Examen Parcial Laboratorio de Farmacologa I

Semestre 2014-2
Lunes 17:00 - 20:00
Nombre: MORENO RUZ MONTSERRAT
Calif: ______

Grupo: 2

Equipo: 2

1) Para determinar la actividad biolgica de nuevos compuestos, se han sugerido los

bioensayos, los cuales deben ser rpidos, reproducibles y econmicos, entre estos, el
mtodo de A. salina Leach, ha sido utilizado para evaluar potenciales nuevas
molculas con posible actividad biolgica. La siguiente tabla muestra el criterio bajo
la cual se puede considerar activa a una sustancia con este mtodo.
CL50 (ppm)

Actividad

CL501000
500 CL50<1000
100 CL50<500
0 CL50<100

Inactivo
Medianamente
inactivo
Activo
Muy activo

Con los datos de la tabla siguiente, determinar la CL 50 (utilizar tabla de probits

incluida) y sus intervalos de confianza. En la tabla se presentan los Pi obtenidos de 3
rplicas, (10 artemias por cada vial n=30), para 5 diferentes concentraciones y 1
control (N (total)= 180).
C
(ppm)
0
10
30
100
300
1000

Pi (Anlogo
1)
0
0
0
0
0.15
0.40

Pi (Anlogo
2) 0.20
0.28
0.36
0.464
0.576
0.696

Pi (Anlogo
3)
0
0.33
0.45
0.66
0.78
0.84

Pi (Anlogo
4)
0
0
0.03
0.08
0.17
0.32

Pi (Anlogo
5)
0
0.01
0.03
0.16
0.43
0.76

De
a los

acuerdo
datos

obtenidos y los criterios anteriores, indique si los anlogos son activos o no,
seleccione 2 anlogos para continuar con el experimento.
C
(g/mL=pp
m)
0
10
30
100
300

Log C

Pi
(Anlogo
1)
0

1
1.4771212
55

2
2.4771212
55

0
0.15

0.4

1000

ANLOGO 1
5

Yi

f(x) = 1.93x - 0.98

R = 0.98

0
1.8 2 2.2 2.4 2.6 2.8 3 3.2

Log C

y = 1.9332x - 0.9782
=1.9332
S= 1821.0039
= -0.9782
EEM= 191.950665
CL50=
1237.04552
LSC= 1613.26883
CL84=
4022.44361
LIC= 860.82222
CL16=

Pi'

Pi Miller

Yi

0.017

0.017

0.15

0.15

3.96

0.4

0.4

4.75

2.81

380.435818
Intervalo de confianza: 1237.04552 (860.82222-1613.26883) ppm
C
(g/mL=pp
m)
0

Log C

10

1
1.4771212
55

0.28

0.464

300

2
2.4771212
55

1000

0.4696

30
100

Pi
(Anlogo
2)
0.2

ANLOGO 2
Pi'

Yi

0.1

3.72

10
Yi

0.36
0.2

4.16

0.33

4.56

0.47

4.92

0.62

5.31

5
0
0.5

f(x) = 0.79x + 2.97

R = 1
1 1.5 2 2.5 3 3.5
Log C

0.576

y = 0.7877x + 2.9658
S=
= 0.7877
3442.83334
EEM=
= 2.9658
362.906499
CL50=
LSC=
382.344854
1093.64159
CL84=
LIC=
6906.83233
-328.951883
CL16=
21.1656488
Intervalo de confianza: 382.34 (-328.95-1093.64) ppm
ANLOGO 3
10
Yi

5
0
0.5

f(x) = 0.75x + 3.82

R = 0.98
1 1.5 2 2.5 3 3.5
Log C

C
(g/mL=pp
m)
0

Log C

10

1
1.4771212
55

0.33

2
2.4771212
55

0.66

0.84

30
100
300

0.7518x +
3.8233
=
S=
0.751 380.1
8
68234

1000

Pi
(Anlogo
3)
0

Pi'

Yi

0
0.33

4.56

0.45

4.87

0.66

5.41

0.78

5.77

0.84

5.99

0.45

0.78

EEM=
40.0732505
LSC=
115.286765
LIC=
-41.8003767

= 3.8233
CL50=
36.7431942
CL84=
762.107953
CL16=
1.77148437
Intervalo de confianza: 36.7431942 (-41.8003767-115.286765) ppm
ANLOGO 4
5
f(x) = 0.87x + 1.88
R = 1

Yi
0
0.5

1.5

2.5

3.5

Log C

C
(g/mL=pp
m)
y = 0.8744x
0

Log C

Pi
(Anlogo
4)
0

Pi'

+ 1.8792
0
= 0.8744
S=
24996.6563
10
0
0.017
1
= 1.8792
EEM=
2634.87893
30
1.4771212
0.03
0.03
55
CL50=
LSC= 8871.81812
100
0.08
0.08
3707.45542
2
300
2.4771212
0.17
0.17
CL84=
LIC= -1456.90728
55
50266.7583
1000
0.32
0.32
3
CL16=
273.445636
Intervalo de confianza CL50: 3707.45542
ANLOGO 5
10
Yi

5
0
0.5

f(x) = 1.56x + 0.97

R = 0.99
1 1.5 2 2.5 3 3.5
Log C

Yi
2.81
3.12
3.59
4.05
4.53

(-1456.90728-8871.81812) ppm

C
(g/mL=pp
m)
0

Log C

10

1
1.4771212
55

0.01

2
2.4771212
55

0.16

0.76

30
100
300

1000
y = 1.5574x + 0.9655
S= 796.680534
= 1.5574
= 0.9655
EEM= 83.9775019
CL50=
389.525154
LSC= 554.121058
CL84=
1683.48926
LIC= 224.92925
CL16=
90.1281933

Pi
(Anlogo
5)
0

Pi'

Yi

0
0.01

2.67

0.03

3.12

0.16

4.01

0.43

4.82

0.76

5.71

0.03

0.43

Intervalo de confianza CL50:

389.52 (224.93-554.12) ppm
Ejemplo de clculo: Para el
Anlogo 2.

