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IDENTIDADE

DOS SERES VIVOS

AS FUNES VITAIS
BSICAS
EXPERIMENTO

Preparo de lmina para


observao de mitose de
clula vegetal ao microscpio
ptico

Verso: agosto 19, 2011 4:30 PM

Preparo de lmina para observao de mitose de clula vegetal ao microscpio ptico

1. Resumo
Este experimento proporciona a visualizao da mitose em clulas de razes de cebola ao microscpio ptico.

2. O experimento

2.1 Materiais
Razes novas de cebola (preparar uma semana antes da aula);
Soluo de orcena actica 1%;
Copos, potes de plstico, garrafa PET ou frasco de lcool cortados;
Palitos de dente;
Lminas;
Lamnulas,
Pinas;
Lmina de barbear;
Pipetas Pasteur ou conta-gotas;
Papel absorvente, papel toalha ou papel filtro;
Placa de Petri ou pires de material resistente ao calor;
Lamparina a lcool, vela, bico de Bunsen ou fogareiro;
Pina de madeira;
Microscpio ptico que proporcione uma ampliao total de pelo menos 100x;
leo de imerso.

Figura 1: Materiais necessrios.

2.1.1 Dicas de obteno de materiais


Orcena actica, lmina e lmnula podem ser encontradas em distribuidoras de material para laboratrio;
Para manuseio da lmina de barbear com maior segurana, quebre-a previamente ao meio e proteja a parte
interna, que ser manuseada pelo aluno, com fita adesiva. Faa esse procedimento antes da aula, no sendo
aconselhvel a realizao do mesmo pelos alunos.
Para obteno de razes novas de cebola, a cebola deve ser preparada aproximadamente uma semana antes

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da aula de acordo com as instrues abaixo:


1) Raspar a regio da raiz da cebola com a lmina de barbear, conforme mostra a Figura 2;

Figura 2: Raspando a raiz da cebola.


Com esse procedimento, a regio ressecada (razes antigas da cebola) retirada, permitindo melhor contato da
gua com as clulas basais.
2) Colocar a cebola com as razes raspadas em um copo com gua, com a regio da raiz imersa. Para deix-la parcialmente submersa, podem ser inseridos palitos que serviro de apoio na regio mediana (Figura 3) ou ainda pode ser
usado o frasco de lcool cortado invertido (Figura 4).

Figura 3: Cebola com a parte da raiz submersa em gua.

Figura 4 : Cebola mantida na gua em frasco de lcool cortado.


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3) Esperar de cinco a sete dias at as razes atingirem aproximadamente 2 cm. aconselhvel preparar uma cebola
para cada dois experimentos, pelo nmero de razes que crescem nesse perodo;

Figura 5: Cebola com razes novas.

2.2 Procedimento

Sugerimos que esta atividade seja desenvolvida depois que voc j tiver trabalhado com os alunos o conceito de
ciclo celular, a importncia da intrfase e da mitose e a caracterizao das fases da mitose.
Antes de iniciar o experimento, retome os conceitos de clula e de diviso celular explorados em aulas anteriores.
Apresente o roteiro de trabalho antes da execuo do procedimento, apontando as questes de segurana, as dicas
importantes, bem como as tarefas e avaliaes dessa atividade.

2.2.1 Protocolo experimental


1) Corte trs ou quatro razes em tamanhos de 1 a 2 cm a partir da regio apical (meristema apical) e as transfira
para uma placa de Petri contendo orcena actica (corante);

Figura 6: Retirada das razes.

Figura 7: Razes retiradas.

Figura 8: Razes com orcena actica.

A orcena actica um corante formado por orcena e cido actico. O cido actico um fixador que tem como
funo manter a integridade das estruturas celulares. A orcena cora os cromossomos, fazendo com que se destaquem
das outras estruturas, podendo ser facilmente identificados ao microscpio.
O meristema apical (Figura 9) o tecido da regio da ponta da raiz, responsvel pelo seu crescimento. Sendo assim, possui clulas com alto grau de diviso celular (mitose).
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Figura 9: Estruturas da cebola.


