Ciclo celular

El ciclo celular (tambin llamado ciclo de divisin celular) es una secuencia de sucesos que conducen primeramente al
crecimiento de la clula y posteriormente a la divisin en clulas hijas. El ciclo celular se inicia en el instante en que
aparece una nueva clula, descendiente de otra que se ha dividido, y termina en el momento en que dicha clula, por divisin
subsiguiente, origina nuevas clulas hijas. Los controles internos en la clula son ejecutados por protenas que no permiten
que se presenten situaciones desastrosas (enfermedades) para un ser vivo.
En rigor, el ciclo celular (la secuencia de sucesos) comprende dos periodos bien
ntidos: la interfase (etapas G1 S y G2) y la divisin celular (etapa M). Esta
ltima tiene lugar por mitosis o meiosis.
La interfase es el perodo comprendido entre divisiones celulares. Es la fase
ms larga del ciclo celular, ocupando casi el 95 por ciento del ciclo, se divide en
tres sub etapas: G1, S y G2.
El estado o etapa G1, del ingls Growth o Gap1 (Intervalo 1), es la primera fase
del ciclo celular, en la que existe crecimiento celular con sntesis de protenas y
de ARN. Es el perodo que trascurre entre el fin de una mitosis y el inicio de la
sntesis de ADN. Tiene una duracin de entre 6 y 12 horas, y durante este tiempo
la clula duplica su tamao y masa debido a la continua sntesis de todos sus
componentes, como resultado de la expresin de los genes que codifican las
protenas responsables de su fenotipo particular.
El estado o etapa S (del ingls Synthesis) representa "Sntesis". Es la segunda fase del ciclo, en la que se produce
la replicacin o sntesis del ADN, como resultado cada cromosoma se duplica y queda formado por
dos cromtidas idnticas. Con la duplicacin del ADN, el ncleo contiene el doble de protenas nucleares y de ADN que al
principio. Tiene una duracin de unos 6-8 horas.
El estado o etapa G2 del ingls Growth o Gap2 (Intervalo 2), es el tiempo que transcurre entre la fase S y el inicio de la mitosis
(la clula se prepara para mitosis). Tiene una duracin entre 3 y 4 horas. Termina cuando la cromatina empieza a
condensarse al inicio de la mitosis.
El estado o etapa M representa la fase M, e incluye la mitosis o reparto de material gentico nuclear (donde se divide la
cromatina duplicada de modo tal que cada clula hija obtenga una copia del material gentico o sea un cromosoma de cada
tipo) y la citocinesis (divisin del citoplasma).
Si el ciclo completo durara 24 horas, la fase M durara alrededor de media hora (30 minutos). El final de la mitosis da cabida a
un nuevo ciclo en G1 o puede que la clula entre en fase G0 que corresponde a un estado de reposo especial caracterstico
de algunas clulas, en el cual puede permanecer por das, meses y a veces aos. Las clulas que se encuentran en el ciclo
celular se denominan proliferantes y las que se encuentran en fase G0 se llaman clulas quiescentes.
Aqu es importante recordar que todas las clulas se originan nicamente de otra existente con anterioridad.
Como todo proceso orgnico, el ciclo celular est sujeto a regulacin. sta es realizada en sitios especficos
llamados puntos de control o de chequeo, que pueden frenar o disparar diversos procesos que le permitan a la clula
proseguir con su ciclo normal de replicacin del material gentico, crecimiento y divisin. La funcin de la regulacin,
bsicamente es realizada por protenas especficas conocidas como cinasas (kdc) y ciclinas (ciclinas A B).

Divisin celular
Las clulas se reproducen duplicando tanto su contenido nuclear como el citoplasmtico y luego dividindose en dos. La
etapa o fase de divisin posterior es el medio fundamental a travs del cual todos los seres vivos se propagan. El ciclo
celular comprende el conjunto de procesos que una clula debe realizar para cumplir la replicacin exacta del ADN y la
segregacin (separacin o divisin) de los cromosomas replicados en dos clulas distintas. La gran mayora de las clulas
tambin doblan su masa y duplican todos sus orgnulos citoplasmticos en cada ciclo celular: De este modo, durante el ciclo
celular un conjunto complejo de procesos citoplasmticos y nucleares tienen que coordinarse unos con otros.

En la divisin o reproduccin del ncleo celular (segunda etapa del ciclo celular), existen dos variantes, dependiendo del tipo
de clula que deba dividirse o reproducirse: la mitosis y la meiosis.

