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I. OBJETIVO:
Los alumnos deben de conocer los principales principios para la preparacin de los
medios de cultivo.
II. EQUIPOS Y MATERIALES:
Autoclave
Cocinas
Bao Maria
Balanza y Estufa
Material de vidrio: (Balones, placas Petri, tubos de ensayo, pipetas y matraces).
Cocinas
Balanza y estufa
Agares y medios de cultivo
III. FUNDAMENTO:
Para obtener colonia de microorganismos es necesario utilizar determinados sustratos
nutritivos (medios de cultivo) en los cuales los microorganismos pueden desarrollar todos
sus procesos vitales.
Los medios de cultivo deben de reunir los siguientes requisitos:
2 Medios selectivos
Son bsicamente iguales a los de enriquecimiento,
se diferencian por ser medios slidos y estn
diseados para el aislamiento de microorganismos
especficos. Ej. Agar desoxicolato citrato utilizado
para el aislamiento de patgenos entricos.
3 Medios diferenciales
No contienen sustancias inhibidoras, es decir, permiten el crecimiento de
muchos tipos de microorganismos, pero si contienen indicadores de productos
derivados de la actividad metablica de los microorganismos sobre algunos de
los componentes del medio. Se utilizan para la identificacin de los
microorganismos. Ej.: Agar base rojo fenol utilizado para detectar
fermentacin de carbohidratos.
4 Medios selectivos diferenciales
A veces se combinan en un mismo medio las caractersticas de ser selectivo y
diferencial. Por ejemplo, el agar Mac Conkey, este medio contiene sales
biliares y cristal violeta, que inhiben el crecimiento de las bacterias gram
positivas. Pero como tambin contiene lactosa y un indicador de pH permite
distinguir entre las bacterias fermentadoras de lactosa y las que no lo son.
TIPOS DE AGARES Y CALDOS DE CULTIVO:
Agar Nutritivo
Composicin:
Extracto de carne, 3g
Peptona, 5g
Agar,15 g
Agua destilada hasta 1000 ml
Glucosa 5,0 g
Fosfato dipotsico 5,0 g
Agua destilada 1000,0 mL
pH 6,9
Agar Sangre:
Composicin por Litro:
Digestivo pancretico de casena -15g
Peptona de soja - 5g
Cloruro sdico-5g
Agar-15g
5,0
5,0
5,0
4,0
1,0
Verde brillante
0,005
Dihidrogenofosfato potsico
3,4
Hidrogenofosfato dipotsico
4,35
(Caldo de enriquecimiento selenito-verde brillante-manita segn STORES y OSBORNE)
IV. PREPARACIN:
Para la preparacin de medios de cultivo se utiliza agua limpia destilada neutra. Los
recipientes que se utilizaran se lavaran esmeradamente con el fin de eliminar
cualquier sustancia extraa.
En lo posible se prepara mximo 2 Lts. por recipiente en la balanza digital calcular el
peso por regla de tres.
Se preparan segn las indicaciones de las etiquetas del envase de cada medio de
cultivo.
Los medios que contienen Agar o gelatina deben ser calentados para obtener su
disolucin.
Con cuidado los medios que no contienen Agar ni gelatinas se pueden disolver por lo
general en agua fra o bajo ligero calentamiento.
Antes de esterilizarlos es conveniente repartir el medio de cultivo en porciones ms
pequeas como (tubos , balones etc), si las normas indicadas en el envase nos indican
otra cosa.
La esterilizacin de los medios de cultivo se lleva a cabo en autoclave, a 121C
durante 15 minutos.
Distribuir en recipientes como placas de petri, tubos, etc.
Luego se coloca un algodn y papel antes de esterilizar para evitar la contaminacin
al trasladarlo del autoclave al lugar de trabajo
V. CONCLUSIONES:
En dicha prctica se puede llegar a concluir que existen diferentes tipos de agares y
caldos de cultivo utilizados como medios de cultivo para la gran gama de
microorganismos.
As vez la identificacin de los microorganismos nos lleva a la conclusin de que cada
microorganismo puede tener uno varios medios de cultivo especficos en el mercado
que aparte de favorecer a un determinado microorganismo puede favorecer a otro con
similares propiedades, lo que conlleva a un crecimiento de ambos..
Tambin se dice que cuando un microorganismo posee propiedades especificas solo un
tipo de cultivo ser beneficioso par asu crecimiento, estos medios especficos tienen
nutrientes que facilitan el desarrollo del microorganismo inhiben el desarrollo de otros
microorganismo en el mismo medio de cultivo.
VI. BIBLIOGRAFA:
E. MERCK. manual de microbiologa DARMASTACH (R.F. de ALMANIA)