UNIVERSIDAD NACIONAL TECNOLGICA DE LIMA SUR

ii

Carrera Profesional de Ingeniera Ambiental

INFORME DE LABORATIO N 5
ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA CATALAZA

DOCENTE:

Blga. Carmen Rosa Terry Borjas

INTEGRANTES:

Ayma Choque, Elizabeth

Gutierrez Grados, Kelvin
Hoyos Trujillo, Michelle
Olave Choquecahuana, Joel
Salazar navarro, Karol

INTRODUCCIN

INFORME DE LABORATORIO ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA

CATALAZA

Las reacciones qumicas que se dan en los seres vivos no podran tener lugar sin la
presencia de los enzimas. Estas macromolculas, que generalmente son protenas,
catalizan las reacciones bioqumicas, permitiendo que los sustratos se conviertan en
los productos que necesita la clula. Como todo catalizador, los enzimas no se
consumen en las reacciones que catalizan, pero a diferencia de otros catalizadores de
naturaleza inorgnica, las reacciones que catalizan son muy especficas: slo
interaccionan con determinados sustratos, y slo facilitan el curso de determinadas
reacciones. Un enzima que podemos encontrar en todos los seres vivos es la catalasa,
necesaria para descomponer el perxido de hidrgeno, un compuesto txico, que se
produce durante el metabolismo celular.
La catalasa es una enzima presente en los peroxisomas de las clulas de todos los
tejidos animales y vegetales. Acta sobre el perxido de hidrgeno (agua oxigenada)
descomponindolo en agua y oxgeno, y liberando energa en forma de calor. El agua
oxigenada es un producto resultante de las reacciones metablicas y si no se destruye
puede ser txica para la clula. Si se pone un tejido en contacto con el agua
oxigenada se observa la aparicin de efervescencia (produccin de oxgeno).

OBJETIVOS

Identificar la presencia de la enzima catalasaen los tejidos animales (hgado de

pollo) y vegetales (papa).
Comprobar la accin del pH sobre la actividad de la enzima.
Identificar la accin de la temperatura sobre la actividad de la enzima.

MARCO TERICO
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CATALAZA

1. ENZIMA:
Una enzima es una protena que cataliza las reacciones bioqumicas del metabolismo.
Las enzimas actan sobre las molculas conocidas como sustratos y permiten el
desarrollo de los diversos procesos celulares.
Es importante determinar adems de todo lo expuesto que las enzimas se caracterizan
por contar con una serie de seas de identidad propias que las determinan en todos y
cada uno de sus aspectos. En este sentido podemos exponer, por ejemplo, que
poseen la capacidad para contar con unos tamaos muy diferentes de tal modo que
hay desde las que tienen 2.500 aminocidos hasta las que, sin embargo, rondan los
50.
Y adems poseen elementos fundamentales para su funcionamiento tales como el
centro activo o la cadena de aminocidos, entre otros muchos ms.

Las enzimas tienen caractersticas muy singulares e importantes, ya que gracias a

estas caractersticas pueden realizar las actividades correspondientes de manera

segura y efectiva. A continuacin mencionaremos algunas de estas caractersticas:

Las enzimas son catalizadores orgnicos, que no son afectados por la reaccin
que catalizan, adems de ser muy potentes y eficaces. La actividad cataltica de
una enzima facilita su identificacin.
Las enzimas catalizan la formacin o rotura de enlaces covalentes
Su elevada especificidad es su mayor caracterstica.
Actan en baja concentracin; No se necesita gran cantidad de ellas para realizar
la accin de manera eficiente, ya que son activas a concentraciones pequeas.
No sufren modificaciones durante la reaccin; su composicin y forma no son
transformadas en ninguna parte de la reaccin, se recuperan intactas.

No afectan el equilibrio de la reaccin, pero si su velocidad, debido a que su

trabajo es catalizar la reaccin.
Son sumamente especficas; tienen un trabajo especfico y solo son usadas para
ello, su actividad est regulada y actan en el mismo lugar donde se segregan.

