Avaliação Biofarmacotécnica

UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO
CENTRO DE CINCIAS DA SADE

DEPARTAMENTO DE CINCIAS FARMACUTICAS
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM CINCIAS FARMACUTICAS
TESE DE DOUTORADO
Avaliao biofarmacotcnica do Efavirenz um frmaco

classe II (SCB)
DANILO CESAR GALINDO BEDOR
RECIFE-PE
2011

TESE DE DOUTORADO
Avaliao biofarmacotcnica do Efavirenz um frmaco

classe II (SCB)
Tese apresentada ao Programa de PsGraduao em Cincias Farmacuticas do

Centro
de
Cincias
da
Sade
da
Universidade Federal de Pernambuco, para

avaliao como requisito para obteno do
ttulo de Doutor.
Doutorando: M.Sc. Danilo Csar Galindo Bedor

Orientador: Prof. Dr. Davi Pereira de Santana
Recife, 2011
Bedor, Danilo Cesar Galindo

Avaliao biofarmacotcnica do Efavirenz um
frmaco classe II (SCB) / Danilo Cesar Galindo
Bedor. Recife: O Autor, 2011.
184 folhas: il., fig.; 30 cm.
Orientador: Davi Pereira de Santana.
Tese (doutorado) Universidade Federal de
Pernambuco. CCS. Cincias Farmacuticas, 2011.
Inclui bibliografia e apndice.
1. AIDS. 2. Efavirenz.
3. Quality by Design.
4. Bioequivalncia. I. Santana, Davi Pereira de.
II.Ttulo.
615.4
CDD (20.ed.)
UFPE
CCS2012-09

Reitor
Ansio Brasileiro de Freitas Dourado
Vice Reitor
Slvio Romero Marques
Diretor de Cincias da Sade CCS
Jos Thadeu Pinheiro
Vice Diretor do Centro de Cincias da Sade - CCS
Mrcio Antnio de Andrade Coelho Gueiros
Chefe do Departamento de Cincias Farmacuticas
Dalci Jos Brondanni
Vice Chefe do Departamento de Cincias Farmacuticas
Antonio Rodolfo de Faria
Coordenador do Programa de Ps-Graduao em Cincias Farmacuticas
Nereide Stela dos Santos Magalhes
Vice - Coordenador do Programa de Ps-Graduao em Cincias Farmacuticas
Ana Cristina Lima Leite
minha me, irmos, amigos e familiares
AGRADECIMENTOS
Famlia:
Em primeiro lugar agradecer minha me pela luta durante a vida para proporcionar a mim
e meus irmos uma vivncia de muitas alegrias, ensinamento e por ter se desdobrado para
nos dar uma educao escolar alm da domstica.
Aos meus irmos (Bedor, Charles e Cheila) por terem me repassado exemplos de vida e
uma convivncia feliz durante minha criao e ao me av materno Elias Castor (in
memoriam) por ter cuidado de mim e transferido valores j na minha primeira infncia.
OBRIGADO a vocs, parte desta conquista devo a vocs.
A minha namorada Noely, que vem todos os dias me dando foras e me ajudando, sem ela
essa reta final teria sido bem mais difcil. Muito obrigado por tantos momentos felizes
juntos,Te amo, minha princesa.
Mestres:
Serei eternamente grato aos mestres que passaram por minha vida, sendo eles acadmicos
ou da vida social. Tarciso Batista, treinador, que me ensinou a ter a disciplina de recorrer
aos conceitos de base quando se quer conquistar algo na vida. Aos mestres Eduardo
Oliveira, Iram Mundim, Luis Renato pelos ensimentos tcnicos que me trouxeram at esse
momento. Ao meu orientador de iniciao cientfica Prof. Dr. Pedro Rolim pela grande
contribuio na minha formao e pelos bons momentos que desfrutei de sua companhia.
Ao Prof. Eric Beyssac, ao Prof. Jean-Michel Cardot e todos ERT-CIDAM na Frana onde me
acolheram de forma extraordinria e pelos ensinamentos cientficos e momentos de muita
aprendizagem.
Ao meu amigo e orientador, mestrado e doutorado, Davi Santana pelos mais de 7 anos de
tima convivncia acadmica e de vida pessoal. Foram muitos os ensinamentos filosficos e
cientficos.
Amigos:
Dentre todos que me cercam de boas energias no poderia deixar de citar alguns nomes em
especial: Augusto e Gustavo amigos e companheiros de primeira ordem desde a infncia.
Lamartine e Mnica, Fischer, Fbio, Bengno e Lvio, grandes figuras humanas e que ha
tanto tempo convivemos juntos. Amigos de diretrio acadmico Lamartine, Fbio e Ana
Paula, tempos de grande aprendizagem. Amigos de grandes empreitadas como Osman,
Papito, Jomir, Marco, Marcelo(s), Paulinho, Celsinho, Jnior Cear, Modinha, Xico,
Thiago,...... e tantos outros companheiros.
CBIO-NUDFAC e B&S:
Agradeo a participao e apoio durante toda a jornada de todos que compem e
compuseram o CBIO-NUDFAC: Carlos Eduardo, Felipe, Thayse, Luis, Luis Renato, Breno,
Marema, Henrique, Vanessa, Katiana, Ricardo Galindo, Jovanka, Priscila, Raquel, Talita,
Jlio, Iguaci, Margarete, Diego, Levi, Homero, Sardon, Virna, Amanda, Januria, Hosana,
Leila, Carlos Csar, Andr Correia, Andr Luis, Marlia e Znia. Obrigado a todos.
Aos funcionrios e docentes do Departamento de Cincias Farmacuticas da UFPE
Aos membros da banca examinadora (Fabio, Eduardo, Dalmora, Pedro e Davi)
s empresas parceiras que possibilitaram experimentos (LAFEPE, Cristlia, SINC, IDEF,
CETENE, DQF, NCQMC, LTM-UFPE)
impossvel para um homem aprender aquilo que ele acha que j sabe.
Epteto (Filsofo grego)
No h nada de nobre em sermos superiores ao prximo. A verdadeira nobreza
consiste em sermos superiores ao que ramos antes.
Esopo (Fabulista grego)
Resumo
RESUMO
A sndrome da imunodeficincia adquirida (AIDS) a manifestao da infeco pelo
vrus da imunodeficincia humana (HIV) que leva, em mdia, oito anos para o seu
aparecimento.
tratamento
da
AIDS
conta
com
diferentes
classes
de
medicamentos que atuam em fases distintas do ciclo de replicao. O efavirenz

(EFV), inibidor no nucleosdico da transcriptase reversa, o primeiro frmaco antiHIV aprovado para utilizao uma vez ao dia, devido a sua alta meia vida. O
efavirenz um produto descrito fisicamente com pelo menos 5 (cinco) diferentes
polimorfos e de classificao biofarmacutica II. O presente estudo teve o objetivo
de realizar ensaios de caracterizao do p, em seu estado slido, de trs diferentes
lotes de insumo farmacutico ativo, ensaios de solubilidade e dissoluo intrnseca
alm de avaliar perfil de dissoluo como ferramentas de Quality by Design e
estudar a biodisponibilidade comparada entre um medicamento teste e o de
referncia. A caracterizao fsico-qumica foi realizada atravs de ensaios de
potncia, ensaios em nvel molecular, anlises em nvel de partculas e anlise da
solubilidade e dissoluo em meios clssicos e biorrelevantes. A bioequivalncia foi
realizada atravs de estudo aberto, aleatrio e cruzado 2 x 2 com washout de 15
(quinze) dias. A caracterizao mostrou resultados com semelhana em nvel
molecular, variao na potncia, similaridade em nvel de partculas e desvios em
nvel de aglomerado de partculas que levou s diferenas encontradas nos
resultados de solubilidade e velocidade de dissoluo. O estudo de equivalncia
farmacutica e de perfis de dissoluo utilizando aparato 4 e meios biorrelevantes
no foram discriminantes o suficiente para prever as diferenas encontradas no
ensaio de bioequivalncia. Desta forma imperativo que a qualidade de insumos
farmacuticos ativos do EFV seja avaliada de forma ampla, visando a garantia da
segurana e eficcia do tratamento de pessoas infectadas pelo HIV, para isso devese realizar ensaios alm dos descritos nas farmacopias. O presente estudo
mostrou a importncia da incluso de dados cientficos, Quality by Design, no
desenvolvimento de produtos farmacuticos a base de frmacos de classe II caso do
EFV.
Palavras Chave: AIDS, Efavirenz, Quality by Design, Bioequivalncia.
Abstract
ABSTRACT
The Acquired Immune Deficiency Syndrome (AIDS) is the clinical manifestation of
immunodeficiency due to the infection by the human immunodeficiency virus (HIV).
AIDS have an average latency period of eight years after the infection. The HIV
treatment has several drugs with different action mechanisms acting in different
phases of the replication cycle. Efavirenz (EFV) is a non-nucleoside reverse
transcriptase inhibitor and was the first anti-HIV authorized for administration once
daily, because of his long terminal half-life. Several factors contribute for rate and
extent of absorption of a drug in general circulation, including the pharmaceutical
quality of the drug raw material and medicine drug, the quality of physical and
chemical characteristics of the active pharmaceutical ingredient (API). EFV has five
crystalline forms described and belongs to the class II of BCS classification system.
The aim of this study was to characterize the solid state of three active
pharmaceutical ingredients from different sources, solubility, intrinsic dissolution rate
and dissolution profile to input a quality by design approach and to study the
pharmaceutical equivalence and bioequivalence between test and reference drug
dosage. The solid state characterization was carried out by assay and purity tests, at
the molecular level, at particle level and at bulk level. Solubility and dissolution rates
were performed in classical and biorelevant mediums. The bioequivalence study was
an open, randomized and crossover 2 x 2 design with a washout period of 15 days.
The solid-state characterization showed different results for assay and purity test.
The molecular and particle level shows the same results for three API from different
manufacturers but different properties at bulk level, with these differences resulting in
different solubility and dissolution rate. The pharmaceutical equivalence and
dissolution profiles using apparatus 4 and biorelevant mediums were not relevant to
predict the difference observed at in vivo absorption. These results show the
necessity of quality control of EFV API to guarantee safety and efficacy in HIV
treatment, with complementary methods not described in pharmacopeia. These
results shows the importance of the Quality by Design approach on pharmaceutical
product development with BCS class II molecules, like EFV.
Keywords: AIDS, Efavirenz, Quality by Design, Bioequivalence.
Lista de
figuras
LISTA DE FIGURAS
Captulo 1 - Reviso bibliogrfica
Figura 1. Ciclo de replicao do HIV. 1 adsoro; 2 fuso; 3 desencapeamento; 4
transcrio reversa; 5 intregao ao genoma do hospedeiro; 6 transcrio do RNA
viral genmico em mRNA; 7 traduo em poliprotenas; 8 montagem; 9 brotamento;
10 maturao.. .......................................................................................................... 38
Figura 2. Possibilidades, tericas, de combinaes de frmacos ARVs. ................. 39
Figura 3. Rota de sntese do composto DMP-266 (efavirenz) ................................... 44
Figura 4. Mdia ( DP) aps administrao intravenosa das doses de 2, 5 e 15
mg/Kg (A) e mdia ( DP) aps administrao oral das doses de 10, 40 e 160 mg/Kg
(B) em ratos............................................................................................................... 48
Figura 5: Estrutura molecular plana do EFV.............................................................. 50
Figura 6: Estrutura molecular da impureza majoritria do efavirenz (SR695).
Adaptada de Weissburg, 2002 .................................................................................. 51
Figura 7. Sistema de classificao biofarmacutica. ................................................. 61
Figura 8. Principais fenmenos envolvidos na absoro in vivo. Esquema geral de
absoro sistmica aps administrao oral (Adaptada de Cardot, JM, 2007). ........ 67
Figura 9. Esquema de funcionamento da clula de fluxo que pode ser configurado na
sada do aparato IV como sistema aberto
ou sistema fechado
. ............ 69
Figura 10. Aspectos farmacuticos envolvidos na dissoluo de medicamentos.
Setas contnuas: informaes disponveis diretamente. Setas pontilhadas
Informaes indiretas. ............................................................................................... 70
Captulo 2 - Caracterizao do estado slido
Figura 1: Estrutura molecular do efavirenz ................................................................ 90
Figura 2. Cromatograma representativo do EFV (120 gmL-1). ................................ 97
Figura 3. Cromatograma representativo da anlise de impurezas do EFV 16.237. .. 98
Figura 4. Resultado de anlise de DSC do lote EFV 16.108 na razo de aquecimento
de 10Cmin-1. .......................................................................................................... 100
Figura 5. Resultado de anlise de TG/DTG do lote EFV 16.108 na razo de
aquecimento de 10Cmin-1. .................................................................................... 101
Figura 6. Microscopia tica (A) e microscopia eletrnica de varredura (B). ............ 102
Figura 7. Estrutura molecular do EFV (A) e do DPC961 (B). .................................. 103
Figura 8. Difratogramas de Raios-X de ps dos trs IFA analisados ...................... 105

