BIOTECNOLOGA DE AVANZADA APLICADA AL

MEJORAMIENTO GENTICO DE ANIMALES Y PLANTAS

Walter O swaldo Reye s B o rja , P h D
D o c e n t e I n ve s t i ga d o r
U n i ve rs i d a d T c n i c a D e B a b a h oyo
E m a i l : rey e s b o rj awa l t e ro swa l d o @ ya h o o. c o m

Cultivo de anteras
en arroz

Protoplastos

Embriognesis
somtica

Ingeniera gentica

Variacin somaclonal

Biotecnologa
reproductiva en
bovinos

Lema (Le)

Cultivo in vitro de
Anteras en Arroz

Palea (Pl)
Andrognesis a partir de

Anteras (St)

clulas gametofiticas o microsporas

Estilo (Cp)
Lodcula (Lo)

Heredabilidad
de sus
caracteres

Granos de
polen de arroz

MATERIAL
VEGETAL DE
ARROZ

Bloques de cruzamientos

Primera fecha de siembra, 15-04-10 (A); segunda fecha de siembra, 30-04-10 (B);
tercera fecha de siembra, 15-05-10 (C).

Germinacin de semillas F1 (A)

Plntulas F1, 7 das despus de la siembra
en cajas de Petri (B)
Fase vegetativa del material donante de
anteras, en etapas de plntula
(derecha) y macollamiento (izquierda) (C)
Fase de reproduccin (derecha) y
maduracin (izquierda) del material
donante de anteras (D)
Plantas F1 en etapa de embuchamiento,
75 das despus del trasplante, ptimas
para el cultivo de anteras (E)

Soca de las plantas F1 que tambin fueron

utilizados como material donante de
anteras (F).

RESULTADOS
Viabilidad del polen

Frtil: 38 cruces
Infrtil: 2 cruces (JAPN/FED-50 y JAPN/FED-275)

Polen frtil de color caf oscuro, luego de la tincin con lugol (A).
Polen infrtil de color amarillo, luego de la tincin con lugol (B).

Relacin pancula/microspora

Diferencia de distancias entre

aurculas de las 5 panculas,
observndose en el literal (b) la
pancula ptima (A); diferencias en el
color y consistencia entre flores de
las 5 panculas, observndose en el
literal (b) la inflorescencia ptima (B);
estados de desarrollo del polen de las
5 panculas, observndose en el
literal (b) el estado uninucleado (C).

Panculas con 2 a 5 cm de
distancia entre aurculas de las
dos ltimas hojas; ptimas para
cultivo de anteras

Aurculas

Induccin de Callos

Microcallos en diferentes estado de crecimiento (A); liberacin del microcallo de la antera

al medio de cultivo (B); callo de 45 das en medio de induccin (C)

RESULTADOS

Callos por
germoplasma

Regeneracin de plantas

Transferencia de microcallos a
medio de regeneracin (A);
callo
de
8
das
(B);
diferenciacin de rganos en
un callo de 20 das (C); Plntula
R1 albina de 30 das (D);
plntula R1 verde de 40 das
(E); planta R1 verde de 60 (F).

Cruce: JAPN/FED-50

Aclimatacin de plantas

Plantas R1 albina y verde en el

primer da de aclimatacin, en
medio de cultivo (A); plantas
R1 albina y verde en el segundo
da de aclimatacin, en agua de
grifo (B); trasplante de R1 a
suelo fangueado (C); R1
aclimatada a los 5 das despus
del trasplante (D).

DETERMINACIN DE LA
PLOIDIA POR CITOMETRIA
DE FLUJO DE LOS
MATERIALES OBTENIDOS A
PARTIR DE CULTIVO DE
ANTERAS (Tumbaco, 2014)

Niveles de ploida
determinadas en
las plntulas
regeneradas
(Tumbaco, 2014)

vs

Generacin F1

Generacin R1

Planta estril (androestril) obtenida a partir del cruce JAPN/FED-50

(A) y planta frtil obtenida mediante cultivo de anteras a partir de la
F1, JAPN/FED-50 (B)

JAPON

In vitro anther culture of F1

Doble Haploide
Homocigtica (R1)

FED-50

Japn (Madre)

Fedearroz-50 (Padre)

X
Homocigtica (R1)

Generacin R2
Homocigticas

Mejoramiento
gentico de arroz
tipo japnico

Biotecnologa Reproductiva para el mejoramiento gentico

de bovinos y su efecto en el incremento de la produccin
de carne y leche en el Ecuador.
1) Coleccin y Procesamiento de semen
2) Inseminacin artificial
3) Ovum pick up (OPU)
4) Produccin in vitro de embriones
5) Inyeccin intracitoplasmtica de espermatozoides
6) Sincronizacin del estro y superovulacin
7) Lavado y recoleccin in vivo de embriones
8) Criopreservacin de embriones
9) Transferencia de embriones
10) Diagnstico de gestacin

