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PRCTICA#5:ExtraccineidentificacindeGlicsidosantracnicos

JoseDavidMateus(151426)SebastinDavidRomero(125244)
LaboratoriodeFitoqumica,DepartamentodeFarmacia,UniversidadNacionaldeColombia
BogotColombia,24Juniode2015.

OBJETIVOS

General: Realizar la extraccin de los posibles alcaloides que se encuentren


presentes en extracto de hojas de Sen (
Cassia angustifolia) y extracto de Yag
(
Banisteropsiscaapi)

Especfico:
1.
Determinar la presencia de glicosidos antracenicos a partir de un prueba de
reconocimientoutilizandolareaccindeBorntragerKraus
2. Realizar una cromatografa en capa delgada (CCD) utilizando como revelador
unasolucindeKOH:EtOH(10%)comopruebadeconfirmacin

MARCOTERICO
1. Glicosidosantracnicos
Losglicosidosantracnicossonungrupodeproductosnaturalespocodistribuidosenla
naturalezaquederivandelantracenoyquebiosinteticamenteseoriginandelarutadel
malonilCoAyvadelcidoshikimico+cdiomevalonico.Lamayoriadeestoscompuestos
seencuentranenformadequinonasnaturales,lascualestienenefectodelaxiony
reguladordeltonointestinalyseempleancomolaxanteocatarticoeneltratamientodel
estreimiento
(1)
.

LoscompuestosantraquinonicossonfrecuentesenespeciesdelasfamiliasRhamnaceae
(cscarasagrada,frangula,Rhamnusspp),Polygonaceae(ruibarbo),Rubiaceae(Rubia
tinctoria),Leguminaceae(hojasyfrutosdesen),Liliaceae(aloeosbila)ytambienhansido
aisladosdelquenesyhongos
(1)
.

Lasantraquinonasyotrosderivadosdelantracenocomoantrona,antranol,antraquinona,
oxantrona,diantronaodiantranolexistenenlasplantasenformahidroxilada(enlos
carbonos1y8principalmente),carboxiladaometilada(principalmenteenelcarbono3),
librecomoagliconasoazucaradoscomoglucosidos,locualgeneraunenormenumerode
compuestoscomoelcrisofanol,emodina,aloeemodina,reina,senedina,senosidos,entre
otros
(1)
.

Fig.1.Estructuradelantraceno
(2)

Fig.2.Enumeracindeloscarbonosenlaantraquinona
(3)
2.Identificacin
Lasantraquinonasysusformasreducidas
puedenreconocerseenmuestrasvegetales
atravesdeldenominadoensayode
BorntrangerKraus.

Enesteensayo,laporciondelextracto
vegetalseponeenebullicionconuna
solucindeH2SO4(50%)yH2O2(20%).
Posteriormenteseponeenebullicioncon
unasoluciondeNaOH.

Elprincipiodeestemtodoradicaenla
hidrolisisdelglicosidoantracnicohasta
generarlasformastautomrasdela
antraquinona.Lasporcionestratadascon
estosreactivossonseparadosmedianteuna
mezcladesolventesorganicosformando
salesdeantraquinonaenpresenciade
solucionesalcalinasqueadquierenuna
coloracinroja(VerFig.4.)
(4)
.

3.Hojasdesen
Comercialmenteseconocenel"Sende
Alejandra",elcualcorrespondealaespecie
Cassiasenna(Leguminosae)el"Sende
TinnevellyodelaIndia"elcualcorresponde
aCassiaangustifolia(Leguminosae)yotras
especiescomoC.acutifoliayC.obovata.La
drogalaconstituyenlashojasyfrutos
desecados
(3).

Fig.3.Ncleosbsicosdecompuestosantracnicos
(3)


Fig.4.DeterminacincolorimtricadeglicosidosantracenicosapartirdelareacciondeBorntragerKraus
(4)

Loscomponentesdelashojassonglicsidos
antraquinnicos,glicsidosdeantronas,2.5a5%
desensidosA,B,CyD(VerFig.5).Adems
aloemodina,renay2naftalnglucsidos.La
farmacopeaeuropeaVolI.especificaqueladroga
debecontenernomenosdeun2.5%de
componentesantracnicos,calculadoscomo
sensidoB.Estasdrogasseutilizancomo
laxantesypurgantes,enformadetisanas,polvos,
extractos,salesclcicasdelossensidosAyB
cristalizadas,etc.Sinembargosehareportado
queelusoprolongadodeestadrogaconllevaa
arritmiacardiaca.Laaccinlaxantedelas1,8
dihidroxiantraquinonaspresentesenelsen
dependedelnmerodemolculasdeazcar
ligadas,siendolasagliconasprcticamente
inactivas
(3)
.