Figura 9. Perfis de dissoluo dos IFAs analisados nos diferentes meios de
dissoluo. .............................................................................................................. 112
Figura 10. Eficincia de dissoluo nos meios analisados em 5 min. (A), 30 min. (B)
e 120 min. (C).......................................................................................................... 113
Captulo 3 Avaliao de cinticas de dissoluo
Figura 1. Anlise de cintica de dissoluo de IFA. ................................................ 128
Figura 2. Anlise de cintica de dissoluo dos comprimidos................................. 128
Figura 3. Esquema de clula de fluxo contnuo para dissoluo do IFA. ................ 131
Figura 4. Esquema de clula de fluxo contnuo para dissoluo do comprimido. ... 133
Figura 5. Perfis de dissoluo do EFV 16.108 nos diferentes meios. ..................... 136
Figura 6. Perfil de dissoluo IFA x Produto acabado em FaSSIF (A), FeSSIF (B),
LSS 0,5% (C) e LSS 1,0% (D)................................................................................. 137
Figura 8. Perfil de dissoluo em gua (teste e referncia). ................................... 138
Figura 9. Perfis de dissoluo: FaSSIF (A), FeSSIF (B), LSS 0,5% (C) e LSS 1,0%
(D). .......................................................................................................................... 140
Figura 10. Perfil farmacocintico mdio (30 voluntrios), em estado de jejum........ 140
Captulo 4 Avaliao da bioequivalncia
Figura 1. Estrutura molecular do efavriez (A) e padro interno (B). ........................ 150
Figura 2. Espectro de massas do EF em modo negative (on produto) .................. 157
Figura 3. Cromatogramas demonstrativos da seletividade e do efeito matriz.
Amostras de plasma branco (A) e amostras fortificadas com analito e P.I. na
concentrao do LIQ juntamente com o experimento do efeito matriz (B) .............. 158
Figura 4. Curva media da concentrao plasmtica versus o tempo aps
administrao das formulaes teste e referncia. ................................................. 164
Lista de
Tabelas
LISTA DE TABELAS
Captulo 1 - Reviso bibliogrfica
Tabela 1. Antiretrovirais aprovados pelo FDA ........................................................... 41
Tabela 2. Apresentaes do Stocrin registrados na EMEA. ................................... 43
Tabela 3. Tcnicas analticas mais utilizadas na caracterizao de frmacos em
estado slido ............................................................................................................. 57
estado slido (continuao)....................................................................................... 58
Tabela 4. Classificao biofarmacutica provisional dos frmacos biosentos segundo
a ANVISA. ................................................................................................................. 64
Tabela 5. Objetivos da dissoluo durante o ciclo de vida de um medicamento....... 65
Tabela 6. Valores de pH no trato gastrintestinal em jejum e ps-prandial ................ 71
Tabela 7. Composio de meios biorrelevantes jejum (FaSSIF) e alimentado
(FeSSIF) .................................................................................................................... 71
Captulo 2 - Caracterizao do estado slido
Tabela 1. Distribuio granulomtrica das partculas de EFV. ................................ 103
Tabela 2. Densidade aparente e compactada para os trs IFA. ............................. 106
Tabela 3. Dados da solubilidade das amostras de EFV .......................................... 109
Captulo 3 Avaliao de cinticas de dissoluo
Tabela 1. Ensaios, especificaes e referncia da equivalncia farmacutica ....... 130
Tabela 2. Resultados da EQFAR entre o medicamento teste com a MP-A e o
medicamento de referncia Stocrin. ..................................................................... 135
Tabela 3. Eficincia de dissoluo nos diferentes meios analisados. ..................... 139
Captulo 4 Avaliao da bioequivalncia

Tabela 1. Resultados da preciso e exatido dos nveis de concetrao. .............. 159
Tabela 2. Preciso e exatido do EFV .................................................................... 160
Tabela 3. Resultados do estudo de estabilidade do EFV em matriz biolgica. ....... 162
Tabela 4. PArmetros farmacocinticos para as formulaes teste e referncia .... 164
Lista de
abreviaturas e
siglas
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

AIDS Acquired Immunodeficiency Syndrome
ANVISA Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria
ARV Antiretroviral
ATR Attennuated Total Reflection
AZT Zidovudina
BET - Braunauer, Emmet e Teller
CAS Chemical Abstract Service
CC Curva de Calibrao
CCS Centro de Cincias da Sade
CEP Comit de tica em Pesquisa
CLAE Cromatografia Lquida de Alta Eficincia
CQB Controle de Qualidade Baixo
CQM Controle de Qualidade Mdio
CQA Controle de Qualidade Alto
CV Coeficiente de Variao
DRIFT Diffuse Reflectance Infra-red Fourier Transform
DRX Difrao de Raio X
DNA Desoxyrribonucleic acid
DPR Desvio Padro Relativo
DSC Differential scanning calorimetry
DST Doenas Sexualmente Transmissveis
ECD Estabilidade de Curta Durao
EDTA cido Etilenodiamino Tetra-actico
EFV Efavirenz
EGD Estabilidade de Gelo e Degelo
ELD Estabilidade de Longa Durao
EMEA European Agency for the Evaluation of Medicinal Products
EPP Estabilidade de Ps-processamento
EQFAR Equivalncia farmacutica
ESI Electrospray ionization
EUA Estados Unidos da Amrica
FaSSIF- Fludo intestinal simulando jejum
FeSSIF - Fludo intestinal simulando alimentao

FDA Food and Drugs Administration
HAART Highly active antiretroviral therapy
HCTZ Hidroclorotiazida
HEMOPE Hemocentro de Pernambuco
HIV Human Immunodeficience Virus
IDR Intrinsic dissolution rate
IFA Insumo Farmacutico Ativo
IV Infravermelho
LI Liberao imediata
LIQ Limite Inferior de Quantificao
LM Liberao Modificada
LSQ Limite Superior de Quantificao
LSS Lauril Sulfato de Sdio
MQ Mdia Quadrtica
MRM Monitoramento de Reaes Mltiplas
MTBE Metil Tert-butil ter
MTDSC Modulated temperature DSC
OMS Organizao Mundial da Sade
ONU Organizao das Naes Unidas
P.I. Padro Interno
RE Resoluo Especfica
RNA Ribonucleic acid
RPM Rotaes por Minuto
SEM Scanning Eletronic Microscopy
SCB Sistema de Classificao Biofarmacutica
SQ Soma Quadrtica
SQR Substncia Qumica de Referncia
TPS Tetrahertz pulsed Spectroscopy
UNAIDS The United Nations Joint Programme on HIV/AIDS
Lista de
smbolos
LISTA DE SMBOLOS
% - Percentual
< - Inferior a
> - Superior a
- Mais ou menos, aproximadamente
- Marca registrada
C Graus Celsius
Comprimento de onda
2 ngulo de Bragg
- Densidade
An Nmero de absoro
CL Clearence
Cmx Concentrao plasmtica mxima
ASC rea Sob a Curva
ASC0-t - rea sob a curva de zero ao ltimo ponto de coleta
Cs Concentrao de saturao
Ct Concentrao no tempo t
D - Difusividade
dc/dt - razo de dissoluo do frmaco
Dn Nmero de dissoluo
Do Nmero de dose
f1 Fator de similaridade
f2 Fator de diferena
GL Graus de Liberdade
IC Intervalo de Confiana
Kel Constante de eliminao
Log P Coeficiente de partio octanol/gua
min - minuto
mg - miligrama
mg mL-1 miligrama por mililitro
MS/MS Espectrometria de massas seqencial
M0 - Dose do medicamento
g micrograma
g mL-1 micrograma por mililitro

N2 - Nitrognio
ng - nanograma
ng mL-1 nanograma por mililitro
pH Potencial Hidrogeninico
Peff - Permeabilidade
pKa Constante de acidez
rpm Rotaes por minuto
R - Raio intestinal
seg - Segundos
r0 - Raio inicial das partculas
T onset Temperatura inicial da reao
Tg Transio vtrea
T1/2 Meia-vida plasmtica
- Constante de absoro
TDiss - Tempo de dissoluo
Tmx Tempo mximo
Ton Tonelada
tres - Tempo de residncia intestinal
UV Ultravioleta
v/v volume/volume
V0 - Volume de gua na administrao da dose (usualmente 250 mL)
Sumrio
SUMRIO
1.
Introduo ......................................................................................................... 30
1.1. Referncias bibliogrficas ................................................................................. 32

2.
Objetivos ........................................................................................................... 35
2.1. Objetivo geral ..................................................................................................... 35

2.2. Objetivos especficos ......................................................................................... 35
3.
Captulo 1 - Reviso bibliogrfica ..................................................................... 37
3.1. Avanos na terapia antiretroviral....................................................................... 37

3.2. Efavirenz (EFV) .................................................................................................. 42
3.2.1. Desenvolvimento do insumo farmacutico ativo (IFA)..................................... 42
3.2.2. Farmacodinmica ............................................................................................ 45
3.2.3. Farmacocintica .............................................................................................. 45
3.2.4. Bioequivalncia ............................................................................................... 48
3.2.5. Caractersticas Fsico-qumicas ...................................................................... 49
3.2. Caracterizao de Insumo Farmacutico Ativo (IFA)........................................ 53
3.3. Sistema de Classificao Biofarmacutica - SCB ............................................. 61
3.4. Dissoluo de formas farmacuticas slidas .................................................... 65
3.5. Referncias bibliogrficas ................................................................................. 72
4.
Captulo 2 - Caracterizao de estado slido do Efavirenz um frmaco SCB

classe II como ferramenta de Quality by Design ............................................... 86
4.1. Resumo do captulo ........................................................................................... 86

4.2. Introduo .......................................................................................................... 87
4.3. Material e mtodos ............................................................................................. 90
4.3.1. Anlise de potncia ......................................................................................... 90
4.3.1.1. Teste de teor ................................................................................................ 90
4.3.1.2. Anlise do perfil de impurezas ..................................................................... 91
4.3.2. Anlise em nvel de molculas ........................................................................ 91
4.3.2.1. Espectroscopia no infravermelho ................................................................. 91
4.3.3. Anlise em nvel de partculas......................................................................... 91
4.3.3.1. Anlises trmicas ......................................................................................... 92
4.3.3.2. Microscopia tica e eletrnica de varredura ................................................. 92
4.3.4. Anlise em nvel de aglomerado de partculas ................................................ 93
4.3.5. Solubilidade e cintica de dissoluo .............................................................. 94
4.3.5.1. Estudo de solubilidade ................................................................................. 95
4.3.5.2. Dissoluo intrnseca ................................................................................... 95
4.3.5.3. Dissoluo aparente ..................................................................................... 96
4.4. Resultados e discusso...................................................................................... 96
4.4.1. Anlise de potncia ......................................................................................... 96

4.4.1.1. Teste de teor ................................................................................................ 96
4.4.1.2. Anlise do perfil de impurezas ..................................................................... 97
4.4.2. Anlise em nvel de molculas ........................................................................ 98
4.4.2.1. Espectroscopia no infravermelho ................................................................. 98
4.4.3. Anlise em nvel de partculas......................................................................... 99
4.4.3.1. Anlises trmicas ......................................................................................... 99
4.4.3.2. Microscopia tica e eletrnica de varredura ............................................... 101
4.4.3.3. Tamanho de partculas ............................................................................... 102
4.4.3.4. Difrao de Raios-X ................................................................................... 104
4.4.4. Anlise em nvel de molculas ...................................................................... 105
4.4.4.1. Densidade aparente e compactada ............................................................ 105
4.4.4.2. Umidade por titulao Karl Fischer ............................................................ 106
4.4.5. Solubilidade e cintica de dissoluo ............................................................ 107
4.4.5.1. Estudo de solubilidade ............................................................................... 107
4.4.5.2. Dissoluo intrnseca ................................................................................. 109
4.4.5.3. Dissoluo aparente ................................................................................... 110
4.5. Concluses....................................................................................................... 114
4.6. Agradecimentos ............................................................................................... 114
4.7. Referncias ...................................................................................................... 115
5.
Captulo 3 Avaliao biofarmacutica de duas formulaes do antiretroviral

efavirenz: dissoluo em meios biorrelevantes............................................... 124
5.1. Resumo do captulo ......................................................................................... 124

5.2. Introduo ........................................................................................................ 125
5.1. Materiais e mtodos........................................................................................ 127
5.1.1.
Materiais .............................................................................................. 127
5.3.1.1. Equipamentos e acessrios ....................................................................... 127

5.3.1.2. Reagentes e materiais de referncia .......................................................... 129
5.3.1.3. Substncia qumica de Referncia (SR) e Matrias primas ....................... 129
5.3.1.4. Produtos farmacuticos .............................................................................. 129
5.1.2.
Mtodos ............................................................................................... 129
5.3.2.1. Equivalncia Farmacutica - EQFAR ......................................................... 129

5.3.2.2. Dissoluo do Insumo Farmacutico Ativo (IFA) ........................................ 130
5.3.2.3. Dissoluo dos produtos farmacuticos ..................................................... 131
5.3.2.3.1. Dissoluo dos produtos farmacuticos (aparato 2 p)........................ 131
5.3.2.3.2. Dissoluo dos produtos farmacuticos (aparato 4 clula de fluxo) ..... 132
5.2. Resultados e discusso .................................................................................. 133
5.2.1.
Equivalncia Farmacutica ......................................................................... 133
5.2.2.
Dissoluo do IFA....................................................................................... 136
5.2.3.
Dissoluo dos produtos acabados ............................................................ 138
5.4.3.1. Perfil de dissoluo aparato 2 .................................................................... 138

5.4.3.2. Perfil de dissoluo aparato 4 .................................................................... 139
5.3. Concluso ....................................................................................................... 142
5.4. Referncias ..................................................................................................... 143
6.
Captulo 4 Avaliao da bioequivalncia .................................................. 147
(publicado na Qumica nova, v.34, n.6, p.950-955,2011) Apndice A..................... 147

6.1. Resumo ............................................................................................................ 148
6.2. Introduo: ....................................................................................................... 149
6.3. Material e Mtodo ............................................................................................. 150
6.3.1. Substncias e reagentos qumicos ................................................................ 150
6.3.2. Equipamentos ............................................................................................... 151
6.3.3. Condies cromatogrficas ........................................................................... 151
6.3.4. Condies espectromtricas ......................................................................... 152
6.3.5. Preparo dos padres de calibrao e das amostras de controle de qualidade
........................................................................................................................ 152
6.3.6. Mtodo de extrao ....................................................................................... 153
6.3.7. Desenho do estudo de bioequivalncia ......................................................... 153
6.3.8. Anlise farmacocintica e estatstica ............................................................ 154
6.4. Resultados e discusso.................................................................................... 155
6.4.1. Otimizao da cromatografia lquida de alta eficincia ................................. 155
6.4.2. Otimizao da espectrometria de massas..................................................... 156
6.4.3. Validao do mtodo ..................................................................................... 157
6.4.3.1. Seletividade ................................................................................................ 157
6.4.3.2. Linearidade................................................................................................. 158
6.4.3.3. Recuperao .............................................................................................. 159
6.4.3.4. Preciso e exatido .................................................................................... 160
6.4.3.5. Estudo de estabilidade ............................................................................... 161
6.4.4. Anlises estatsticas e parmetros farmacocinticos .................................... 162
6.4.5. Discusso ...................................................................................................... 165
6.5. Concluso ........................................................................................................ 166
6.6. Referncias ...................................................................................................... 166
7.
Concluso ....................................................................................................... 175
8.
Perspectivas ................................................................................................... 177
Apndice A. (publicado na Qumica nova, v.34, n.6, p.950-955,2011).................... 179
Introduo
30
1. Introduo
A sndrome da imunodeficincia adquirida (AIDS) a manifestao clnica
(sinais, sintomas e/ou resultados laboratoriais que indiquem deficincia imunolgica) da
infeco pelo vrus da imunodeficincia humana (HIV) que leva, em mdia, oito anos
para o seu aparecimento.
Dados do programa de HIV/AIDS das naes unidas (UNAIDS), criado em 1996,
mostram que aes globalizadas de combate epidemia tm levado a resultados
positivos em relao ao nmero de casos de pessoas infectadas e na reduo da
mortalidade ocasionada pela infeco pelo HIV.
O nmero de bitos por AIDS teve um declnio de 2,2 milhes (1,9 2,6 milhes) em
2005 para 2,0 milhes (1,8 2,3 milhes) em 2007 segundo relatrio global da
epidemia de AIDS da UNAIDS publicado em 2008 (UNAIDS, 2010).
Aps a introduo da poltica de acesso universal ao tratamento anti-retroviral (ARV), o
qual combina drogas com diferentes formas de ao, observou-se uma importante
reduo na mortalidade. A partir do ano de 2000, essa taxa se estabilizou em cerca de
6,4 bitos por 100.000 habitantes, sendo esta estabilizao mais evidente em So
Paulo e no Distrito Federal (BRASIL, 2008).
Segundo o ltimo consenso para tratamento de pessoas infectadas pelo HIV, o
tratamento de primeira escolha envolve a administrao de 2 Inibidores de transcriptase
reversa anlogo de nucleosdeo (zidovudina e lamivudina) em combinao com um
inibidor de transcriptase reversa no anlogo de nucleosdeo (efavirenz) no caso de
administrao a gestantes e criana menores de 3 anos o efavirenz substitudo pela
nevirapina.
Devido relevante importncia do tratamento de pessoas infectadas pelo HIV e pela
notoriedade mundial do programa de combate a AIDS do Ministrio da Sade (DST-
31
AIDS) em 04 de maio de 2007, o Presidente da Repblica Federativa do Brasil assinou