2) Aquea a placa de Petri com uma lamparina a lcool at a emisso de vapores, sem deixar ferver (Figura 10);
Nesse processo, apenas passe a placa de Petri algumas vezes sobre a chama, sem deix-la por muito tempo em contato com o fogo. Professor, se achar conveniente, voc pode flambar um pedao da raz at a fervura para depois
comparar os resultados. Para isso, retire as razes da lmina, deixando apenas uma pequena parte que dever ficar
por mais tempo sobre a chama.

Figura 10: Aquecimento das razes com orcena actica.


Segurana:
Aquea as razes da cebola com a orcena actica perto de janelas, em capela ou em local com corrente de ar para
eliminar os vapores que se desprendem do corante.
Utilize uma pina de madeira, um pedao de pano ou papel espesso no manuseio da placa de Petri para evitar
queimaduras.

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3) Pegue as razes com uma pina de ponta fina, coloque-as sobre uma lmina limpa e seccione a regio do meristema, que representa um pedacinho de cerca de 2 a 3mm a partir do pice. Despreze o resto da estrutura;

Figura 11: Retirada do pice da raiz.


Segurana:
Chame ateno para que os alunos no toquem na placa de Petri, pois isso pode causar queimaduras. Se achar conveniente, deixe esfriar por cerca de 2 minutos.
Corte a lmina ao meio e coloque um pedao de fita adesiva. O manuseio deve ser feito na regio da fita, evitando
o contato com a parte cortante. De preferncia, acompanhe a utilizao da lmina por cada grupo e depois a recolha
de volta.
4) Pingue uma gota de orcena actica sobre o meristema seccionado e, com muito cuidado, cubra o material com
a lamnula;

Figura 12: Montagem da lmina.


5) Com um pedao de papel absorvente, elimine o excesso de corante, conforme mostra a figura abaixo;


Figura 13 : Retirada do excesso de corante .
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Segurana:
Certifique-se de que a lmina esteja sobre uma superfcie lisa. Irregularidades como a interface entre azulejos, por
exemplo, podem promover a quebra da lmina.
6) Cubra a lamnula com o papel absorvente e, cuidadosamente, pressione com o polegar at visualizar uma camada nica de clulas ao microscpio ptico.

Figura 14 : Esmagamento do pice corado entre lmina e lamnula.

Segurana:
Ao esmagar o pice da raiz entre a lmina e a lamnula, use a bancada como apoio (Figura 14).
Certifique-se de que a lmina esteja sobre uma superfcie lisa. Irregularidades como a interface entre azulejos, por
exemplo, podem promover a quebra da lmina.
7) Coloque a lmina no microscpio e visualize as clulas em diviso mittica. O aumento de 1000x proporciona
melhor visualizao.
O aumento calculado multiplicando-se o aumento da lente objetiva pelo aumento da lente ocular. Para objetivas,
a partir do aumento de 100x, dever ser usado leo de imerso.
O leo de imerso uma interface lquida que possui o mesmo ndice de refrao da objetiva. Ele deve ser usado
para a objetiva de 100x, pois far com que os raios luminosos no se dispersem ao atravessarem o conjunto lmina-leo, permitindo a entrada de um grande cone de luz na objetiva, o que melhora a visualizao do material.
Para uso do leo de imerso, pingue uma pequena gota do leo em cima da lamnula somente quando a for visualizar com a objetiva de 100x. Coloque a lmina no microscpio e posicione a objetiva. Sendo a maior lente, a objetiva
de 100x quase toca na lamnula.

Figura 15: Clulas em mitose (aumento de 1000x).


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Segurana:
Devido proximidade da objetiva de 100x com a lamnula, a focalizao do corte dever ser feita com muito
cuidado, dando preferncia focalizao fina, pois a lmina pode se romper caso a objetiva encoste nela. Encaixe
primeiro a objetiva de menor aumento e ajuste o foco. Depois passe para a objetiva seguinte, de maior aumento (use
leo de imerso para a objetiva de 100x).

Espera-se que as clulas estejam coradas, com os cromossomos destacados por uma colorao mais forte. Nem
todas as clulas da raiz estaro em mitose. Muitas estaro na intrfase, sendo necessrio que toda a extenso do
corte seja pesquisada.