Fig.5.Estructurageneraldeunsensido(glicosidoantracnicopresenteenlashojasdeSen)
(5)

4.ExtractodeYag
Elyag(
Banisteropsiscaapi)
esunarbustooextensalianaqueseencuentraenbosques
tropicales.Lacortezaesgeneralmentemarrnchocolateysuave.Lashojassonopuestas,
deformaovalada,verde,marginalmenteenteras.Elfrutoesunanuezsamara,5mmde
largo.Lassemillasenformadeabanicosondecolorverdecuandoestfresco,perose
vuelvenmarronesconlaedad
.
Elprincipalmetabolitoquepodemosencontrarenesta
plantaeslaHarmalina,aunquetambinseencuentralaHarmala.Noseencuentran
reportesacercadelapresenciadeglicosidosantracnicosenesatadrogavegetal
(6)
.

PROCEDIMIENTO

Tanto para el extracto de Banisteriopsis caapi como para extracto de Cassia aungustifolia
se tom 1 g de extracto y se disolvi en 10 ml de una solucin agua etanol (7:1) y se
calent a 60C por 10 minutos aproximadamente. Se filtro y se separo 1 ml en un tubo de
ensayo, a el restodelfiltradose leadicion 1mldeH
SO
O
2
4al 50% y1ml H
2
2 al20%conel
objetivo de que se oxidarahastaantraquinona,luegosecalentcon aguahirviendodurante

10 minutos, se dejo enfriar y se trasvaso a un embudo de decantacin donde se realizo la


extraccin con 2 porciones de 5 ml de tolueno. En la fase acuosaobtenidaporelacidoyel
perxido quedan azucares, compuestos mas polares, entre otros. La fase orgnica se
deshidrato con sulfato de sodio anhidro y se concentro. Se realizo la prueba de
reconocimiento con una solucin de NaOH al 5% que contiene 2% deNH
OHporqueunos
4
reaccionan mas fcil con uno que con otro. A el mililitro que se separ de la primera
filtracin seleaadi1mldetoluenoyseretirlafaseorgnicaconunapipetaPasteur ala
cual se le realizo la prueba de reconocimiento mencionada anteriormente. Finalmente se
realiz la cromatografa en capa delgada la cual primero se revelaba a luz ultravioleta y
luegoconKOHal10%etanol.

RESULTADOS

TablaNo.1:
Resultadosdelaidentificaciondeglicosidosantracenicospresentesen
Cassiaangustifolia
y
Banisteriopsiscaapi
utilizandolareaccindeBorntragerKraus
Tratamiento:
Adicindecidosulfricoyperxidodehidrgeno,calentadoenfriadoyfiltrado.

Prueba:


TablaNo.2:
Resultadosdelaidentificacindeglicosidosantracenicospresentesen
Cassiaangustifolia
y
Banisteriopsiscaapi,
sintratamientoprevio(ReaccinconNaOH)

Prueba:

Fig.6.CCDsinrevelarutilizandounamezclade
toluenoacetatodeetilocidoacetico(75:24:1)como
fasemovil

Fig.7CCDutilizandounamezclade
toluenoacetatodeetilocidoacetico(75:24:1)como
fasemovil
.
Luzuvcomorevelador

Tabla3.
ImagenesdelasCCDrealizadasconlosextractosobtenidosenellabortorio

ANLISISDERESULTADOS

La finalidad delarealizacinde
dostiposdepruebas,teniendounauntratamientoprevioel
cual consiste en agregar 1ml de acido sulfurico, y 1ml de peroxido de hidrogeno, y la otra
solo calentamiento durante un tiempo de 30 minutos, se realiza para verificar la presencia
de glicsidos antracenicos de manera oxidada, libre y purificada. En algunos tipos de
plantas no existe la necesidad de realizar un tratamiento previo, esto se debe a que estos
ncleos ya se encuentran libres como en el caso del rizoma de ruibarbo
(7) en los que se
encuentran los glucosidos en forma de antraquinona o antraglucosidos,loscualescambian
directamente de color a una tonalidad marron rojisa al agragarNaOH.Paraelcasodelas
hojas de sen, alrealizar laprueba conNaOHelextractopasade unatonalidadtransparente
a una tonalidad rojiza oscura, debido a la concentracion de glicsidos antracenicos que
aunque no se encuentran presentes como antraquinonas, si se encuentran en forma de
heterosidos(senosidos).

