos T CD4+
- Infecciones por patgenos oportunistas, sobre todo por citomagalovirus,
micobacterias, y criptococos.
- Tumores (linfomas, cncer del SNC, cncer de cuello de tero).
PRDIDA DE CD4+ Y DEFECTOS EN MACRFAGOS Y CLUALS DENDRTICAS
La prdida de CD4+ se debe a factores tanto directos como indirectos:
-
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Una vez que el sida es diagnosticado, es muy importante conocer los niveles de linfocitos T
CD4+ y la carga viral (la cuantificacin de la carga viral se lleva a cabo por PCR). Solo hablamos
de fase de sida cuando los niveles de linfocitos T CD4+ estn por debajo de 200 clulas/L
Otros factores a tener en cuenta son:
-
TRATAMIENTO
La terapia utilizada se denomina HAART: se basa en una combinacin de inhibidores de la
retrotranscriptasa inversa, inhibidores de las proteasas e inhibidores de las integrasas.
Hoy en da, la infeccin de VIH es una infeccin crnica, pero no mortal.
Algunos pacientes, tras recibir este tipo de terapia sufren el sndrome inflamatorio de la
reconstitucin inmunitaria:
-
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Inmunologa
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22. INMUNOTERAPIA
En este apartado, nos vamos a centrar fundamentalmente en 3 aspectos de la inmunoterapia
-
Inmunizacin
AcM (anticuerpos monoclonales) teraputicos
Inmunoterapia contra el cncer
INMUNIZACIN
Denominamos inmunizacin al proceso mediante el cual un individuo adquiere inmunidad
frente a un determinado agente patgeno. Distinguimos dos tipos de inmunizacin
-
VACUNACIN
La vacunacin consiste en la inoculacin de un agente infeccioso atenuado o inactivo; o un
toxoide (toxina modificada). Existen 3 posibles vas de vacunacin:
-
Va intradrmica
Va intramuscular
Va oral
Simulamos as una primoinfeccin con el objetivo de evocar una respuesta inmune adaptativa.
De esta forma, si el individuo es infectado por el patgeno real, ser capaz de defenderse
rpidamente.
El tipo de vacuna depender de:
-
El tipo de patologa que queremos prevenir: las patologas pueden estar causadas bien
por el propio microorganismo, o bien por las toxinas producidas por este
microorganismo. En caso de infecciones provocadas por toxinas, no se inocula el
microorganismo, sino la toxina inactivada. Las toxinas inactivadas se denominan
toxoides.
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No ha de producir la enfermedad
Ha de evocar una inmunidad duradera (durante varios aos)
Han de activar tanto la inmunidad humoral (sntesis de anticuerpos) como la
inmunidad celular (linfocitos T)
No ha de tener efectos adversos (ej. generar alergias)
Ha de ser econmica, estable y de fcil administracin.
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Integracin del DNA proviral en el genoma de la clula husped (el virus puede
permanecer latente durante aos). Se dificulta as el acceso de los componentes del SI.
La existencia de mltiples cepas con composiciones antignicas diferentes.
La falta de modelos de enfermedad en animales pequeos. El VIH afecta
exclusivamente a primates y humanos. Los ensayos clnicos con primates son
excesivamente caros.
El desconocimiento de los mecanismos del SI capaces de terminar con la infeccin. Si
no conocemos cules son estos mecanismos, no podemos ni activarlos ni potenciarlos
mediante vacunas.
La incapacidad del sistema inmune de creas anticuerpos eficaces, capaces de bloquear
la infeccin. *Los antgenos virales no evocan una inmunidad humoral eficaz.
Debido a la ausencia de vacunas, se han intentado aplicar otro tipo de inmunoterapias, que no
han sido tiles:
-
*El 13 de septiembre de 2013 (hace apenas dos meses), un grupo de investigadores ha sido
capaz de evocar la sntesis de anticuerpos realmente eficaces gracias al descubrimiento de una
nueva vacuna, vacuna cuyo antgeno es un vector viral.