Caso as clulas no apaream definidas ou caso estejam escuras ou sobrepostas, impedindo a visualizao de
imagens ntidas e claras, provvel que o corte da raiz tenha ficado muito grosso. Tente movimentar a lamnula,
girando-a um pouquinho enquanto a pressiona contra a lmina.
Se no encontrar clulas em mitose, prepare outra lmina, certificando-se de que seja utilizado um fragmento
situado a apenas 1 ou 2 mm do pice da raiz.
Voc pode mostrar esquemas das fases da mitose para discutir as imagens visualizadas e retomar o contedo. No
software Lminrio virtual 4 Diviso Celular, so encontrados cortes de cebola e de testculo de gafanhoto que podem ser utilizados para complemento da discusso.
De acordo com a disponibilidade de material (microscpio, lmina etc.), a classe pode ser dividida em grupos,
de modo que cada grupo deve se encarregar do preparo de uma lmina. Depois, os componentes dos grupos faro
as observaes ao microscpio. Caso a quantidade de material seja pequena, aconselhvel que voc, professor,
prepare a lmina, demonstrando todos os passos para que haja maior tempo para os alunos fazerem as observaes
ao microscpio.

3.Sugesto de roteiro de trabalho


A seguir, sugerimos um roteiro de trabalho para ser utilizado na ntegra ou adaptado que poder ser entregue aos
alunos. Ele contm todas as orientaes necessrias para o desenvolvimento da aula prtica e tambm algumas questes que auxiliaro no encerramento da atividade.

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PRTICA LABORATORIAL DE BIOLOGIA


Preparo de lmina para observao de mitose de clula vegetal ao microscpio
ptico
Nome: __________________________ N_____ Srie: _____ Data: ________
Objetivo da aula prtica
Preparar uma lmina histolgica de raiz de cebola para a visualizao das fases da mitose ao microscpio ptico.

Protocolo experimental
Materiais
Razes novas de cebola (preparar uma semana antes da aula);
Soluo de orcena actica 1%;
Copos, potes de plstico, garrafa PET ou frasco de lcool cortados;
Palitos de dente;
Lminas;
Lamnulas;
Pinas;
Lmina de barbear;
Pipetas Pasteur ou conta-gotas;
Papel absorvente, papel toalha ou papel filtro;
Placa de Petri ou pires de material resistente ao calor;
Lamparina a lcool, vela, bico de Bunsen ou fogareiro;
Pina de madeira;
Microscpio ptico que proporcione uma ampliao total de pelo menos 100x;
leo de imerso.

Procedimento
1. Corte trs ou quatro razes da cebola preparada previamente em tamanhos de 1 a 2 cm a partir da
regio apical e as transfira para uma placa de Petri, contendo orcena actica (corante);
2. Aquea a placa de Petri com uma lamparina a lcool at a emisso de vapores, sem deixar ferver;
3. Pegue as razes com uma pina de ponta fina, coloque-as sobre uma lmina limpa e seccione a regio
do meristema, que representa um pedacinho de cerca de 2 a 3 mm a partir do pice. Despreze o resto
da estrutura;
4. Pingue uma gota de orcena actica sobre o meristema seccionado e, com muito cuidado, cubra o
material com a lamnula;

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5. Com um pedao de papel absorvente, elimine o excesso de corante;


6. Cubra a lamnula com o papel absorvente e, cuidadosamente, pressione com o polegar at visualizar uma camada nica de clulas ao microscpio ptico;
7. Coloque a lmina no microscpio e visualize as clulas em diviso mittica;
8. Procure as clulas em diviso mittica; selecione uma e a desenhe no espao abaixo.

Aumento:_____

(Se o trabalho estiver sendo realizado em grupo, procurar trs clulas em diferentes fases da mitose.
Desenhar cada uma delas).
9. Qual(is) fase(s) da mitose est(o) representada(s) e por qu?