Mitosis

La mitosis es la divisin nuclear asociada a la divisin de las clulas somticas. Las clulas somticas de un organismo
eucaritico son todas aquellas que no van a convertirse en clulas sexuales. La mitosis, entonces, es el proceso de divisin o
reproduccin nuclear (del ncleo) de cualquier clula que no sea germinal (sexual). En ella, una de las estructuras ms
importantes son los cromosomas, formados por el ADN y lasprotenas presentes en el ncleo. Una manera de describir un
cromosoma en forma sencilla sera: corresponde a dos brazos, los cuales estn unidos por el centrmero, en los brazos se
ordena el ADN. Las etapas ms relevantes de la mitosis son:
Interfase: Es el tiempo que pasa entre dos mitosis o divisin del ncleo celular. En ella, ocurre la duplicacin del nmero de
cromosomas (es decir, del ADN). As, cada hebra de ADN forma una copia idntica a la inicial. Las hebras de ADN duplicadas
se mantienen unidas por el centrmero. La finalidad de esta duplicacin es entregar a cada clula nueva formada la misma
cantidad de material gentico que posee la clula original. Adems, tambin se duplican otros organelos celulares como, por
ejemplo, los centrolos que participan directamente en la mitosis. Terminada la interfase, que es la primera etapa del ciclo
celular; comienza la mitosis propiamente tal (divisin de la clula), que se ha subdividido en cuatro etapas:
Profase: las hebras de ADN se condensan y van adquiriendo una forma determinada llamada cromosoma. Desaparecen la
membrana nuclear y el nuclolo. Los centrolos se ubican en puntos opuestos en la clula y comienzan a formar unos finos
filamentos que en conjunto se llaman huso mittico. Ntese que el ncleo (ya sin membrana) y
todos los componentes celulares estn dispersos dentro del citoplasma.
Metafase: las fibras del huso mittico se unen a cada centrmero de los cromosomas. Estos se
ordenan en el plano ecuatorial de la clula, cada uno unido a su duplicado.
Anafase: los centrmeros se duplican, por lo tanto, cada duplicado del cromosoma se separa y es
atrado a su correspondiente polo, a travs de las fibras del huso. La anafase constituye la fase
crucial de la mitosis, porque en ella se realiza la distribucin de las dos copias de la informacin
gentica original.
Telofase: en ella se desintegra el huso mittico, la membrana nuclear y el nuclolo reaparecen, los
nuevos cromosomas pierden su forma definida y se transforman en hebras o largos filamentos de
ADN.

Esquema
que
muestra de modo
resumido el proceso
de mitosis.

Terminada la telofase se forman dos ncleos idnticos en relacin con la cantidad y calidad de ADN que posee cada clula
nueva. A medida que va ocurriendo la telofase, el citoplasma comienza a separarse en la regin de la lnea ecuatorial en dos
porciones iguales hasta que forma dos clulas idnticas entre s. Este proceso, que representa una verdadera divisin del
citoplasma que hasta all contiene dos ncleos, se llama citoquinesis. La mitosis (divisin del ncleo) junto con la citoquineis
(divisin del citoplasma) representa la forma de reproduccin para los organismos unicelulares. A los organismos
pluricelulares, este mismo proceso les permite reemplazar clulas muertas o desgastadas, el
crecimiento, la cicatrizacin, la formacin de nuevos tejidos, etctera

Meiosis

Debemos recordar que los organismos superiores que se reproducen de forma sexual se forman a
partir de la unin de dos clulas sexuales especiales denominadas gametos.
La meiosis consta de
dos
divisiones
celulares sucesivas
(meiosis I y meiosis
II) con una sola
replicacin
del
material
gentico,
previa a la primera
divisin.

Los gametos se originan mediante meiosis, proceso exclusivo de divisin de las clulas germinales
(o clulas sexuales).
La meiosis es un mecanismo de divisin celular que a partir de una clula diploide (2n) permite la
obtencin de cuatro clulas haploides (n) con diferentes combinaciones de genes. La meiosis