Aunque no se ha averiguado la forma de acabar con la enfermedad, gracias a las terapias
antirretrovirales (explicadas en el tema anterior) la enfermedad de la inmunodeficiencia
humana se ha convertido en una enfermedad crnica, que no provoca la muerte. No obstante,
debido a esta cronicidad, los pacientes desarrollan un sndrome conocido como sndrome de
inflamacin crnica: la presencia del virus en el organismo provoca un ambiente
proinflamatorio constante.
Por otro lado, determinados frmacos contra el sida provocan alteraciones en el metabolismo
de los lpidos, generando enfermedades como ateroesclerosis.
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Inmunologa
2013/14
AcM TERAPETICOS
Los primeros anticuerpos monoclonales fueron sintetizados en el ao 1975. Actualmente,
estos anticuerpos se utilizan en mltiples terapias, como por ejemplo, el tratamiento del
cncer.
SNTESIS DE AcM
Hoy en da, los AcM se sintetizan mediante clonacin en genotecas de bacterifagos. El
proceso es el siguiente:
-
Los anticuerpos que se obtienen mediante este proceso son anticuerpos murinos (de ratn). Si
suministramos anticuerpos murinos a un paciente, su SI los reconocer como elementos
extraos y los terminarn por destruir. El tiempo de la terapia sera muy limitado. Adems, los
receptores para la regin Fc localizados en clulas NK y fagocitos, reconocen peor los
anticuerpos murinos que los anticuerpos humanos.
Para solventar este problema, se sintetizan anticuerpos humanizados:
-
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Adems de los AcM, gracias a los nuevos avances, actualmente tambin se sintetizan:
-
Suministramos al paciente la
clula dendrtica con antgenos tumorales en el interior.
Una vez en el paciente, estas clulas dendrticas comienzan a presentar lso antgenos,
activando al SI.
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Inmunologa
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*No solo podemos transvectar las clulas dendrticas con plsmidos que codifiquen para
antgenos tumorales, sino tambin con plsmidos que codifiquen para citocinas estimulantes.
Por ejemplo, si transvectamos plsmidos que codifiquen para la Il-2, lograremos una activacin
ms eficaz del linfocito T CD8+ que esta interaccionando con la clula dendrtica.
Adems de la vacunacin, existen otro tipo de inmunoterapias contra el cncer:
-
Terapia sistmica con citocinas: consiste en inocular al paciente Il-2 e IFN. Se utiliza
en melanoma metastsico y cncer renal, aunque el xito es bastante reducido.
Bloqueo de la inmunosupresin: consiste en suministrar AcM dirigidos contra
molculas inhibidoras de los diferentes componentes del SI:
Anticuerpos anti-CTLA-4: como por ejemplo, el Ipilimumab. Se emplea en
cncer metastsico
Anticuerpos anti-linfocitos T reguladores: los linfocitos T reguladores bloquen
la accin de los linfocitos T efectores. Si inhibimos los linfocitos T reguladores,
tendremos muchos ms linfocitos T efectores capaces de luchar contra el
tumor.
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SEMINARIO 1
TCNICAS Y POLIMORFISMO DEL HLA
En clnica, cundo se necesita llevar a cabo un estudio del sistema HLA?
-
Un paciente puede generar anticuerpos contra las molculas HLA. Tambin se puede llevar a
cabo el estudio de estos anticuerpos.
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Luego se evalan los pocillos al microscopio. En un microscopio normal no veriamos nada. Son
microscopios en los que la lente esta debajo y la luz viene de arriba.
El nombre de este mtodo es NIH-CDC.
Este mtodo nos permite distinguir los antgenos HLA. Se invent en los aos 60 y an se
utiliza.
Si las clulas absorben el colorante, significa que el paciente tiene anticuerpos contra las
molculas HLA del donante. No sabemos cual es la molecula HLA del donante, pero si sabemos
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Inmunologa
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que el paciente tiene anticuerpos que reconocen esas molculas HLA del donante. Antes de
poner el rgano ya tiene anticuerpos.