C
(g/mL=pp
m)
0
10
30
100
300

Log C

Pi
(Anlogo
2)
0.2

1
1.4771212
55

0.28

2
2.4771212
55

0.464

y = 0.7877x + 2.9658
1000
3
= 0.7877
S=
3442.83334
EEM=
= 2.9658
362.906499
CL50=
LSC=
382.344854
1093.64159
CL84=
LIC=
6906.83233
-328.951883
CL16=
21.1656488

Pi'

Pi Miller

Yi

0.1

0.1

3.72

0.2

0.2

4.16

0.33

0.33

4.56

0.47

0.47

4.92

0.62

0.62

5.31

0.36

0.576
0.4696

Intervalo de confianza: 382.34 (-328.95-1093.64) ppm

1. Como en el grupo control el valor de Pi0 se realiz una correccin de datos de la
siguiente manera con la frmula de Aboott:

Pi =

|P i pruebaP icontrol|
1P i control

0.20.2
=0
10.2

Pi =

0.280.2
=0.1
10.2

Pi =

0.360.2
=0.2
10.2

Pi =

0.5760.2
=0.47
10.2

2. Con los datos corregidos se utiliz la Tabla Probit obtener los valores Probit (Yi).
3. Se grafic Yi vs LogC (no se graficaron los valores del grupo control), obtuvo la
siguiente ecuacin:
y = 0.7877x + 2.9658

Yi=LogC +

4. Se calcul CL50, CL16 Y CL84:

C=10

Yi

C L16=10

C L50=10
4.012.9658
0.7877

C L84 =10

52.9658
0.7877

=382.3448 54 ppm

=21.1656488 ppm

5.992.9658
0.7877

=6906.83233 ppm

5. Se calcul la desviacin estndar (S):

S=

C L84C L16 6906.8323321.1656488

=
=3442.83334 ppm
2
2

6. Se calcul el error estndar de la media (EEM):

EEM=

2S
23442.83334
=
=362.906499
2 N
2180

7. Para los intervalos de confianza (=0.025):

*De tablas estadsticas T= 1.96.

LSC =C L50+ EEMT =382.3448 54+362.9064991.96=1093.64159 ppm

LIC=C L50EEMT =382.3448 54362.9064991.96=328.951883 ppm

Conclusin:

Anlogo
Anlogo
Anlogo
Anlogo
Anlogo

Para los anlogos 1 y 4 el porcentaje de muertes no llega al 50%, por lo que los
valores de CL50 obtenidos son resultado de una extrapolacin. Ambos son inactivos
porque su potencia es tan baja que para observar un efecto mnimo teraputico y/o
txico (CL50) se requiere administrar concentraciones muy altas de frmaco, por lo
que su manejo experimental en estudios posteriores no es satisfactorio ni rentable.
Los anlogos 2 y 5 son los frmacos seleccionados porque son activos,
cuyas concentraciones letales mnimas que presentan permite hacer
experimentaciones y administrar diversas concentraciones del frmaco,
que
hagan posible llegar a observar cierta respuesta que se est
estudiando sin llegar rpidamente a la muerte del 50% de la poblacin,
lo que limitara en tiempo, magnitud y precisin las observaciones
requeridas en el estudio. As pues, dichos anlogos son opcin para
experimentos futuros.
En contraste con los anlogos 2 y 5, el anlogo 3 no es buena opcin para
continuar el experimento puesto que al ser muy activo, la potencia del frmaco es

1:
2:
3:
4:
5:

Inactivo
CL50 382.3448 ppm Activo
CL50 36.7432 ppm Muy activo
Inactivo
CL50 389.5251 ppm Activo

tal que a muy baja concentracin se llegar a la muerte del 50% de la poblacin
limitando el dominio de la experimentacin y la variedad de concentraciones a las
que puede someterse la poblacin estudiada. As pues, el manejo experimental del
anlogo 3 en estudios posteriores generara resultados muy limitados e imprecisos.
2) Los compuestos anteriormente probados, se cree actan a nivel del receptor GABA A.
Para estos compuestos se hace un estudio para determinar la DE 50 y compararla con
un frmaco prototipo.
a. De acuerdo a la informacin de cmo se cree que actan estos anlogos, cul
sera el frmaco de referencia (prototipo) que escogera para comparar las DE 50?,
fundamente su respuesta, en la eleccin del prototipo.
No se cuenta con una amplia informacin sobre datos farmacocinticos y
farmacodinmicos de los frmacos anlogos, ms que su CL 50. Para esto,
si se sabe que para Anlogo 2, su CL50 = 382.3448 ppm (= 382.3448 mg/L)
y para el Anlogo 5, su CL50 389.5251 ppm (= 389.5251 mg/L), se concluye
que la ventana de actividad biolgica de ambos frmacos puede ser muy
amplia (si a dosis muy bajas se observan efectos farmacolgicos) o muy
corta (si los efectos son observables a dosis altas y cercanas a las dosis
letales), lo que adems definira la potencia de los frmacos
desconocidos. De tal manera, se requerir de un frmaco cuyo sitio de
accin sea especficamente el receptor GABAA y cuya ventana de actividad
biolgica sea amplia, siendo su CL50 similar a las conocidas, lo que
permitir la comparacin de dosificaciones e iguales administradas con
respecto a los frmacos desconocidos y los efectos que se presenten.
Adems, se considerar la rapidez de accin, la duracin del efecto y el
grado de biodisponibilidad del frmaco prototipo elegido.
La
benzodiacepinas
son
frmacos
que
potencian
la
accin
hiperpolarizante del GABA. El receptor GABA A es el que se relaciona con
los receptores de las benzodiacepinas, las cuales actan por modulacin
alostrica.
Se elige como prototipo el CLORDIAZEPXIDO porque al ser una
benzodiacepina acta a nivel del receptor GABAA, con una afinidad
intermedia por el sitio benzodiacepinrgico del receptor GABA A ; su
biodisponibilidad es elevada, oscilando entre el 100% (variable con
administracin IM); cuya CL50 321 mg/L; su rango de dosis teraputica
de 5-300mg/Kg aproximadamente, lo que muestra una amplia ventana de
actividad biolgica que permitir hacer comparaciones en las
dosificaciones
variadas administradas con respecto a los frmacos
anlogos y sus respectivos efectos farmacolgicos, lo que sera clave en
la comparacin de DE50 determinadas; se absorbe de tal manera que tras
su administracin los efectos se observan rpidamente; es una
benzodiacepina de semivida larga (8 a 20 h), pues si su t 1/2 fuera corto, su
eliminacin sera rpida y sus efectos seran observados durante un
periodo de tiempo ms limitado; se excreta por orina , donde se puede
encontrar un 1 a 2% de frmaco inalterado, lo que garantiza que
prcticamente la dosis administrada completa produce efecto. Adems
esta sustancia consiste en un polvo cristalino blanco, inodoro, cuya
solubilidad es tal que 1g es soluble en 10 mL de agua, lo que facilitar su
administracin por alguna va parenteral (IM) haciendo posible la
preparacin de una solucin acuosa del frmaco.