consta de dos divisiones sucesivas de la clula con una nica replicacin del ADN (previa a la primera divisin o meiosis I). El
producto final son cuatro clulas con n cromosomas La meiosis se diferencia de la mitosis en que slo se transmite a cada
clula nueva un cromosoma de cada una de las parejas (hay 23 parejas, por tanto son 46 cromosomas) de la clula original.
Por esta razn, cada gameto contiene la mitad del nmero de cromosomas que tienen el resto de las clulas del cuerpo (o
sea, 23 cromosomas). Cuando en la fecundacin se unen dos gametos, la clula resultante, llamada cigoto, contiene toda la
dotacin doble de cromosomas (46). La mitad de estos cromosomas proceden de un progenitor y la otra mitad del otro. La
meiosis, entonces, consiste en dos divisiones sucesivas de una clula diploide (primera y segunda divisin meitica),
acompaadas por una sola divisin de sus cromosomas. En los organismos multicelulares (el hombre es uno de ellos), la
meiosis ocurre nicamente en los rganos encargados de la formacin de clulas sexuales. Estos rganos se
denominan gnadas en los animales y son los ovarios de la hembra, que producen gametos femeninos u vulos, y
los testculos del macho, que generan gametos masculinos o espermatozoides. En las plantas con flores (fanergamas o
espermatfitas), la meiosis opera en determinadas estructuras florales: "ovario" y " antera".
Debido a que la meiosis consiste en dos divisiones celulares, estas se distinguen como Meiosis I y Meiosis II. Ambos sucesos
difieren significativamente de los de la mitosis. Cada divisin meiotica se divide formalmente en los estados de: Profase,
Metafase, Anafase y Telofase. De estas la ms compleja y de ms larga duracin es la Profase I, que tiene sus propias
divisiones: Leptoteno, Citogeno, Paquiteno, Diploteno y Diacinesis.
Meiosis I.- Las caractersticas tpicas de la meiosis I solo se hacen evidentes despus de la replicacin del ADN (primera
etapa del ciclo celular), cuando en lugar de separarse las cromtidas hermanas se comportan como bivalentes o una unidad,
como si no hubiera ocurrido duplicacin formando una estructura con el cromosoma homlogo (tambin bivalente) con cuatro
cromtidas. Las estructuras bivalentes se alinean sobre el huso, posteriormente los dos homlogos duplicados se separan
desplazndose hacia polos opuestos, a consecuencia de que las dos cromtidas hermanas se comportan como una unidad,
cuando la clula meitica se divide cada clula hija recibe dos copias de uno de los dos homlogos. Por lo tanto, las dos
progenies de esta divisin contienen una cantidad doble de ADN, pero estas difieren de las clulas diploides normales.
Profase I.- Al comienzo de la profase I, los cromosomas aparecen como hebras nicas, muy
delgadas, aunque el material cromosmico (ADN) ya se ha duplicado en la interfase que precede a
la meiosis. Muy pronto, los cromosomas homlogos se atraen entre s, colocndose uno junto al
otro, para formar parejas que se correspondan y contactan ntimamente en toda su extensin. En
este proceso de apareamiento, llamado sinapsis, cada pareja de homlogos incluye un cromosoma
de origen "paterno" y un cromosoma de origen "materno", ambos en proceso de condensacin.
A medida que continan acortndose y engrosando, se hace visible que cada cromosoma est
constituido por dos cromtidas hermanas unidas por uncentrmero, de modo que la pareja de
homlogos forma, en conjunto, una estructura de cuatro cromtidas, la ttrada. Mientras integran
una ttrada, las cromtidas no hermanas intercambian porciones homlogas, fenmeno conocido
como entrecruzamiento. La recombinacin de material hereditario en el entrecruzamiento
contribuye a la variacin de la descendencia.

Intercambio de
fragmentos entre
cromtidas
homlogas por
entrecruzamiento de
cromosomas
homlogos.

Durante la profase I, la clula sufre cambios similares a los estudiados en la mitosis. Los centrolos
(si existen) se separan y aparecen el huso y los steres. La membrana nuclear y el nuclolo
terminan desintegrndose. En sntesis, la principal diferencia entre la profase I en la meiosis y la
profase de la mitosis radica en la sinapsis, proceso exclusivo de la meiosis, puesto que no ocurre en la mitosis.
Etapas de la Profase I

Leptoteno:
En esta fase, los cromosomas se hacen visibles, como hebras largas y finas. Otro
aspecto de la fase leptoteno es el desarrollo de pequeas reas de engrosamiento a lo
largo del cromosoma, llamadas crommeros, que le dan la apariencia de un collar de
perlas.

Cigoteno:
Es un perodo de apareamiento activo en el que se hace evidente que la dotacin
cromosmica del meiocito corresponde de hecho a dos conjuntos completos de
cromosomas. As, pues, cada cromosoma tiene su pareja, cada pareja se denomina par
homlogo y los dos miembros de la misma se llaman cromosomas homlogos.