Sin embargo, si las clulas del donante no absorben el colorante, significa que el paciente no
tiene anticuerpos contra las clulas HLA de ese donante.
HLA-A
HLA-B
HLA-C
Dentro de cada una de ellas existen varias molculas de HLA-A, varias de HLA-B y varias de
HLA-C. *Se denominan con nmeros. HLA-A1, HLA-A2
Tenemos 3 tipos diferentes de molculas de clase 2:
-
HLA-DP
HLA-DQ
HLA-DR
*Al igual que las de clase 1, tenemos varias clases de cada una de ellas.
En los aos 60 comenzaron a secuenciarse los genes de las molculas de HLA mediante el
mtodo enzimtico. Todo el mundo quera conocer la secuencia de cada molcula de HLA.
Para una misma molcula, haba ms de una secuencia. Por ejemplo, para una molcula HLAA2 haba varias secuencias distintas.
La secuenciacin a da de hoy todava es una de las tcnicas trabajosas de estudiar el sistema
HLA, pero se utilizan nuevas tcnicas:
-
Todas estas ventajas han permitido que la secuenciacin entren no solo en el laboratorio d
experimentacin, sino tambin en laboratorios clnicos.
Ha da de hoy es imposible predecir cuantos alelos HLA tiene la especie humana. Se han
identificado miles de alelos que codifican para molculas de HLA.
Problema: Cmo llamamos a todas estas variaciones?. Un comit se dedic exclusivamente a
poner nombre.
HLA-A*02:101:01:02N
*Se ha obtenido la informacin mediante un mtodo gentico. A la derecha queda el nombre
del alelo y a la izquierda queda el nombre del gen.
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El nmero en verde indica que tipo de molcula de HLA-A es. Si es HLA-A1, HLA-A2
La primera molcula HLA-A*02 se denomina HLA-A*02:01, la siguiente que se descubre HLAA*02:02 Estas molculas se diferencian entre s en algunos aminocidos
Molculas con los mismos aa, que se diferencian entre s en la secuencia de nucletidos, ya
que hay tripletes que codifican para el mismo aa. Entonces, aunque no tengan la misma
secuencia de nucletidos, pueden tener la misma secuencia de aa.
El cuarto nmero se utiliza para indicar cambios en los intrones.
Cmo de diferentes pueden ser dos alelos que codifiquen para una molcula de HLA?.
Por ejemplo, dos secuencias de aa de dos molculas de HLA-A2 pueden ser hasta un 10%
diferentes. Los cambios de aa se concentran sobre todo en el dominio amino terminal. El
polimorfismo, por tanto, lo que cambia es la capacidad de la molcula de HLA-A2 de
interaccionar con pptidos. Resulta, que lo que esta en zonas del dominio N-terminal que no
toca ni al TCR ni a los pptidos est bastante conservado. Los cambios se producen en la zona
del dominio terminal que interacciona con el pptido y con el TCR.
El polimorfismo se concentra en ciertas zonas. No es polimorfismo que se produzca por
recombinacin, si no que es un polimorfismo que se ha acumulado durante aos.
Hay tcnicas menos finas que la secuenciacin que nos permiten definir con precisin grupos
de alelos. Son ms finas que la NIH-CDC, pero menos que la secuenciacin
HLA Y TRANSPLANTE
En transplante hay que distinguir:
-
TRANSPLANTE HEMOPOYTICO
El donante perfecto es un hermano gemelo, porque es genticamente idntico en principio.
Pero un hermano HLA idntico no es perfecto por qu?. En un hermano HLA idntico solo
tenemos garantizado que en HLA no hay incompatibilidades. Pero puede haber reacciones
inmunolgicas contra otro tipo de molculas.
Lo siguiente que buscamos, es un hermano del paciente cuyo HLA sea idntico al del paciente
cmo demostramos que el HLA del paciente es idntico que el del donante? Se realizan
estudios familiares en los que se ve la herencia de los alelos.