b.

Cul sera su hiptesis de trabajo para comparar el efecto entre los anlogos
escogidos y el frmaco prototipo seleccionado en lo que a potencia se refiere?
Sabiendo que las CL50 del clordiazepxido y los anlogos 2 y 5 son
relativamente muy similares, se espera que si el grado de potencia de los
frmacos
anlogos
estudiados
es
relativamente
igual
al
del
clordiazepxido, entonces se observarn respuestas farmacolgicas
similares en los individuos tras la administracin de dosis iguales (por
una misma va de administracin), en periodos de tiempo semejantes con
respecto al frmaco control.

c. Describa cmo hara un estudio para determinar la DE 50, qu efecto escogera y

qu modelo sugerira para llevarlo a cabo.
Se sabe que la ventana de actividad biolgica del clordiazepxido es
muy amplia, con lo que se definen dosis crecientes y variadas que
sern administradas, tanto del frmaco control como de los anlogos
desconocidos, teniendo en cuenta las CL50 conocidas para la
preparacin de las soluciones de frmaco, as como el peso de los
animales que sern administrados.
El clordiazepxido es un frmaco indicado para el alivio de la ansiedad
y la tensin.
Se llevar a cabo la experimentacin con ratones, animales que al
explorar un ambiente extrao muestran una conducta de ansiedad y
nerviosismo fcilmente de observar. Se usarn por lo menos 5 ratones
(cuyo peso sea entre 25 y 35 gr) para cada frmaco, a los que se les
administrarn dosis distintas.
La va de administracin utilizada en todos los ratones debe ser la
misma. Ser de tipo parenteral (extravascular). Se sugiere
intraperitoneal intramuscular, ya que no se conocen las
caractersticas liposolubles de los frmacos.
As pues, tras la administracin del frmaco control en el ratn, en un
modelo de cilindro de exploracin se observar la disminucin de
levantamientos
sobre
las
extremidades
traseras
por
efecto
tranquilizante del frmaco, llevando un control del tiempo en el que se
observa tal comportamiento del animal, as como la intensidad del
efecto (estimada mediante el nmero de levantamientos del ratn) en
relacin a la dosis administrada. Este procedimiento se repetir para
cada ratn administrado con el mismo frmaco (con dosis variadas) y
para cada ratn correspondiente a los frmacos estudiados (con dosis
iguales a las administradas con el clordiazepxido). Finalmente, se
compararn las dosis efectivas observadas para cada frmaco con
respecto a las dosis de clordiazepxido, teniendo en cuenta la rapidez
de accin tranquilizante observada, la intensidad y duracin del efecto.
Para cada frmaco, la relacin entre la intensidad del efecto y los
logaritmos de las dosis administradas se representarn mediante una
grfica: Curva dosis- respuesta gradual (CDRG), que adquiere una
forma sigmoidal. Ser importante el anlisis y comparacin de la forma
de la curva, las respuestas a dosis bajas y altas del frmaco y la
pendiente de la parte recta de la curva para la estimacin de la
potencia relativa de los frmacos anlogos y el control.
Finalmente, para la determinacin del valor de la DE 50 de cada frmaco
se tienen 4 modelos farmacodinmicos: modelo lineal (%E vs dosis),

modelo lineal logartmico (%E vs log dosis), modelo hiperblico (1/E vs

1/Dosis ) y modelo sigmoideo del efecto mximo (Log(E/Emx-E) vs Log
Dosis), cuyos grficos son de tipo lineal para los 4 casos, seleccionando
al final el modelo cuya R2 sea ms cercana a 1, ajustndose mejor al
comportamiento farmacodinmico del frmaco y con base en la
ecuacin de recta obtenida en dicho modelo se calcula la DE 50.
No se debe olvidar que si los frmacos anlogos realmente actan a
nivel del receptor GABAA, la respuesta de tranquilidad en los ratones a
los que se les administr dichos frmacos debe ser muy similar al
efecto mostrado por los ratones administrados con clordiazepxido, sin
embargo, por la potencia desconocida de los frmacos que se estn
estudiando
la
respuesta
farmacolgica
puede
variar.
Las
benzodiacepinas, como el clordiazepxido, tienen propiedades no slo
ansiolticas, sino tambin hipnticas, anticonvulsionantes y relajantes
musculares,
variando
dichos
efectos
dependiendo
de
las
caractersticas de cada molcula y de la dosis empleada. As, en
general, en dosis bajas son ansiolticas, en dosis mayores son
hipnticas y miorrelajantes y, en dosis altas son anticonvulsionantes.
Adems, para establecer la selectividad y el mecanismo de accin, y
con ello el sitio de actividad de cada frmaco, sera necesario llevar a
cabo estudios a nivel molecular, que en este experimento no se
realizarn.
3) La siguiente es una serie de datos para una Curva Dosis Respuesta Gradual (CDRG)
en ratones para cada uno de los anlogos probados as como el frmaco prototipo o
de referencia (control):
Dosis
mg/kg
0.3
1
3
10
30
100

