El estrs oxidativo se incrementa en el suero de Pacientes mexicanos con esclerosis

mltiple recurrente-remitente
Resumen. Objetivo: Determinar los marcadores de estrs oxidativo en el suero de pacientes
con esclerosis mltiple remitente-recurrente.
Mtodos: Muestras de sangre de controles sanos y 22 pacientes 15 mujeres (7 aos de edad
de 20 a 30 y 8 eran> 40 aos edad) y 7 hombres (5 edades comprendidas de 20 a 30 y 2
eran> 40 aos) que cumplan los criterios de McDonald y clasificados como Recadaremisin de esclerosis mltiple de acuerdo con Lublin fueron recogidos por los marcadores
de estrs oxidativo cuantificacin.
Resultados: metabolitos del xido ntrico (nitratos / nitritos), productos de peroxidacin de
lpidos (malondialdehdo ms alquenales 4-hidroxi), y actividad de la glutatin peroxidasa
se incrementaron significativamente en el suero de sujetos con esclerosis mltiple
remitente-recurrente en comparacin con la de los controles sanos. Estos datos apoyan la
hiptesis de que la esclerosis mltiple es un componente estrechamente vinculado
al estrs oxidativo.
Palabras clave: esclerosis mltiple, el estrs oxidativo, xido ntrico, la peroxidacin
lipdica, glutatin peroxidasa

La esclerosis mltiple (MS) es uno de los trastornos crnicos y discapacitantes ms

comunes del sistema nervioso central (CNS) en adultos jvenes. Poco se sabe sobre su
etiologa, aunque la evidencia indica que la EM es un rasgo complejo causado por la
interaccin de factores genticos y ambientales. Varios patrones de MS remisin
exacerbacin se han identificado y descrito; MS normalmente comienza como una
enfermedad recurrente con episodios de disfuncin neurolgica que duran varias semanas,
seguido de una mejora parcial o completa (recidivante - EM remitente). A se obtiene una
etapa de acumulacin insidiosa ms tarde de la discapacidad [29].
Hay evidencia creciente de que la esclerosis mltiple no slo se caracteriza por reacciones
inflamatorias mediadas inmunes, sino tambin por procesos neurodegenerativos
[10]. Rfagas de inflamacin focal se cree que la base de la recada episdica, - remitiendo
fase de la EM, mientras que la prdida axonal y la neurodegeneracin son responsables de
sntomas progresivos, que son la causa predominante de la discapacidad [11]. En las
enfermedades neurodegenerativas, la prdida neuronal est mediada por el estrs oxidativo,
que constituye una va comn final txico. Se ha planteado la hiptesis de que
fase de recada-remisin de la EM est mediada por el estrs oxidativo [9]. Algunos
marcadores de estrs oxidativo, tales como: plasma hidroperoxides de ster de colesterilo
[6]; nitrato y nitrito en suero [8] y leucocitos de sangre [14]; dieno conjugados en
leucocitos de sangre perifrica son mayores en los pacientes con EM que los sujetos control
sanos. Adems, una disminucin significativa en el nivel del eliminador natural del
peroxinitrito, cido rico [19,25] se ha descrito en pacientes con EM. Por otro lado, la
actividad de la glutatin peroxidasa en la EM sigue sin estar claro, por ejemplo, se ha

informado de una disminucin de la actividad enzimtica en clulas de la sangre [13,16,26],

