MEM. CONF. INTERNA MED. APROVECH. FAUNA SILV. EXT. CONV.

2011, 7: 2

TCNICA DE NECROPSIA Y TOMA DE MUESTRAS

PARA HISTOPATOLOGA Y MICROBIOLOGA EN
PECES
Vsquez-Machado GM1, Penagos-Castro LG2 e Iregui-Castro CA3
1 MVZ, MSc (c). Grupo de Patobiologa Veterinaria, UN. Correo e:
gerssonmv@hotmail.com
2 MV, MSc (c). Grupo de Patobiologa Veterinaria, UN. Correo e:
lgpenagosc@unal.edu.co
3 MV, PhD. Laboratorio de Patobiologa, Facultad de Medicina Veterinaria y
Zootecnia, Universidad Nacional de Colombia. Correo e: caireguic@unal.edu.co

Resumen
El proceso de necropsia junto con la recoleccin y envo de muestras apropiadas
para la realizacin de pruebas de laboratorio es trascendental en el proceso de
emisin de un diagnstico o en la solucin de problemas mdicos. En dicho proceso
el eslabn central de la cadena lo constituye la toma de muestras, que se acompaa
de otras actividades complementarias como acondicionamiento y envo al
laboratorio, no siendo estas tareas menos importantes que la colecta misma de las
muestras.
Una necropsia ordenada con muestras apropiadas para procesamientos de
laboratorio permitir que el Mdico Veterinario pueda establecer un diagnstico,
formular un programa teraputico o proponer planes preventivos con mayor
probabilidad de xito.
Esta revisin tiene el nimo de aportar herramientas bsicas de apoyo al profesional
Veterinario durante su tarea diaria de diagnstico.
Palabras claves: necropsia; toma de muestras; colecta; diagnstico; histopatologa;
microbiologa; peces; ictiopatologa.

Introduccin
La remisin de muestras al laboratorio de ictiopatologa tiene como objetivo
principal evaluar el estatus sanitario de un grupo de individuos y en algunos
casos identificar el agente etiolgico causante de muerte o enfermedad. Es
por esto que un diagnstico histopatolgico correcto y oportuno depende en
gran medida de la calidad de la necropsia y las muestras remitidas. Muestras
mal tomadas, mal fijadas, mal transportadas o en algunos casos la falta de
rganos o tejidos, limitan las posibilidades de emitir un diagnstico adecuado.
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Tambin genera prdidas de tiempo, dinero y retrasa las medidas de

prevencin y control.
La evaluacin macroscpica y microscpica del conjunto de rganos y tejidos
es una herramienta fundamental para el diagnstico de enfermedades en
peces. Debido al tamao, cantidad y costo de los animales, es posible tomar
un buen nmero de individuos y analizar todos sus rganos al microscopio.
Este anlisis detallado de los tejidos (histopatologa) posibilita la distincin de
la mayora de los procesos de enfermedad, an los de curso subclnico,
ofrece una primera aproximacin al estado de la calidad del agua y sugiere
ciertas anomalas en el manejo de los peces.
Existen tcnicas complementarias al diagnstico histopatolgico, que en el
caso de infecciones bacterianas y virales permiten una clasificacin ms
detallada de los patgenos. Entre estas tcnicas se encuentran las de tipo
microbiolgico, en la cuales se intenta el aislamiento de las bacterias
causales, o las de biologa molecular mediante las que se identifica genrica
o especficamente el material gentico del microorganismo en los tejidos o en
los aislamientos.

Generalidades
Cuando se presentan cambios en el comportamiento normal de los peces, en
brotes agudos y severos de mortalidad o cuando alguien quiere evaluar el
estado sanitario de un grupo de peces es importante recurrir a la ayuda de
personal calificado, preferiblemente un Mdico Veterinario para que realice el
diagnstico que incluya la inspeccin de las condiciones de manejo,
ambientales y sanitarias del sitio donde se encuentran los peces y sea quien
realice la necropsia y tome los diferentes tipos de muestra para identificar los
problemas. Si no es posible que el procedimiento lo realice un profesional, el
encargado de los peces debe asegurarse de enviar el mejor tipo de muestra
al laboratorio. [1]
Todas las muestras que se remitan al laboratorio de diagnstico deben ir
acompaadas de una historia clnica del caso. [2] Aunque existen muchos
tipos de formatos para remitir una historia clnica, los cuales contemplan
diferentes detalles, existen algunos datos que siempre deben estar
presentes, entre ellos:
1. Datos de quien remite la muestra.
a. Nombre del propietario o encargado.
b. Telfonos, correo electrnico.
2. Informacin del sitio o explotacin.
a. Ubicacin geogrfica.
b. rea aproximada en espejo de agua.
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3. Descripcin de la poblacin afectada.