%E
(Anlogo
%E (Ctrl)
x)
3.22
13.04
10
33.33
25
60
52.63
83.33
76.92
93.75
91.74
98.04

%E
(Anlogo
y)
4.62
13.86
32.33
60.62
80.83
91.51

a. Determine la DE50 de cada compuesto, indique el modelo utilizado para

determinarla y el porqu de su eleccin.
1. CONTROL: Modelo sigmoideo del Efecto mximo (Emx), porque R = 1,
indicando que para este caso la ecuacin de Hill es el modelo que mejor se
ajusta al comportamiento farmacodinmico del frmaco:
Dosis
%E
Log Dosis
mg/kg (Control)
0.3
3.22
0.5228787
45
1
10
0

1/Dosis

1/%E

3.3333333
0.310559
33
01
1
0.1

Emax-E

96.78
90

E/(EmaE)

log (E/
(Emax-E))

0.033271
34
-1.47792975
0.111111 -0.95424251

25

0.4771212
55

10

52.63

30

76.92

1.4771212
55

100

91.74

0.3333333
33

0.04
0.019000
0.1
57
0.0333333 0.013000
33
52
0.010900
0.01
37

75
47.37
23.08
8.26

11
0.333333
33
-0.47712125
1.111040
74
0.04572999
3.332755
63
0.52280347
11.10653
75
1.04557869

PROTOTIPO
1.5
1
f(x) = 1x - 0.95
0.5
R = 1
0
Log (E/(Emax-E)) -1 -0.5 0 0.5 1 1.5 2 2.5
-0.5
-1
-1.5
-2
Log D

y = 1.0002x - 0.9545

E
log
=h logDhlog DE 50
E mxE
La pendiente es:
h = 1.0002
La ordenada al origen es:

hlog DE 50=0.9545

Se sustituye el valor de h y finalmente se despeja DE50:

0.9545= (1.0002) log DE 50

log DE 50=

0.9545
=0.9543
1.0002

0.9543

DE 50 =10

DE50 = 9.0013 mg/ Kg

2. ANLOGO X: Modelo sigmoideo del Efecto mximo (Emx), porque R =
1, indicando que para este caso la ecuacin de Hill es el modelo que mejor se
ajusta al comportamiento farmacodinmico del frmaco:
Dosis
%E
Log Dosis
mg/kg (Anlogo

1/Dosis

1/%E

Emax-E

E/(EmaE)

log (E/
(Emax-E))

X)
0.5228787
45
0
0.4771212
55

0.3

13.04

33.33

60

10

83.33

30

93.75

1.4771212
55

100

98.04

3.3333333
0.076687
33
12
1
0.030003
0.3333333 0.016666
33
67
0.012000
0.1
48
0.0333333 0.010666
33
67
0.010199
0.01
92

86.96
66.67
40
16.67
6.25
1.96

0.149954 -0.82404194
0.499925 -0.30109514
1.5
4.998800
24

0.17609126

15
50.02040
82

1.17609126

0.69886578

1.69914723

ANLOGO X
2
1.5
f(x) = 1x - 0.3
1=1
R
Log (E/(Emax-E))

0.5
0
-1 -0.5 0 0.5 1 1.5 2 2.5
-0.5
-1
Log D

y = 1.0001x - 0.3011

log

E
=h logDhlog DE 50
E mxE

La pendiente es:
h = 1.001
La ordenada al origen es:

hlog DE 50=0.3011
Se sustituye el valor de h y finalmente se despeja DE50:

0.3011= (1.0001) log DE 50

log DE 50=

0.3011
=0.301
1.0001

DE 50=100.301

DE50 = 2 mg/ Kg
3. ANLOGO Y: Modelo hiperblico del Efecto mximo (Emx), porque R =
1, indicando que para este caso la ecuacin generada con el ajuste de
Lineweaver Burke es el modelo que mejor se ajusta al comportamiento
farmacodinmico del frmaco:
%E
Dosis
(Anlogo Log Dosis
mg/kg
x)
0.5228787
0.3
4.62
45
1

13.86

32.33

0.4771212
55

10

60.62

30

80.83

1.4771212
55

100

91.51

1/Dosis

1/%E

Emax-E

E/(EmaE)

log (E/
(Emax-E))

3.3333333
0.216450
33
22

95.38

0.048437
83
-1.31481534

0.072150
07

86.14

0.160900
86
-0.79344164

0.3333333 0.030931
33
02

67.67

0.477759
72
-0.32079047

0.016496
21

39.38

1.539360
08

0.18734022

19.17

4.216484
09

0.62495047

8.49

10.77856
3

1.03256087

0.1

0.0333333 0.012371
33
64
0.01

0.010927
77

ANLOGO Y
0.25

f(x) = 0.06x + 0.01

R = 1

0.2

0.15

1/%Efecto
0.1

0.05

0.5

1.5
1/Dosis

y = 0.0618x + 0.0103

1 DE 50 1
1
=
+
E Emx C Emx

La pendiente es:

DE 50
=0.0618
Emx

La ordenada al origen es:

1
=0.0103
E mx

2.5

Se obtienen los valores de DE50 y Emx:

Emx =

1
=97.09
0.0103

DE50 = (0.0618) (97.09) = 6 mg/ Kg

b. En trminos de potencia, cul o cules frmacos son ms potentes que el

prototipo?
El Anlogo X es el ms potente. Si slo se observan los valores de %E
dados, se pensara que el Anlogo Y es ligeramente ms potente que el
Prototipo, sin embargo, al obtener el valor de DE 50 para ambos frmacos
se observa que sin duda el Anlogo Y es ms potente que el Control,
pues una dosis claramente menor de Y (con respecto al Control) es
suficiente para generar un efecto farmacolgico.
4)