Cuando no hay un donante dentro de la familia, no suele ser til recurrir a familiares de
segundo grado. Hay que recurrir a los bancos de donantes. Los bancos a los que se recurre
para buscar transplantes no solo estn en Madrid. No hacemos bsquedas locales. Se busca en
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Inmunologa
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todo el planeta. Hay una red de bases de datos donde se introduce el genotipo de un paciente
y saber en un plazo relativamente breve si hay donantes que son idnticos o que podran serlo.
TRANSPLANTE DE RGANOS
Pueden producirse dos situaciones:
-
Que el paciente tenga ya los anticuerpos antes de que el rgano sea trasplantado. Para
saber si esto es as se realiza una prueba cruzada. Ej: el mtodo NIH-CDC explicado
anteriormente.
Que el paciente desarrolle anticuerpos una vez que recibe el trasplante
Inmunologa
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Una caracterstica que distingue el rin de los otros rganos grandes es que un rin que no
funciona puede ser sustituido por una dilisis. Por tanto, un paciente en espera a un rin
puede estar meses o aos. Puede esperar a un rin adecuado genticamente.
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Inmunologa
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La inmunidad innata es rpida y puede aparecer entre las 0-4 horas de la infeccin inicial. La
inmunidad adaptativa puede ser un poco ms tarda (3-4 das despus de la infeccin). Ambas
tienen como objetivo la eliminacin del agente patgeno
La adaptativa requiere el transporte del antgeno a los rganos linfticos secundarios, la
presentacin de este antgeno y la proliferacin de linfocitos T y B. es ms lenta.
INMUNIDAD INNATA
COMPLEMENTO
Un mecanismo fundamental de la inmunidad innata es el sistema de complemento. El
complemento tiene 3 vas
-
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Inmunologa
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El sistema de complemento tiene funcin ltica, principalmente: elimina los patgenos. Pero
tambin
-
Opsonizacin y fagocitosis
Eliminacin de inmunocomplejos
Coagulacin e inflamacin mediada por los fragmentos pequeos.
La funcin principal del complemento es la lisis, la eliminacin de los patgenos. Los ensayos
de activacin de las vas del complemento se han diseado en funcin de la capacidad de
lisar.
-
CH-50
La va clsica se activa fundamentalmente por inmunocomplejos. Basndose en esta premisa,
hace muchos aos (hacia los aos 50) alguien puso en prctica un sistema en el que utilizaba
como antgeno eritrocitos de carnero; y un anticuerpo de conejo. Este complejo antgenoanticuerpo es capaz de activar la va clsica. Tenemos en el laboratorio inmunocomplejos de
estos y los hacemos reaccionar con el suero de un paciente. Si la va clsica del paciente
funciona adecuadamente, se lisaran estos inmunocomplejos. Esta lisis la medimos fcilmente
porque se suelta hemoglobina. Esto se mide con espectofotmetro.
AP-50
En la va alternativa se activa por antgenos de la superficie celular. Se utilizan eritrocitos de
conejo. Estos eritrocitos se ponen en presencia de un suero humano. Si el complemento
funciona, se lisarn estos eritrocitos. Esta lisis la medimos fcilmente porque se suelta
hemoglobina. Esto se mide con espectofotmetro.
Estos experimentos se hacen en tubos de ensayo. En cada tubo se aade ms o menos suero
del paciente. Se elabora un grfico de lisis segn la dilucin del suero .
Qu tipo de parmetros hay que medir en el complemento?
Adems de hacer los estudios anteriores, hay que medir otra serie de parmetros:
-
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Inmunologa
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En estas situaciones nos planteamos o bien que el individuo tiene una infeccin o
una enfermedad autoinmune. Por ello, estn reducidas las protenas del
complemento
-
Deficiencias primarias/congnitas
C3 y C4 estn normales. CH-50 o AP-50 es 0. Deficiencias en otros
componentes del complemento, que no son ni C3 ni C4. Hemos de
hacer estudios para caracterizar que componente es el que falta: por
ejemplo, aadimos diferentes componentes y uno de ellos restituye la
actividad ltica.
