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Trabajos originales

Acta Farm. Bonaerense 24 (3): 371-6 (2005)


Recibido el 20 de noviembre de 2004
Aceptado el 10 de abril de 2005

Estudo morfo-anatmico das folhas e caule da


Calophyllum brasiliense (Clusiaceae),
uma contribuio ao estudo farmacognstico da droga vegetal
Arquimedes G. JUNIOR 1, Izabel C. P. FERREIRA 2, Celso V. NAKAMURA 3,
Benedito P. D. FILHO 3, Ezilda JACOMASSI 4, Maria C. M. YOUNG 5 e Digenes A. G. CORTEZ 2*
Mestrando em Cincias Farmacuticas da Universidade Estadual de Maring.
de Farmcia e Farmacologia, 3 Departamento de Anlises Clnicas,
Universidade Estadual de Maring, Avenida Colombo 5790, 87020-900, Maring, PR, Brasil.
4 Universidade Paranaense (UNIPAR),
Instituto Superior de Cincias Farmacuticas e Bioqumica, Umuarama, PR, Brasil.
5 Instituto de Botnica de So Paulo, So Paulo, SP, Brasil
1

2 Departamento

RESUMO. Calophyllum brasiliense Cambess (Clusiaceae), conhecida como guanandi popularmente utilizada para o tratamento de reumatismo, varicoses, hemorridas e lceras crnicas. Neste estudo, foram determinadas as caractersticas botnicas e fsico-quimica para o C. brasiliense, com o objetivo de auxiliar a
sua identificao taxonmica e o controle de qualidade de produtos preparados com esta planta. Para a
caracterizao da morfologia, anatomia e histoqumica foram confeccionadas lminas semipermanentes
do caule e das folhas do C. brasiliense. Testes histoqumicos realizados mostraram a presena de compostos fenlicos principalmente localizados nos canais secretores do caule, pecolo e limbo. Os dados obtidos
determinaram os parmetros para avaliao de qualidade e pureza.
SUMMARY. Anatomical study of leaves and stem of Calophyllum brasiliense (Clusiaceae), a contribution to the
farmacognostic study of vegetal drug. Calophyllum brasiliense Cambess (Clusiaceae), a folk medicine plant
known as guanandi, is popularly used in the treatment of rheumatism, varicosity, hemorrhoids and chronic ulcerations. This study determines botanical and physico-chemical characters of C. brasiliense, with the objective
of providing tools for its taxonomical identification and the quality control of derivatives products. For morphological, anatomical and histochemical characterizations semi-permanent slides has been made from C.
brasiliense stem and leaves. Histochemical tests demonstrated the presence of phenolic compounds mainly localized on the secretory canals of stem, petiole and leaf blade. These data shown to be useful to the identification
and quality parameters and purity.

INTRODUO
A famlia Clusiaceae (Lindl.) inclui 50 gneros e 1200 espcies distribudas principalmente
nas regies tropicais do globo. Entretanto, alguns gneros se desenvolvem com grande facilidade nas regies norte de zonas temperadas.
Esta famlia engloba rvores, arbustos, lianas e
ervas de interesse econmico pela produo de
frutos comestveis, madeiras, derivados qumicos
de interesse farmacutico e tintas. A maioria das
espcies est distribuda em trs gneros: Hypericum L. (350 spp), Clusia L. (200 spp) e Garcinia L. (200 spp) 1. No entanto, o gnero Calophyllum L., cuja maioria das espcies so representadas por rvores tropicais, apresenta entre 180 a 200 espcies de grande interesse
econmico, devido a produo de madeiras no-

bres 2. Os gneros mais importantes no Brasil


so: Kielmeyera Mart. & Zucc. (pau-santo), Caraipa Aubl, Patonia R. Wight (obacuri), Clusia
L., Hypericum L., Rheedia L., Calophyllum L.,
destacando-se quantitativamente o Calophyllum
brasiliense Camb 3., espcie conhecida popularmente como guanandi ou jacareba, cuja infuso da casca um remdio popular utilizado
para o tratamento de reumatismo, varicoses, hemorridas e lceras crnicas 4.
Calophyllum brasiliense Cambess. uma espcie arbrea, com altura variando entre 20 a 30
metros e dimetro de 40 a 60 cm 5, que se desenvolve preferencialmente em florestas semidecdua, ombrfila densa, amaznica e no cerrado
constituinte de vrios estados do Brasil 6.
As folhas so simples na forma do limbo, a

KEYWORDS: Anatomy, Calophyllum brasiliense, Clusiaceae.