En la siguiente tabla se encuentran datos fisicoqumicos de los anlogos estudiados

Estado
fsico

Punto
de
Solubilidad
(agua)
Densidad
pKa/pKb
Coeficiente

Prototipo

Anlogo X

Anlogo Y

Cristales, inodoros
e incoloros o
ligeramente
amarillos

Cristales de color
blanco a amarillo
con olor
caracterstico

Polvo blanco
amorfo inodoro

136C
15 g/L a 37C
1.39 g/cm3
3.49 pKb
0.19

145C
8.4 g/L
1.7 g/cm3
3.3 pKb
1.2

128C
5.5 mg/mL
1.5 g/cm3
3.7 pKb
1.15

Con estos datos indique:

a. Cul fue la va de administracin utilizada en el experimento de CDRG (pregunta
3), teniendo en cuenta que se administr cada dosis a una razn de 0.1 ml/10 g de
peso?
Como regla general se suele administrar los frmacos en solucin y/o
suspensin en ratones en dosis acordes a la razn mencionada (0.1 ml/10
g de peso). En este caso se supone una administracin por va
intraperitoneal, pues la cavidad del peritoneo cuenta con una superficie
de absorcin amplia y alta vascularizacin, lo que permite una rpida y
fcil absorcin del frmaco en solucin acuosa, adems que las
condiciones de pH y presencia de enzimas gastrointestinales se
intestinales no afectan a dosis de frmaco administrada y disponible
para llevar a cabo el efecto farmacolgico. Aunque la absorcin sera ms
rpida para el frmaco Prototipo, por su baja liposolubilidad dada por un
coeficiente de reparto menor.
b. Cules son las desventajas de esta va de administracin y en qu pueden afectar
los resultados de nuestro experimento?

Si se administr por la va intraperitoneal en el experimento, al ser los

anlogo X y Y ms liposolubles por su alto coeficiente de reparto con
respecto al Prototipo, los depsitos de frmaco en el tejido adiposo del
animal se veran favorecidos, disminuyendo la rapidez de absorcin del
frmaco. Por otra parte, antes de llegar a circulacin sistmica, el
frmaco accede a la circulacin venosa perifrica, prcticamente de
forma exclusiva a travs del sistema portal del hgado, donde puede
sufrir alteraciones importantes (efecto del primer paso) que afecten su
biodisponibilidad en cantidad antes de llegar a torrente sanguneo y por
supuesto a sus receptores donde genera efecto farmacolgico. As pues,
la captacin y biotransformacin en el hgado por enzimas hepticas
durante el primer recorrido del frmaco en la circulacin puede evitar que
una fraccin importante de la dosis administrada llegue al lugar de accin
y la biodisponibilidad del frmaco sea mnima, tal que pueda ser
insuficiente para causar efecto, lo que limitara los resultados obtenidos
en el experimento, al ser probablemente inobservables las respuestas
farmacolgicas en los individuos.
Adems, esta va, pese a ofrecer una gran capacidad de absorcin, su uso
presenta peligros de infeccin, adherencias y perforacin de rganos.
c. Tomando en cuenta la DE50 determinada en nuestro experimento de CDRG, qu
va de administracin se puede utilizar en experimentos futuros? indicar ventajas y
desventajas que puede tener esta administracin en nuestro experimento.
Va intramuscular.
Ventajas:
Los msculos presentan mayor irrigacin sangunea y menos fibras
nerviosas.
til cuando los frmacos se absorben mal por va oral, son
degradados o tienen metabolismo de primer paso heptico
importante. Por los valores de pKb dados se sabe que el carcter de los
frmacos Prototipo, X y Y es bsico, por lo que su principal absorcin se da a
nivel intestinal, ms que en estmago, cuando se administra por va oral.
Sin embargo, el frmaco se encuentra antes en estmago que en intestino,
donde el pH cido y las enzimas gstricas, la presencia o no de alimento
(vaciamiento gstrico) pueden condicionar su llegada a intestino delgado y
por ende su absorcin, tanto en velocidad como en cantidad de frmaco
absorbido, debido a su degradacin por los factores mencionados (pH cido
y enzimas gstricas). Sin olvidar que a pesar de que una alta fraccin de
dosis administrada llegue inalterada al intestino y su absorcin mayoritaria
sea favorecida, antes de alcanzar la circulacin sangunea, el frmaco
inalterado sufre efecto del primer paso heptico, lo cual puede limitar tanto
su biodisponibilidad que su efecto puede no llegarse a presentar. Siendo as,
la administracin por va oral puede generar mayores inconvenientes en los
resultados obtenidos que la va intraperitoneal.
Las condiciones de pH y presencia de enzimas gastrointestinales se
intestinales no afectan a dosis de frmaco administrada.
Permite la administracin de volmenes mayores de frmaco que la
va subcutnea.

 Absorcin ms rpida y regular que con la va subcutnea y,

adems, produce menos dolor.
Absorcin rpida con soluciones acuosas.
Las sustancias liposolubles (como los anlogos X y Y por su mayor
coeficiente de reparto con respecto al Prototipo) pueden difundir
directamente a travs de las membranas de las clulas endoteliales
capilares, con una velocidad de paso mayor a sustancias
hidrosolubles.
Un elevado grado de liposolubilidad no es necesario para una
rpida absorcin, puesto que es necesario cierto grado de
solubilidad en agua, ya que las sustancias que se absorben son las
solubles en el lquido acuoso intersticial, lo que favorece la
administracin del frmaco Prototipo que tiene un bajo coeficiente
de reparto y es poco liposoluble.
Se consigue un efecto ms rpido, ya que la rica vascularizacin
muscular permite una rpida absorcin.
La absorcin del frmaco es casi completa. Asegura el
cumplimiento de un tratamiento teraputico o como opcin a otras
vas de administracin.
Existen formulaciones farmacuticas que tienen un pH muy distinto
del que tiene el sitio de inyeccin muscular (aproximadamente 7,0).
Ejemplo: la fenitona inyectable est formulada a pH= 12.
Desventajas:
Produccin de abscesos locales, hematomas, endurecimientos,
infecciones, shock anafilctico.
Se pueden lesionar vasos, nervios e incluso el hueso. La inyeccin
en el nervio citico por error puede producir parlisis y atrofia de
los msculos en el miembro inferior.
Dosis repetidas son inconvenientes para los individuos.
Menos del 30% del frmaco pasa por hgado, evitando el efecto del
primer paso que disminuya la biodisponibilidad en magnitud del
frmaco.
d. Cules seran las concentraciones de las soluciones que se utilizaran cuando se
administre la DE50? (tomar solo en cuenta la concentracin para administrar la
DE50), incluir clculos de su respuesta. Puede utilizar como referencia un peso
promedio de 25g para los ratones:
1. Para el Prototipo:

25 g de peso

25 g de peso

mg frmaco
=0 .225 mg frmaco
( 9.0013
1000 g de peso )

=0.25 mL solucin
( 0.110mLg desolucin
peso )

La concentracin de la solucin debe ser:

0.2255 mg frmaco
=0.90013 mg /mL
0.25 mL solucin

2. Para el Anlogo X:

25 g de peso

25 g de peso

2 mg frmaco
=0 .05 mg frmaco
( 1000
g de peso )

=0.25 mL solucin
( 0.110mLg desolucin
peso )

La concentracin de la solucin debe ser:

0.05 mg frmaco
=0.2 mg/ mL
0.25 mL solucin
3. Para el Anlogo Y:

25 g de peso

6 mg frmaco
=0 .15 mg frmaco
( 1000
g de peso )

( 0.110mLg desolucin
peso )

25concentracin
g de peso
=0.25 mLdebe
solucin
La
de la solucin
ser:
0.15 mg frmaco
=0.6 mg/ mL
0.25 mL solucin
5) De acuerdo a su respuesta del inciso c de la pregunta 4 (va de administracin
elegida), indique en forma de diagrama lo siguiente:

 La mayor parte de los

metabolitos se eliminan
por orina (va renal), y una
escasa parte lo hace a
travs de la bilis y,
finalmente por las heces.

b) Factores
que influyen
en la
absorcin
de los
principios
activos:

El frmaco se introduce en el
msculo esqueltico.
La solucin acuosa del
frmaco se disemina
rpidamente en el perimisio,
mientras que los aceites
forman primero un glbulo
que se extiende lentamente a)
a lo largo de las hojas deLiberacin
tejido conectivo situadasdel frmaco
entre las fibras musculares.tras su
administraci
ADMINISTRACIN
DEva
n por
CLORDIAZEPXIDO
intramuscul
ar:POR VA

La absorcin se realiza a travs de los

capilares sanguneos por transporte
pasivo (difusin y filtracin).
En general, para la mayora de los
medicamentos, tanto liposolubles como
insolubles en lpidos, el paso a travs
de la pared capilar no constituye el
factor limitante para la absorcin.
Slo las molculas de elevado tamao
insolubles en lpidos se absorben por
canales linfticos.
Las sustancias que se absorben son las
solubles
en
el
lquido
acuoso
intersticial.
A mayor superficie de absorcin, mayor
velocidad de la misma.
A mayor velocidad de flujo sanguneo y
mayor
vascularizacin,
mayor
velocidad de absorcin: la presin
arterial muy baja se acompaa de
escaso flujo muscular y cierre capilar,
lo que imposibilita la absorcin.
En situaciones de insuficiencia cardiaca
o shock puede alterarse la absorcin.

c) Sitio de
accin del
frmaco:

d) Va de
eliminacin:

Sitio benzodiacepinrgico del

receptor GABAA

6) La siguiente, es una tabla de las cadas totales de los ratones en un experimento de

Cuerda Tirante, uno de los experimentos que se usan para hacer un perfil
neurofarmacolgico. En ella se comparan el grupo control (A), control positivo (B) y 1
de las nuevas molculas (C) a los 30 minutos de haberse administrado el frmaco. El
nmero de cadas se registr a lo largo de 5 minutos de experimentacin y utilizando
la DE50 determinada anteriormente.
Ratn/Tratamie
1
2

A=Solucin
2
3

B=_______________
4
4

C=______________
6
6

3
1
5
5
4
4
6
4
5
3
3
4
6
1
4
6
a. Qu prueba estadstica usara para valorar estos resultados?, explique por qu.
Se usara la prueba ANOVA porque se cuenta con ms de dos muestras
con datos no pareados, con una escala numrica. Dicha prueba permite la
comparacin de las medias de las muestras. Si hay diferencia significativa
(cuando P<0.05), entonces se puede realizar una prueba post hoc, tal
como Dunnet (recomendable), Holm-Sidak Bonferroni para la
comparacin contra un grupo control: pruebas post hoc como Tukey
(recomendable), Duncan Fisher LSD para la comparacin de todos
contra todos en pares.
b. Realice la prueba estadstica sugerida e indique si hay diferencias entre los grupos
tratados.
Con el programa estadstico SigmaPlot 12.0 se obtuvo:
H0: A=B =C
H1: ABC
One Way Analysis of Variance
Data source: Data 1 in Notebook1

Normality Test (Shapiro-Wilk)

Passed

Equal Variance Test:

(P = 0.674)

Group Name
Col 1 7
1
Col 2 7
1
Col 3 7
1

Passed

N
Missing
2.333 1.211
4.333 1.033
5.167 0.983

Mean
0.494
0.422
0.401

(P = 0.063)