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CATALAZA

Estructura Enzimtica:
Por su estructura y composicin qumica puede afirmarse que el origen de las enzimas
est vinculando al origen de las sustancias proteicas. Al hablar del origen de la vida se
ha citado el xito de los experimentos realizados en el laboratorio para la produccin
de aminocidos; estos aminocidos son los que precisamente constituyen la base del
edificio proteico. Tambin en el laboratorio se ha intentado la sntesis de protenas a
partir de aminocidos.
La sede de las enzimas es el citoplasma. Los cloroplastos vegetales contienen una
amplia gama enzimas encargadas de la funcin cloroflica, proceso que a travs de
reacciones qumicas complejas y encadenadas transforman compuestos inorgnicos,
como el agua, y el anhdrido carbnico, en sustancias complejas adecuadas para ser
entre otras cosas el alimento fundamental de los animales.

FACTORES QUE
LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
Diferentes factores ambientales pueden
.Destacaremos dos: el pH y la temperatura.

AFECTAN

afectar

la

actividad

enzimtica

EFECTO DEL pH:

El pH es otro factor que influye en la actividad enzimtica, debido a que el pH influye
en la ionizacin de los grupos funcionales de los aminocidos que forman la protena
enzimtica. Cada enzima realiza su accin dentro de un determinado intervalo de pH,
dentro de este intervalo habr un pH ptimo donde la actividad enzimtica ser
mxima. Por debajo del pH mnimo o por encima del pH mximo el enzima se inactiva
ya que se desnaturaliza.

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CATALAZA

En la mayora de las enzimas el pH ptimo est prximo a la neutralidad, aunque hay

excepciones .La mayora de los enzimas presentan un pH ptimo para el cual su
actividad es mxima; por encima o por debajo de ese pH la actividad disminuye
bruscamente.
EFECTO DE LA TEMPERATURA:
Al igual que ocurre con la mayora de las reacciones qumicas, la velocidad de las
reacciones catalizadas por enzimas se incrementa con la temperatura. La variacin de
la actividad enzimtica con la temperatura es diferente de unos enzimas a otros en
funcin de la barrera de energa de activacin de la reaccin catalizada. Sin embargo,
a diferencia de lo que ocurre en otras reacciones qumicas, en las reacciones
catalizadas por enzimas se produce un brusco descenso de la actividad cuando se
alcanza una temperatura crtica.
Este efecto no es ms que un reflejo de la desnaturalizacin trmica del enzima
cuando se alcanza dicha temperatura .La Temperatura influye en la actividad
enzimtica. En general por cada 10C que aumente la temperatura la velocidad de la
reaccin aumenta de 2 a 4 veces. Estareg la se cumple hasta que la temperatura
alcanza un valor mximo (T ptima)donde la actividad es mxima. Esto se debe a que
al aumentar la T aumenta el movimiento de las molculas y, por tanto aumenta la
probabilidad de encuentro entre el S y el E.

2. ENZIMA CATALASA:
La catalasa en una enzima que la podemos encontrar en muchos organismos vivos, y
cataliza la reaccin de descomposicin del perxido de hidrgeno en agua y oxgeno.
El perxido de hidrgeno es uno de los productos del metabolismo celular en diversos
organismos, pero dada su potencial toxicidad, es transformado enseguida por la
enzima catalasa.
En la industria, se tambin se utiliza la enzima catalasa, para diferentes fines. Por
ejemplo, se usa en la industria textil, para eliminar residuos de perxido de hidrgeno.