aumento de la actividad
[30], o una actividad normal en linfocitos, granulocitos y plaquetas de pacientes con EM
[27]. La contradictoria informaron datos para la actividad de la glutatin peroxidasa nos
impulsan a investigar esta actividad y los marcadores de estrs oxidativo (metabolitos del
xido ntrico y productos de peroxidacin lipdica) en el suero de los pacientes mexicanos
con esclerosis mltiple remitente-recurrente.
2. Material y mtodos
2.1. Pacientes
La prevalencia de SM vara significativamente
en el fondo gentico del paciente [3]. La EM es
considerada una baja prevalencia de la enfermedad en Mxico, su
caractersticas se han descrito en los estudios de varios geogrfica
regiones del pas, notablemente la clnica
perfil de la enfermedad es similar a la reportada en
otros pases y el patrn observado correspondi
a la encontrada en las latitudes del norte [4,28]. Las muestras de sangre
se obtuvieron de 22 pacientes que asistieron a la
sala de consulta en el hospital (Unidad Mdica de Alta
Especialidad - Hospital de Especialidades, Centro
M'edico Nacional de Occidente del Instituto Mexicano
del Seguro Social). Ninguno de los pacientes estaban experimentando
una recada aguda en el momento de la toma de muestras de sangre.
Se obtuvo consentimiento informado del paciente
por un personal mdico. El estudio fue aprobado por el
UMAE-HE revisado bordo y se llev a cabo de conformidad
con los principios de la declaracin de Helsinki
en su versin revisada de 2000. El diagnstico de la EM se realiz siguiendo
Los criterios revisados de McDonald 2005 [17,20] y los pacientes fueron clasificados con
recadas o remisiones
Esclerosis mltiple en consecuencia con Lublin [15]. Pacientes
y los voluntarios fueron agrupados por sexo y edad. En
Grupo MS, haba 15 mujeres (7 aos de edad de 20 a 30
y 8 eran> 40 aos) y 7 hombres (5 aos de edad a partir del 20
a 30 y 2 fueron> 40 aos de edad). La edad media de la
Grupo de MS fue de 32 aos. Ninguno de los pacientes seleccionados
y los sujetos de control estaba tomando antioxidantes.
El ayuno muestras de sangre de pacientes y sujetos control
se obtuvieron 09:00-11 a.m.. Sangre
se extrae de una vena en la fosa antecubital por un 19calibrar la aguja. El torniquete fue puesto en libertad con cuidado
despus de su aplicacin y la sangre se recogi. Suero
se obtuvo mediante una tcnica estndar. La concentracin de protenas
se determin por el mtodo de Bradford utilizando
albmina de suero bovino como un estndar [1].

2.2. xido ntrico

La liberacin de xido ntrico se determin por espectrofotometra
mediante la medicin de la acumulacin de su establo
productos de degradacin, nitritos y nitratos. Cuantificacin
de estos metabolitos en suero se realiz utilizando un comercial
paquete (Calbiochem xido ntrico Assay Kit,
colorimtrico 482650). En pocas palabras, el nitrato a nitrito de conversin
se hizo utilizando nitrato reductasa. Nitrito total
A continuacin se determina espectrofotomtricamente mediante el uso de la
Reaccin de Griess. Los resultados se expresan como M / mL.
2.3. La peroxidacin lipdica
Los sueros fueron probados por la peroxidacin lipdica utilizando
un Kit de Oxford Biomedical Res Inc. (producto
No FR 12). Cada medicin se repiti cuatro
veces. El kit contiene un reactivo cromognico (Nmethyl2-fenilindol) que reacciona con el lpido
productos de peroxidacin de malonaldehdo (MDA) y 4Hidroxialquenales (4-OHA) a 45C produciendo un establo
cromforo con absorbancia mxima a awavelength
de 586 nm [4]. Los resultados se expresan como nmolMDA + 4OHA (mg de protena) -1.
2.4. Actividad de la glutatin peroxidasa
Actividad glutatin peroxidasa se determin de acuerdo
con el mtodo descrito anteriormente [7], que
se basa en la oxidacin del glutatin reducido (GSH)
en presencia de cumeno, glutatin reductasa y
NADPH. La actividad enzimtica fue referido como M de
NADPH oxidado min-1 (mg de protena) -1. 2.5. El anlisis estadstico
Los datos se expresan como valores medios SEM. Diferencias
en marcadores de estrs oxidativo se evaluaron con
el nonparametricWilcoxon firmado rank test para emparejado
datos. Un valor de p <0,05 fue considerado estadsticamente
significativo.
3. Resultados y discusin
Los radicales libres (xido ntrico, superxido radical, etc.)
la produccin conduce a estrs oxidativo cuando hay
un desequilibrio en el estado redox de una clula [23].
Los radicales libres son generalmente de corta duracin y, por tanto, indirecta
se requieren mtodos de deteccin. Estndar
mtodos de deteccin son: resonancia de spin electrnico,
sustancias reactivas al cido tiobarbitrico, deteccin
de malonaldehdo, y otros productos de oxidacin
a partir de cidos grasos poliinsaturados (tales como 4hydroxynonenal), la medicin de productos de oxidacin
tales como isoprostanos, 8-hydroxydeoxyguanosine, metionina
sulfxido, etc. [21]. En este trabajo hemos medido