Std Dev

SEM

Source of Variation DF
SS
MS
F
P
Between Groups
2
25.444 12.722 10.905 0.001
Residual
15 17.500 1.167
Total
17 42.944
The differences in the mean values among the treatment groups are greater than
would be expected by chance; there is a statistically significant difference ( P =
0.001).
Power of performed test with alpha = 0.050: 0.964
Hay diferencia significativa entre las medias de las muestras (P =
0.001<0.05), por lo que hay la suficiente evidencia para rechazar H0. As
pues, se procedi a realizar una prueba post hoc: Dunnet, para la
comparacin contra el grupo control (AvsB y AvsC). Para esto se
generaron los siguientes resultados:
Multiple Comparisons versus Control Group (Dunnett's Method):

Comparisons for factor:

ComparisonDiff of Means
Col 1 vs. Col 3
2.833
Yes
Col 1 vs. Col 2 2.000

q'
4.543

P P<0.050
<0.001

3.207 0.011

Yes

Finalmente, se realiz la prueba Tukey para Y para la comparacin de

todos contra todos los datos de las muestras (A, B y C). Se obtuvo:
All Pairwise Multiple Comparison Procedures (Tukey Test):
Comparisons for factor:
ComparisonDiff of Means

Col 3 vs. Col 1 2.833

Col 3 vs. Col 2 0.833
Col 2 vs. Col 1 2.000

3
3
3

6.425
1.890
4.536

0.001
0.398
0.015

P<0.050
Yes
No
Yes

Hay una diferencia significativa entre la muestra A (control) y B.

Hay una diferencia significativa entre la muestra A (control) y C.
No hay una diferencia significativa entre la muestra B (control) y C.
c. De acuerdo a la informacin generada hasta el momento quin sera B y quin
sera C?, es decir, quin sera su control positivo y cul sera una de las molculas
que escogi para los experimentos despus de determinar la actividad biolgica.
Justificar la respuesta.
Tras el tratamiento estadstico realizado no se encontr diferencia
significativa entre el comportamiento de B y C, por lo que se concluye son
tan parecidos que podran ser frmacos con actividades farmacolgicas
muy similares, o incluso, podra tratarse de la misma molcula. Asimismo,
con los resultados registrados tras la experimentacin, se observa que el
nmero de cadas por efecto de cada frmaco son relativamente
parecidas, por lo que no podramos descarta la idea de que ambos
frmacos podran ser molculas muy semejantes.
7) En el siguiente grfico y de acuerdo a la va de administracin revisada y propuesta
en el punto 4, cul sera el perfil farmacocintico esperado para el experimento de
CDRG y cual para los experimentos con la DE50?, explicar su conclusin.

A
B
C
Tras una administracin por va intraperitoneal en el experimento de
CDRG se esperara una curva como la representacin A.
Tras una administracin por va intramuscular para los experimentos de
con la DE50 se esperara una curva como la representacin A.

En ambos casos, el perfil de niveles plasmticos se explica como la

resultante de un proceso de incorporacin de frmaco, debida a la
absorcin, y de un proceso de eliminacin. Asimismo, en la curva A se
observa claramente la evolucin de las concentraciones plasmticas del
frmaco en funcin del tiempo tras la administracin por ambas vas
extravasculares.
8) La siguiente tabla, presenta un comparativo de la farmacocintica del frmaco
prototipo y de uno de los anlogos escogidos en el punto 1.
T (h)
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
4.5
5
6
9
12

A
2310.4
3495.2
5058.3
5952.67
6430.26
6211.53
5296.71
5161.66
4482.07
3494.86
3240.94
2853.82
2716.12
2654.91

B
2386.77
3060.99
4040.77
5127.71
5718.71
5831.41
5496.41
5157.12
4651.05
3836.73
3395.41
3081.03
2860.36
2848.66

a. De acuerdo a los perfiles obtenidos, qu grupo de datos pertenece al frmaco

prototipo y cual al anlogo?, explique su respuesta en base al perfil y al anlogo
escogido.
Para visualizar mejor el perfil farmacocintico de ambos frmacos y
compararlos, se graficaron los datos experimentales dados, obtenindose
lo siguiente:
Perfil farmacocintico de A y B
8000
6000
A

Concentracin (mcg/mL) 4000

2000
0

10 15

Tiempo (hr)

En el punto 1 se eligi experimentar con los anlogos 2 y 5, de los que

posteriormente se obtuvo su valor de DE 50 para comparar su potencia
relativa con un frmaco prototipo (pregunta 3), resultando X el frmaco
claramente ms potente con respecto a Y y al Prototipo, siendo stos
ltimos dos, frmacos con %Efecto y potencias ms parecidas (aunque Y
ciertamente es ms potente que el frmaco Prototipo). Sabiendo esto, en

esta ocasin se deduce que A es el anlogo Y, mientras que B

corresponde al prototipo, porque de acuerdo al grfico obtenido, se
observa que la rapidez de absorcin del frmaco A es mayor que B, pues
es claro el hecho de que A alcanza una concentracin plasmtica mxima
mayor y en un tiempo ms corto que B, que adems de coincidir con las
potencias relativas estimadas ya descritas, es coherente con las
propiedades fsicas dadas para el frmaco Prototipo y para Y, donde ste
ltimo al presentar un estado amorfo y anhidro, adems tener un
coeficiente de reparto mayor (mayor liposolubilidad) que el Prototipo,
favorece su solubilidad y por ende la velocidad de su absorcin, tal como
muestra el grfico.
b. Determine los siguientes parmetros para cada frmaco: Cp 0, Cmax, tmax, t1/2, Ka, Ke,
ABC, Vd y Cl. Tomar en cuenta que la dosis administrada es la DE 50 calculada y
depende de la eleccin del prototipo y del anlogo.

