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A CROMATOGRAFIA GASOSA NA QUANTIFICAO DE CONCENTRAES ULTRATRAOS

DE HPAs EM GUA: PR-CONCENTRAO DO ANALITO

Jeny Patricia Nio Guerrero*


*Instituto de Geocincias, Ps-graduao em Geoqumica: Petrleo e Meio Ambiente, Universidade Federal
da Bahia, Salvador, Brasil. Jeny.nino@ufba.br

Resumo
Os HPAs de baixo peso molecular so ligeiramente solveis na gua, no entanto, os mais
pesados so praticamente insolveis o que torna que sua presena na gua seja improvvel;
levando a ter concentraes muito baixas deles na coluna de gua. A determinao e
quantificao destes compostos transformam-se num desafio analtico para qualquer
profissional dedicado ao estudo de seu comportamento e persistncia em ambientes
diferentes e o efeito que causa em organismos vivos. Neste caso, necessrio um processo
detalhado e completo para a preparao de amostras, e condies de funcionamento do
equipamento a ser usado para fornecer uma alta sensibilidade, devido as baixas
concentraes em que se podem encontrar os compostos de interesse. Neste artigo,
discutimos alguns aspectos importantes para a anlise cromatogrfica de HPAs presentes na
gua em concentraes ultratazas.
Palavras-chave:
Hidrocarbonetos aromticos polinucleares, anlise de gua, preconcentrao, injeo.

Introduo
Dentre os problemas ambientais que a humanidade enfrenta encontra-se a alterao dos
ecossistemas pela presena de compostos qumicos produto das atividades antropognicas
(indstria, agricultura, etc resduos domstico). entre os poluentes qumicos mais
contaminantes esto os hidrocarbonetos aromticos Polinucleares (HPAs), cujo nmero

excede a 2000 entre simples e substitudo, 16 destes compem a lista de poluentes de


prioridade da EPA (a United States Environmental Protection Agency) para os nveis de
concentrao abaixo partes por bilho (ppb) na gua (tabela 1). Os hidrocarbonetos
aromticos policclicos (HPAs) so substncias de natureza aromtica, com dois ou mais
anis fundidos, que tm sua origem em fontes antropognicas ou naturais, e so altamente
mutagnicos e carcinognicos. Algumas fontes tpicas de contaminao so centrais de
energia trmica, a fumaa dos carros, processos do refino de alumnio e derrames de
combustveis fsseis emtre otros (Vera l., 2002, Santana J, 2012).
Tabela 1. Poluentes de prioridade de EPA HPA (modificado de Vera l., 2002)
Ordem
Composto
Abreviatura
Classificao
1
Naftaleno
NAF
HAP ligeiro
2
Acenafteno
ACE
HAP ligeiro
3
Acenaftileno
ACI
HAP ligeiro
4
Fluoreno
FLU
HAP ligeiro
5
Fenantreno
FEN
HAP ligeiro***
6
Antraceno
ANT
HAP ligeiro***
7
Fluoranteno
FLT
HAP ligeiro***
8
Pireno
PIR
HAP ligeiro***
9
Benzo(a)antraceno
B(a)A
HAP pesado
10
Criseno
CRI
HAP pesado
11
Benzo(a)pireno
B(a)P
HAP pesado
12
Benzo(b)fluoranteno B(b)F
HAP pesado
13
Benzo(k)fluoranteno B(k)F
HAP pesado
14
Dibenzo(ah)antraceno DBA
HAP pesado
15
Benzo(ghi)perileno
B(ghi)P
HAP pesado
16
Indeno(cd)pireno
I(cd)P
HAP pesado
***Compostos fronteira do acordo com a diferena de hidrofobicidade (Vera, 2002)
Para a anlise e quantificao de HPAs em gua, a maioria das pesquisas baseada na
extrao lquido-lquido (ELL) da amostra aquosa, seguida pela concentrao do extrato
orgnico por rotoevaporao, para finalmente ser analisado por cromatografia gasosa (GC)
com detector de ionizao de chama ou espectrmetro de massa; ou por cromatografia
lquida (CL) com detector UV ou de fluorescncia (Avila, Ivez, Herrera, Frias,
2002).Estes mtodos so considerados inseguros, pois devido manipulao da amostra
pode levar perda do analito durante o processo. Considerando que a concentrao de
HPAs em gua geralmente em termos de ppb (partes por bilho) faz necessrio o uso de

