Identificacin bacteriana: Taxonoma filogentica. Evolucin microbiana.

La fisiotaxonoma consiste en la asignacin de nombre a los microorganismo

para poder organizarlos de cierta forma e identificarlos a partir de 3 dominios
bases (Arqueobacterias, Bacterias y eucariotas)
Taxonoma = Clasificacin
La taxonoma se basa en criterios (algunos relacionados con la evolucin) y
caractersticas en comunes con el fin de identificar sus propiedades para un
mejor entendimiento funcional y estructural de los M.O.
En qumica un buen ejemplo de taxonoma es la tabla peridica, donde los
elementos se ordenan en funcin de su configuracin electrnica.
La teora evolutiva es una de las bases de la taxonoma por agrupamientos de
especies en funcin de algn ancestro en comn y su similitud.
La filogenia es la utilidad de las clasificaciones.
Para poder hacer taxonoma se postul como base al ribosoma, cuya funcin es
la sntesis e protena y est compuesto mayoritariamente por RNAr que tiene
una estructura compleja y con ciertas secuencias variables y que no son
constantes utilizadas para hacer comparaciones entre distintas especies y a
partir de esto se definieron los 3 dominios nombrados anteriormente.
El dominio procarionte contiene a los microorganismos carente de ncleo
donde las arqueas no forman parte de agentes patgenos hasta la fecha. En
cuanto a dominio las clulas eucariotas son de mayor tamao que las clulas
procariotas y poseen organelos, dentro de ellos se puede destacar a la
microcondria y al cloroplasto quien poseen ADN y ribosomas, es por lo
cual la informacin gentica de una clula no solo est contenida en su ncleo,
sino tambin en estos organelos, y es por lo mismo que se cree que estos eran
microorganismos independientes que fueron endocitados por las celulas
eucariotas y parte de su ADN se integro al ncleo (Teora endosimbitica de la
evolucin) el cual es un proceso que se cree que aun ocurre. Un respaldo de lo
anterior es observar que es lo que ocurre con la actividad de la mitocondria y el
cloroplasto cuando son expuestos a algn antibitico. Experimentos han
demostrado que sus actividades disminuyen. Otro respaldo es la similitud de
ADN de estos organelos con el de las bacterias.
En cuanto al origen de la vida se cree que el primer organismo apareci
alrededor de 1.000 millones de aos y en ese mismo momento se puso en
curso el proceso de evolucin. Muchas bacterias han evolucionado
rpidamente, incluso se han llegado a hacer experimentos con respecto a esto
y una de los aspectos evolutivos de estos M.O. es la tolerancia ante ciertos
frmacos que es justamente una de las areas de estudio para el desarrollo de
frmacos.
Analisis de M.O.

Eventos previos :
1. Toma de muestra:
Flora bucal: Se toma muestra mediante un isopo
Punsin Lumbar: Involucra rotura de huesos para tomar LCR
Muestra de Sangre
Orina
2. Rotular de buena manera la muestra con la informacin correspondiente y
situarla en un contenedor adecuado
3. Anlisis de laboratorio
Se procede a realizar distintas pruebas, dentro de ellas se recurre con
frecuencia al microscopio con una tinsin previa (colorear los M.O.)
De acuerdo con el anlisis con microscopio se puede hacer dos tipos
a)Examen directo: Donde el medio de refraccin de la luz es un aceite y no el
aire y permite alcanzar un aumento mejor y la muestra debe ser teida. La
tinsion mas frecuente es la tinsion de Gram (Clsica, de mayor utilidad)
b) Microscopa de campo oscuro: Se basa en hacer incidir la luz en distintos
ngulos laterales para obtener un mayor grado de resolucin o calidad
Otras tcnicas de identificacin bacteriana:
Baciloscopa
Muy utilizado para el diagnostico de Tuberculosis.
1. Se le pide al paciente que tosa en un recipiente para recoger su
muestra,
2. La muestra se vierte a un porta-objeto
3. Tratamiento con acido para luego teir con colorantes (ya que en este
situacin la bacteria es capaz de retener el colorante).
4. Finalmente se acompaa de una tinsion azul para revelar la existencia
de restos celulares.
Siembra de M.O.
Medios selectivos: Impide el crecimiento de algunos M.O. ya que este
medio contiene pptidos y protenas que solamente favorece la
sobrevivencia de algn tipo de M.O. en especial.
Medios indicadores: Bacterias crezcan y cambien de color dependiendo
de la especie
Tipos de Medios
Lquido: Se denominan caldo de cultivo.