En el extracto de yag no se encontr presencia de glicsidos antracenicos, y


remitiendonos a la literatura, encontramos que la planta de yage no se caracteriza por
posee este tipo de compuestos
(6)
, si noquepresentaensucomposicionunaaltacantidad
alcaloides (Harmala y Harmalina), por este motivo en las pruebas se obtuvieron resultados
negativos, sin importar si sehayarealizadountratamientopreviono.Sepuedeverificarla
presencia de glicsidos antracnicos en las muestras de
Cassiaangustifilia
y
Banisteropsis
caapi
,medianteunapruebadeidentificacionporcromatogrfiaencapadelgada(CCD).

En la CCD se realizo la siembra de los extractos de las muestras (


Cassia angustifolia
derecha
y
Banisteriopsis caapi
izquierda) y
se evidencia la presencia de glicsidos
antracenicos en la muestra de sen, sin necesidad de revelar la placa cromatogrfica con
KOH (10%). Se observa una luminiscencia notable de tonalidad anaranjada Fig. 6, la cual
se incrementa al realizar el revelado con KOH, estosepuedeexplicardebidoaquelabase
aplicada a los compuestos antracenicos encontrados que se encuentran demanera neutra,
retiran los protones de grupos hidroxilo haciendo que la estructura adopte una carga
negativa, incrementando el flujo electronico debido a la resonancia tan marcada que se da
en la molecula. Al pasar la placa por la luz ultravioleta, confirmamos an ms la presencia
estos ncleos debido a la gran luminiscencia emitida por los glicsidos, como pdemos
observarenlaFig.7.

Para la muestra de yag se alcanza a notar una pequeavariacindetonalidaddecoloral


revelar la placa de cromatografia, lo cual nos indica la presencia de un compuesto que, si
bien puede ser un glicosido antracnico, tambien existe la probabilidad de que se trate de
otro compuesto con una solubilidad similar. Al pasarlo por la luz ultravioleta se nota la
presencia de este compuesto, lo cual nos indica que se pudo haber generado un error
experimental debido a que en las pruebas con NaOHnosepresentaronestoscompuestos,
existe algun componente en la composicion de el yage que presenta una solubilidad
similar al de los glicsidos al ser revelados con KOH. Adems, se pueden reportar falsos
resultados positivos con la reaccin de BorntragerKraus, ya que la oxidacin mediante
H2O2 puede generar compuestos de tipo quinonicos que pueden ser observables en las
placascromatogrficas.


CONCLUSIONES

Se evidencia una alta concentracion de glicsidos antracenicos en el sen (


Cassia
angustifolia
), debido a la evidente percepcion de los resultados positivos mostrados
enlasdiferentespruebasdedeteccion.
Banisteriopsis caapi
, evidencia la ausencia de glicsidos antracenicos debido a que
no seobservounatonalidadrojizaenlaspruebasrealizadas,aunqueseevidenciala
presencia de algun compuesto en la cromatografia por capa delgada, por lo cual
quedamos al pendiente de nuevoshallazgoscomplementariosenlaliteraturalocual
nospermitaconcluirsisellegoaunerrorexperimental.
Si bien la reaccin de BorntragerKraus promueve la deteccion de compuestos
quinonicos, se pueden encontrar falsos resultados positivos ya que mediante la
oxidacin de compuestos, se pueden generar otros que, estructuralmente, se
asemejenaunodetipoquinonico.

BIBLIOGRAFIA
(1)
Universidad Nacional de Colombia, Departamento de Farmacia, Guas de laboratorio

practicas de farmacognosia y fitoqumica Pag. 28 - 30


(2)
Antraceno.Hidrocarburosaromticos.Disponibleen
http://agrega.juntadeandalucia.es/repositorio/24042011/9c/esan_2011042413_9223157/OD
E2c200a86c8da322093b7a001b76deef6/4_hidrocarburos_aromticos.html
Juniode2015
(3)
Martinez,A.Quinoncasycompuestosrelacionados.UniversidaddeAntioquia.Medellin,
Noviembrede2012.Disponibleen
http://farmacia.udea.edu.co/~ff/quinonas.pdf
Juniode
2015
(4)
Borntragerreaction.Pharmacognosypracticaltraining.Disponibleen
http://www.fpharm.uniba.sk/fileadmin/user_upload/english/Department_selection/Department_of_Pharm
acognosy_and_Botany/Practice/Pharmacognosy_1/Practice_No_2.doc
.Juniode2015

(5)
Sensidos.Glicosidosantracnicos.Disponibleen
http://www.ehu.eus/biomoleculas/hc/sugar33c3.htm
Juniode2015
(6)
Banisteriopsis Caapi. National Tropical Botanical Garden. Disponible en
http://ntbg.org/plants/plant_details.php?plantid=1447
Junio de 2015
(7)
Ruibarbo. Disponible en
http://www.labnaturfar.com/naturopatias_ruibarbo_100_10_3.html
Junio de 2015

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