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4. Referncias complementares
1. Animaes em Biologia Celular. Possui tpicos variados como DNA, mitose e meiose, apresentados atravs de
animaes computacionais.
MARQUES-SANTOS, L. F. Animaes em Biologia Celular. In: Biblioteca Digital de Cincias, 11. Fevereiro/2008.
Disponvel em: http://www.ib.unicamp.br/lte/bdc/visualizarMaterial.php?idMaterial=545.
Acesso em: 27/01/2009
2. Cuidados Bsicos com Microscpios pticos. Esta referncia informa medidas bsicas para conservao de
microscpio ptico; elas vo desde a simples limpeza de lentes at os cuidados com o armazenamento, transporte
e a troca de lmpadas.
MACEDO, A et al. Cuidados Bsicos com Microscpios pticos. In: Comunicado Tcnico, n 3. Novembro/1996.
Disponvel em: http://www.cnpdia.embrapa.br/publicacoes/download.php?file=CT03_96.pdf.
Acesso em:20/01/2009
3. Orcena e fibras elsticas. Artigo sobre a origem e a ao da orcena em tcnicas histolgicas.
BARCAT, J.A. Orcena y fibras elsticas. In: Medicina [Buenos Aires], vol. 63, n 5, p. 353-356. Setembro/outubro
de 2003.
Disponvel em: http://www.scielo.org.ar/scielo.php?pid=S0025-76802003000500015&script=sci_arttext.
Acesso em:20/02/2009
4. Exerccio online da Fundao Centro de Cincias e Educao Superior a Distncia do Estado do Rio de Janeiro (CECIERJ). Compara as diferenas entre as fases da mitose e da meiose.
Disponvel em: http://objetoseducacionais2.mec.gov.br/bitstream/mec/2950/1/exercicio_mitose_meiose.swf.
Acesso em: 15/05/2009
5. Animao da editora Mcgrall-Hill. Narrada em ingls (o som pode ser retirado), bastante didtica e autoexplicativa.
Disponvel em: http://highered.mcgraw-hill.com/olc/dl/120073/bio14.swf.
Acesso em: 15/05/2009
6. Video que mostra a mitose de uma clula animal.
Disponvel em: http://www.youtube.com/watch?v=s1ylUTbXyWU.
Acesso em: 15/05/2009
7. Vdeo que mostra a mitose de uma clula vegetal.
Disponvel em: http://www.youtube.com/watch?v=0oJZDKdperU.
Acesso em:15/05/2009
8. Animao grfica que mostra as fases da mitose do ponto de vista do interior da clula.
Disponvel em: http://www.youtube.com/watch?v=2WwIKdyBN_s.
Acesso em: 15/05/2009

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FICHA TCNICA
Universidade Estadual de Campinas
Reitor: Fernando Ferreira Costa.
Vice-reitor: Edgar Salvadori de Decca.
Pr-reitor de ps-graduao: Euclides de Mesquita Neto.
Instituto de Biologia
Diretora: Shirlei Maria Recco Pimentel.
Diretor Associado: Flavio Antonio Mas dos Santos.

EXECUO

Projeto EMBRIAO
Coordenao geral: Eduardo Galembeck.
Coordenao de Mdia - Audiovisuais: Eduardo Paiva.
Coordenao de Mdia - Software: Eduardo Galembeck.
Coordenao de Mdia - Experimentos: Helika A. Chikuchi, Marcelo J. de Moraes e Bayardo B. Torres.
Apoio Logstico/Administrativo: Eduardo K. Kimura, Gabriel G. Hornink, Juliana M. G. Geraldi.

OBJETO DE
APRENDIZAGEM

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Coordenao do Experimento: Bianca Caroline Rossi Rodrigues.
Redao: Bianca Caroline Rossi Rodrigues, Maurcio Aurlio Gomes Heleno, Helika A. Chikuchi e
Eduardo Galembeck.
Pesquisa: Bianca Caroline Rossi Rodrigues, Maurcio Aurlio Gomes Heleno e Roney Vander dos
Santos.
Reviso de Contedo: Daniela Kiyoko Yokaichiya, Helika A. Chikuchi e Cristiane Zaniratto.
Testes de Bancada e Captura de Imagens: Gislaine Lima Marchini e Roney Vander dos Santos.
Edio de Imagem: Florencia Mara Pin Pereira Dias.
Adequao Lingustica: Lgia Francisco Arantes de Souza e Raquel Faustino.
Diagramao: Thais Goes.

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Laboratrio de Tecnologia Educacional


Departamento de Bioqumica
Instituto de Biologia - Universidade Estadual de Campinas UNICAMP
Rua Monteiro Lobato, 255
CEP 13083-862, Campinas, SP, Brasil

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