a. Nombre comn de la especie.
b. Grupo etario, talla o peso.
c. Procedencia.
d. Nmero de peces por rea.
e. Porcentaje aproximado de enfermos.
f. Porcentaje aproximado de mortalidad.
g. Fecha de inicio de la enfermedad o de la mortalidad.
4. Descripcin del problema
a. Ubicacin de los peces en la columna del agua.
b. Consumo de alimento.
c. Signos de enfermedad.
d. Estado de alerta (letargo, excitacin).
e. Alteraciones en el cuerpo, las aletas, las branquias, las papilas,
los ojos y la boca.
5. Condiciones de manejo.
a. Tipo de alimento y frecuencia de alimentacin.
b. Forma y frecuencia de los recambios.
c. Caractersticas bsicas del agua (temperatura, oxgeno, pH).
d. Adicin de sustancias al agua.
e. Prcticas de manejo recientes sobre el o los lotes afectados.
Las muestras para histopatologa y microbiologa deben tomarse en el menor
tiempo posible despus de la insensibilizacin o del sacrificio de los peces.
Las muestras de microbiologa se deben tomar antes que las de
histopatologa. Cada muestra se debe rotular en forma independiente,
marcando el frasco y no en la tapa.

Envo de Muestras
Pueden ser remitidas dos tipos de muestra al laboratorio: 1, animales vivos;
y 2, animales en formol:
Animales vivos: el espcimen como muestra es adecuado porque
ofrece la posibilidad de hacer anlisis histopatolgico, microbiolgico y
molecular. Se considera ideal 10 peces adultos o 20 individuos si se
trata de larvas o alevinos pequeos, por cada lote que presente
problemas. Se deben enviar peces vivos, la mitad con problemas
evidentes y la otra mitad aparentemente sanos. stos se empacan en
bolsas con tres partes de aire por una de agua. [3]
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Animales fijados en formol: este tipo de muestra imposibilita la

recuperacin de bacterias patgenas de los tejidos y reduce la eficacia
de las pruebas de biologa molecular. Se deben utilizar frascos
hermticos de boca ancha y de tapa rosca.

Necropsia y Toma de Muestras para Patologa

Anestesia e insensibilizacin
Los peces pueden anestesiarse con una solucin de tricana (MS-222) en
agua (50 300ppm, segn la especie) o en una mezcla de agua con hielo.
Cuando alcancen un estado de anestesia profunda (posicin lateral en el
agua y prdida del reflejo de huida), se inicia la diseccin.

Necropsia
Como protocolo general se recomienda:
1. Colocar el pez estrictamente en decbito lateral derecho para los
aplanados lateralmente o en decbito dorsal para los individuos
aplanados ventralmente.
2. Insensibilizar al pez por medio de un corte de la mdula espinal
inmediatamente posterior al borde caudal del oprculo.
3. Evaluar alteraciones en la cabeza, el cuerpo y las aletas. Algunas
lesiones comunes son: enrojecimiento, puntos blancos, lceras,
erosiones, prdida de escamas, ndulos, exoftalmia, opacidad ocular,
pigmentacin o despigmentacin de la piel.
4. Retirar ambos oprculos con tijera.
5. Baar las branquias con abundante formol inmediatamente despus de
retirar los oprculos. Pinzar el arco y cortar con tijera las inserciones
dorsales y ventrales de las branquias. Llevar el paquete completo a los
frascos con formol. En peces pequeos se deben tomar ambos paquetes
branquiales.
6. Realizar una incisin abdominal desde la papila anal hasta el extremo
inferior del oprculo y otra por la lnea longitudinal media hasta el borde
de las branquias. Un tercer corte se hace entre los puntos finales de los
anteriores.
7. Retirar completamente el colgajo de piel y evaluar rpidamente las
vsceras.
8. Inyectar abundante formol en estmago e intestino hasta que se llenen.