um decreto (6 108/2007) regulamentando o licenciamento compulsrio, por interesse
pblico, para fins de uso pblico no comercial das patentes relacionadas ao antiretroviral efavirenz (EFV). Estima-se que a economia chegue a US$ 236,8 milhes at
2012, quando a patente do produto ir expirar no Brasil.
Para a produo de medicamentos seguros e eficazes necessrio a compreenso de
toda a cadeia produtiva que vai desde o estabelecimento de especificaes de
qualidade para os insumos farmacuticos, formulao, processo produtivo e mtodos
analticos na fase de desenvolvimento at o controle de qualidade dos lotes produzidos.
Diversos fatores esto relacionados com a velocidade e quantidade de frmaco que
chega corrente sangunea, dentre eles a qualidade farmacutica do medicamento,
atendimento aos requisitos de qualidade fsicos, fsico-qumicos e microbiolgicos e a
qualidade da matria-prima do princpio ativo (AALTONEN et al., 2009; STORPIRTS et
al.,1999, 2004).
A qualidade do produto acabado est diretamente ligada qualidade dos insumos
farmacuticos utilizados na produo de medicamentos, garantindo que, aps a
administrao ao paciente, o frmaco atinja nveis plasmticos dentro do ndice
teraputico, ou seja, cheguem circulao sistmica em concentraes seguras e
eficazes (KATRINIC et al., 2009; PIFFERI; SANTORO; PEDRANI, 1999).
Para alcanar as caractersticas ideais importante o desenvolvimento dentro da
filosofia de Quality by Design que envolve o estabelecimento racional de especificaes
para toda a cadeia produtiva, baseada na avaliao sistemtica de parmetros crticos
ao processo de obteno de medicamentos seguros e eficazes.
Baseado nessas informaes o presente trabalho tem o objetivo de avaliar qualidade da
matria-prima do efavirenz de trs diferentes fornecedores nacionais, alm de verificar
as caractersticas de solubilidade e de dissoluo destas fontes do insumo farmacutico
32
ativo (IFA). Avaliou-se ainda a equivalncia farmacutica e a bioequivalncia da forma

farmacutica quando produzida com a matria-prima de um dos fornecedores do IFA.
1.1.
Referncias bibliogrficas
AALTONEN, J.; ALLES, M.; SABIRUDDIN, M.; KORADIA, V.; GORDON, K.C.;
RANTANEN, J. Solid form screening A review. European Journal of Pharmaceutics
and Biopharmaceutics, v.71, p. 23 -37, 2009.
BRASIL. Ministrio da Sade. Metas e Compromissos Assumidos pelos EstadosMembros na Sesso Especial da Assemblia Geral das Naes Unidas em
HIV/Aids. Secretaria de Vigilncia em Sade, Programa Nacional de DST e Aids.,
Braslia, DF, 208p., 2008.
KATRINCIC, L.M.; SUN, Y.T.; CARLTONB, R.A.; DIEDERICHA, A.M.; MUELLER, R.;
VOGT, F.G. Characterization, selection, and development of an orally dosed drug
polymorph
from
an
enantiotropically
related
system.International
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of
Pharmaceutics, v.366 p. 1-13, 2009.

PIFFERI, P.G.; SANTORO, P.; PEDRANI, M. Quality and functionality of excipients. II
Farmaco, v. 54, p. 1 14, 1999.
STORPIRTIS, S.; OLIVEIRA, P.G.; RODRGUEZ, D.; MARANHO, D. Consideraes
biofarmacotcnicas relevantes na fabricao de medicamentos genricos: fatores que
afetam a dissoluo e a absoro de frmacos. Revista Brasileira de Cincias
Farmacuticas, v.35, n.1, p.1-16, 1999.
STORPIRTIS, S.; MARCOLONGO, R.; GASPAROTTO, F. S.; VILANOVA, C. M. A
equivalncia farmacutica no contexto da intercambialidade entre medicamentos
genricos e de referncia: bases tcnicas e cientficas. Infarma, v. 16, n. 9-10, p. 51 56, 2004.
33
UNAIDS, Joint United Programme on HIV/AIDS. Global report: UNAIDS report on the
global AIDS epidemic 2010. ISBN 978-92-9173-871-7, 356 p. Disponvel em:
<http://www.unaids.org/globalreport/Global_report_es.htm>. Acesso em: 31 jan. 2011.
34
Objetivos
35
2. Objetivos
2.1. Objetivo geral
Avaliao biofarmacoctcnica de trs diferentes fornecedores de IFA do
efavirenz e de duas formulaes (teste e referncia) in vitro e in vivo.
2.2. Objetivos especficos
Avaliar as propriedades fsico-qumicas de trs diferentes fornecedores de
matria-prima do efavirenz;
Caracterizar o estado slido de trs diferentes fornecedores de efavirenz
(anlises em nveis molecular e de partculas);
Avaliar a solubilidade em meios de dissoluo biorrelevantes e clssicos,
dissoluo intrnseca dos trs diferentes fornecedores de matria-prima;
Caracterizar o perfil de impurezas por HPLC-UV;
Avaliar a dissoluo dos trs diferentes fornecedores em clulas de fluxo com
diferentes meios de dissoluo (biorrelevantes e clssicos);
Estudar a dissoluo e perfil de dissoluo de formulaes contendo a matriaprima dos trs diferentes fornecedores;
Realizar estudo de equivalncia farmacutica entre um medicamento teste e o
medicamento de referncia;
Desenvolver e validar mtodo bioanaltico para anlise de efavirenz e aplicao
em estudo de biodisponibilidade comparada e estudo de bioequivalncia mdia;
36
Captulo 1
Reviso bibliogrfica
37
3. Captulo 1 - Reviso bibliogrfica

3.1. Avanos na terapia antiretroviral
Nos ltimos 25 anos, o retrovrus reponsvel pela transmisso da AIDS passou de um
agente infeccioso terapeuticamente intratvel para um no qual pelo menos 25
apresentaes medicamentosas existentes para o tratamento da infeco (BTHUNE,
2010; ECHEVERRA et al., 2010; SOSNIK; CHIAPPETTA; CARCABOSO, 2009).
Os antiretrovirais (ARVs) apareceram na teraputica a partir da aprovao pelo FDA da
comercializao da zidovudina (AZT), em 19 de maro de 1987 (TABELA 1) (BRODER,
2010), cerca de 4 anos aps a descoberta que o HIV o agente etiolgico da AIDS
(BARRE-SINOUSSI et al., 1983; GALLO et al., 1983). Onze anos aps, em 1998, onze
medicamentos de trs diferentes classes teraputicas estavam aprovados para
tratamento do HIV (DE CLERQ, 1998).
Os laboratrios farmacuticos dedicaram maior investimento no desenvolvimento de
frmacos capazes de controlar a replicao do HIV (FIGURA 1) e atualmente esto
disponveis para utilizao na teraputica, 25 frmacos de 6 diferentes classes
teraputicas: 8 frmacos inibidores da transcriptase reversa anlogos de nucleosdeo
(ITRNs), 4 inibidores da transcriptase reversa no-anlogos de nucleosdeo (ITRNNs),
10 inibidores da protease (IPs), 1 inibidor da integrase, 1 inibidor de fuso e 1 inibidor
CCR5 (BTHUNE, 2010; BRODER, 2010).
Aps 1996, a disponibilidade dos inibidores da protease transformou a infeco por HIV
de progressiva e fatal patologia, na maioria dos casos, para infeco crnica tratvel
(ECHEVERRA et al., 2010).
A introduo da terapia antiretroviral de elevada potncia (highly active antiretroviral
therapy HAART) implicou em grande avano na prtica teraputica de portadores do
HIV, nos ltimos 20 anos, a terapia passou da inefetiva monoterapia para combinaes
38
com multifrmacos capazes de suprimir a replicao viral na maioria dos pacientes

infectados (TOZZI, 2010).
FIGURA 1. Ciclo de replicao do HIV. 1 adsoro; 2 fuso; 3 desencapeamento; 4

transcrio reversa; 5 intregao ao genoma do hospedeiro; 6 transcrio do RNA viral
genmico em mRNA; 7 traduo em poliprotenas; 8 montagem; 9 brotamento; 10
maturao. (Adaptada DE CLERQ, 2009).
A importncia das combinaes teraputicas vem tornando-as cada vez mais aceitas. A
utilizao de 3 ou mais frmacos ARVs tem basicamente trs objetivos: (i) obteno de
sinergismo entre as diferentes classes teraputicas, com seus diferentes alvos no ciclo
de replicao viral; (ii) diminuio das dosagens em relao s monoterapias com
diminuio dos efeitos colaterais e (iii) diminuio da probabilidade do aparecimento de
mecanismos de resistncia viral. As possibilidades de combinaes so bastante
elevadas como demonstrado na FIGURA 2. O desenvolvimento de comprimidos com
dose fixa combinada fez com que o nmero de unidades farmacotcnicas para
administrao da HAART fosse reduzido de 20 comprimidos por dia, em 1996, para um
nico em 2006 (DE CLERQ, 2009).
39
Inibidores da
Transcriptase Reversa
anlogos de
nucleosdeo
Inibidores da
no-anlogos de
nucleosdeo
Inibidores da
anlogos de
nucleotdeo
Inibidores CCR5
Inibidores de Fuso
Inibidores da Protease
Inibidores da Integrase
FIGURA 2. Possibilidades, tericas, de combinaes de frmacos ARVs. (Adaptada de

DE CLERQ, 2009).
A primeira classe de ARVs aprovada, em 1987, para o tratamento de infeco por HIV
foi a dos Inibidores da Transcriptase Reversa anlogos de nucleosdeo. S em 1995
surgiu a segunda classe representada pelos inibidores da protease com o registro do
saquinavir e pouco tempo aps, uma terceira classe foi introduzida na teraputica, os
Inibidores da Transcriptase Reversa no-anlogos de nucleosdeo (ITRNNs), vindo em
1996 a aprovao pelo FDA da nevirapina, seguida por delaverdina, em 1997, e
efavirenz, em 1998 (BTHUNE, 2010).
Mesmo com os avanos no desenvolvimento de novos frmacos, um grupo de
pacientes no se beneficiou das vantagens teraputicas por conta do aparecimento de
mecanismos de resistncia viral aos ARVs disponveis. Nos ltimos anos, vrios
40
frmacos com melhores perfis de resistncia tm sido desenvolvidos, dentre eles a

etravirina, primeiro ITRNNs a apresentar eficcia clnica em pacientes resistentes
terapia e atualmente outras molculas esto sendo desenvolvidas. Os ITRNNs podem
ser classificados em duas diferentes geraes: (i) primeira gerao (nevirapina,
delaverdina e efavirenz); (ii) segunda gerao (etravirina, rilpivirina, RDEA806, IDX899
e lesivirina (UK-453061)), sendo que alguns dos frmacos citados encontram-se em
estudos clnicos (BTHUNE, 2010).
Segundo o consenso brasileiro de tratamento de pacientes infectados com HIV, a
opo teraputica de escolha a combinao de 2 ITRNs e 1 ITRNN, sendo a escolha
alternativa utilizao de
2 ITRNs e 1 IP. Para ITRNs, a primeira escolha a
administrao de zidovudina e lamivudina, em casos de intolerncia zidovudina, a

alterao do esquema deve ser feita pela didanosina entrica ou pelo tenofovir. Quanto
escolha dos ITRNNs, o efavirenz continua sendo preferencial nevirapina, exceto em
gestantes. Esta opo est fundamentada na sua elevada potncia de supresso viral,
na comprovada eficcia em longo prazo e no menor risco de efeitos adversos srios
(BRASIL, 2008).
Em 4 de maio de 2007, o Presidente da Repblica assinou o decreto 6 108/2007, que
oficializou o licenciamento compulsrio do efavirenz para uso pblico no- comercial. O
dispositivo tem validade de 5 anos e pode ser renovado por mais 5. O licenciamento
compulsrio permite que o Ministrio da Sade importe verses genricas de
laboratrios pr-qualificados pela Organizao Mundial da Sade (OMS). A concesso
de licena compulsria do efavirenz previu a importao do medicamento atrelada ao
compromisso de que o laboratrio exportador repassasse ao Brasil toda a tecnologia
para produo nacional pelo laboratrio oficial Farmanguinhos (Fundao Osvaldo
Cruz). Inicialmente, foram compradas verses genricas do medicamento produzidas
por laboratrios da ndia. Os primeiros lotes chegaram ao Brasil em julho de 2007,
assegurando o abastecimento do antirretroviral (RODRIGUES; SOLER, 2009).
41
TABELA 1. Antiretrovirais aprovados pelo FDA