Paquiteno:
Esta fase se caracteriza por la apariencia de los cromosomas como hebras gruesas
indicativas de una sinapsis completa. As, pues, el nmero de unidades en el ncleo es
igual al nmero n.
A menudo, los nuclolos son muy importantes en esta fase. Los engrosamientos
cromosmicos en forma de perlas, estn alineados de forma precisa en las parejas
homlogas, formando en cada una de ellas un patrn distintivo

Diploteno:
Ocurre la duplicacin longitudinal de cada cromosoma homlogo, al ocurrir este
apareamiento las cromtidas homlogas parecen repelerse y separarse ligeramente y
pueden apreciarse unas estructuras llamadas quiasmas entre las cromtidas. La
aparicin de estos quiasmas nos hace visible el entrecruzamiento ocurrido en esta fase.

Diacinesis:
Esta etapa no se diferencia sensiblemente del diploteno, salvo por una mayor
contraccin cromosmica. Los cromosomas de la interfase, en forma de largos
filamentos, se han convertido en unidades compactas mucho ms manejables para los
desplazamientos de la divisin meitica.

Metafase I.- Esta etapa de la primera divisin meitica tambin difiere sustancialmente de la mitosis. Al llegar a esta etapa la
membrana nuclear y los nuclolos han desaparecido y cada pareja de cromosomas homlogos ocupa un lugar en el plano
ecuatorial. En esta fase los centrmeros no se dividen; esta ausencia de divisin presenta una
diferencia importante con la meiosis. Los dos centrmeros de una pareja de cromosomas
homlogos se unen a fibras del huso de polos opuestos.
Adems, los diferentes pares de cromosomas homlogos se distribuyen a ambos lados del
ecuador de la clula en forma independiente y al azar, vale decir, algunos cromosomas de origen
paterno o materno se colocan en un lado del plano ecuatorial y, el resto, en el lado opuesto. Para
tal ordenamiento, la nica regla es que cada cromosoma de origen paterno quede siempre
enfrentado a su homlogo de procedencia materna; pero el hemisferio celular que ocupa
cualquiera de ellos depende slo de la casualidad. Como consecuencia de esta distribucin al azar,
cuando se separan los dos grupos cromosmicos en direccin al polo de su respectivo hemisferio,
cada conjunto incluye una mezcla casual de cromosomas maternos y paternos, lo que se traduce
finalmente en una amplia variedad de combinaciones cromosmicas en los gametos, fenmeno
conocido como permutacin cromosmica. Expresado de otra manera, cada gameto poseer un
material hereditario diferente del de los otros. Esta orientacin de cromtidas al azar antes de su
desplazamiento hacia los polos concuerda con la Segunda ley de Mendelllamada de la Asociacin
independiente.

Meiosis: Metafase I.

Anafase I.- Como en la mitosis, esta anafase comienza con los cromosomas movindose hacia los polos. Precisamente es
en esta etapa de anafase I de la meiosis I cuando ocurre la separacin de los cromosomas homlogos, momento en el que
ocurre realmente la haploidia cuando cada miembro de una pareja homloga se dirige a un polo opuesto y se cumple conlo
establecido por Mendel.
Telofase I.-Esta telofase y la interfase que le sigue,llamada intercinesis,son aspectos variables de la meiosis I.
En muchos organismos, estas etapas ni siquiera se producen; no se forma de nuevo la membrana nuclear y las clulas
pasan directamente a la meiosis II. En otros organismos la telofase I y la intercinesis duran poco; los cromosomas se alargan
y se hacen difusos, y se forma una nueva membrana nuclear. En todo caso, nunca se produce nueva sntesis de ADN y no
cambia el estado gentico de los cromosomas.

Meiosis II.- La segunda divisin meitica es una divisin ecuacional, que separa las cromtidas hermanas de las clulas
haploides (citos secundarios). Esencialmente, la Meiosis II es una mitosis normal en la que las dos clulas producto de
la meiosis I separan, en la anafase II, las cromtidas de sus n cromosomas. Surgen as cuatro clulas con n cromtidas cada
una.

Segunda divisin de
la meiosis.

Profase II.- Esta fase se caracteriza por la presencia de cromosomas compactos (reordenados) en nmero haploide y por el
rompimiento de la membrana nuclear, mientras aparecen nuevamente las fibras del huso. Los centriolos se desplazan hacia
los polos opuestos de las clulas.
Metafase II.- En esta fase, los cromosomas se disponen en el plano ecuatorial. En este caso, las cromtidas aparecen, con
frecuencia, parcialmente separadas una de otra en lugar de permanecer perfectamente adosadas, como en la mitosis.
Anafase II.- Los centrmeros se separan y las cromtidas son arrastradas por las fibras del huso acromtico hacia los polos
opuestos.
Telofase II.- En los polos, se forman de nuevo los ncleos alrededor de los cromosomas. En suma, podemos considerar que
la meiosis supone una duplicacin del material gentico (fase de sntesis del ADN) y dos divisiones celulares.
Inevitablemente, ello tiene como resultado unos productos meiticos con solo la mitad del material gentico que el meiosito
original.