mtodos analticos apropriados que permitem a correta identificao e quantificao de


estes compostos; em geral, necessrio que essas metodologias sejam capazes de fornecer
uma alta sensibilidade, alm de ser seletivas o qual vai permitir diferenciar os analitos das
interferncia; finalmente necessrio que seja confivel, mesmo na ordem de limites de
deteco de ultratazas.

AMOSTRA PRECONCENTRAO
A presena de HPAs em gua regulada em alguns pases devido os riscos potenciais que
apresenta pra a sade humana, por exemplo, na Unio Europeia, a concentrao de 6 HPAs
(fluorantreno,

benzo(b)fluoranteno,

benzo(k)fluoranteno,

benzo(a)pireno,

benzo(ghi)perileno e indeno (cd)pireno) juntos no podem exceder os 0,2 ppb (mg l -1) ,
limitando o benzo(a)pireno at 20 ppt (ng l-1) e na gua potvel a concentrao total de 6
compostos tem um limite de 1 ppb. Estes limites determinam a capacidade de deteo dos
instrumentos pelo qual torna-se o pr-tratamento da amostra em uma das etapas mais
cruciais e interessante para qumica analtica ambiental (vila, 2002; Stashenko, 2011).
Entre os mtodos mais comuns para a extrao de HPAs esto: extrao lquido-lquido
(ELL), extrao em fase slida (EFS), extrao de fase slida on-line (EFSL),
microextrao lquido-lquido (MELL) e Microextrao de fase slida (SPME).

Preparao da amostra por mtodos tradicionais de ELL e EFS


O mtodo tradicional ELL comumente adotado o US EPA Method 3510C (Dasgupta
2011) no qual uma amostra de 200 mL de gua disponibilizada em uma ampola de
decantao de 250 mL e extrada trs vezes com 20 mL de diclorometrano, as fases
orgnicas so combinadas e so secas com sulfato de sdio anidrido seguido de
concentrao at 1 mL com uma ligeira corrente de nitrognio seguido de anlise por GC MS.

Para o EFS, ou SPE (sigla em ingls) usado uma coluna de adsoro (cartucho de
Bakerbond-SPE de slica de octadecil C-8) que deve ser ativada anteriormente com um
solvente adequado tambm, asim para a quantificao de HPAs e reportado o uso de 10 ml
de metanol e 8 ml de uma mistura de n-hexano + etil (5:3 v/v), posteriormente eluido com
10 ml de metanol e 5 ml de gua desionizada (duas vezes) para o condicionamento. Uma
poro de 200 ml de gua passada atravs do cartucho vazio. O cartucho secado ento
por 10 min. A Eluo dos compostos do cartucho realizada com 10 ml de n - hexano +
acetato de etila (7:3 v/v). Os extratos so secados com sulfato de sdio anidro e
concentrados para 1 ml sob uma ligeira corrente de nitrognio para posterior anlise por GC
- MS
Preparao da amostra pelo mtodo MELL
Dasgupta et al, (2011) reportam um procedimento no qual 10 mL de amostra de gua
extrada com 250 l por agitao durante 1 minuto, seguido de 2 minutos de repouso e
posterior centrifugao a 6000 rpm por 5 minutos. A fase orgnica coletada e evaporada
at quase sequidade sob uma ligeira corrente de nitrognio seca (a 25 C) e reconstituda
com 20 l de solvente de intercambio, mistura de acetato de etilo + ciclohexano (1:9 v/v).
Preparao das amostras pelo mtodo SPME
Esta tcnica conhecida como SPME (sigla em ingls) altamente usado, uma vez que
permite a injeo direta da amostra para o equipamento de cromatografia, alem que no
requiere o uso de solventes. Nesta tecnica, uma fibra revestida com um material sorbente
utilizada para extrair molculas volteis da amostra que posteriormente por dessoro so
transferidas para a equipe de anlise (GC-MS). O metodo SPEME mostra grande vantagem
na reduo da manipulao de amostras.