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CATALAZA

CARACTERISTICAS DE LA ENZIMA CATALASA:

FUNCIN:
La funcin principal de la catalasa es oxidar y descomponer el perxido de
hidrgeno que se crea dentro de las clulas. El perxido de hidrgeno daa las
protenas dentro de las clulas. El compuesto se forma cuando el oxgeno
reacciona con otras molculas, y crea sper radicales. Otra enzima, la superxido
dismutasa, convierte estos radicales en perxido de hidrgeno. La catalasa
tambin juega un papel en la oxidacin del formaldehdo, alcoholes, fenoles y
cido frmico dentro de la clula.
PROCESOS:
La enzima catalasa descompone a la molcula de perxido de hidrgeno en un
proceso de dos pasos. La primera etapa implica que la enzima choque con la
molcula de perxido de hidrgeno. Un tomo de oxgeno del perxido de
hidrgeno se une a un tomo de hierro en la catalasa. Un segundo perxido de
hidrgeno es entonces capaz de unirse a la enzima catalasa, que luego rompe la
molcula y la convierte en agua y gas oxgeno.
ESTABLE Y RPIDA:
La molcula de catalasa es muy estable. Esta estabilidad es necesaria ya que la
enzima tiene que trabajar para romper reactivos qumicos dentro de la clula de
forma rpida y eficiente. Si fuera inestable, estas molculas reactivas seran
capaces de descomponerla y causar dao a la clula. La enzima se compone de
cuatro subunidades idnticas a las que se pueden unir otras molculas. En la
clula, cada molcula de catalasa puede romper millones de molculas de
perxido de hidrgeno en menos de un segundo.
FORMA:
La forma de la enzima catalasa es ligeramente diferente para cada tipo de clula.
En los seres humanos, la catalasa utiliza iones de hierro para sujetar al perxido
de hidrgeno. Muchas bacterias pueden utilizar enzimas catalasa ms grande para
atacar al perxido de hidrgeno. Otras formas de bacterias utilizan iones de
manganeso en lugar de los iones de hierro dentro de la clula.
USOS:
La catalasa se ha estudiado ampliamente, ya que est presente en todos los
organismos vivos. Esto ha llevado a que la enzima se utilice para muchos
propsitos, como para eliminar el perxido de hidrgeno a partir de la leche antes
de que se procese en queso. Tambin se puede encontrar en desinfectantes de
lentes de contacto y est tambin en envolturas de alimentos para evitar la
oxidacin y mantener los alimentos frescos durante perodos ms largos de
tiempo.

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CATALAZA

MATERIALES Y PROCEDIMIENTO
A. Materiales:
1. Muestras
Papa
Hgado de pollo

2. Instrumentos

Bistur o cuchillo
Pinzas
Tubos de ensayo
Gradillas para tubos
Mechero
Mortero

3. Reactivos

HCl 0.1M o HNO3

NaOH 0.1M
Hielo
Perxido de hidrogeno H2O2

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B. Procedimiento
1. Triturar la papa y el hgado y color en 5
tubos cada uno de igual tamao (1gr.
Aprox.). Rotular los tubos con los nmeros
1, 3, 5, 7, 9 y aadir la papa, y a los tubos 2,
4, 6, 8 y 10 aadir el hgado.

2. Al tubo 1 y 2 agregar 2ml de H2O2 a

cada uno de ellos.

3. En los tubos 3 y 4 aadir 2ml

de agua para hervir la muestra.
Hervir durante unos 5 minutos,
luego retirar el agua sobrante y
agregar 2ml de H2O2.

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CATALAZA

4. A los tubos 5 y 6
agregar
2ml
de
la
disolucin de HNO3 0.1M,
esperar 5 minutos, luego
agregar 2ml de H2O2.

5. A los tubos 7 y 8 agregar

2ml de la disolucin de
NaOH 0.1M, esperar 5
minutos y agregar 2ml de
H2O2.