Nome
fantasia
Nome Genrico
Produtor
Aprovao
Aprovao
FDA
(meses)
Inibidores da transcriptase reversa anlogos de nucleosdeos
Retrovir
Zidovudina,AZT
GlaxoSmithKline
19-Mar-87
3,5
Videx
Didanosina, ddl
Bristol Myers-Squibb
9-Oct-91
6,0
Hivid
Zalcitabina, ddC
Hoffmann-La Roche
19-Jun-92
7,6
Zerit
Estavudina, d4T
24-Jun-94
5,9
Epivir
Lamivudina, 3TC
GlaxoSmithKline
17-Nov-95
4,4
Combivir
AZT + 3TC
GlaxoSmithKline
27-Sep-97
3,9
Ziagen
Abacavir, ABC
GlaxoSmithKline
17-Dec-98
5,8
Videx EC
Didanosina*
31-Oct-00
9,0
Trizivir
ABC + AZT + 3TC
GlaxoSmithKline
14-Nov-00
10,9
Viread
Tenofovir, TDF**
Gilead Sciences
26-Oct-01
5,9
Emtriva
Emritambicina, FTC
Gilead Sciences
2-Jul-03
10,0
Epzicom
ABC + 3TC
GlaxoSmithKline
2-Aug-04
10,0
Truvada
TDF + FTC
Gilead Sciences
2-Aug-04
5,0
Inibidores da transcriptase reversa no-anlogos de nucleosdeos
Viramune Nevirapina, NVP
Boehringer Ingelheim
21-Jun-96
3,9
Restrictor Delaverdina, DLV
Pfizer
4-Apr-97
8,7
Sustiva
Efavirenz, EFV
17-Sep-98
3,2
Intelence
Etravirina
Tibotec Therapeutics
18-Jan-08
6,0
Inibidores da protease
Invirase
Saquinavir, SQV
Hoffmann-La Roche
6-Dec-95
3,2
Norvir
Ritonavir, RTV
Abbot Laboratories
1-Mar-96
2,3
Crixivan
Indinavir, IDV
Merck
13-Mar-96
1,4
Viracept
Nelfinavir, NFV
Agouron Pharmaceulticals
14-Mar-97
2,6
Fortovase Saquinavir
Hoffmann-La Roche
7-Nov-97
5,9
Agenerase Agenerase
GlaxoSmithKline
15-Apr-99
6,0
Kaletra
Lopinavir + RTV
Abbot Laboratories
15-Sep-00
3,5
Reyataz
Atazanavir, ATZ
20-Jun-03
6,0
Lexiva
Fosamprenavir
GlaxoSmithKline
20-Oct-03
10,0
Aptivus
Tipranavir, TPV
Boehringer Ingelheim
20-Jun-05
6,0
Prezista
Darunavir
Tibotec, Inc.
23-Jun-06
6,0
Inibidores de fuso
Fuzeon
Enfuvirtide, T-20
Hoffmann-La Roche and
13-Mar-03
6,0
Trimeris
Inibidores de entrada antagonistas co-receptores CCR5
Selzentry
Maraviroc
Pfizer
6-Aug-07
8,0
Inibidores da integrase
Isentress
Raltegravir
Merck & Co., Inc.
12-Oct-07
6,0
Dose fixa combinada Multi-classe
Atripla
EFV + FTC + TDF
Bristol Myers-Squibb and
12-Jul-06
2,5
Gilead Sciences
* Didanosina (Comprimidos gastroresistentes) ** Tenofovir disoproxil fumarato.

(Adaptada de BRODER, 2010).
42
3.2. Efavirenz (EFV)

3.2.1. Desenvolvimento do insumo farmacutico ativo (IFA)
O desenvolvimento do efavirenz (EFV) deu-se por pesquisas da DuPont Merck
Pharmaceutical Company e foi, inicialmente, denominado de L-743,726 (DMP-266),
Os primeiros ensaios clnicos, em seres humanos, foram realizados em maro de 1996
(RADESCA et al., 1999). Em Julho de 1998, a Dupont comprou os direitos da Merck na
DuPont Merck Pharmaceutical Company e mudou o nome da empresa para DuPont
Pharmaceuticals. As duas empresas continuaram compartilhando os direitos de
comercializao do efavirenz. A Merck passou a comercializar o medicamento fora
dos Estados Unidos, Canad e alguns pases europeus com o nome fantasia Stocrin.
A DuPont Pharmaceuticals continuou a comercializar o medicamento com o mesmo
nome fantasia Sustiva aprovado pelo FDA (DONG, 1998). Em outubro de 2001, a
DuPont Pharmaceuticals foi adquirida pela empresa Bristol-Myers Squibb Pharma
EEIG.
O efavirenz teve sua comercializao liberada pelo FDA em setembro de 1998 e em
2000, tinha o custo de tratamento de aproximadamente U$ 10.95 (dez dlares e
noventa e cinco centavos) por dia ou U$ 3,942 (trs mil novecentos e quarenta e dois
dlares) por ano (PORCHE, 2000).
A apresentao inicial de comercializao foi dada na forma de cpsulas de 200 mg,
tendo em vista a posologia usual diria de 600 mg, os pacientes eram obrigados a
deglutir 3 unidades farmacotcnicas do medicamento. Foram desenvolvidas duas novas
apresentaes na forma de comprimidos de 300 mg e de 600 mg atravs de um
processo usual de granulao e colocadas no mercado em 2002 (GAO et al., 2007).
O efavirenz comercializado em diversas apresentaes, estando descritos na
TABELA 2, os medicamentos registrados na European Agency for the Evaluation of
Medicinal Products (EMEA), aprovados para comercializao em 28 de maio de 1999
(EMEA, 2009).
43
O produto Atripla composto por uma associao de trs frmacos (efavirenz /

emtricitabine
tenofovir
disoproxil)
encontra-se
aprovado
pela
EMEA
para
comercializao desde 13 de dezembro de 2007 (EMEA, 2009).

Nos Estados Unidos da America (EUA), o Food and Drug Administration (FDA) tem os
registros publicados no Orange Book: Approved Drug Products with Therapeutic
Equivalence Evaluation, quatro apresentaes contendo EFV: cpsulas duras de 50 e
200 mg, com registro aprovado em 17 de setembro de 1998, comprimidos revestidos de
600 mg, aprovado em 1 de fevereiro de 2002 e a associao de trs frmacos
(efavirenz / emtricitabine / tenofovir disoproxil) aprovada em 12 de julho de 2006 (FDA,
2011).
TABELA 2. Apresentaes do Stocrin registrados na EMEA.
Dosagem
Forma Farmacutica
Embalagem
Quantidade
50 mg
100 mg
200 mg
200 mg
30 mg/mL
600 mg
600 mg
50 mg
200 mg
Cpsula dura
Cpsula dura
Cpsula dura
Cpsula dura
Soluo oral
Comprimido revestido
Frasco (HDPE)
Frasco (HDPE)
Frasco (HDPE)
Blister (alu)
Frasco (HDPE)
Frasco (HDPE)
Blister (alu)
Frasco (HDPE)
Frasco (HDPE)
30 cpsulas
30 cpsulas
90 cpsulas
42 cpsulas
1 frasco + 1 seringa
30 comprimidos
30 comprimidos
30 comprimidos
90 comprimidos
No Brasil, encontram-se registrados na Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria

(ANVISA), as seguintes apresentaes farmacuticas: Soluo oral de 30 mgmL-1,
cpsulas gelatinosas duras de 50 e 200 mg e comprimidos revestidos de 300 e 600 mg
(BRASIL, 2011a).
Formulaes base de EFV esto sendo propostas como alternativa para o tratamento
de pacientes peditricos, como encapsulao em micelas polimricas para incrementar
a solubilidade em gua (CHIAPPETTA et al., 2010).
44
O efavirenz o principal composto de um grupo de molculas da classe das

Benzoxazinonas que foram sintetizadas para utilizao em infeces causadas por
retrovrus. Em 1996, YOUNG et al., pesquisadores da Merck & Co., Inc. descreveram
em patente (US PATENT 5,519,021) a sntese (FIGURA 3) de uma srie de
benzoxazinonas, dentre elas a molcula do EFV S-(-)-6-Cloro-4-(ciclopropiletinil)-4(trifluorometil)-1,4-dihidro-2H-3,1-benzoxazin-2-ona.
Em 1996, pesquisadores da Merck & Co., Inc. (Rahway, NJ), THOMPSON, et al.
descreveram em patente (US Patent 5,698,741) a sntese assimtrica desta molcula.
O enantimetro R foi testado in vitro e no apresentou atividade em testes de inibio
da transcriptase reversa.
FIGURA 3. Rota de sntese do composto DMP-266 (efavirenz) (Adaptada de YOUNG et

al., 1996).
Outras rotas de sntese foram desenvolvidas para a produo do IFA, atualmente o
EFV produzido com custos aproximadamente 25% menores pela empresa Aspen
45
Pharmacare em uma joint venture com matriz na ndia (PINHEIRO; ANTUNES;

FORTUNAK, 2008).
3.2.2. Farmacodinmica
O retrovrus HIV tem um ciclo de replicao que envolve vrias etapas,
consequentemente vrios frmacos foram desenvolvidos para atuar em diferentes fases
da replicao. Os inibidores da transcriptase reversa no anlogos de nucleosdeos
agem como inibidores no competitivos se ligando enzima e mudando sua
conformao, impedindo o mecanismo de transcrio do RNA viral em DNA viral
(PEANHA; ANTUNES; TANURI, 2002).
O efavirenz (CAS 154598-52-4) o primeiro frmaco anti-HIV aprovado para utilizao
uma vez ao dia, quando administrado em combinao com outro antiretroviral em
crianas e adultos (PATEL, 1999). A aprovao em dose nica foi concedida devido
sua elevada meia vida, mantendo nveis plasmticos dentro do ndice teraputico por
um longo tempo (HILLERY; LOPEZ, 1999).
Os primeiros ensaios in vitro mostraram resultados efetivos contra a transcriptase
reversa do HIV tipo 1 e contra variaes mutantes atravs da anlise das constantes de
inibio KI e KII. A ao contra o HIV tipo 2 no mostrou resultados clinicamente
relevantes (YOUNG et al.,1996).
3.2.3. Farmacocintica
A farmacocintica do efavirenz caracterizada por uma elevada meia-vida plasmtica,
entre 52 a 76 horas aps administrao de dose nica e de 40 a 55 horas aps
administrao de doses mltiplas, sendo o mesmo metabolizado pelo citocromo P450
2B6 (CYP2B6) e citocromo P450 3A4 (CYP3A4) (TSUCHIVA et al., 2004). A janela
teraputica proposta para este frmaco em indivduos portadores do HIV de 1 g/mL
(concentrao mnima eficaz) e 4 g/mL (concentrao mxima tolerada) (MARZOLINI
et al., 2001).
46
A concentrao plasmtica mxima (Cmx) encontrada no plasma humano aps

administrao oral de 600 mg de 12,9 3,7 M, equivalente a 4,07 1,17 g/mL. O
tempo para concentrao plasmtica mxima de 3 5 horas e o estado de equilbrio
alcanado entre 6 e 10 dias (DONG, 1998; PORCHE, 2000).
Aps administrao desta mesma dose o EFV apresentou uma rea sob a curva ASC
de 184 73 M.h, equivalente a 58,08 23,04 g.h/mL (KAUL, 2010), caso a
administrao seja em indivduos alimentados com refeio rica em gorduras tem sua
biodisponibilidade aumentada em 50% (PORCHE, 2000).
O EFV tem uma meia-vida de absoro de 2 - 3 horas. A biodisponibilidade oral de 40
- 45% (FABBIANI et al., 2009; FRIEDLAND et al., 2006) e uma variabilidade inter e
intrarindividual de 54,6% e 26%, respectivamente (CSAJKA et al., 2003).
Diante da alta variabilidade, a monitorizao teraputica dos nveis plasmticos de EFV
recomendada para evitar efeitos colaterais e descontinuao do tratamento
(CHIAPPETTA et al., 2011).
Estudos posteriores demonstraram que a administrao de EFV com uma alimentao
hiperlpidica (894 Kcal) resulta em um incremento de 39% na Cmx e de 22% na ASC, j
uma alimentao hipolpdica (440 Kcal) contribui para um crescimento de 51% e 17%
para Cmx e ASC, respectivamente. recomendada a administrao de EFV de
estmago vazio e de preferncia antes de dormir (EMEA, 2009; KAUL et al., 2010).
O EFV tem alta taxa de ligao protica (99,5 a 99,75%), predominantemente
albumina,
contudo
atravessa
barreira
hematoceflica
atingindo
lquido
cefalorraquidiano com concentraes em mdia de 0,69% (0,26 e 1,19) da

concentrao plasmtica correspondente. A proporo corresponde ao triplo da frao
livre de EFV no plasma. O volume de distribuio aparente descrito de 252 L (200 a
326 L) (CSAJKA et al., 2003).
47
A eliminao do EFV caracterizada pela elevada meia vida e possui um clearence

(CL), aps administrao oral, de 9,4 L/h (8,7 a 10,3 L/h) (CSAJKA et al., 2003).
Segundo estudo relacionando a farmacocintica do EFV com os gneros, o sexo
feminino apresentou uma ligeira diminuio do CL 9,08 L/h enquanto, no mesmo
estudo, o gnero masculino apresentou um CL de 10,2 L/h (OFOTOKUN; CHUCK;
HITTI, 2007). Aproximadamente 14 a 34% de uma dose contendo EFV marcado
radioativamente foram recuperados na urina e menos de 1% da mesma dose foi
excretada na urina na forma inalterada (EMEA, 2009). Os estudos realizados no
mostram efeito de primeira passagem significativo (GAO et al., 2007).
Estudos indicam que o EFV apresenta uma farmacocintica no-linear, isto pode ser
atribudo saturao do metabolismo e alterao do tempo de esvaziamento gstrico
que provoca um prolongamento da fase de absoro (CHIAPPETTA et al., 2011).
Em estudo realizado com ratos Sprague-Dawley e macacos Rhesus, BALANI et al.,
1999, obtiveram-se resultados que demonstraram a no linearidade da farmacocintica
do efavirenz quando administrado nas doses de 10, 40 e 160 mgKg-1 em ratos e doses
de 2, 10, 40, 80, 120 e 160 mgKg-1 em macacos (todas as doses foram administradas
na forma de suspenso). Os resultados da rea sob a curva em ratos, aps as doses
de 10, 40 e mgKg-1 foram 77 24, 890 269 e 5.400 1.900 M.min e em macacos,
os resultados mostraram rea sob a curva 232 86, 2.100 940, 16.100 7.600 e
44.200 17.500 M.min para as doses de 2, 10, 40 e 80 mgKg-1, respectivamente.
A FIGURA 4 mostra os resultados obtidos nos estudos comprovando a no linearidade
da farmacocintica.
48
FIGURA 4. Mdia ( DP) aps administrao intravenosa das doses de 2, 5 e 15

mgKg-1 (A) e mdia ( DP) aps administrao oral das doses de 10, 40 e 160 mgKg-1
(B) em ratos. (Adaptada de BALANI et al., 1999).
3.2.4. Bioequivalncia
Em estudos de bioequivalncia conduzidos para fins de registro do medicamento,
verificou-se que as cpsulas produzidas por via de granulao mida foram
bioequivalentes s formulaes micronizadas utilizadas nos ensaios clnicos. Para as
solues orais, utilizando solvente no aquoso na composio foi identificada uma
diminuio de 20% na quantidade de IFA absorvido. Para as formulaes de
comprimidos revestidos, foram testadas diversas formulaes e os resultados finais
para as apresentaes contendo 300 e 600 mg mostraram-se bioequivalentes
formulao referncia, cpsulas de 200 mg (EMEA, 2009).
O primeiro estudo de bioequivalncia, para fins de registro de comprimidos no FDA,
teve a participao de 12 voluntrios (jejum), sendo a dose administrada de 600 mg de
EFV da formulao utilizada nos estudos clnicos (cpsula 200 mg) e da formulao
teste (comprimido 600 mg) com um perodo de washout de 14 dias. Os resultados
mostraram bioequivalncia entre as formulaes, porm evidenciou-se efeito residual
entre os perodos, devido ao pequeno tempo de washout (FDA, 2002).
49
Para o segundo estudo, aumentou-se o tempo de washout para 28 dias e 28 voluntrios