Algumas adaptaes dos mtodos da Microextrao em fase slida e microextrao


lquido-lquido, usado em diversos estudos e suas principais caractersticas como tempo de
extrao, o solvente e o mtodo utilizado na deteo so descritas na tabela 2.

Tabela 2. Comparao das caractersticas dos mtodos preconcentrao para anlise de HPAs. (Modificado de
W. TSENG, 2014)
Mtodo*

Instrument
o

HPAs

Solvente para
a extrao

Tempo de
extrao
(min)

Rango de
linearidade
(g l-1)

LOD (g
l-1)

SPME

GC-MS

16

45

0,001-10

0,0010,029

HSPME

GC-FID

11

30

0,1-50

0,03-0,3

HF-LPME

GC-MS

13

Tolueno

15

10-2000

0,01-0,95

DLLME

GC-FID

16

Tetracloreto de
carbono

Alguns
segundos

0,02-200

0,007-0,03

USAEME

GC-FID

Tolueno

0,5

0,05-100

0,02-0,05

UDSADLLME

GC-MS

11

Heptanol

0,08-100

0,22-0,060

WLSEME

GC-MS

11

nonanol

Alguns
segundos

0,08-100

0,022-0,13

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2006
Saleh A.,
2009
Tseng W.,
2014
Tseng W.,
2014

*Ver lista de acrnimos


DISCUSSO:
Os mtodos convencionais tais como extrao de fase slida e extrao lquido-lquido
utilizam grandes volumes de solventes orgnicos, alem que exigem mais tempo para o
processamento das amostras, estas desvantagens so superadas com o desenvolvimento de
tcnicas como a Microextrao em fase slida (SPME) baseada na utilizao de fibras
absorventes, o que muito favorvel, uma vez que no requer o uso de qualquer tipo de
solvente de extrao. Por outro lado, apesar de ter entre seus benefcios a alta flexibilidade
e fcilidade de automatizao, apresenta desvantagens como o tempo de vida til da fibra e
a fragilidade da mesma alem de a baixa reprodutibilidade entre lotes, sensibilidade a
solventes orgnicos e a disponibilidade comercial de fases estacionrias especficas, entre
outros. (QUINTO M., 2012, TSENG W., 2014).
No estudo de alguns compostos tais como pesticidas, PCBs e HPAs presentes em matrizes
aquosas em concentraes ultratraas tambm so reportadas a otimizao de tcnicas de
microextrao lquido-lquido com resultados muito favorveis, reportando as recuperaes
de todos os compostos dentro 76-120% ( 10%), com o limite de deteco do mtodo
(MDL), variando de 1 a 250 ng / L dependendo da resposta do analito.

CONCLUSES
O uso de tcnicas cromatogrficas permite a determinao simultnea de vrios
contaminantes presentes em uma amostra. No entanto, a seleo adequada do processo de
purificao da amostra para anlise posterior um fator determinante no processo de
amostras ambientais em concentraes extremamente baixas principalmente em matriz de
gua. Em quanto ao sistema de deteo utilizado, comum o acoplamento de um
espectrmetro de massas ao sistema de separao cromatografica em fase gasosa (GC-MS)
permitindo que eles possam identificar e quantificar as substncias presentes na gua em
concentraes muito baixas com grande confiabilidade, sendo tambm frequente o uso de
detector de ionizao de chama (FID).
LISTA DE SIGLAS:
SPME: microextrao em Fase slida
HSPME: microextrao em Fase slida Headspace
HF-LPME: microextrao em Fase liquida com fibra oca
DLLME: microextrao dispersiva lquido-lquido
DLLME-SFO: microextrao dispersiva lquido-lquido baseado na solidificao de gota
orgnica flutuante
USAEME: Emulsificao microextrao assistida por ultra-som
UDSA DLLME microextrao dispersiva lquido-lquido assistida por saker up and down
WLSEME microextrao dispersiva lquido-lquido assistida com soluo aquosa de
surfactante em baixa concentrao

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