Lupus eritematoso
Infecciones repetitivas
Angioedema hereditario
Patologas renales.
o Sndrome urmico hemoltico
o Glomerulonefritis
DEFICIENCIAS PRIMARIAS
La inmunodifusin doble es una tcnica que se hace en una placa de agar con varios pocillos.
Ponemos anticuerpos frente a los componentes de complemento. A continuacin ponemos el
suero del paciente. Si el anticuerpo reconoce su antgeno, aparece una banda. Pero si el
elemento del complemento reconocido por uno de los anticuerpo de los pocillos, no est en el
suero del paciente, no habr banda.
Las deficiencias primarias en C5, C6 suelen cursar con infecciones de repeticin.
Pero hay otra serie de protenas reguladoras: factor H y Factor I (de la va alternativa); C1
inhibidor. Hay mutaciones en estos genes que causan enfermedades.
La deficiencia del C1 inhibidor causa angioedema hereditario: es una de las llamadas
enfermedades raras (prevalencia baja). Cursa con episodios de edemas recurrentes, en cara,
articulaciones, abdomen. Estas enfermedades cursan en brotes.
El problema ms serio que tienen los pacientes es que se les inflame la garganta y fallezcan por
asfixia.
A estos pacientes se les puede administrar el C1 inhibidor en el momento del ataque. Estos
enfermos no responden a los antiestamnicos.
Los parmetros que hay que medir para diagnosticarla son los niveles de C3, C4 y C1 inhibidor.
-
Inmunologa
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En estos pacientes se puede caracterizar la mutacin del gen que codifica para C1 inhibidor
Sndrome hemoltico urmico y glomerulonefritis:
Afectan a la microvasculatura renal. Se deben a fallos en la va alternativa. En estas
enfermedades hay activacin anmala del sistema del complemento.
-
Sndrome urmico hemoltico: se da en general en nios. Hay una bacteria que puede
causar esta patologa. Cuando la enfermedad es de tipo infecciosa remite. Pero hay
otras enfermedades denominadas atpicas, que es por mutacin en los genes de
componentes de la va alternativa. Se caracteriza por anemia hemoltica y
trombocitopenia. Produce hematuria y fracaso renal. Se trata con inhibidores de
complemento.
Glomerulonefritis: tiene una evolucin larga. Se crean una especie de trombos en el
endotelio del glomrulo renal.
En estas patologas se estudian los niveles de C3 y C4, factor H, factor I y factor B y tambin se
mide la presencia de anticuerpo anti factor H (autoinmune)
Tambin se estudian la presencia de mutaciones en genes de la va alternativa.
En estas dos enfermedades se han descrito polimorfismos y mutaciones en genes, as como
autoanticuerpo.
Ph
Anin superxido
NO
Estudios in vitro: se utilizan clulas de E.coli marcadas con fluorescena. Si los fagocitos
se las tragan, los fagocitos sern fluorescentes.
Por el tamao de clulas: cuando fagocitan las bacterias, los leucocitos aumentan de
tamao.
Medir la actividad oxidativa. Se estudia si se forma anin superxido adecuadamente.
Si el individuo no genera el anin superxido se detecta mediante una tcnica de
fluorescencia. La enfermedad granulomatosa crnica es una inmunodeficiencia severa.
Los fagocitos no causan la muerte intracelular. Hay infecciones severas. Las causas de
no generar el anin es por mutaciones en genes de las protenas encargadas de
generar este anin.
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Inmunologa
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INMUNIDAD ADQUIRIDA
Reacciones mediadas por complejos antgeno -anticuerpo
Es una asociacin biomolecular mediadas por uniones no covalentes. Es una reaccin
altamente especfica; pero no es una reaccin irreversible. Es una unin reversible.
Un anticuerpo tiene 2 cadenas pesadas y dos cadenas ligeras.