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9. Con la pinza sin garra, pinzar el esfago o un extremo duro del

estmago y separar el paquete visceral hasta la papila anal.
10. En algunos peces, debido a la dificultad de llenar el intestino con el
fijador, despus de retirar el ovillo completo, se hacen cortes de
pequeos segmentos.
11. Separar la vejiga natatoria y exponer el rin. En peces donde el rgano
es muy delgado se recomienda disecarlo junto con un segmento de
msculo.
12. Los ojos se retiran cortando con tijera las inserciones orbitales.
13. El corazn se expone al terminar el segundo corte de la pared
abdominal; debe pinzarse por el extremo distal del cono arterioso y
retirarse completo.
14. El cerebro se expone por medio de un corte rectangular por detrs de los
ojos. cuando los peces son pequeos, se puede llevar la cabeza
completa, incluyendo los ojos, el cerebro expuesto y eventualmente las
branquias y el corazn.
15. Por ltimo se toma un pedazo de piel. Si tiene apariencia normal, 1cm2
es suficiente. Si tiene lesiones se toman varias porciones que incluyan
tejido sano y lesionado.
16. En peces pequeos los rganos se depositan enteros en los frascos con
formol. En animales grandes se toman fragmentos de aproximadamente
1 cm2, tanto de reas sanas como lesionadas.
17. Peces menores de 5cm se toman enteros con la cavidad abdominal y
orobranquial expuesta y el tubo digestivo lleno de formol.
18. Los rganos deben depositarse en frascos con formalina buferada al
3,7% manteniendo una relacin de nueve partes de formol por una de
tejido.

Toma y Envo de Muestras para Microbiologa

Los aislamientos de bacterias deben hacerse principalmente del hgado,
rin, bazo y lesiones en piel, utilizando medios de cultivo slidos en cajas
de Petri.
Si se sospecha de Aeromonas sp, Edwardsiella tarda o Streptococcus
agalactiae, se puede utilizar agares convencionales como TSA o BHI
suplementados con sangre ovina desfibrinada al 5%. Si se sospecha de
bacterias filamentosas, sembrar en medio TYES. Para aislamiento de
micobacterias se debe utilizar medio de cultivo Lowenstein Jensen.

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Procedimiento
Antes de tomar la muestra los mecheros deben encenderse y el instrumental
sumergirse en un recipiente con desinfectante (alcohol o cloruro de
benzalconio).
Las muestras para microbiologa se toman durante el proceso de necropsia.
Previo a la diseccin, la piel se desinfecta del costado izquierdo frotndola
con una gasa impregnada de yodo. Posteriormente se realiza la diseccin de
la pared abdominal, se levanta el colgajo de piel con una pinza de garra y se
toman las muestras, preferiblemente de hgado, bazo o rin en el caso de
micobacterias y gram (-) o de cerebro, ojo y bazo en el caso de
Streptococcus agalactiae. La toma se realiza por puncin del rgano con el
asa estril y se siembra por agotamiento en las cajas de Petri.
En el caso de infecciones de la piel, luego de la insensibilizacin se
recomienda lavar la zona afectada con agua destilada estril, para retirar
bacterias contaminantes. La toma de la muestra debe hacerse en la periferia
de la lesin procurando puncionar por debajo de la epidermis.

Bibliografa
1.

2.
3.

Iregui CA, Hernndez E, Jimnez AP, Pulido EA, Rey AL. Manual de Sanidad
Pisccola. Bogot DC (Colombia): Grupo de Fisiopatologa Veterinaria, MADR;
2004. Captulo 5, Principios para la Toma y Envo de Muestras para el
Diagnstico Histopatolgico; p. 49-56.
Rodrguez M, et al. Manual de Enfermedades de Peces. Boletn del Programa
Nacional de Sanidad Acucola y la Red de Diagnstico. 2001.
Iregui CA, Figueroa J, Penagos LG, Barato PA. Manual de toma y envo de
muestras de peces ornamentales para histopatologa, microbiologa y biologa
molecular. Bogot DC (Colombia): grupo de Fisiopatologa veterinaria, MADR;
2011. En prensa.

10 Asociacin de Veterinarios de Vida Silvestre (VVS) ISSN 2011 - 9348