PALAVRAS CHAVES: Anatomia, Calophyllum brasiliense, Clusiaceae.
*

Autor para correspondncia. E-mail: dagcortez@uem.br

ISSN 0326-2383

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JUNIOR A.G., FERREIRA I.C.P., NAKAMURA C.V., FILHO B.P.D., JACOMASSI E., YOUNG M.C.M. & CORTEZ D.A.G.

maioria elptica, obtusa no pice e cuneiforme


na base 4. O padro de venao do tipo paxilato 7, ou seja, com nervuras secundrias numerosas, paralelas e muito prximas uma das outras. Esse tipo de venao citado por Melville
7, para o C. inophyllum L. No entanto, Mouton 7
denomina este padro de venao como de paraleldromo transverso, e Rizzini 8 de venosa
obliquivnia.
Segundo Cronquist 1 uma das caractersticas
anatmicas marcantes da famlia Clusiaceae a
presena de canais e cavidades secretores esquizgenos em todos os tecidos, onde so elaborados e secretados diversos metablitos secundrios. Suas folhas apresentam cavidades secretoras resinferas, sendo algumas delas produtoras
de resinas aromticas que, somadas aos canais
secretores, promovem o acmulo de diversos tipos de metablitos secundrios, tais como xantonas e cumarinas 9,10, podendo estar na forma
isolada ou agrupar-se com cristais de oxalato de
clcio.
Diversas cumarinas e xantonas isoladas de
representantes do gnero Calophyllum apresentaram importantes atividades moluscicida, antitumoral, antiviral e antimicrobiana 11-14. Sartori et
al. 15 comprovaram efeito citoprotetor, anti-secretor e antilcera da frao diclorometano obtida da casca do C. brasiliense Cambess. Da Silva
et al. 16 comprovaram atividade analgsica e antiinflamatria das fraes obtidas do extrato das
folhas do C. brasiliense Cambess.
Recentemente, Gasparotto Junior 17 comprovou atividade moluscicida do extrato, fraes e
de uma cumarina isolada das folhas do Calophyllum brasiliense Cambess. apresentando a
mesma intensa atividade moluscicida frente ao
Biomphalaria glabrata, importante vetor da Esquistossomose Mansnica no Brasil.
Segundo Oliveira et al. 18, outro fator importante para a diagnose de drogas vegetais, alm
da descrio anatmica, corresponde s incluses celulares tanto de natureza orgnica
(amido, compostos fenlicos, gotculas de leo,
etc) como inorgnicas (cristais de oxalato de
clcio, carbonato de clcio, etc), e estas incluses podem ser evidenciadas por meio de reaes histoqumicas adequadas.
O presente trabalho tem por objetivo o estudo da anatomia e histoqumica das folhas e caule do Calophyllum brasiliense Cambess., visando
estabelecer: 1) caractersticas marcantes para sua
identificao; 2) dar subsdio para a anlise farmacognstica permitindo o controle de qualidade da droga vegetal.

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MATERIAL E MTODOS
O material botnico, folhas e caule do Calophyllum brasiliense Cambess. (Clusiaceae) foram coletados na Ilha do Cardoso, localizada no
Estado de So Paulo, pela professora Dra. Maria
Claudia Young, em maro de 2001. A exsicata
foi depositada no Herbrio do Instituto de Botnica de So Paulo, sob o nmero de registro
SP363818.
Para a anlise microscpica do material botnico foram realizados cortes transversais, longitudinais e paradrmicos, mo livre, com auxlio de lmina de barbear.
Lminas semipermanentes foram preparadas
com os cortes descorados em soluo de hipoclorito de sdio 33%, lavados com gua destilada, corados com safranina 1% e soluo de azul
de astra 1%, montados em lmina e lamnula,
com gelatina glicerinada (soluo 1:1) 18-20 e observados em microscpio tico Nikon (ALPHAPHOT -2) YS2-T.
Para os testes histoqumicos, os cortes do
material botnico foram submetidos: soluo
aquosa de cloreto frrico 10%, para localizao
de compostos fenlicos 19; soluo de floroglucinol cido, para evidenciar paredes lignificadas
20; soluo de Sudan IV (soluo saturada do
corante em lcool 95% e adicionada igual quantidade de glicerina), para localizar paredes suberificadas, cutinizadas e outros materiais lipdicos
21; ao reagente de Lugol (gua destilada 100,0 ml
para 1,0 g de iodeto de potssio), para localizao de amido 22; soluo de azul de metileno (soluo de 0,3 g de azul de metileno em
20,0 ml de lcool 96GL, e completando com
gua destilada para 100,0 ml) para evidenciar estruturas celulsicas e mucilaginosas 23; soluo
de cido sulfrico diludo de 5-10%, para evidenciar cristais de oxalato de clcio; e soluo
de vermelho de rutnio para evidenciar a presena de clulas de contedo mucilaginoso 24.
Os aspectos anatmicos das folhas e caule
foram observados, descritos e ilustrados ao microscpio ptico. As fotomicrografias e as escalas referentes s ilustraes foram obtidas utilizando-se do programa Image-pro Lite (version
3.0 for windows/98) acoplado ao microscpio
tico Leika DMLS type 020-518.5000 e devidamente ajustado por meio de pr-calibrao.
RESULTADOS E DISCUSSO
Descrio Microscpica
Follha
Calophyllum brasiliense apresenta pecolo
dorsiventral com sistema vascular formado por