Para valorar la reaccin antgeno anticuerpo hay reacciones cualitativas y otras cuantitativas
-
Reacciones cualitativas
o Inmunodifusin doble bidimensional
o Inmunoelectroforesis
o Inmunofijacin
Cuantitativas
o Inmunodifusin radial
o ELISA
Tenemos un gel de agar. En el gel hacemos unos pocillos. En el agar ponemos anticuerpos y en
el pocillo antgeno. Por difusin, antgeno y anticuerpo se unen y se produce una franja de
precipitacin. Esto es lo que se llama inmunodifusin radial.
La inmunodifusin doble ya se ha explicado en el apartado de inmunidad innata.
Inmunoelectroforesis: es una tcnica inmunolgica combinada con electroforesis 8separacin
de protenas frente a un campo elctrico).
Tenemos una placa de agar en la que se hace una trinchera y dos pocillos. En cada pocillo
ponemos uno suero de nio enfermo y otro de paciente normal. Por electroforesis se sepan las
protenas del suero. En la ranura ponemos un anticuerpo contra una protena del suero.
Protenas y anticuerpo difunden. Si un individuo no tiene la protena, no hay precipitado y no
vemos nada
Inmunofijacin: separamos las protenas por electroforesis y se marcan con anticuerpos.
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Se utilizan anticuerpos sobre Hep-2. Estas lneas son el sustrato. Es una lnea celular de un
epitelioma de laringe.
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REACCIN ALRGICA
Lo primero que hay que hacer cuando una persona llega a la consulta con un cuadro de alergia
es eliminar los sntomas. A continuacin hay que ver que es lo que los ha provocado.
Las reacciones alrgicas estn provocadas por IgE que se unen a la superficie de mastocitos
basfilos y eosinfilos. Cuando IgE se une al alrgeno, se liberan los grnulos con aminas
vasoactivas y mediadores lipdicos.
Una vez eliminado el cuadro hay que descubrir que es lo que lo ha provocado (polen,
insectos)
En primer lugar lo que vamos a hacer son pruebas cutneas. En la piel se ponen determinados
antgenos. Se observa que antgenos provocan una reaccin. Pero a un nio chico no podemos
someterle a estas pruebas. Ni con personas ancianas o con grandes reacciones alrgicas.
Lo que se hace es un enzimoinmunoensayo o ELISA.
Bsicamente consiste en que en unos pocillos ponemos antgenos que queremos probar (de la
leche, de la yema de huevo) Se cogen los sueros y se incuban con los antgenos. Luego estos
anticuerpos se revelan con sustratos enzimticos. Se aade un ligando con un enzima que si
hay anticuerpos se unen a ellos. Luego se aade el sustrato. Lo que vemos al final esque
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cuando no hay ninguna coloracin no hay anticuerpos (resultado negativo) y si hay coloracin
el resultado ser positivo (hay anticuerpos).
Todas las pruebas siempre llevan el antgeno promedio. Pero por ejemplo, en el huevo hay
muchos antgenos diferentes y hay personas alrgicas a diferentes antgenos del huevo.
SEROLOGA
La palabra serologa es imprescindible en todas las infecciones vricas. En una serologa se
determina la existencia de anticuerpos frente a un determinado agente (virus que producen
hepatitis A, B, C; VIH, toxoplasma)
HEPATITIS A
La hepatitis A no es una hepatitis complicada ni peligrosa en individuos inmunocompetentes y
sanos. Es una hepatitis que se da en nios. Casi no se ve en el medio occidental. De hecho, si
hacemos una serologa de hepatitis A probablemente muy pocas personas jvenes tendrn
serologa positiva (IgM o IgG frente al virus de la hepatitis A)
Un paciente que presenta transaminasas muy altas, cansado.. Lo primero que debemos pensar
es que tiene una hepatitis A. Si la IgM es positiva y no hay IgG estamos en hepatitis aguda. La
IgG se va formando tambin con el transcurso de los das. Queda en la sangre del paciente
durante toda su vida.
Si solo hay IgG, la hepatitis se pas hace tiempo.
Esta serologa se hace mediante ELISA.
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Hepatitis B. Ahora mismo tenemos una alta incidencia de hepatitis B. Puede ser mortal.