La Meiosis en lminas

Profase I (temprana)

En el cito primario los cromosomas se

ven como filamentos muy delgados

Profase I (intermedia)

Los cromosomas homlogos se

aparean (sinapsis) y se hacen ms
cortos y gruesos

Profase I (tarda)

Cada cromosoma tiene dos

cromtidas hermanas unidas por un
centrmero. La membrana nuclear
empieza a desaparecer

Metafase I

Las ttradas se ordenan en el

ecuador del huso

Citos secundarios

Durante la intercinesis no hay

duplicacin de material gentico

Anafase I

Los cromosomas homlogos se

separan, dirigindose a los polos
opuestos. Los centrmeros no se
dividen

Profase II

En los citos secundarios los

cromosomas se recondensan. La
membrana nuclear comienza a
desaparecer y se reconstituye el huso
acromtico

Anafase II

Los centrmeros se dividen, separndose las cromtidas

Telofase I

Se forman dos ncleos haploides.

Cada cromosoma consta de dos
cromtidas adheridas a un
centrmero

Metafase II

Los cromosomas se alinean en el

ecuador del huso como en la mitosis

Telofase II

Reconstruccin de los ncleos. Se completa la citoquinesis

hermanas. Los nuevos cromosomas migran hacia los

polos opuestos

formndose cuatro clulas haploides que entran al periodo

de interfase

ESTRUCTURA DEL ADN

Est formado por la unin de muchos desoxirribonucletidos. La mayora de las molculas de ADN poseen dos cadenas
antiparalelas ( una 5-3y la otra 3-5) unidas entre s mediante las bases nitrogenadas, por medio de puentes de hidrgeno.
La adenina enlaza con la timina, mediante dos puentes de hidrgeno, mientras que la citosina enlaza con la guanina,
mediante tres puentes de hidrgeno. El ADN es el portador de la informacion gentica, se puede decir por tanto, que los
genes estn compuestos por ADN.
ESTRUCTURA PRIMARIA DEL ADN: Se trata de la secuencia de desoxirribonucletidos de una de las cadenas. La
informacin gentica est contenida en el orden exacto de los nucletidos.
ESTRUCTURA SECUNDARIA DEL ADN:Es una estructura en doble hlice. Permite explicar el almacenamiento de la
informacin gentica y el mecanismo de duplicacin del ADN. Fu postulada por Watson y Crick,basandose en:
- La difraccin de rayos X que haban realizado Franklin y Wilkins
- La equivalencia de bases de Chargaff,que dice que la suma de adeninas ms guaninas es igual a la suma de timinas ms
citosinas.
Es una cadena doble, dextrgira o levgira, segn el tipo de ADN. Ambas cadenas son complementarias, pues la adenina de
una se une a la timina de la otra, y la guanina de una a la citosina de la otra. Ambas cadenas son antiparalelas, pues el
extremo 3de una se enfrenta al extremo 5de la otra. Existen tres modelos de ADN. El ADN de tipo B es el ms abundante y
es

el

descubierto

por

Watson

Crick.

ESTRUCTURA TERCIARIA DEL ADN:Se refiere a como se almacena el ADN en un volumen reducido. Vara segn se trate
de organismos procariontes o eucariontes:
a) En procariontes se pliega como una super-hlice en forma, generalmente, circular y asociada a una pequea cantidad de
proteinas. Lo mismo ocurre en la mitocondrias y en los plastos.
b) En eucariontes el empaquetamiento ha de ser ms complejo y compacto y para esto necesita la presencia de proteinas,
como son las histonas y otras de naturaleza no histona (en los espermatozoides las proteinas son las protaminas). A esta
unin de ADN y proteinas se conoce como cromatina, en la cual se distinguen diferentes niveles de organizacin:

Nucleosoma

Collar de perlas

Fibra cromatinica

Bucles radiales

Cromosoma

ADN
El cido desoxirribonucleico (ADN) CONTIENE la informacin gentica de la mayor parte de los organismos vivos (una
excepcin son algunos virus, denominados retrovirus, que utilizan el ARN o cido ribonucleico para guardar su informacin
gentica).

El ADN es un polmero, compuesto de unidades denominadas nucletidos (o mononucletidos).