(jejum) completaram o estudo de trs perodos para a avaliao dos comprimidos de
300 e 600 mg versus cpsulas de 200 mg. Os resultados de Cmx apresentaram-se fora
do especificado (80 -125%) com intervalo de confiana de 113,38 134,21 para 300 mg
e 108,80 128,79 para 600 mg (FDA, 2002).
Alteraes na formulao foram realizadas e um novo estudo com 21 voluntrios
(jejum) foi conduzido com 28 dias de washout e os resultados confirmaram a
bioequivalncia entre cpsulas de 200 mg e os comprimidos de 300 e 600 mg (FDA,
2002).
Em um estudo de bioequivalncia aberto, cruzado 2 x 2 e 35 dias de washout realizado
pela empresa Ranbaxy Laboratories Limited da ndia no ano de 2005 com 40
voluntrios (36 finalizaram o estudo), os resultados nos indivduos sadios apresentaram
Cmx igual a 3,604 1,012 g/mL, ASC de 88,075 3,604 g.h/mL e tmx de 3,5 1,0
hora para a formulao teste. Para a formulao referncia Sustiva, lote N ESD158A,
os resultados encontrados foram 3,131 1,381 g/mL, 81,994 30,083 g.h/mL e 3,5
1,2 hora para Cmx, ASC e Tmx, respectivamente. Os medicamentos foram
considerados bioequivalentes (OMS, 2011).
3.2.5. Caractersticas Fsico-qumicas
O EFV possui frmula molecular C14H9ClF3NO2, atividade ptica e um peso molecular
de 315,68 g/mol, como apresentado na figura 5. Apresenta-se como um p cristalino
branco ou levemente amarelado, faixa de fuso entre 136C e 141C, praticamente
insolvel em gua e solvel em metanol e diclorometano (DE CLERCQ, 1998).
A solubilidade do EFV em gua 9,2 g/mL, com pH 8,7 a 25C, sendo incrementada
quando o pH aumentado para valores acima de 9,0. Solues alcolicas solubilizam
facilmente o EFV: 725 mg/mL, 663 mg/mL e 598 mg/mL para solubilizao em metanol,
etanol e isopropanol, respectivamente. A molcula apresenta um pKa de 10,2 e um
coeficiente de partio octanol/gua de 5,4 (ROWE et al., 1999).
50
Apresenta-se como uma molcula muito lipoflica (solubilidade intrnseca em gua de 4

gmL-1) (CHIAPPETTA et al, 2010). Com morfologia predominantemente de agulhas
fundidas e quebradas, com tamanhos de partcula de aproximadamente 3 m (D50) e
aproximadamente 13 m (D90) e uma densidade compactada de aproximadamente 0,1
g/cm3 (GAO et al., 2007).
A molcula possui um carbono quiral que confere atividade ptica de configurao S
[]D20 = -84,7 (c = 5,0 g/mL), a atividade biolgica est relacionada ao enantimero
levgiro e tem em sua rota sinttica, o passo mais crtico, a etapa de obteno da
pureza enantiomrica (XU et al., 2000).
FIGURA 5: Estrutura molecular plana do EFV.

Segundo o sistema de classificao biofarmacutica (AMIDON et al., 1995)
considerada uma molcula pertencente classe II por apresentar baixa solubilidade em
gua e alta permeabilidade intestinal (YANG; GREY; DONEY, 2010). Estudos de
permeabilidade com clulas Caco-2 em monocamada mostraram um coeficiente de
permeabilidade aparente de 8.92 x 10-5 cm/s (TAKANO et al., 2006).
A sntese do EFV foi descrita pela primeira vez em 1995, com uma rota composta de
cinco etapas chegando a um composto com pureza enantiomrica acima de 98%
(PINHEIRO; ANTUNES; FORTUNAK, 2008).
51
Em 2001, MONTGOMERY et al., descreveram um mtodo cromatogrfico para

deteco de 10 impurezas de sntese e possveis produtos de degradao (SR695;
SD573; SM097; Metil-DMP 266, SV997; SD573-Metil carbamato, SV993; SD572;
SG275 e SW965), o mesmo mtodo foi aplicado a amostras que passaram por stress
cido (HCl 0,1N), stress alcalino (NaOH 0,1N) stress por oxidao (H2O2 3%) e stress
fotoltico. Aps anlise das amostras, o EFV mostrou degradao de 0,1%, 3,6%,
menor que 0,1% e 0,12% para as amostras em meio cido, bsico, perxido de
hidrognio e fotoltico, respectivamente. O meio bsico demonstrou o maior nvel de
degradao com a presena majoritria dos compostos SD573 e SM097.
Em estudo realizado pelo mesmo grupo de pesquisa, WEISSBURG et al., (2002)
realizaram uma otimizao do mtodo e a impureza majoritria SR695 (Figura 6) teve
uma melhor separao cromatogrfica (maior resoluo) em relao ao EFV.
Outras substncias relatadas foram identificadas por mtodos cromatogrficos para
garantir a pureza da matria-prima, publicados em farmacopias para identificao dos
compostos relacionados.
FIGURA 6: Estrutura molecular da impureza majoritria do efavirenz (SR695).

(Adaptada de WEISSBURG et al., 2002).
O EFV apresenta-se na forma cristalina, descrito com pelo menos 5 diferentes
polimorfos por RADESCA et al (1999) atravs da patente WO 99/6445 (DU PONT,
52
1999) onde os autores descrevem e comprovam o polimorfismo do efavirenz atravs de

ensaios de calorimetria exploratria diferencial (DSC) e difrao de raios X. Esto
descritos os processos de obteno dos diferentes polimorfos atravs de diferentes
tcnicas de recristalizao.
O polimorfo 1 caracterizado por ser o mais estvel termodinamicamente,
apresentando faixa de fuso entre 138 e 140C, por essa caracterstica deve ser o
mais comumente utilizado nas formulaes para uma garantia de maior estabilidade do
produto farmacutico (DU PONT, 1999). Segundo a mesma publicao, o polimorfo 2
apresenta uma faixa de fuso de 116 a 119C, o polimorfo 3 de 108 a 110C, o
polimorfo 4 de 95 a 100C e o polimorfo 5 uma faixa de fuso de 108 a 110C. Todos
os difratogramas foram apresentados evidenciando os valores dos ngulos de
espalhamento (2) para auxiliar na caracterizao dos compostos, bem como
diferenciao dos polimorfos.
Os dados relacionados caracterizao da estrutura cristalina so escassos, algumas
formas foram patenteadas recentemente (RAVIKUMAR; SRIDHAR, 2009; CUFFINI et
al., 2010) e existem ambigidades quanto ao atual nmero de formas cristalinas
descritas, os mtodos de preparao e suas propriedades. Os polimorfos descritos no
correspondem forma de maior estabilidade descrita na patente WO 99/6445 (Forma
1) (MAHAPATRA et al., 2010).
Outros polimorfos do EFV foram relatados em diversas patentes. O Quadro 1 adaptado
de CUFFINI, S.L. 2010 mostra as sobreposies das formas polimrficas com
diferentes nomenclaturas.
O QUADRO 1 correlaciona as diferentes nomenclaturas apresentadas em diferentes
patentes mostrando que alguns nomes correspondem mesma forma cristalina.
53
QUADRO 1. Polimorfos do efavirenz protegidos por patente Fonte: Cuffini, S.L. 2010
US
WO
WO
WO
WO
WO
5,965,729
99/6445
2006/018853
2006/030299
2006/040643
2006/040643
Forma I
Forma I
Forma 1
Forma 1
Forma
Forma II
Forma II
Forma 4
Forma III
Forma III
Forma 3
Polimorfo
Forma 2
Forma 2
Forma 5
Forma 5
Forma II
Forma H1
Forma H1
Forma
Forma
Forma
Forma
amorfa
amorfa
amorfa
Forma
Forma 2
Forma
Alfa
Forma
Forma
Beta
Forma
Forma
Delta
Forma N
Forma N,
(O,P)
O,P
3.2. Caracterizao de Insumo Farmacutico Ativo (IFA)

A qualidade do produto acabado est diretamente ligada qualidade dos insumos
farmacuticos utilizados na produo de medicamentos, garantindo que aps a
administrao ao paciente o frmaco atinja nveis plasmticos dentro da faixa
teraputica, ou seja, chegue circulao sistmica em concentraes seguras e
eficazes (HOURI, et al., 2002; KATRINIC, et al., 2009; PIFFERI; SANTORO; PEDRANI,
1999).
Diversos fatores esto relacionados com a velocidade e quantidade de frmaco que
chega corrente sangunea, dentre eles a qualidade farmacutica do medicamento e
do
IFA,
atendimento
aos
requisitos
de
qualidade
fsicos, fsico-qumicos
microbiolgicos (AALTONEN et al., 2009; STORPIRTS et al.,1999).
54
Diferentes rotas sintticas podem gerar IFA com maior nmero de impurezas, estas
podem contribuir para instabilidade do produto farmacutico, diminuindo a qualidade
final do medicamento (AALTONEN et al., 2009; KATRINIC et al., 2009). As diferentes
rotas de sntese podem gerar cristais com diferentes morfologias e contaminao do
IFA com diferentes produtos intermedirios da sntese (STORPIRTS et al.,1999).
Poole et al (1968) estudaram os fatores fsico-qumicos que influenciam na absoro da
ampicilina anidra e tri-hidratada. Baseado nos resultados encontrados durante as
pesquisas ficou evidenciada a necessidade de se detectar, quantificar e controlar todas
as etapas de preparao do medicamento, desde a sntese do frmaco at a
estocagem do mesmo nas prateleiras das farmcias, inclusive as caractersticas de
formas cristalinas do IFA e do produto formulado.
sabido que estruturas moleculares complexas podem se apresentar sob diferentes
estruturas fsicas, fenmeno este conhecido por polimorfismo, o que pode alterar as
propriedades fsico-qumicas dos frmacos, dentre elas a solubilidade e dissoluo,
fatores imperativos na biodisponibilidade de frmacos (SINGHAL; CURATOLO, 2004).
Aps a administrao de diferentes polimorfos na mesma formulao, a concentrao
plasmtica mxima (Cmx) e a rea Sob a Curva (ASC) podem ser bastante diferentes,
ao ponto de uma formulao chegar a nveis sub-teraputicos ou alternativamente
txicos.
A compreenso da natureza polimorfa de um frmaco parte fundamental do
planejamento de uma nova formulao seja ela um novo medicamento ou a tentativa de
se produzir um medicamento genrico. As substncias quando se apresentam como
slidos amorfos apresentam uma maior solubilidade que as suas formas cristalinas,
devido maior energia e mobilidade molecular, mas essas caractersticas levam
tambm a uma instabilidade que implicam em maior probabilidade de reverso para as
formas cristalinas estveis e metaestveis, sendo a forma metaestvel frequentemente
mais solvel que a forma estvel (CHIENG; RADES; AALTONEN, 2011).
55
Os processos produtivos de formas farmacuticas podem levar a alteraes dos

estados cristalinos dos frmacos. A mudana da forma cristalina pode acarretar
alteraes na temperatura de fuso, densidade, solubilidade, estabilidade fsica ou
qumica, dissoluo e biodisponibilidade de um frmaco e de sua formulao (CLAS,
DALTON, HANCOCK, 1999; YOSHIHASHI et al., 2000).
Por isso, importante a caracterizao por tcnicas diversas tais como, anlise trmica,
determinao do tamanho da partcula e da rea superficial, espectrofotometria na
regio do ultravioleta, espectroscopia na regio do infravermelho, difrao de raios X,
ressonncia magntica nuclear em estado slido, entre outras (NERY et al., 2008). A
TABELA 3 mostra as tcnicas analticas mais utilizadas na caracterizao de
substncias farmacuticas no estado slido e dados sobre as informaes extradas
sobre o comportamento do composto analisado (CHIENG; RADES; AALTONEN, 2011).
O tamanho de partculas outro fator que pode influenciar na dissoluo de frmacos e
consequentemente, afetar a biodisponibilidade, com alteraes de Cmx e ASC. Sabe-se
que quando as partculas de um frmaco so reduzidas, a velocidade de dissoluo
aumenta; a explicao est no aumento da rea superficial em contato com o solvente.
Atravs da equao de Noyes e Whitney, pode-se demonstrar a relao direta da rea
superficial com a taxa de dissoluo (ABDOU, 1995; SHARGEL; YU, 1999).
Para
frmacos
classificados
como
de
classe
II
(baixa
solubilidade
alta
permeabilidade), caso do EFV, o tamanho de partculas tem maior influncia no

processo de dissoluo alterando a velocidade e a quantidade de frmaco que atinge a
circulao sistmica (STORPIRTIS et al., 1999). O Sistema de classificao
biofarmacutica ser discutido no item 3.4.
BRITTAIN et al (1995) categorizou a caracterizao do estado slido em trs nveis:
nvel molecular, nvel de partculas e nvel de aglomerados de partculas.
56
Os estudos de caracterizao de frmacos de classe II so bastante relevantes, pois

devido baixa solubilidade aquosa, prefervel a obteno da forma amorfa no
desenvolvimento de novos medicamentos devido a sua maior solubilidade quando
comparada solubilidade das formas cristalinas estveis e metaestveis, essa maior
solubilidade pode levar a uma maior taxa de dissoluo e possivelmente a uma maior
biodisponibilidade (CHIENG; RADES; AALTONEN, 2011).
Como uma baixa solubilidade aquosa uma grande preocupao no desenvolvimento
de medicamentos, slidos amorfos oferecem uma alternativa atraente por causa de sua
maior solubilidade, que pode levar a melhorar a taxa de dissoluo, assim,
possivelmente, uma maior biodisponibilidade (RODRIGUES-SPONG et al., 2004; YU,
2001).
A importncia de tais estudos se d pelo fato de que as tcnicas modernas de
descobrimento de novos frmacos (avanos nos mtodos de High-throughput screening
HTS e a introduo da anlise qumica combinatria) mostram resultados que
aumentam o nmero de molculas, candidatas a frmacos, com baixa solubilidade em
gua (VAN DE WATERBEEMD; TESTA, 2009). De acordo com algumas estimativas,
mais de 40% de molculas com potencial farmacolgico apresentam alta lipofilicidade e
baixa solubilidade em gua (VAN DE WATERBEEMD et al., 2001).
57
TABELA 3. Tcnicas analticas mais utilizadas na caracterizao de frmacos em estado slido