Produccin In Vitro
de Embriones de
Bovinos

Seleccin de razas genticamente superiores adaptadas al

territorio Ecuatoriano

Fuente de ovocitos
Ovarios

Colecta de ovarios a partir de animales

faenados (MATADERO)

Coleccin in vivo de ovocitos con

la tcnica de Ovum Pick Up

Bsqueda de los ovocitos colectados con

la ayuda del Stereomicrospopio

Colocacin de los ovocitos en

plato temperado

Pasos importantes
para la obtencin
in vitro de
embriones

Ovocitos
colectados de
los ovarios

Incubadora 39oC y
5% CO2

Maduracin in vitro Fertilizacin in vitro

de los ovocitos
de los ovocitos
(IVF-Medium)
(IVM-Medium)

22 Horas
despus

6-18 Horas
despus de la
aplicacin del
semen (Da Cero)

Semen

Cultivo in vitro de los

ovocitos (IVC-Medium)

Embriones 7 Das despus

de la fertilizacin

Evaluation of embryo quality

Compacted
Morula

Morula

Early
Blastocyst

Blastocyst

Expanded
Blastocyst

Hatched
Blastocyst

Days

a: 8-cell stage (code 4, left upper side), compacted morula (code 3, left lower side),
compacted morulae (code 1, right upper and lower side)
b: Expanded blastocyst (code 1, left upper side), degenerated embryo (code 4, left
lower side), compacted morula (code 3, left upper side), early blastocyst (code 2, left
lower side)
c: Expanded blastocysts (code 1) and a dead embryo only zona pellucida (code 4)
d: Hatched blastocyst (code 1)

Uso de los
embriones
producidos

in vitro

Transferencia de Embriones

Criopreservacin

Lavado y
recoleccin
in vivo de
embriones

PROGRAMA DE SUPEROVULACIN A VACAS DONANTE

DIA 0: CIDR+E2 (2mg)
DIA 4: AM FSH (5mg)
PM FSH (4mg)
DIA 5: AM FSH (4mg)

PM FSH (3mg)
DIA 6: AM FSH (2mg)
PGF2 (30mg)
CIDR remover
PM FSH (2mg)
PGF2 (20mg)
DIA 7: No aplicar nada

DIA 8: PM Inseminacin Artificial

GnRH (100 ug 200 ug)
DIA 9: AM Inseminacin Artificial
DIA 15: Colecta de Embriones

LUGAR DE TRABAJO

EVALUACIN DE LA DONANTE

Materiales para la Colecta de Embriones

Anestesia epidural

COLECTA DE EMBRIONES

POSICIN DEL POLICATETER

APLICACIN DE LUTALYSE

OBSERVACIN EN EL ESTREOMICROSCOPIO LOS

EMBRIONES COLECTADOS IN VIVO

EVALUACIN DE RECEPTORAS

PALPACIN DE OVARIOS VIA RECTAL

PROTOCOLO DE SINCRONIZACIN PARA RECEPTORAS

MATERIALES PARA LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

CONTAMINACIN BACTERIANA
Without outer sheath

With outer sheath

Takahashi et al. (1982)

Without outer sheath

Year
1981
1982

With outer sheath

Pregnancy rate (n)

Without
With
33% (66)
59% (22)
33% (24)
64% (22)
Takahashi (1981) & Takahashi et al. (1982)

TRANSFERENCIA DEL EMBRIN

CAPACITACIN A PERSONAL TCNICO DEL ECUADOR EN BIOTECNOLOGA REPRODUCTIVA

Institucin

CAPACITADORES

Numero de
Participantes

UNIVERSIDAD TCNICA
DE BABAHOYO

ESCUELA SUPERIOR
POLITCNICA
AGROPECUARIA DE
MANAB MFL

EL ROSARIO-MAGAP

Conclusiones
Existen vas de alta factibilidad para el mejoramiento gentico de especies
vegetales a travs de herramientas biotecnolgicas que acortan la obtencin
nuevos cultivares comparado con los mtodos convencionales.
Biotecnologas reproductivas en ganado bovino para el mejoramiento
gentico, especialmente utilizando la tcnica de cultivo in vitro de
embriones, es posible seleccionando los animales donantes de gentica
superior que el mismo productor posee en su finca, totalmente adaptado y
de alta produccin en trminos de carne y leche.
Los programas de mejoramiento gentico se deben fortalecer a nivel
nacional para llevar a cabo este tipo de actividades en beneficio del
productor.