Frmaco A:
Cp0= 6140.7367 g/mL
Cmax= 6430.26 g/mL
tmax= 2 h
t1/2= 8.078638468 h
Ka= 1.8919 h-1
Ke= 0.0858 h-1
ABC= 74581.30699 g/mL
Vd= 0.0241 mL
Cl= 0.0021 mL/hr

Frmaco B:

Cp0= 5748.5332 g/mL

Cmax= 5831.41 g/mL
tmax= 2.5 h
t1/2= 9.817948733 h
Ka= 2.7403 h-1
Ke= 0.0706 h-1
ABC= 83969.1218 g/mL
Vd= 0.0380 mL
Cl= 0.0027 mL/hr
Ejemplo de clculo para el frmaco A
1. Se grafic LnC vs Tiempo con datos correspondientes a la Eliminacin:

(h)

(mcg/mL)

2.5

6211.53

5296.71

3.5

5161.66

4482.07

4.5

3494.86

3240.94

2853.82

y=0.0858 x+ 8.7227

2716.12

LnC =0.0858 t +8.7227

12

2654.91

A: ELIMINACIN
9
8.5
LnC

f(x) = - 0.09x + 8.72

R = 0.69

8
7.5
7

10 12 14

Tiempo (hr)

2. Con la ecuacin de recta obtenida:

Donde:

m=Ke=0.0858 hr

b=LnC p

t1 =
2

1
8.7227

C p =e

=6140.73671 g/mL

ln2
ln 2
=
=8.07 h
K 0.0858

3. Por el mtodo de los residuales se calcul Ka:

Extrapolacin:
Tiempo (hr)

Extrapolacin (g/mL)

Cp^ -Cpexp

Ln (Cp^ -Cpexp)

6140.73671

3830.33671

8.25070799

0.5

5882.8699

2387.6699

7.77807323

5635.83164

577.531638

6.35876323

1.5

5399.16721

-553.502792

--

5172.44098

-1257.81902

--

8.5
8

f(x) = - 1.89x + 8.41

R = 0.92

7.5
Ln(Cp^-Cpexp)

7
6.5
6

0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2

Tiempo (hr)

Para la obtencin de los valores extrapolados:

Ya se obtuvo:

LnC=0.0858 t +8.7227

Cp=6140.73671 g /mL

Con la ecuacin de recta obtenida en la grfica de extrapolacin:

y=1.8919 x+8.4085
Donde:

m=Ka=1.8919 h1

C pltima
C p 0 +C p1
C p1 +C p2
ABC =
t 10 ) +
t 2t 1 ) ++
=74581.30699 g /mL
(
(
2
2
K

Cl=

FD 1 6180 0.025
=
=0.0021 mL /min
ABC
74581.30699

Vd=

Cl 0.0021
=
=0.0241 mL
K 0.0858

9) Con base en los resultados anteriores y en la informacin investigada, cul de los

anlogos es el que posiblemente se utiliz en todos los experimentos descritos?, con

los resultados obtenidos, sera un candidato adecuado para llegar a pruebas

clnicas?
De acuerdo a lo que ya se ha analizado a lo largo de los estudios hechos, se
puede afirmar que el frmaco anlogo utilizado en cada experimento fue Y,
pues al presentar una potencia intermedia conocida (DE50 de 6 mg/Kg)
relativa a los frmacos Prototipo y X, facilita su manejabilidad en estudios
experimentales porque permite la administracin de diversas dosis de
frmaco, que
hagan posible observar cierta respuesta que se est
estudiando. Asimismo, su velocidad de absorcin mayor con respecto al
Prototipo favorece su manejo experimental, pues permitir observar
respuestas en un periodo de tiempo ms corto desde su administracin.
El anlogo Y s puede ser candidato adecuado para pruebas clnicas
posteriores, pues conociendo su DE50 calculada (pregunta 3), tras el
tratamiento estadstico realizado (pregunta 6) y el clculo de sus
parmetros farmacocinticos (pregunta 8), es claro que la accin
farmacolgica de este anlogo, as como su perfil farmacocintico con
respecto al prototipo son muy semejantes, concluyendo que podran
pertenecer a una misma familia de frmacos, tal como las benzodiacepinas,
por el clordiazepxido elegido como frmaco prototipo para la comparacin
de DE50 (pregunta 2).
10) Lea con atencin los siguientes enunciados, colocar en el parntesis F si es falso y
V si es verdadero
( V ) Una va parenteral es aquella que no hace uso del sistema digestivo
( F ) El tiempo de vida media es la fecha de caducidad de caducidad del frmaco
( F ) La Cp0 es la concentracin que se tiene en plasma una vez absorbido el frmaco
( F ) El mtodo de Hill utiliza una grfica de 1/E vs. 1/dosis.
( V ) Una va de administracin que no presenta absorcin es la intravenosa
Defina los siguientes conceptos:
a. Tiempo de vida media: Tiempo que tarda una determinada concentracin
plasmtica de frmaco en reducirse a la mitad; se expresa en unidades
de tiempo.
b. Nmero de Hill: Se denota como nH o h y es una medida de cooperatividad.
Indica cuntas de las zonas de unin frmaco-receptor afectan la afinidad
de la unin del frmaco en el resto de las zonas de unin. Si no es
significativamente diferente o es igual a 1 indica que no hay
cooperatividad. Si h>1 no puede considerarse que el ligando se fija a una
sola clase de receptores que no interaccionan entre s, ya que la
ocupacin de un sitio de unin por la molcula de ligando est
aumentando la probabilidad de que otros sitios resulten ocupados por
otras molculas (cooperatividad positiva). Cuando h<1 puede tratarse de
cooperatividad negativa o de la existencia de mltiples clases de sitios
de unin.

c. Farmacocintica: La disciplina que estudia la evolucin del frmaco y los

fenmenos que sufre en su trnsito por el organismo con el paso del
tiempo, desde que se administra la forma de dosificacin hasta que se
elimina por completo del organismo (comprende los procesos de
liberacin, absorcin, distribucin, metabolismo y excrecin).
Sus
conclusiones permiten establecer los regmenes posolgicos ms
adecuados para un tratamiento teraputico, porque analiza lo que le
ocurre al frmaco una vez administrado.
d. Farmacometra: Rama de la farmacologa que estudia la cuantificacin de
los efectos d los frmacos, desde el punto de vista experimental y clnico,
en funcin de las dosis administradas.