Slido: Se aplica un polmero llamado

Agar-agar (se obtiene a partir de las
algas) que ayuda aislar la bacteria con
la ayuda de una asa de platino que
contiene un pequeo circulo, se
sumerge en la muestra y se transporta a un porta objeto .
Posteriormente se obtiene las bacterias que han crecido independiente
una de la otra (Separadas). Existen 2 tipos de Agar-agar:
Agar chocolate: Consiste en el mismo polimero enriquecido con sangre de
cordero a alta temperatura, donde los glbulos rojos se lisan y liberan su
contenido nutritivo al medio para bacterias "exigentes", denominadas
bacterias fastidiosas.
Agar Sangre: A menor temperatura para no daar los glbulos rojos ya que
las bacterias sembradas en este tipo de medios liberan sustancias para
producir la lisis de los eritrocitos reconocidas mediante zonas claras mas del
porta-objeto con respecto a la sangre contenida en l. Este medio sirve para
identificar bacterias hemolticas.
Medio diferencial: Un ejemplo de ellos es sembrar bacterias en un medio
de lactosa y aquellas que aprovechan este polisacrido para su
crecimiento adopta un color debido al pH cido que se genera y aquellas
que no la utilizan adoptan otro color diferente
Fisiotaxonoma bacteriana
Asignacin de un nombre para la bacteria tomando como referencia la
capacidad de esta para metabolizar ciertos compuestos o nutrientes al igual
que en una marcha analtica

En clinica se ocupan indicadores. Consiste en una barra donde se aplican

distintos nutrientes o compuestos (cada zona adopta un color especifico) y
todas estas zonas son cultivadas con el mismo M.O. Los cambios de colores se
traducen en un cdigo asociado a una secuencia de nmeros el cul se ingresa
en un programa computacional y este programa indica el nombre de la
bacteria. Esto se utiliza para llevar a cabo un tratamiento adecuado contra la
bacteria.
Identificacin por anticuerpos (Inmunoglobulina)
Reconocimiento altamente especifico. Uno de ellos es por aglutinacin. La
bacteria se resuspende en suero fisiologico y se agrega el anticuerpo. Si hay
reconocimiento se observara la formacin de grumos que correspondera a la
unin del anticuerpo con su antgeno (Conglomerado que precipita)
Test
de
ELISA,
"Enzyme
Linked
Immunoabsorbent
Assay"
(Ensayo
inmunoenzimtico ligado a enzimas)
Consiste en una placas solidas plsticas cargadas
positivamente las cuales se someten al siguiente
tratamiento
1. Como la placa est cargada positivamente,
las bacterias se anclan a la placa debido a la
interaccin de esta con las protenas
contenidas en la superficie del M.O.
2. Se vierte sobre la placa alguna proteina para
rellenar las espacios cargados positivamente
3. Se vierte un anticuerpo especifico que se unir a la bacteria.
4. Se vierte un segundo anticuerpo que reconoce al primer anticuerpo y
que est asociado a una enzima. Esta enzima cataliza una reaccin que
genera color. Este color muchas veces se puede cuantificar para conocer
la cantidad de bacteria presente
Otra "versin" del test de ELISA es la inmunofluorescencia, que consiste en la
asociacin a un compuesto fluorescente en lugar de una enzima la cual emite
color al unirse con su antigeno, evento perceptible al microscopio.
Electroforesis
Consiste en la ruptura de la bacteria para producir una liberacin de su
contenido proteico, estas protenas se vierten sobre un gel, se aplica un campo
elctrico y las protenas se ordenan de acuerdo a su peso molecular.
Posteriormente las protenas se tien y se obtienen bandas.

Muchas veces el bandeo no permite distinguir una bacteria de la otra (debido a

la cantidad de proteinas) por lo cual se procede a una tinsion ms especifica
con anticuerpos (Western blot).
Fagotipificacin
Consiste en el reconocimiento de las bacteria mediante
su lisis. Estas bacterias se siembran y son infectadas
por un tipo de virus llamado Bacterifago, el cual
produce esta muerte de la bacteria. El anlisis
posterior se trata de identificar estas zonas donde
hubo lisis ya que es en ellas donde ocurri algn
reconocimiento especifico.

Uso de la hibridacin de ADN

Otra forma de reconocimiento bacteriano es a partir del ADN de una bacteria
identificada:

1. El ADN conocido se disocia y solamente una de las dos hebras se une a

un compuesto fluorescente. Esta molecula de ADN unido a un
compuesto fluorescente es lo que se llama "sonda"
2. Por otro lado, la muestra "problema" que es la bacteria en cuestion se
adhiere a un papel de microcelulos
3. El papel de microcelulosa junto a la bacteria se sumerge a una solucin
con pH extremadamente bsico
4. El ADN a ese pH se disocia

5. Se agrega la "sonda" y donde hubo hibridacin se emite fluorescencia

gracias al compuesto fluorescente.
Southern Blot
Reconocimiento
fluorescentes.

de

ADN

con

anticuerpos

asociados

compuestos

Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)

Tcnica que sirve para ampliar una secuencia de ADN para su estudio
obtenindose mltiples copias a partir de poca muestra, el cual optimiza la
identificacin bacteriana.