Secuenciacin de

protenas
Mtodos de:
Sanger
Edman

La secuenciacin de protenas es el
proceso por medio del cual se
determina el orden exacto de los
residuos de aminocidos en una
protena, es decir, su estructura
primaria
Frederick Sanger(1918 -), investigador
de la universidad de Cambridge
(Inglaterra) es uno de los pioneros en la
secuenciacin de protenas. Sanger se
dedic a la investigacin del
metabolismo de los aminocidos y la
determinacin de la estructura de la
insulina.

 Para

identificar al aminocido localizado en el

extremo amino terminal de la cadena polipeptdica,
Sanger desarroll un mtodo, en el cual el
dinitrofluorobenceno (DNFB) reacciona con los
grupos -amino de los aminocidos N-terminales,
para formar un dinitrofenil-derivado (DNP) del
aminocido. La unin entre el grupo DNFB y el
aminocido no se rompe por hidrlisis cida suave.
De este modo, el aminocido que se ha
transformado en el derivado DNP, puede ser aislado
luego de la hidrlisis del polipptido. El derivado DNP
del aminocido, que corresponde al extremo amino
terminal, puede ser identificado por cromatografa
de intercambio inico, en papel o capa fina.

Degradacin de Edman
La secuencia en una cadena de

polipptidos se puede determinar por el

proceso de degradacin de Edman ( la
secuencia de residuos se denomina
estructura primaria ). En cada ciclo de este
procedimiento el residuo N-terminal de la
protena reacciona con el reactivo de
Edman y se lleva a cabo una serie de
reacciones que dan como resultado la
ruptura de los enlaces peptdicos en los
cuales se va a identificar la estructura del
aminocido N- terminal.

Procedimiento
A pH de 9 el residuo N-terminal de

una cadena polipeptdica reacciona

con el reactivo de Edman.
Posteriormente el tratamiento del
feniltiocarbamoilpptido con cido
trifluorocetico (F3 CCOH) libera un
derivado anilinotiazolina del residuo
del aminocido N- terminal sin
romper los otros enlaces peptdicos
de la cadena del polipptido.

 La

anilinotiazolina se extrae y se trata con

cido acuoso, el cual provoca un
reacomodamiento del derivado de modo
que forma el derivado estable
feniltiohidantona.

Este derivado se puede identificar

entonces cromatogrficamente.

El

resto de la cadena polipeptdica se

regresa a las condiciones alcalinas, y el
residuo de aminocido que al principio
estaba en segunda posicin ahora es el
nuevo residuo N-terminal y es sometido
nuevamente al mismo procedimiento.

El rendimiento del procedimiento de

degradacin de Edman puede
acercarse al 100%.
Con solo algunos picomoles de
muestra se puede dar la secuencia
de hasta 30 residuos o ms.
Este mtodo debe ser
complementado por otros
procedimientos de fragmentacin
para obtener la estructura primaria
de protenas grandes.