- Los nucletidos tienen tambin otras funciones: (transportadores de energa: ATP, GTP; respiracin celular: NAD, FAD;
transduccin de seales: AMP cclico; coenzimas: CoA, UDP; vitaminas: nicotinamida mononucletido,
Vit B2).
Utilizando la nomenclatura de las protenas, podemos hablar en terminus de estructura primaria, secundaria, terciaria y
cuaternaria de la molcula:
I Estructura primaria de la molcula: esqueleto covalente y bases laterales
Un
nuclesido
est
hecho
de
un
azcar
+
una
base
nitrogenada.
Un nucletido est hecho de un grupo fosfato + un azcar + una base nitrogenada. En el ADN, el nucleotide es un
desoxirribonucletido (en el ARN, el nucletido es un ribonucletido).
I-1 cido fosfrico: Suministra un grupo fosfato.

I-2 Azcar:
Desoxirribosa, que es una pentosa cclica (azcar de 5
carbonos). Nota: el azcar en el ARN es una ribosa. Los
carbonos del azcar se numeran de 1' a 5'. El atomo
de nitrgeno de la base nitrogenada se une a C1' (por
un enlace glicosdico), y el grupo fosfato se une al C5'
(enlace ster) para formar el nucletido. El nucleotide
es, por lo tanto: fosfato - C5' azcar C1' base
nitrogenada.

I-3 Bases nitrogenadas:

Son heterociclos aromticos; hay purinas y pirimidinas.
- Purinas: adenina (A) y guanina (G).
Pirimidinas:
citosina
por uracilo (U) en el ARN).

(C)

timina

(T)

(Nota:

la

timina

es

reemplazadas

Nota: pueden existir otras bases nitrogenadas, en particular bases metiladas derivadas de las anteriores; este tipo de bases
tienen un papel funcional (ver captulo correspondiente).

Glosario:
Nombres
de
nuclesidos:
desoxirribonuclesidos
en
el
ADN:
desoxiadenosina,
desoxiguanosina, desoxicitidina, desoxitimidina (ribonucletidos en el ARN: adenosina, guanosina, citidina, uridina).
- Nombres de nucletidos: desoxirribonucletidos en el ADN: cido desoxiadenlico, cido desoxiguanlico, cido
desoxicitidlico, cido desoxitimidlico (ribonucletidos en el ARN: cido adenlico, cido guanlico, cido citidlico, cido
uridlico).

II Estructuras secundaria y terciaria de la molcula Conformacin tridimensional del ADN

II.1 Dinucletidos
Los dinucletidos se forman a travs de un enlace fosfodister entre dos mononuclotidos. Este enlace se forma entre el
grupo fosfato de un mononucletido (en C5' de su azcar) y el C3' del azcar del anterior mononucletido. As, comenzando
con un grupo fosfato, tenemos un azcar en 5' (+ su base) y cuyo extremo en 3', est unido a un segundo grupo fosfato en 5'
de otro azcar, cuyo extremo 3' est libre para un siguiente enlace. La unin y la orientacin de la molcula es, por tanto 5'
-> 3'.
Los polinucletidos estn formados por la sucesiva adicin de monmeros en una configuracin general 5' -> 3'. El esqueleto
de la molcula est hecho por una sucesin de grupo fosfato-azcar (n nucletidos) fosfato - azcar (nucletido n+1), y as
sucesivamente, unidos covalentemente, con las bases nitrogenadas situadas lateralmente.

II.2 Molcula de ADN

El ADN est formado de dos ("ADN dplex") cadenas o hebras dextrgiras (como un tornillo; con giro hacia la derecha)
enrolladas alrededor de un eje formando una hlice doble de 20A de dimetro ("la doble hlice").
Las dos cadenas son antiparalelas (esto es: sus orientaciones 5'->3' estn en direcciones opuestas). La apariencia general
del polmero muestra una periodicidad de 3,4 A, correspondiente a la distancia entre dos bases, y otra de 34 A,
correspondiente a una vuelta completa de la hlice (y tambin a 10 pares de bases).