Uno de sus grandes problemas es que puede evolucionar a un carcinoma heptico o a cirrosis.
Cada vez hay un mayor nmero de infectados, debido a las migraciones.
A los nios se les vacuna en el nacimiento.
El mecanismo de transmisin: sexual, vertical (de madre-hijo) y parenteral.
Sntomas: fiebre, ictericia, dolores, orina y heces de color oscuro. Esplenomegalia.
Evolucin serolgica: la serologa es complicada. Primero anticuerpos anticore (anti-HBc):
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Si antes de hacer quimioterapia no hacemos serologa previa, puede que el paciente se cure de
cncer y muera de una hepatitis fulminante.
Luego hay otro anticuerpo, el anticuerpo antisuperficie (anti-HBs) que es siempre de la clase
IgG. Sube cuando la hepatitis se resuelve. Anticuerpos antisuperficie los tiene todo el mundo
que ha sido previamente vacunado.
Hay hepatitis B crnicas: si no se tratan el paciente acabar con carcinoma o cirrosis.
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Hepatitis C (VHC)
Es muy fcilmente contagioso. Los cirujanos se contagian, sobre todo los de digestivo. Se
necesita muy poco aporte viral.
No produce una gran hepatitis. Se aloja en el sujeto y convive tranquilamente hasta que
aparece despus de muchos aos.
En los aos 80, se contagiaron muchas personas por transfusiones.
Tambin se contagia por trasplante de rganos, hemodilisis.
El periodo de incubacin puede ser de 2-22 semanas.
Solo hay ictericia entre el 30%-40% de los casos. Se cronifica.
El curso serolgico es tremendamente complicado de entender. Los anticuerpos que se crean
no protegen frente a la infeccin.
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VIH
AFECTA A LAS CLULAS CD4
Se necesitan semanas para hacer anticuerpos IgM. Existe una fasede primoinfeccin. En esta
fase lo que hay que hacer es una determinacin del antgeno circulante (virus en sangre).
Al cabo de la semana se empiezan a ver anticuerpos IgM y al cabo del mes de IgG.
Es de las pocas infecciones en las que la determinacin del antgeno circulante es posible.
Una vez que tenemos una prueba positiva, volvemos a hacer otro Elisa, sobre todas y cada una
de las protenas del virus. Pero no se utilizan las protenas nativas del virus, sino protenas
hechas con ingeniera gentica (protenas recombinantes)
Los anticuerpos son capaces de unirse a una clula, activar el complemento y matarla.
Vamos aprovechar esta actividad pero la vamos a dirigir nosotros, por ejemplo, contra
clulas cancerosas
Inmunizacin pasiva: Si hay una persona que tiene una buena inmunizacin frente a
algo, se cogen sus anticuerpos y se le pasan a otra persona poco inmunizada frente a
ese algo. Ej. Caso de transmisin de anticuerpos equinos. Haba nios infectados con
difteria. Los nios moran muchsimo. Se infect uno de los caballos con antgenos de
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Lo que hay que hacer es humanizar los anticuerpos. Un anticuerpo con actividad de anticuerpo
que nos sea reconocido por el SI. Los anticuerpos quimricos (anticuerpos humanizados).
Medicamentos que acaban en mab: anticuerpos utilizados en enfermedades autoinmunes o en
determinados tipos de tumores.
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SEMINARIO 4
Vamos a ver que tcnicas utilizamos para estudiar los marcadores de diferenciacin
leucocitaria. Estas molculas de diferenciacin sirven para cuantificar poblaciones (por
ejemplo linfocitos T CD4 de un paciente con VIH) para diagnosticar patologas hematolgicas
como leucemias o linfomas.
CITOMETRA DE FLUJO
Un citmetro de flujo es un aparato que nos sirve para analizar clulas en suspensin. Con este
aparato no podemos cuantificar clulas de un tejido a no ser que consigamos que las clulas
del tejido se disgreguen. La muestra ideal para este tipo de anlisis es el LCR, muestra
sangunea y medula sea.