Tcnica
analtica
IV-TF;
DRIFTS e
ATR
Raman
NIR
ss-RMN
Informaes extradas
Vantagens
Anlises a nvel molecular

- Vibraes intramoleculares
- Pequena quantidade de amostra
Formas polimrficas: Bandas
- Aquisio dos dados rpida
nicas e deslocamento de picos
- Bibliotecas com espectros
Forma amorfa: picos largos
- Instrumentos facilmente disponveis
- Informaes qumicas espaciais - Sem preparo de amostra para ATR
Formas polimrficas:
Bandas nicas e deslocamento
de picos
Forma amorfa: picos largos
- Complementar s informaes
das anlise de IV
- Informaes qumicas espaciais
- Pequena quantidade de amostra

- Sem preparo de amostra
- Anlise no destrutiva
- Capaz de analisar atravs de vidros
- Tolerncia da umidade do ambiente
- Disponibilidade de sondas ticas
- Em baixas freqncias pode ser
utilizado para anlise de partculas
- Sobreposio e combinao de - Aquisio de dados rpida
vibraes com infravermelho
mdio
- Sem preparo de amostra
- Sensibilidade para diferentes
- Capaz de analisar atravs de vidros
estados de hidratao
- Disponibilidade de sondas ticas
- Informaes qumicas espaciais - Pode ser utilizado para anlise de
partculas e quantificaes com
calibraes apropriadas
- Dinmica molecular
- Interaes: frmaco-farmco e
- Anlise qualitativa e quantitativa sem
frmaco-excipientes
calibrao
Desvantagens
- Preparo da amostra no IVTF e DRIFTS pode induzir a

uma transformao do
estado slido
- Interferncia da umidade
do ambiente
- Aquecimento da amostra
- Fluorescncia da amostra
- Fotodegradao
- Baixa sensibilidade
- Baixa seletividade
- Nvel de rudo alto
- Utilizao de quimiometria
para analisar o espectro
- Tempo de aquisio de
dados relativamente longo
- Relativamente caro
58
TABELA 3. Tcnicas analticas mais utilizadas na caracterizao de frmacos em estado slido (continuao)
Tcnica
analtica
TPS
DRX
Informaes extradas
Anlises a nvel de partculas

- Pequena quantidade de
Formas polimrficas: Picos nicos
amostra
Forma amorfa: Sem espectro
- Informao estrutural de 5 a 902
Formas polimrficas: Picos nicos
Forma amorfa: Sem picos
- Grau de cristalinidade
Raios-X de - Informao estrutural de 5 a 902

monocristal Formas polimrficas: Picos nicos
Forma amorfa: Sem picos
- Grau de cristalinidade
Raios-X de - Informao estrutural
pequeno
de 0.01 a 32
anglo
DSC
Vantagens
- Eventos trmicos:
Temperatura de transio vtrea
Temperatura de cristalizao
Temperatura de fuso
Capacidade trmica
Calor de fuso-transiocristalizao
- Interaes: frmaco-farmco e
frmaco-excipientes
amostra
- Anlise qualitativa e
quantitativa
Desvantagens
- Espectro afetado pela gua

- Relativamente caro
- Requer compresso da
amostra
- Sem informao sobre a
estrutura qumica
- Requer monocristal com

tamanho maior que 0.1 mm
- Tempo de aquisio de dados

- Sonda para anlise de nm a m relativamente longo
- Necessidade de avanos na
interpretao dos resultados.
- Anlise destrutiva
amostra
- Sem informaes sobre a
natureza dos eventos trmicos
quantitativa
- Inapta para discriminar
eventos trmicos sobrepostos
na mesma temperatura.
59
Tcnica
analtica
MTDSC
TG e DVS
IMC
SC
PLM
Informaes extradas
Vantagens

- Os mesmos do DSC
- Maior capacidade para
- Separao dos modos de
detectar eventos trmicos
aquecimento
pequenos e sobrepostos
- Transies envolvendo perda ou

ganho de massa
-Decomposio trmica
- Uso em conjunto com titulao
por Karl Fischer
- Mudana de calor em uma
reao: calor de cristalizao,
entalpia de slidos amorfos
- Mudana de calor em uma

reao: calor de soluo,
capacidade trmica de lquidos,
capacidade trmica de slidos
- Cristalinidade
- Morfologia, colorao e hbito
cristalino
- Quantidade de
solvato/hidrato na amostra
- Experimento simples
amostra
- Alta sensibilidade
quantitativa
- Estudo de estabilidade direto
nas condies de
armazenamento
quantitativa
amostra
- Fcil utilizao
- Pequeno preparo de amostra
- Variabilidade de temperatura
Desvantagens
- Maior nmero de variveis

experimentais
- Tempo de aquisio de dados
relativamente longo
- Interpretao dos termogramas
"separados" nem sempre
corretos
- Interferncia de excipientes
contendo gua
- Anlise destrutiva
- Inadequado para materiais
termolbeis
- Baixa especificidade
- Grande quantidade de amostra
- Baixa especificidade
- Grande quantidade de amostra
- Anlise destrutiva
- Longo tempo de anlise
- Informao quantitativa no
disponvel
60
Tcnica
analtica
SEM
Titulao por
Karl Fischer
BET
Densidade
Informaes extradas
Vantagens

- Propriedades topogrficas
- Maior resoluo
amostra
Anlises a nvel de aglomerado de partculas
- Quantidade de gua (absorvida
- Alta sensibilidade
ou hidrato)
- Anlise rpida
- Utilizao em conjunto com TG e
DVS
- rea superficial
- Anlise simples e confivel
- Densidade aparente e densidade
compactada
- Anlise simples e confivel

Desvantagens
- Requer preparo de amostra
- Amostra precisa ser dissolvida

- Amostras acima de 50 mg
- Degaseficao prvia
- Ajustes de quantidade
dependente da amostra
- Amostra precisa ser dissolvida
- Amostras acima de 50 mg
(Adaptada de CHIENG; RADES; AALTONEN, 2011).

Levantamento bibliogrfico do perodo de 2000 a 2010 apontam 123 estudos de caracterizao de frmacos no estado
slido, 90% destes estudos utilizaram pelo menos duas ou mais tcnicas, em mdia quatro diferentes tcnicas, das
listadas na TABELA 3. Na maioria dos estudos foi utilizada uma tcnica de anlise a nvel molecular e outra a nvel de
partculas. As anlises mais freqentes em ordem decrescente foram: (1) difrao de raios-X de ps, (2) calorimetria
exploratria diferencial, (3) espectroscopia no infravermelho mdio e (4) microscopia. O maior nmero de tcnicas
utilizadas em um nico estudo foi 8 (CHIENG; RADES; AALTONEN, 2011).
61
3.3. Sistema de Classificao Biofarmacutica - SCB

O conceito do sistema de classificao biofarmacutica foi estabelecido por AMIDON et
al. (1995) e diferencia os frmacos em quatro diferentes classes, levando em
considerao os parmetros de solubilidade e permeabilidade intestinal em dois
diferentes nveis: alto e baixo, segundo a FIGURA 7.
FIGURA 7. Sistema de classificao biofarmacutica (Adaptado de AMIDON et al,

1995).
A partir do sistema de classificao proposto, os estudos de correlao entre os
resultados da dissoluo in vitro de frmacos e os resultados de biodisponibilidade in
vivo tornaram-se viveis e diversos estudos de correlao in vitro in vivo (CIVIV) tm
sido conduzidos (CAMPOS, 2008).
O SCB caracterizado por trs nmeros adimensionais que auxiliam na classificao
dos frmacos: nmero de dose (D0), nmero de dissoluo (Dn) e nmero de absoro
(An)
62
Nmero de dose:
Equao 1
Nmero de dissoluo:
Equao 2
Nmero de absoro:
Equao 3
Onde:
Peff = Permeabilidade
R = Raio intestinal
tres = Tempo de residncia intestinal
= Constante de absoro
TDiss = Tempo de dissoluo
Cs = Solubilidade
D = Difusividade
= Densidade
r0 = Raio inicial das partculas
M0 = Dose do medicamento
V0 = Volume de gua na administrao da dose (usualmente 250 mL)
Os estudos de solubilidade e permeabilidade podem ser conduzidos de diversas

maneiras. Para avaliao da solubilidade, a padronizao de metodologias est
descrita em guia do FDA (2000), porm para avaliao da permeabilidade muitos so
os mtodos disponveis, mas de difcil padronizao.
Devido ao custo elevado dos ensaios in vitro para a avaliao da permeabilidade de
frmacos, KASIM et al (2004) e, posteriormente, TAKAGI et al (2006) propuseram a
classificao provisional empregando dados fsico-qumicos de frmacos e/ou
simulaes computacionais. Desta forma, a avaliao in silico apresentada como uma
nova ferramenta para a classificao biofarmacutica de frmacos (CAMPOS, 2008).
A classificao provisional realizada considerando-se, basicamente, os parmetros
nmero de dose (Do) e coeficientes de partio (Log P e/ou cLogP) do IFA. Os valores
de LogP e/ou cLog P so relacionados com os valores de permeabilidade (Peff) do
frmaco in vivo tendo como referncia os valores de permeabilidade e coeficiente de
63
partio do frmaco metoprolol. Assim, todo frmaco que apresentar valores de Log P
e/ou cLogP superiores ao do metoprolol so considerados frmacos de alta
permeabilidade (KASIM et al., 2004).
A classificao biofarmacutica tem sido bastante utilizada como ferramenta de auxlio
na deciso sobre a iseno de estudos de biodisponibilidade (bioiseno) para registro
de medicamentos. O FDA admite a bioiseno para frmacos de classe I, de acordo
com critrios de ensaios de dissoluo, j a OMS amplia a bioiseno para frmacos de
classe II e III e a comunidade europia restringe para frmacos da classe III, sempre
com critrios de dissoluo definidos (EMEA, 2007; FDA, 2000)
No Brasil, a ANVISA lanou a Resoluo de Diretoria Colegiada - RDC N 37, DE 3 DE
AGOSTO DE 2011 que dispe sobre o Guia para iseno e substituio de estudos de
biodisponibilidade relativa/bioequivalncia e d outras providncias:
(...) Seo III - Da bioiseno baseada no sistema de
classificao biofarmacutica (SCB)
Art. 7 A bioiseno baseada no sistema de classificao
biofarmacutica aplicvel a medicamentos genricos e
similares, bem como a medicamentos novos (assim
considerados apenas os previstos no pargrafo nico do
art. 3 desta Resoluo) orais de liberao imediata que
contenham frmacos presentes na Instruo Normativa n
4 de 3 de agosto de 2011 que dispe sobre a lista de
frmacos candidatos bioiseno baseada no sistema de
classificao biofarmacutica, formulados com excipientes
que no apresentem impacto sobre a biodisponibilidade e
que apresentem rpida dissoluo in vitro (...).
64
A Instruo Normativa n 4 de 3 de agosto de 2011 traz uma lista de doze frmacos. KAZIM et al. (2004) atravs da
classificao biofarmacutica provisional classificou dez dos doze publicados pela ANVISA de acordo com a TABELA 4.
TABELA 4. Classificao biofarmacutica provisional dos frmacos biosentos segundo a ANVISA.
Frmaco
Dose
mxima
(mg)
Solubilidade
Solubilidade
(mg/mL)
CLog
P
LogP
500
Ligeiramente solvel
3,33
0,601
1,02
1,18
3,5
Propranolol*
40
Solvel
33
0,000
2.75
2.65
Doxiciclina*
100
Muito pouco solvel
0,1
4,000
-0,60
-3,66
IV
IV
Estavudina
40
83
0,002
0,73
0,47
III
III
Fluconazol
50
Ligeiramente solvel
1,00
0,200
0,53
0,99
III
III
Isoniazida
300
Livremente solvel
125
0,01
-0,67
0,64
III
III
Levofloxacino
750
50
0,06
Metoprolol
100
Muito solvel
1000
0,0004
9,7
Metronidazol
500
Pouco solvel
10
0,2
-0,46
III
Paracetamol
500
0,1
20
0,49
0,89
IV
IV
cido
pKa(s) Classe SCB

LogP CLogP
III
III
Acetilsaliclico
(Adaptada de KAZIM et al., 2004) *Cloridrato
65
3.4. Dissoluo de formas farmacuticas slidas