II.2.1 Puentes de hidrgeno: emparejamiento entre las bases

Las bases nitrogenadas (hidrofbicas) se encuentran apiladas en el interior de la doble hlice, en planos perpendiculares a su
eje. La parte exterior (grupos fosfato y azcares) es hidroflica. Las bases de una de las cadenas o hebras estn unidas
mediante puentes de hidrgeno con las bases nitrogenadas de la otra cadena o hebra, uniendo ambas cadenas (lneas
discontinuas en la figura). De esta manera, una purina de una de las cadenas se encuentra enfrentada y unida a una
pirimidina en la otra cadena. Por ello, el nmero de purinas es igual al nmero de pirimidinas. A se une a T (con dos puentes
de
hidrgeno).
G se une a C (con tres puentes de hidrgeno: enlace ms estable: 5,5 kcal vs 3,5 kcal).
Nota: el contenido de A en el ADN es por lo tanto igual al contenido en T, y el contenido en G es igual al contenido en C.
Esta correspondencia estricta (A<->T y G<->C) hace a las dos cadenas o hebras complementarias. Una es el molde para la
otra, y recprocamente tambin: esta propiedad permitir una replicacin exacta
III Estructura cuaternaria de la molcula - Cromatina
El ADN se asocia a protenas: histonas y no histonas, para formar la cromatina. El ADN en su conjunto es cido (cargado
negativamente) y se une a protenas bsicas (cargadas positivamente) denominadas histonas.
Hay 3 x 10 9 pares de nucletidos en el genoma humano haploide que contiene unos 30 000 genes dispersos sobre los 23
cromosomas que conforman un juego haploide.

Desnaturalizacin del ADN:

La doble hlice puede desespiralizarse in vitro mediante calor, pH extremos y otras condiciones (urea, ) en un proceso
denominado fusin. Se puede calcular su punto de fusion, que es caracterstico y dependiente de la proporcin A/T versus
G/C, debido al hecho que hay slo dos puentes de hidrgeno en la unin A/T, y tres en la G/C, unin ms estable. Con la
desnaturalizacin, las propiedades fsicas del ADN cambian; por ejemplo, hay un efecto hipercrmico ya que la absorcin de
la luz a 260 nm es mayor en el ADN desnaturalizado que en el ADN bicatenario. La abosrcin de la luz tambin vara con la
proporcin A/T vs G/C y es mayor en secuencias ricas en A/T que en secuencias ricas en G/C. La desnaturalizacin del ADN
es importante porque:
1- permite medir el contenido A/T vs G/C;
2- es la base de las tcnicas de hibridacin

Mtodos de extraccin
Para extraer los cidos nucleicos del material biolgico es preciso provocar una lisis celular, inactivar las nucleasas celulares
y separar los cidos nucleicos de los restos de clulas. El procedimiento de lisis idneo suele consistir en un equilibrio de
tcnicas y ha de ser suficientemente fuerte para romper el material inicial complejo (un tejido, por ejemplo), pero
suficientemente suave para preservar el cido nucleico diana. Entre los procedimientos usuales de lisis figuran los siguientes:
Rotura mecnica (trituracin, lisis hipotnica, etc.);
Tratamiento qumico (detergentes, agentes caotrpicos, reduccin con tioles, etc.);
Digestin enzimtica (Proteinasa K, etc.).
Es posible romper la membrana celular e inactivar las nucleasas intracelulares al mismo tiempo. Por ejemplo, una misma
solucin puede contener detergentes que solubilicen las membranas celulares y sales caotrpicas fuertes que inactiven las
enzimas intracelulares. Tras la lisis celular y la inactivacin de las nucleasas, los restos de clulas se eliminan fcilmente por
filtracin o precipitacin.
Mtodos de purificacin: Los mtodos empleados para purificar los cidos nucleicos de extractos celulares suelen ser
combinaciones de dos o ms tcnicas de las siguientes:
Extraccin/precipitacin;
Cromatografa;
Centrifugacin;
Separacin por afinidad.

En los prrafos siguientes se describen brevemente estas tcnicas.