acta farmacutica bonaerense - vol. 24 n 3 - ao 2005

Figuras 1-4: Sees transversais e longitudinal do pecolo de Calophyllum brasiliense Cambess. 1: sistema vascular; 2: evidenciando o crtex; 3: evidenciando as drusas; 4: seco longitudinal evidenciando laticfero (Ce canal esquizgeno, D - drusas, F - fibras perivasculares, Fl - floema, L - laticfero, X - xilema).

nico feixe colateral. Na face dorsal, possui grupos de fibras associados ao floema (Fig. 1). O
sistema fundamental composto em sua maior
parte por parnquima colenquimatoso, que se
caracteriza por apresentar certo espessamento
no lignificado na parede celular (Fig. 2). As
drusas esto presentes por todo o sistema fundamental, bem como laticferos e canais esquizgenos, sendo estes ltimos tambm localizados no sistema vascular (Figs. 3-4). Metcalfe &
Chalk 25 relatam estas estruturas para algumas
espcies da famlia Clusiaceae. O tipo de pecolo do C. brasiliense observado se enquadra com
o tipo de C. calaba Jacq., descrito por Metcalfe
& Chalk 25.
Em seco transversal, o limbo se mostra
dorsiventral e hipoestomtico com epiderme
unisseriada acompanhada de hipoderme (Figs.
5-7), apresentando cutcula espessa em ambas
as faces epidrmicas. O mesofilo composto
por uma camada de clulas em paliada, uma
camada de clulas coletoras cuneiformes e nove
a onze camadas de clulas com formatos irregulares, constituindo o parnquima lacunoso. Nes-

ta regio observou-se a presena de cristais de


oxalato de clcio, e principalmente as drusas.
Especialmente nas regies das nervuras de menor calibre, o parnquima palidico pode ser
formado por duas camadas de clulas mais curtas. Metcalfe & Chalk 25 descrevem algumas caractersticas do limbo de representantes da famlia Clusiaceae, tais como: hipoderme com uma a

Figura 5. Seco transversal do mesofilo do Calophyllum brasiliense Cambess evidenciando hipoderme,


parnquima palidico, lacunoso e drusas (Pp: parnquima palidico, Hi: hipoderme, Pl: parnquima lacunoso, D: drusa).

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JUNIOR A.G., FERREIRA I.C.P., NAKAMURA C.V., FILHO B.P.D., JACOMASSI E., YOUNG M.C.M. & CORTEZ D.A.G.

Figuras 6 e 7: Seces paradrmicas da folha do Calophyllum brasiliense Cambess. 6: Face adaxial evidenciando
contorno das clulas; 7: Face abaxial evidenciando estmatos.

Figuras 8 e 9: Sees transversais da nervura principal do Calophyllum brasiliense Cambess. 8: evidenciando o


sistema vascular; 9: evidenciando canal esquizgeno (Ce: canal esquizgeno, F: fibras perivasculares, Fl: floema, X: xilema).