A taxa de dissoluo de um frmaco a partir do estado slido definida como a
quantidade de frmaco que passa para soluo, por unidade de tempo, sob interface
lquido/slido, temperatura e composio do solvente, padronizados. No estudo da
biofarmacotcnica, o termo taxa de dissoluo se refere, geralmente, velocidade com
a qual o frmaco se dissolve a partir de uma forma farmacutica intacta ou seus
fragmentos e partculas formados durante o teste. Em sistemas biolgicos, a dissoluo
de medicamentos pode ser definida como o fenmeno em que um frmaco no estado
slido, se libera da forma farmacutica de administrao e se solubiliza (STORPIRTIS;
CONSIGLIERI, 1995).
Os ensaios de dissoluo esto envolvidos nas principais etapas da cadeia de
produo de um medicamento: desenvolvimento da formulao e do processo de
produo, controle de qualidade, base para correlao in vitro/in vivo e bioisenes
(MANADAS; PINA; VEIGA, 2002). A Tabela 5 resume os objetivos dos ensaios de
dissoluo luz do ciclo de vida de um medicamento (BROWN et al., 2004).
Tabela 5. Objetivos da dissoluo durante o ciclo de vida de um medicamento
Fases
Objetivo do ensaio de dissoluo
0eI
Desenvolvimento de um mtodo que claramente estabelea os

mecanismos de liberao in vitro e de solubilizao do ativo.
II e III
Identificar um ensaio que possa prover potencial correlao in

vivo-in vitro ou outra informao biorrelevante.
Durante e aps
Assegurar a consistncia lote a lote do produto e do processo de
o registro
fabricao e avaliar a estabilidade do mesmo durante o prazo de

validade.
Mudanas
Prever como uma nova formulao agir in vivo. Submisso s
ps-registro
autoridades sanitrias (uso da dissoluo para dispensa de

estudos in vivo).
(Adaptada de BROWN et al, 2004).
66
A avaliao do perfil de dissoluo do IFA a partir da forma farmacutica em funo do

tempo uma ferramenta indispensvel no estabelecimento do padro de qualidade e
avaliao dos pontos crticos de um processo de produo (MARCOLONGO, 2003).
Para as forma farmacuticas slidas de uso oral que veiculam frmacos poucos
solveis, a dissoluo se apresenta como a principal ferramenta de avaliao da
qualidade biofarmacutica, visto que, a taxa na qual frmacos com baixa solubilidade
em gua se dissolvem a partir da forma farmacutica, intacta ou desintegrada, no trato
gastrintestinal, geralmente limitante para a absoro sistmica dos mesmos. Portanto,
a dissoluo de ativos fracamente solveis a partir de formas farmacuticas de
liberao imediata possui muitos desafios (BROWN et al., 2004).
A absoro sistmica de um frmaco decorrente de uma sucesso de etapas
presentes aps administrao da forma farmacutica. Para uma forma slida, como
um comprimido, o processo constitudo pela desintegrao do produto, pela
dissoluo do frmaco em um meio biolgico (aquoso) e a absoro atravs das
membranas celulares at atingir a circulao sistmica (SHARGEL; YU, 1999).
A taxa de absoro ser determinada pela etapa mais lenta deste processo e, portanto
limitante para a absoro. Para um frmaco com baixa solubilidade em gua (Ks<Kr), a
taxa na qual o frmaco se dissolve a mais lenta portanto, a dissoluo a etapa
limitante. De forma contrria, para um frmaco com alta solubilidade em gua, a
dissoluo a etapa mais rpida e a taxa na qual o frmaco atravessa ou permeia as
membranas celulares a etapa limitante (Kd>Kp). A absoro sistmica explicada na
FIGURA 8, que evidencia as constantes de velocidades envolvidas em todo o processo
(CARDOT; BEYSSAC; ALRIC, 2007).
67
Formulao
Desintegrao - Kdd
Liberao - Kr
Dissoluo do IFA - Ks
Kd
Velocidade de dissoluo
Frmaco
solubilizado
Absoro - Kp
Frmaco
Absorvido
Kdd Constante de desintegrao

Kr Constante de liberao
Ks Constante de solubilizao
Kd Constante de dissoluo
Kp Constante de absoro
FIGURA 8. Principais fenmenos envolvidos na absoro in vivo. Esquema geral de
absoro sistmica aps administrao oral (CARDOT; BEYSSAC; ALRIC, 2007).
Duas formulaes diferentes podem resultar em diferentes perfis farmacocinticos, seja
porque a liberao do frmaco no local de absoro foi incompleta (problemas na forma
farmacutica) ou porque a concentrao de frmaco solubilizado seja insuficiente
(problema do insumo farmacutico ativo) ou ainda devido processos fisiolgicos no
lineares, tais como: alto grau de efeito de primeira passagem, baixa permeabilidade
gastrintestinal, presena de transportadores de efluxo ou ainda absoro por processos
no passivos (PANCHAGNULA; THOMAS, 2000).
Quando as caractersticas fsicas e fsico-qumicas esto elucidadas e as rotas de
sntese atendem s essas especificaes, a liberao do frmaco a partir das formas
farmacuticas passa a se configurar como o nico fator relevante no processo de
absoro que tem viabilidade para estudos in vitro (CARDOT; BEYSSAC; ALRIC,
2007).
68
Os ensaios de perfil de dissoluo so realizados de forma instrumental utilizando

equipamentos (dissolutores) com o auxilio de aparatos. Atualmente, encontram-se
descritos na literatura um grande nmero de aparatos, porm apenas alguns tiveram a
aplicao validada (MARCOLONGO, 2003).
Os aparatos mais utilizados no controle de qualidade e na avaliao das caractersticas
biofarmacoctcnicas de produtos farmacuticos so:
Aparato USP 1 (cesta) Apresenta a vantagem de confinar a forma farmacutica
dentro de um cilindro com uma malha na extremidade inferior, importante na
anlise de cpsulas que tendem a flutuar (ABDOU, 1989).
Aparato USP 2 (p) formado por uma haste como o aparato 1, porm na
extremidade a cesta substituda por uma p com duas lminas formando um
ngulo de 180 graus.
Aparato USP 3 (cilindros recprocos) Baseado no aparelho de desintegrao no
qual a forma farmacutica fica suspensa em um tubo que se move atravs do
meio de dissoluo e em determinados intervalos de tempo o meio trocado.
Aparato USP 4 (clulas de fluxo contnuo) Consiste em um sistema no qual a
forma farmacutica fica presa em uma clula na qual o meio, impulsionado por
uma bomba, passa no sentido de baixo para cima, podendo ser configurado
como sistema aberto ou fechado. A FIGURA 9 mostra esquema de configurao
de sistema aberto.
69
FIGURA 9. Esquema de funcionamento da clula de fluxo que pode ser configurado na

sada do aparato IV como sistema aberto
ou sistema fechado
O desenvolvimento racional de medicamentos (formas farmacuticas slidas de uso

oral) frequentemente otimizado com o auxlio de uma importante ferramenta:
correlao in vitro in vivo CIVIV, que auxilia na reduo do nmero de pesquisas
envolvendo seres vivos, possibilita o estabelecimento de critrios de dissoluo e
funciona como indicativo de bioequivalncia entre dois produtos, viabilizando os
registros atravs da bioiseno (CARDOT et al., 2007).
A FIGURA 10 mostra como as caractersticas do IFA, da formulao e processo de
produo podem interferir na qualidade do produto acabado, assim como o
desenvolvimento, validao e conduo dos ensaios de cintica de dissoluo podem
interferir nos resultados encontrados e consequentemente na interpretao da
qualidade do produto analisado (CARDOT; BEYSSAC; ALRIC, 2007).
Formulao e processo de
produo
70
Tipo de formulao: LI, LM,

tipo de LM, etcx
Formula: composio,
excipientes, quantidade de
IFA e excipientes, etcx
Processo de produo:
mistura, granulao,
secagem, compresso,
revestimento.
Aparatos de
dissoluo
Meios de dissoluo
Parmetros de
dissoluo
IFA
IFA: fonte, qualidade,

pureza, sais, etc.
Resultados da
dissoluo:
Percentual
dissolvido
x
tempo
IFA: solubilidade, velocidade

de dissoluo, tamanho de
partculas, forma cristalina,
pKa, etc.
FIGURA 10. Aspectos farmacuticos envolvidos na dissoluo de medicamentos. Setas

contnuas: informaes disponveis diretamente. Setas pontilhadas Informaes
indiretas (Adaptada de CARDOT; BEYSSAC; ALRIC, 2007).
Para tanto, vrios pesquisadores vem investindo ateno especial ao desenvolvimento
de meios de dissoluo e condies experimentais que se assemelhem s condies a
serem encontradas in vivo. Mimetizao do pH do trato gastrintestinal, nas condies
de jejum e ps-prandial como descrito na TABELA 6, alm de meios biorrelevantes que
utilizam sais biliares e sistemas de tampes para manuteno da osmolaridade como
descrito na tabela 7 (DRESSMAN et al., 1998).
71
TABELA 6. Valores de pH no trato gastrintestinal em jejum e ps-prandial

Poro anatmica
Jejum
Estmago
1,4 2,1
Duodeno
4,9 6,4
Jejuno
4,4 6,5
leo
6,5 8,0
(Adaptada de DRESSMAN et al., 1998)
Ps-prandial
3,0 7,0
5,1 5,2
5,2 6,2
6,8 8,0
TABELA 7. Composio de meios biorrelevantes jejum (FaSSIF) e alimentado

(FeSSIF)
FaSSIF
Fasted State Simulated Intestinal Fluid
Composto
Quantidade
NaH2PO4.H2O
1,977 g
Lecitina
0,75 mM
Taurocolato sdico
3,0 mM
NaOH
0,174 g
NaCl
3,093 g
H2O desmineralizada
q.s.p. 1000 mL
pH = 6,5
Osmolaridade 270 mOsmol/kg
(Adaptado de MARQUES, 2004)
FeSSIF
Fed State Simulated Intestinal Fluid
Composto
Quantidade
cido actico
8,65 g
Lecitina
3,75 mM
Taurocolato sdico
15 mM
NaOH
4,04 g
NaCl
11,874 g
H2O desmineralizada q.s.p. 1000 mL
pH = 5,0
Osmolaridade 670 mOsmol/kg
As avaliaes de novos produtos bem como de medicamentos genricos tm

encontrado nos diferentes aparatos, meios e parmetros de dissoluo uma importante
ferramenta na avaliao das caractersticas biofarmacotcnicas envolvidas na
tecnologia farmacutica de processo de produo e composio qualitativa e
quantitativa das formulaes propostas (MANADAS; PINA; VEIGA, 2002).
Essas anlises, sejam por predio do comportamento in vivo atravs de ensaios de
dissoluo que permitam a correlao in vitro in vivo ou comparao direta da cintica
de liberao entre um medicamento teste e um medicamente de referncia possibilitam
um desenvolvimento biofarmacutico racional e menor envolvimento de seres humanos
em pesquisas clnicas (CARDOT; BEYSSAC; ALRIC, 2007; DRESSMAN et al., 1998;
SUGANO et al., 2007).
72
Estudos comparando os resultados de dissoluo de frmacos SCB classe II em meios

biorrelevantes com meios mais simples que utilizam surfactantes convencionais como o
lauril sulfato de sdio, mostram que resultados podem ser preditivos da cintica de
liberao in vivo e podem ser utilizados com menor custo no desenvolvimento de novos
produtos, bem como utilizao na rotina de controle de qualidade na indstria
farmacutica (LEHTO et al., 2011).
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85
Captulo 2
Caracterizao do
estado slido
86
4. Captulo 2 - Caracterizao de estado slido do Efavirenz um

frmaco SCB classe II como ferramenta de Quality by Design
4.1. Resumo do captulo
O efavirenz (EFV) um inibidor da transcriptase reversa no anlogo de nucleosdeo e
o primeiro medicamento anti-HIV registrado para utilizao em dose nica. O EFV
classificado como de classe biofarmacutica II (SCB classe II) possui cinco diferentes
polimorfos descritos. A incluso de fundamentos cientficos no desenvolvimento de
medicamentos Quality by Design (QbD) proporciona uma compreenso das
propriedades dos IFAs e produtos acabados. Neste trabalho foram realizadas anlises
em nvel de potncia (Teor e impurezas), em nvel de molculas (infravermelho), em
nvel de partculas (DSC, TG, MEV, DRX, microscopia tica) e em nvel de aglomerado
de partculas (densidade aparente e compactada e umidade). A solubilidade, dissoluo
intrnseca e dissoluo aparente foram analisadas em meios clssicos e meios
biorrelevantes. Os resultados mostraram que em nvel de teor os trs fornecedores
esto dentro das especificaes, porm o perfil de impurezas diferente entre os
produtos avaliados. Em nvel de molculas e partculas possuem as mesmas
caractersticas com mesmo perfil trmico e padro de difratograma. Em nvel de
aglomerados partculas os resultados mostraram diferenas entre os trs fabricantes
com diferenas na distribuio granulomtrica que levou a resultados de solubilidade e
velocidades de dissoluo diferentes em todos os meios analisados. A dissoluo
intrnseca no foi discriminativa para diferenciar, pois com a presso exercida para
formao dos discos, as propriedades de aglomerados de partculas no interferiram no
processo. Em face ao exposto imperativo que para avaliao da qualidade do EFV se
faz necessrio a incluso do conceito de Quality by Design para imposio de limites
com especificaes bem definidas para parmetros como tamanho de partculas,
umidade e densidade.
Palavras chave: Efavirenz, caracterizao do estado slido, Quality by Design.
87
4.2. Introduo
De acordo com a definio da International Conference on Harmonisation (ICH),
Quality-by-Design (QbD) uma abordagem sistemtica para o desenvolvimento que
comea com os objetivos pr-definidos e enfatiza a compreenso do produto e
processo e do controle do processo, com base em dados cientficos slidos e gesto de
riscos de qualidade (ICH, 2009).
Durante os ltimos anos, a qualidade farmacutica (WOODCOCK, 2004) e estratgias
de implementao QbD (YU, 2008; RATHORE, WINKLE, 2009) para vrias reas de
produtos farmacuticos foram bastante estudadas.
A implementao dos guias Q8/Q9/Q10 da ICH contribuiu para o incremento do
desenvolvimento racional de medicamentos. A aplicao do conceito de QbD
adicionando princpios cientficos no desenvolvimento de formulaes, proporciona uma
compreenso das propriedades dos IFAs e produtos acabados com atribuio de
especificaes atravs da elaborao de um design space (estabelecimento de
especificaes) das variveis crticas (WU, WHITE, KAN, 2011).
O efavirenz (EFV) (S)-6-cloro-4-(ciclopropiletinil)-1,4-dihidro-4-(trifluorometil)-2H-3,1benzoxazina-2-ona (BEST; GOICOECHEA, 2008) um inibidor da transcriptase reversa
no anlogo de nucleosdeo (DE CLERCQ, 1998) e o primeiro medicamento anti-HIV
registrado para utilizao em dose nica (Figura 1). Esta indicao posolgica
atribuda elevada meia vida plasmtica, que indica a manuteno de concentraes
plasmtica efetivas por longos perodos (HILLERY, 1999).
O governo brasileiro obteve em 2007, atravs de licenciamento compulsrio, o direito
de produo do insumo farmacutico ativo (IFA), bem como do produto acabado. Os
custos de aquisio do EFV para atendimento necessidade brasileira em 2012 foi
estimado em U$ 236,8 milhes de dlares (RODRIGUES; SOLER, 2009).
88
O custo do tratamento representa uma das maiores barreiras ao acesso universal.