Extraccin/precipitacin: A menudo se efecta una extraccin con disolventes para eliminar los contaminantes de los
cidos nucleicos. Por ejemplo, suele emplearse una combinacin de fenol y cloroformo con objeto de eliminar las protenas.
Para concentrar los cidos nucleicos suele realizarse una precipitacin con isopropanol o etanol. Si la cantidad de cido
nucleico diana es escasa, puede aadirse a la mezcla un portador inerte (como el glucgeno) para favorecer la precipitacin.
Tambin puede realizarse una precipitacin selectiva con concentraciones salinas elevadas (precipitacin salina) o una
precipitacin de las protenas mediante cambios del pH.
Cromatografa.- Pueden emplearse diversas tcnicas cromatogrficas de separacin: permeacin sobre gel, intercambio
inico, adsorcin selectiva o unin por afinidad. La permeacin sobre gel aprovecha las propiedades de las partculas
porosas del gel para tamizar molculas. Se emplea una matriz con poros de tamao definido, que dejan pasar las molculas
ms pequeas por difusin, pero no las ms grandes, que quedan eluidas en el volumen vaco. As pues, las molculas
quedan eluidas por orden de tamao decreciente. La cromatogrfica de intercambio inico es otra tcnica, que se basa en la
interaccin electrosttica de la molcula diana con un grupo funcional de la matriz en columna. Los cidos nucleicos
(polianiones lineales con fuerte carga negativa) pueden eluirse de las columnas de intercambio inico con simples Tampones
salinos. En la cromatografa de adsorcin, los cidos nucleicos se fijan selectivamente en slice o vidrio, en presencia de
determinadas sales (por ejemplo, sales caotrpicas), mientras que otras molculas biolgicas no se fijan. A continuacin, los
cidos nucleicos pueden eluirse con agua o un tampn hiposalino y se obtiene una muestra que puede emplearse
directamente en las aplicaciones posteriores.
Centrifugacin.- La centrifugacin selectiva constituye un mtodo de purificacin eficaz. As, por ejemplo, la
ultracentrifugacin en gradientes autogenerados de CsCl con fuerzas g elevadas se lleva empleando mucho tiempo para
purificar plsmidos. La centrifugacin suele asociarse a otros mtodos, como la cromatografa de columna centrifugada, en
cuyo caso se combina la permeacin sobre gel y la centrifugacin para separar el ADN o ARN de contaminantes ms
pequeos (sales, nucletidos, etc.), intercambiar tampones o seleccionar segn el tamao. Algunos procedimientos combinan
la adsorcin selectiva en matriz cromatogrfica (vase el apartado anterior Cromatografa) y la elucin por centrifugacin
para purificar de forma selectiva un tipo de cido nucleico.
Separacin por afinidad.- En los ltimos aos, cada vez son ms los mtodos de purificacin que combinan la
inmovilizacin por afinidad de cidos nucleicos y la separacin magntica. Por ejemplo, los ARNm poli A + pueden unirse a
partculas magnticas revestidas de estreptavidina mediante oligo dT marcados con biotina, y el complejo de partculas
puede eliminarse de la solucin (y de los contaminantes libres) con un imn. Esta tcnica en fase slida simplifica la
purificacin de los cidos nucleicos, pues permite sustituir las etapas de centrifugacin, extraccin orgnica y separacin de
fases por una operacin de separacin magntica, nica y rpida.

Electroforesis
Se denomina electroforesis a la tcnica mediante la cual se separan las biomolculas en disolucin cuando se ven sometidas
a un campo elctrico. Se trata de una tcnica fundamentalmente analtica, aunque tambin se puede realizar con fines
preparativos.
Cada molcula se desplaza por efecto del campo, alcanzando rpidamente una velocidad constante al equilibrarse la fuerza
impulsora (fuerza del campo elctrico) con la resistencia al avance (fuerza de friccin o rozamiento) impuesta por el medio en
el que se desplaza
Al ser el medio de soporte a su vez un polielectrolito, est constituido por iones, que son atrados y as recubren los iones de
la muestra, lo que altera el comportamiento de stos en el campo. Todo ello hace que el tratamiento terico cuantitativo de la
electroforesis sea muy difcil y que esta tcnica resulte poco til para obtener informacin precisa sobre la estructura de las
molculas. Sin embargo, es enormemente til como tcnica analtica y preparativa.
Se suele hablar de 3 tipos de electroforesis:
1.

De frente mvil: los componentes de la muestra estn presentes en toda la disolucin y se determina pticamente la
posicin del frente de avance o frontera con el disolvente.

2.

Zonal: la muestra se aplica como una mancha o banda y sus componentes migran a travs de un disolvente,
utilizando adems un medio que soporta a ste. En este caso no se determina la movilidad, sino que el nico
objetivo de la tcnica es separar los componentes de la muestra.

3.

Continua: la muestra se aplica tambin en una zona, pero se suministra continuamente a lo largo del proceso

 PCR
Es una tcnica que permite duplicar un nmero ilimitado de veces un fragmento de ADN en un tubo de ensayo. Mediante esta
tcnica pueden generarse millones de molculas idnticas, a partir de una molcula de ADN. Esto se puede conseguir en
unas horas.
La reaccin es muy sencilla, necesita cantidades de ADN muy pequeas y slo se precisa un tubo de ensayo, algunos
reactivos, una fuente de calor y unas pequeas cadena de nucletidos que actan como cebadores.
La reaccin es un proceso cclico:
1.

La molcula de ADN que va a copiarse se calienta para que se desnaturalice y se separe las dos hebras.

2.

Cada una de las hebras es copiada por la ADN-polimerasa. (Se utiliza la ADN-polimerasa de una bacteria que vive
en aguas termales, Thermus aquaticus, as la enzima puede trabajar a altas temperaturas).

3.

Las cadenas recin formadas son separadas de nuevo por el calor y comienza otro nuevo ciclo de copias. Estos
ciclos se repiten hasta que se obtiene el nmero de copias deseado.