6. A los tubos 9 y 10 hay que en un entorno helado durante 30 minutos, luego agregar
inmediatamente 2ml de H2O2.

RESULTADOS
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CATALAZA

2
3

TUBO DE TRATAMIENTO

RESULTADO
OBSERVADO

PATATA + 2 ml H2O2

Hay poco
burbujeo

HIGADO + 2 ml H2O2

Hay mucho
burbujeo

PATATA + T+ 2 ml H2O2

Hay poco burbujeo

Hay cambio de
color en la patata

HIGADO + T

+2 ml H2O2

PATATA + 2mlHNO3 +2 ml
H2O2

HIGADO +2 ml HNO3 +2 ml
H2O2

PATATA +2 ml NaOH +2ml

H2O2

HIGADO +2ml NaOH +2 ml

H2O2

PATATA +T + 2 ml H2O2

1
0

HIGADO + T + 2 ml H2O2

Hay poco burbujeo

Hay cambio de
color en la hgado

Hay un mnimo de
burbujeo

Hay un mnimo de
burbujeo

Menos burbujeo
que a temperatura
ambiente

EXPLICACIN
La catalasa es una enzima
antioxidante,
cataliza
la
dismutacin del perxido de
hidrogeno (H2O2) en agua y
oxigeno
La decadencia de la actividad
enzimtica
a
temperaturas
mayores 25C, se produce por
efecto trmico de la temperatura
sobre la estructura protenica
terciaria.
Los
hidrxidos
poseen
propiedades bsicas, 7<pH
mientras que en los cidos el
pH<7.
Los
aminocidos
ionizables que conforman el
sitio activo de la catalasa sufren
modificaciones inicas ejercidas
por el pH, lo que disminuye la
afinidad de la enzima hacia su
sustrato (H2O2).
La enzima sufre el proceso de
desnaturalizacin irreversible.
Las
bajas
temperaturas
disminuyen
la
actividad
enzimtica de la catalasa

CONCLUSIN
A travs de la experimentacin pudimos observar las reacciones de la enzima
Catalasa a diferentes temperaturas y pH, y al comparar con la teora vemos que
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CATALAZA

reacciona de manera diferente y se pudo determinar que el pH ptimo para que

reacciones es de alrededor de un pH 3 - 9 y por encima de un pH 7.0 y se activa a
una temperatura de 0 C - 65 C, porque el perxido de hidrgeno inactiva la
Catalasa.

CUESTIONARIO
1. De acuerdo a sus resultados obtenidos Cul es la temperatura y pH ptimo
de la catalasa? Explique.
La catalasa se activa a una temperatura de 0 - 65 C, porque el perxido de
hidrgeno inactiva la Catalasa, como sta a su vez cataliza rompiendo la molcula
(H2O2), es difcil establecer la relacin actividad/temperatura, sin embargo la
actividad inicial es ms rpida a temperaturas altas, la capacidad total es ms grande
al reducir temperaturas.
pH
La Catalasa tiene una ptima actividad de alrededor de un pH 3 - 9 y por encima
de un pH 7.0 la actividad decrece, sin embargo un pH 10, ms del 50 % de
actividad sobra.
ALMACENAMIENTO
Su actividad mxima es mantenida en un ambiente entre 2 - 4 C, bajo estas
condiciones la enzima se encontrar estable por un ao.
2. Explique el fundamento de cada una de las pruebas desarrolladas.
INCIDENCIA DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
La mayora de las enzimas poseen un pH caracterstico al cual su actividad es
mxima; por encima o por debajo de ese pH, la actividad disminuye. El Km no es un
valor fijo, sino que puede variar en dependencia del pH del medio. Por ello se midi la
actividad de la catalasa sometida a diferentes pH para registrar el comportamiento del
Km (concentracin de H2O2, que ha consumido la catalasa para alcanzar la mitad de
su velocidad mxima) en funcin del pH.

La actividad enzimtica a valores de pH extremos disminuye totalmente, la enzima

sufre el proceso de desnaturalizacin irreversible.
Los aminocidos en los seres vivos adoptan carga elctrica, esto depende del pH del
medio en el cual se encuentran. Cuando estn ionizados se les llama Zwitteriones.

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CATALAZA

Los residuos de los aminocidos ionizables que conforman el sitio activo de la

catalasa (Histidina y cistena, son fundamentales en el proceso catlisis), sufren
modificaciones inicas ejercidas por el pH, lo que disminuye la afinidad de la enzima
hacia su sustrato (H2O2).
Otro efecto posible es que el pH indujo cambios en la conformacin terciaria de la
protena que dificulto la formacin del complejo E-S o retardo la descomposicin de
este producto nativo, en agua ms oxgeno.