Un citmetro de flujo analiza clulas o partculas que estn en suspensin.
Qu caractersticas analizamos con este mtodo?
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FLUDICA
Aspira la muestra del paciente y la introduce dentro del aparato. La dirige hacia el punto de
interseccin con el lser. Introduce las clulas de 1 en una
PTICA
Emite seales luminosas con el lser del citmetro. El lser interacciona con la clula.
Hay pticas de coleccin: recogen las seales luminosas que proceden del laser y ya han
pasado por la celula.
ELECTRNICO
Traduce las seales luminosas en seales electrnicas que se digitalizan y es lo que vemos en
la pantalla del ordenador
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FUNCIONAMIENTO
El sistema de fluidos aspira clulas que se introducen por un capilar, de una en una, junto con
algo isotnico. Las clulas van subiendo hacia el punto de interseccin con el lser.
Qu sucede cuando las clulas lleguen al punto de interseccin con el lser?. El lser incide
sobre las clulas y la luz se desva, se produce una dispersin de la luz.
Cuando la clula pasa por delante del lser se produce una dispersin de la luz hacia delante.
El ngulo que se crea hacia adelante es proporcional al tamao/volumen de la clula. Este
ngulo se denomina ngulo de dispersin frontal.
Pero la luz tambin sale disparada hacia los lados. Esto depende de cmo es la superficie de la
clula, de si tiene mucha granularidad o complejidad
Leucemia aguda: vemos clulas cuyo tamao y complejidad conocemos bien. Luego hay clulas
con tamao y complejidad que no tenemos en una medula sea normal.
El citmetro tiene dos tipos de detectores
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Forward scatter: deteccin de luz hacia delante. Esta a 0 con respeco al laser
Side scatter: deteccin de la luz hacia los lados. Esta a 90 con respecto al laser
FL1
FL2
FL3
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Todo esto lo incubamos durante 20 min y luego lisamos los hemates, porque en este anlisis
en concreto no nos interesan.
Luego vamos al citmetro y lo analizamos
Al software le decimos que analice durante un minuto, o cuando llegue a un milln de clulas.
Pasan las clulas por el capilar y por el lser.
El citmetro nos dice el porcentaje de clulas que iban marcados con fluoresteina, el
porcentaje con ficoeritrina, el porcentaje con perCP, y con aloficocianina
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Imaginemos que han pasado el milln de clulas. De cada clula el citmetro recibe seal de
tamao, complejidad y fluorescencia.
Para cada clula del milln tenemos un determinado valor en cada uno de estos parmetros.
Coge la primera clula y contrasta los puntos de la fluorescencia. Crea un grafico Dot-plot. (FL1
contra FL2).
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CD45
Es una molcula expresada por todos los leucocitos.
Nos sirve para distinguir poblaciones en medula sea
En el ejemplo tenemos dot plot de complejidad y
fluorescencia.
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Nmero de clulas.
Inmunofenotipo:
o Linaje
o Estadio de diferenciacin
o Clonalidad: si los linfocitos B son todos kappa son todos lambda
o Aberraciones: expresin de un marcador que pertenece a otro linaje. Pasa
mucho en las leucemias. Un linfocito B expresa un marcador mieloide (CD33,
CD66)
o Asincronismos: expresin de un marcador de un estadio de diferenciacin que
no es.
Cuantificar el DNA
Ver si las clulas son viables o no. Si estn vivas o no. Esto nos interesa cuando nos
llegan medulas seas del extranjero en los trasplantes de medula sea. La mdula
llega por avin desde otro pas y hay que ver si las clulas estn vivas o no.
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*En medula sea la serie granuloctica nace sin grnulos y tiene menos complejidad. La va
adquiriendo.
En medula: zona de CD34 es la zona central. Si esto esta aumentado hay leucemia aguda. Hay
que ver de qu linaje es la leucemia. Hay que ver marcadores, como por ejemplo B (CD19)
Molcula CD66 en una clula inmadura: aberracin
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