productos de oxidacin de lpidos (malondialdehdo plus

4-hidroxialkenals) y metabolitos de xido ntrico (nitratos /
nitritos) como una medida de la lesin oxidativa. Malondialdehdo
y 4 hidroxialkenals son abundantes difundible
productos cree que contribuyen significativamente a la
efectos deletreos de la peroxidacin lipdica en los tejidos. Reactivo
aldehdos a partir de la peroxidacin lipdica aducto de un nmero
de nuclefilos celulares, incluyendo protenas, Nucleic
cidos, y algunos lpidos [5]. Por otro lado, ntrico
xido tiene un juego primario un papel en la fisiopatologa de
SRA. En las lesiones de EM activos, microglia y astrocitos activados
expresar la enzima inducible sintasa del xido ntrico
lo que les permite producir grandes cantidades de
xido ntrico [2].
La Figura 1 muestra los niveles sricos de metabolitos de ntrico
xido (A), productos de peroxidacin de lpidos (B) en sana
sujetos emparejados y pacientes con recada-remisin
esclerosis mltiple. En las muestras de suero de pacientes
estos valores son significativamente mayores que en sano
controles (A-B). Los aumentos en la peroxidacin lipdica
productos y metabolitos del xido ntrico fueron 1,6 y 2,3
veces, respectivamente, en comparacin con muestras de
los sujetos de control; muestra un alto estrs oxidativo en
suero de pacientes con EM. Por otro lado, la actividad
peroxidasewas de glutatin aument significativamente
(1,3 veces) en el suero de pacientes con EM con la de saludable
los controles (Fig. 1C). Fig. 1. catabolitos xido ntrico (A), productos de peroxidacin de
lpidos (B)
y la actividad peroxidasa de glutatin (C) en el suero de controles sanos
y los pacientes con esclerosis mltiple remitente-recurrente. Los asteriscos
indicar una diferencia significativa de los pacientes con esclerosis mltiple
(P <0,05). La barra indica la media S.E.
Nivel de cido rico en suero inferior en pacientes con EM ha sido
informado [19]. Los niveles ms altos de metabolitos de xido ntrico
encontrado en este trabajo podra ser relevante en el desarrollo de la EM
si hay una baja concentracin de suero
acido urico. La evidencia reciente sugiere que el xido ntrico
contribuye al proceso de la enfermedad de la esclerosis mltiple por la sangre cerebro desglose barrera y por el dao tisular directa,
el bloqueo de conduccin axonal y por axonal inducir
degeneracin y formacin de placa [12,24]. Adicionalmente,
peroxinitrito (el producto de reaccin de xido ntrico
y el anin superxido) mediar varios potencialmente destructiva
reacciones qumicas, incluyendo la nitracin de tirosina
y la peroxidacin lipdica y sus efectos son consistentemente
asociado con lesiones activas y durante el remitente
fase. Peroxinitrito participa a neurona y

dao de oligodendrocitos en asociacin con inflamatoria

procesos [9]. Adems, la peroxidacin lipdica puede
desencadenar el proceso de apoptosis, la activacin de la intrnseca
va el suicidio presente en todas las clulas [18].
El papel de la glutatin peroxidasa en los tejidos perifricos
de los pacientes con EM que no queda claro ya que la contradictoria
los datos relativos a su actividad [13,16]. El glutatin
peroxidasa es una enzima eliminador de radicales libres, por lo tanto
es una parte importante del sistema de defensa antioxidante celular. El aumento de su
actividad encuentra en
suero de sujetos con EM podra ser una respuesta a oxidativo
estrs con el fin de minimizar la lesin celular. Los estudios estn en
progreso, en nuestro laboratorio, para fortalecer estas observaciones
y para investigar el papel de enzimtica mitocondrial
actividades en la produccin de especies reactivas de
SRA.
Las OFM etiologa no ha sido an completamente aclarada;
sin embargo se cree que el entorno inflamatorio
en lesiones desmielinizantes conducen a la generacin de
Los radicales libres de oxgeno y de nitrgeno, as como proinflamatoria
citoquinas que contribuyen al desarrollo
y la progresin de la enfermedad [22,24]. La produccin
de las especies reactivas de oxgeno y nitrgeno es un inherente
propiedad de las clulas inmunes activadas. Adicionalmente,
especies reactivas del oxgeno estn involucrados en la fagocitosis
y la degradacin de la mielina, el dao de oligodendrocitos,
y la degeneracin axonal [23]. La inflamacin puede conducir a
estrs oxidativo y a la inversa. Por lo tanto, el estrs oxidativo
y la inflamacin estn involucrados en una autoperpeta
ciclo.
La informacin nueva proporcionada por este trabajo es que
estrs oxidativo se incrementa en el suero de pacientes con EM
incluso cuando no tienen una recada en la enfermedad.
Sea o no este fenmeno refleja un proceso similar
que ocurre en los sujetos del sistema nervioso central OFM
podra ser una cuestin de controversia. Sin embargo, el
existencia de este fenmeno no puede ser minimizada,
ya que el estrs oxidativo es una importante va de dao celular.