ACTIVIDAD

ENZIMATICA EN DEPENDENCIA DE LA TEMPERATURA

Al igual que el pH, el efecto de la temperatura sobre la velocidad de las reacciones
enzimticas es tambin complejo. En el estudio se midi la actividad de la catalasa a
dos temperaturas diferentes, si se compara la actividad a temperaturas menores a
25C, se registra un incremento en la actividad en un 20% a los 25C. En este punto
es probable que el incremento de la temperatura incida en el aumento de las
probabilidades de encuentro o de choque entre las molculas de reactivos (enzima
y sustrato), lo que aumenta la velocidad de reaccin. Por otro lado, si se compara la
actividad cataltica a temperaturas mayores a 25 C, se registra un 10% en la
disminucin en la reaccin enzimtica, porque el incremento de la temperatura supone
un aumento en la velocidad de desnaturalizacin, induciendo desplegamientos o
afloramientos de aminocidos con residuos hidrofbicos sobre la superficie dela
catalasa, que es una protena globular.
Es probable que la decadencia de la actividad enzimtica a temperaturas mayores
25C, sea producto del efecto trmico de la temperatura sobre la estructura protenica
terciaria.
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CATALAZA

La actividad cataltica de la enzima tiene un perfil sigmoideo sencillo en forma de

campana.

3. Qu sucede cuando se pone perxido de hidrgeno en una herida? Qu

sugiere la evidencia?
Al contacto del perxido de hidrogeno con la herida se evidencia pequeas burbujas,
esto es debido a una reaccin qumica en la que se rompe la molcula de perxido
dehidrogeno dando lugar a oxgeno y agua, esto es posible a la participacin de la
enzima catalasa que hace ms fcil la ruptura del enlace.

4.

E
x
plique porqu tantas especies producen la enzima catalasa.

Porque la Catalasa es una enzima cuya funcin es descomponer el H 2O2(Perxido

de H) en Agua y O2 molecular. El H 2O2 es una sustancia txica para la clula de tal
manera
que
debe
ser
degradada
qumicamente.
Gracias a los Peroxisomas que sintetizan este catalizador el H2O2 es descompuesto
evitando que la clula muera por Toxicidad de este compuesto inorgnico.
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CATALAZA

5. Explique las caractersticas estructurales y funcionales de la catalasa y su

importancia en los seres vivos.
Esta enzima es una metal protena tetramrica, cuyo peso molecular se encuentra en
el rango de 210-280 kD. Consta de 4 subunidades idnticas que se mantienen
unidas por interacciones no covalentes. Cada subunidad contiene un grupo
prosttico de protoporfirina IX y el contenido protomdico y el de hierro representan
un 1,1 % y 0,09 % respectivamente del peso molecular total de la enzima.
La catalasa cumple la funcin cataltica.
Importancia de la catalasa
Se aprovecha para utilizar el perxido de hidrgeno como desinfectante cuando se
echa a una herida.
Un estudio del 2006 del Instituto de Citologa y Gentica determin que el estrs
oxidante, la acumulacin de protena y el dao al ADN podran reducirse en presencia
de enzimas antioxidantes, incluyendo la catalasa y el glutatin presentes en los
extractos de citosol y de la mitocondria de las clulas del hgado de las ratas.
Este estudio tambin descubri que los suplementos dietticos incrementan la
actividad de la catalasa en el mitocondria del hgado de las ratas produciendo una
menor disfuncin mitocondrial y desacelerando el proceso de envejecimiento en
dichos animales.

BIBLIOGRAFA
http://www.uacj.mx/ICB/redcib/Documents/REB_DOC/2003/06/2003-2_LA
%20ESTRUC_.pdf
Definicin
de
enzima
Qu
es,
Significado
Concepto http://definicion.de/enzima/#ixzz3dewjiZ7F

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CATALAZA

Enzima
catalasa
|
La
Gua
http://quimica.laguia2000.com/conceptos-basicos/enzimacatalasa#ixzz3df03dXPp

de

Qumica

14