vrias camadas de clulas em contato com a face adaxial da epiderme em muitos gneros, inclusive Calophyllum; cristais de oxalato de clcio na forma de drusas no mesofilo; folha dorsiventral em muitos gneros e cntrica e subcntrica em outros.
A nervura principal na face abaxial convexa com sistema vascular representado por um
feixe colateral em forma de arco, circundado
por um anel de fibras (Fig. 5); apresenta canais
esquizgenos na face abaxial associado ao
parnquima colenquimatoso bem como na regio central (Figs. 8 e 9). Em ambas as faces da
nervura principal ocorrem idioblastos com monocristais prismticos e drusas.
Na regio do bordo, a cutcula mais espessa e a epiderme formada por uma camada de
clulas com tamanho menor, quando comparadas as demais clulas epidrmicas. O sistema
vascular nesta regio representado por um feixe colateral, associado a um canal esquizgeno
envolvido por bainha de esclernquima.
Em cortes paradrmicos, observa-se em ambas as faces epidrmicas clulas de formatos variados e contorno das paredes anticlinais ondulados (Figs. 8 e 9). Os estmatos so numerosos, do tipo anomoctico, e esto presentes unicamente na face abaxial (Fig. 9). Metcalfe &

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Chalk 25 descrevem para alguns representantes


da famlia Clusiaceae estmatos paracticos presentes na face abaxial da epiderme.
Caule
O caule em desenvolvimento primrio (3
mm de dimetro) apresenta contorno retangular
com epiderme unisseriada constituda por clulas retangulares e papiliformes com cutcula espessa. O crtex formado por tecido parenquimtico e o sistema vascular representado por
um cilindro contnuo de floema ao redor do xilema, o qual est envolto por grupos de fibras
perivasculares; a regio central do caule se mostra constituda por clulas parenquimticas isodiamtricas em processo de lignificao, e os
canais esquizgenos so observados na regio
cortical e medular (Figs. 10 e 11). Da mesma
forma, foram observados a presena de idioblastos com microcristais prismticos e, em maior
evidncia, as drusas.
Estes resultados esto de acordo com o relatado por Metcalfe & Chalk 25 e Metcalfe 26 referente presena de canais ou cavidades secretoras em espcies da famlia Clusiaceae, que podem seguir o feixe vascular ou correr independente deste no mesofilo, passando pela regio
medular e cortical do pecolo.

acta farmacutica bonaerense - vol. 24 n 3 - ao 2005

Figs. 10-11: Seces transversais do caule em desenvolvimento primrio do Calophyllum brasiliense Cambess.
10: evidenciando sistema vascular e canais esquizgenos centrais e perifricos; 11: evidenciando canais esquizgenos.

Testes Histoqumicos
Parte da
planta

Lugol

Sudan
IV

H2SO4

FeCl3

Azul de
Metileno

Floroglucinol

Vermelho
De Rutnio

Caule
Primrio

++

+++

+++

++

+++

++

Pecolo

++

+++

+++

++

++

++

Limbo

+++

++

+++

+++

+++

++

+++

Tabela 1. Resultados dos testes histoqumicos para material seco de Calophyllum brasiliense Cambess.
+ fracamente positivo; ++ moderadamente positivo; +++ fortemente positivo; - negativo.

Testes Histoqumicos
Os resultados dos testes histoqumicos com
o C. brasiliense (Tabela 1) demonstraram, aps
a utilizao do FeCl3, a presena marcante compostos fenlicos, principalmente localizados em
canais secretores esquizgenos apresentados
pela espcie. Segundo Metcalfe & Chalk 25, a
natureza qumica do contedo das estruturas secretoras tem sido afirmada sem a utilizao de
testes histoqumicos adequados. No entanto, testes aplicados por diferentes pesquisadores para
o mesmo material podem levar a diferentes concluses, j que o material secretado raramente
constitudo por substncias puras. Com a utilizao do Sudan IV observou-se a deposio de
compostos graxos, notoriamente na espessa cutcula apresentada pela espcie. A utilizao do
H2SO4 comprovou a intensa presena de cristais
de oxalato de clcio na forma de microcristais
prismticos e drusas dispersas tanto na folha
quanto no caule primrio. Com a utilizao do
Floroglucinol cido, evidenciou-se a presena
de paredes lignificadas principalmente no caule
primrio, justificando a existncia em maior
quantidade de tecidos de sustentao neste lo-

cal. A utilizao do Azul de Metileno e do Vermelho de Rutnio revelou a presena de tecidos


no lignificados com contedo mucilaginoso,
principalmente localizados no limbo da espcie.
CONCLUSO
Os dados obtidos com o estudo da anatomia
e histoqumica, para a espcie Calophyllum brasiliense Cambess., foram importantes para sua
identificao e avaliao do controle de qualidade, sendo teis para comercializao desta espcie como droga vegetal.
Agradecimentos. A CAPES/CNPq pelo apoio financeiro.

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