Aproximadamente de 65 90% do custo do produto acabado utilizado no regime
teraputico de combate ao HIV vem do valor do IFA (PINHEIRO; ANTUNES;
FORTUNAK, 2008). Para reduzir o custo do tratamento necessrio o desenvolvimento
de novas rotas sintticas por indstrias farmoqumicas nacionais e/ou aquisio
provenientes de produtores com menor preo.
No mercado indiano, o IFA pode ser adquirido com custo 25% inferior quando
comparado com aquele adquirido pelo detentor da rota sinttica original, ou seja, das
empresas detentoras de patente (PINHEIRO; ANTUNES; FORTUNAK, 2008).
Na descrio da rota sinttica publicada em 1996 por YOUNG et al. dados mostram que
o enantimero R no proporciona resposta teraputica contra o vrus HIV, em
contrapartida a etapa de maior custo na sntese do EFV a destinada obteno da
pureza enantiomrica (XU et al., 2000).
O EFV classificado com classe II de acordo com o sistema de classificao
biofarmacutica por possuir baixa solubilidade e alta permeabilidade (YANG; GREY;
DONEY, 2010). De acordo com a classificao biofarmacutica provisional que se
utiliza de propriedades como o nmero de dose e coeficiente de partio (KASIM et al.,
2004) o EFV classificado tambm como classe II (SUGANO et al., 2007).
Frmacos de classe II apresentam a absoro in vivo e a biodisponibilidade limitadas
pela dissoluo in vivo (GALIA et al., 1998), por esta razo os ensaios de dissoluo
necessitam ser realizados de forma a promover dados discriminativos para refletirem o
fenmeno in vivo (YU et al., 2004).
O mesmo IFA, em diferentes formas cristalinas pode resultar em diferentes
solubilidades, acarretando diferenas na quantidade de frmaco disponvel para
permear as membranas biolgicas (absoro), reduzindo a biodisponibilidade e
89
conseqente decrescendo a atividade da formulao farmacutica (MACCARONI;

MALPEZZI; MASCIOCCHI, 2009).
Vrios parmetros fsico-qumicos so importantes na dissoluo do produto
farmacutico no trato gastrintestinal, tais como: tamanho molecular, tamanho de
partculas, molhabilidade, hidrofilicidade e estrutura cristalina (DRESSMAN et al., 1998).
A caracterizao do estado slido dos frmacos se constitui como uma grande rea de
pesquisa, desenvolvimento e inovao com o intuito de obter o melhor custo benefcio
para formas farmacuticas de uso oral (KATRINIC et al., 2009). As diversas implicaes
advindas da natureza do estado slido de frmacos requerem investigaes amplas
dos agentes teraputicos (CHIENG; RADES; AALTONEN, 2011).
As investigaes podem ser conduzidas com o auxlio de ferramentas tericas, bem
como experimentos prticos com a utilizao de anlises qumicas instrumentais
(AALTONEN et al., 2009).
Muitas tcnicas encontram-se disponveis para a caracterizao do estado slido de
frmacos. Recomenda-se a utilizao de, no mnimo, duas tcnicas complementares,
as mais comumente aplicadas so: difrao de raios x de p (DRX), calorimetria
exploratria diferencial (DSC), calorimetria exploratria diferencial modulada (mDSC),
infravermelho com transformada de Fourier (IV-TF) e microscopia (CHIENG; RADES;
AALTONEN, 2011).
A proposta do presente trabalho foi a caracterizao do estado slido de trs diferentes
matrias-primas de fornecedores nacionais e avaliao da influncia dos parmetros
fsicos e fsico-qumicos no desempenho biofarmacotcnico atravs de anlise de
solubilidade, dissoluo intrnseca e dissoluo aparente em meios convencionais e
meios biorrelevantes.
90
FIGURA 1: Estrutura molecular do efavirenz
4.3. Material e mtodos

O estudo foi dividido em trs grandes linhas de avaliao das matrias-primas
envolvidas na anlise, EFV 16.108, EFV 16.117 e EFV 16.237, as trs foram obtidas de
diferentes fornecedores no mercado brasileiro. Os campos de avaliao foram: anlise
da potncia (pureza e perfil de impurezas), anlise em nvel molecular, anlise em nvel
de partculas e anlise em nvel de aglomerados de partculas, sendo as trs ltimas de
acordo com (CHIENG; RADES; AALTONEN 2011), seguidos de ensaios de solubilidade
e cinticas de dissoluo (intrnseca e aparente).
4.3.1. Anlise de potncia
4.3.1.1. Teste de teor
Para anlise foi utilizado um sistema Hitachi HPLC composto por uma bomba
quaternria (L-2130), compartimento de coluna termostatizado (L-2300), detector
ultravioleta (L-2400), amostrador automtico (L-2600), o controle do equipamento e
processamento dos dados foi realizado atravs do software EzChrom v.3.3.2, agilent.
As anlises foram realizadas por Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE) com
fase mvel composta por acetato de amnio pH 3.0 : Acetonitrila (40:60 v/v), bombeada
91
sob fluxo de 1,5 mLmin-1 e coluna cromatogrfica C18 150 x 4.6 mm, 10 m, volume de
injeo de 35 L, deteco por ultravioleta em 252 nm com tempo de anlise de 8 min.
Foram pesadas amostras de 100 mg, dissolvidas em 100 mL de metanol grau CLAE e
realizadas as diluies para obteno de amostras com concentrao de 120 gmL-1.
4.3.1.2. Anlise do perfil de impurezas
As impurezas foram avaliadas com auxlio do mtodo publicado para anlise indicativa
de estabilidade (MONTGOMERY et al., 2001). O mtodo por CLAE utilizou coluna
analtica Zorbax SB-CN (15cm x 4.6mm, 3.5 m), fase mvel bombeada a 1,5 mLmin-1
sob gradiente com os seguintes eluentes: eluente A - 90% de gua purificada e 10% de
metanol adicionada de 0,05% de cido trifluoroactico e eluente B - 90% de metanol e
10% de gua purificada adicionada de 0,05% de cido trifluoroactico. O volume de
injeo das amostras foi de 35 L e a deteco a 250 nm com tempo total de anlise de
40 min. As amostras foram preparadas de maneira semelhante ao teste de teor. O
sistema cromatogrfico utilizado foi o mesmo descrito para a anlise de teor.
4.3.2. Anlise em nvel de molculas
4.3.2.1. Espectroscopia no infravermelho
A anlise foi realizada atravs de pastilha de Kbr utilizando espectrofotmetro de
infravermelho com transformada de Fourier IFS66 (Bruker). A anlise dos trs lotes de
matria-prima foram realizadas alm da anlise da substncia qumica de referncia
para comparao na faixa de 4000 e 350 cm-1.
4.3.3. Anlise em nvel de partculas
92
4.3.3.1. Anlises trmicas

As curvas de DSC foram obtidas em uma clula DSC-50 (Shimadzu) utlizando porta
amostras de alumnio, fechado, com cerca de 2 mg de amostra, sob uma atmosfera
dinmica (50 mLmin1) e razo de aquecimento de 2 e 10 Cmin1 na faixa de 25 a 600
C. As clulas de DSC foram calibradas com indio (ponto de fuso 156,6 C e entalpia
de fuso = 28,54 Jg1) e zinco (ponto de fuso 419,6 C) (VIANA et al., 2008).
A termogravimetria (TG) e a termogravimetria derivada (DTG) foram obtidas em uma
termobalana modelo TGA Q60 (Shimadzu) em uma faixa de temperatura de 25 a 600
C, utilizando porta amostras, fechado, de platina com 3 mg ( 0.3) de amostra sob uma
atmosfera dinmica (50 mLmin1) e razo de aquecimento de 2 e 10 Cmin1 (VIANA et

al., 2008).
4.3.3.2. Microscopia tica e eletrnica de varredura
A anlise em microscopia tica foi realizada com o microscpio Nikon SMZ1000
acoplado a uma cmera digital Nikon digital sight DS-L1, as imagens foram obtidas com
zoom de 8x, 10x e 80x, as amostras foram preparadas para anlise de acordo com
procedimento descrito na farmacopia americana (USP, 2011a).
A microscopia eletrnica de varredura foi realizada com o auxlio do equipamento SS550 (Shimadzu) sendo a deteco dos eltrons secundrios responsvel pela imagem
da topografia da superfcie da amostra. a distncia de trabalho (WD) foi de 13 mm, a
magnificncia de 800, 4500 e 15000 vezes. As amostras foram previamente
metalizadas com ouro, numa camada de 25nm de espessura, no tempo de 2,5 minutos,
utilizando equipamento metalizador Quick Coater, modelo SC701, Sanyu Electron
(USP, 2011a).
93
4.3.3.3. Tamanho de partculas

A distribuio de tamanho de partculas foi medida por difrao a laser em um
equipamento Malvem Mastersizer S equipado com uma lente 300 F e uma cmara de
para p seco MSX 64. A presso de ar foi fixada em 0,3 Mpa e foram calculados os
seguintes parmetros: dimetro de partculas em volume de distribuio a 10%, 50% e
90% (d(v,0.1), d(v,0.5) e d(v,0.9)), respectivamente, dimetro mdio de partculas em
volume de distribuio (d[4,3]) e rea superficial do dimetro mdio de partculas
(d[3,2]). O controle do equipamento e processamento dos dados foi realizado atravs
do software Mastersize X v2.18 da Malvern instruments (Reino unido).
4.3.3.4. Difrao de Raios-X
A difrao de Raios-X de ps das trs amostras de EFV foi realizada pelo difratmetro
D5000 (Siemens). As amostras foram cuidadosamente analisadas na faixa de 5 - 56 2
com corrente de 40 mA e tenso de 40 kV com 0,05 por passo e um tempo de 5 s
por passo.
4.3.4. Anlise em nvel de aglomerado de partculas
4.3.4.1. Densidade aparente e compactada
Foram pesados 20g de cada matria-prima, transferidas para uma proveta calibrada
com deslocamento vertical de 3 0,2 mm do equipamento Tapped Density Tester 50 1000 (Varian) e submetida a 10, 500 e 1250 compactaes. Os clculos foram
realizados de acordo com procedimento descrito na farmacopia americana (USP,
2011b). As amostras foram analisadas em trs rplicas.
94
4.3.4.2. Umidade por titulao Karl Fischer

O contedo total de gua de cada lote do IFA analisado foi determinado por titulao
Karl Fischer em DL 22 Food and Beverage analyzer (Mettler Toledo). As amostras
foram
tituladas
com
metanol,
grau
espectroscpico
(Merck).
Alquotas
de
aproximadamente 100 mg pesadas em balana AE260 (Mettler Toledo) de cada lote

foram adicionadas ao equipamento aps a equilbrio do sistema, cada lote de IFA foi
analisado em trs rplicas.
4.3.5. Solubilidade e cintica de dissoluo
Antes da avaliao da solubilidade, da dissoluo intrnseca e da dissoluo aparente,
amostras de EFV SQR foram submetidas a um teste de estabilidade nos meios
utilizados nos ensaios, Lauril Sulfato de Sdio (LSS) 1,0%, Fludo intestinal simulando
jejum (FaSSIF) e Fludo intestinal simulando alimentao (FeSSIF).
Amostras de 10 mg, trs rplicas, foram pesadas e transferidas para bales
volumtricos com capacidade para 250 mL que tiveram seus volumes completados com
os solventes e colocados em banho maria com temperatura controlada em 37C sob
agitao de 150 rpm e analisadas aps 24 horas atravs de mtodo por CLAE,
validado.
No momento da anlise, foi preparada uma amostra de Substncia Qumica de
Referncia (SQR) e realizadas sucessivas diluies para obteno de uma curva de
calibrao (6, 12, 24, 30 e 48 gmL-1) em cada meio de dissoluo separadamente.
Adicionalmente foram tambm preparadas trs rplicas de 40 gmL-1, correspondente
100% de solubilizao.
As concentraes foram calculadas atravs da equao da reta do tipo y = ax + b, onde
y a resposta do equipamento (rea do pico), x a concentrao nominal dos padres
de calibrao, a o coeficiente angular e b o coeficiente linear.
95
4.3.5.1. Estudo de solubilidade

A solubilidade das matrias-primas foi avaliada em diferentes meios de dissoluo, para
cada meio de dissoluo utilizado, trs rplicas de cada lote foram analisadas. Lauril
Sulfato de Sdio (LSS) 0,2%, 0,25%, 0,5% e 1,0% e os meios biorrelevantes FaSSIF e
FeSSIF, ambos preparados segundo dados publicados na literatura (DRESSMAN et al.,
1998).
Para cada avaliao foram pesadas trs rplicas de 100 mg de cada lote e transferidos
para bales volumtricos de 250 mL que foram mantidos a 37C sob agitao de 150
rpm. As amostras foram coletadas depois de 24 h de ensaio e analisadas por mtodo
validado de CLAE (dados no publicados).
4.3.5.2. Dissoluo intrnseca
Os ensaios foram conduzidos em um sistema Hanson SR6 (Hanson). Foram pesadas
amostras de 150 mg de cada lote e comprimidas para formao de discos no
desintegrveis de 8 mm de dimetro com fora de compresso de 0,5 e 1,0 toneladas,
a rea de superfcie de cada disco foi de 4,02 cm2. A formao dos discos seguiu
metodologia descrita em literatura (WOOD; SYARTO; LETTERMAN, 1965). Os ensaios
de dissoluo intrnseca foram realizados em 900 mL de LSS 0,5% em gua deionizada
a 37 C 0.5 C como meio de dissoluo, o aparato utilizado foi o disco de rotao
que proporciona que apenas uma face entre em contato com o meio de dissoluo a
uma velocidade de 50 rpm. As amostras foram coletadas nos tempos de 5, 10, 15, 20,
45 e 90 minutos, filtradas com auxlio de seringas e membranas filtrantes de 0,45 m e
foram analisadas por mtodo validado de CLAE (dados no publicados). As anlises
foram realizadas em 4 rplicas para cada IFA.
96
4.3.5.3. Dissoluo aparente

Os perfis de dissoluo foram obtidos em equipamento CE70 (Sotax) para aparato USP
IV, acoplado ao coletor de amostras MS70 (Sotax). Amostras de 60 mg de cada lote
foram pesadas em trs rplicas e transferidas para clulas de fluxo para p de 12 mm.
Os estudos foram conduzidos nos meios de dissoluo LSS 0,5% e 1,0% em gua
deionizada e os meios biorrelevantes FaSSIF e FeSSIF, segundo mtodo descrito
(DRESSMAN et al., 1998). Devido aos resultados apresentados no estudo de
solubilidade os meios LSS 0,2% e 0,25% no foram utilizados por no oferecerem
condies sink para a anlise.
Para cada anlise foram utilizados 500 mL de meio a 37 C 0.5 C, bombeados a uma
vazo de 20 mLmin-1 em um sistema fechado. As amostras foram coletadas em 5, 10,
15, 20, 30, 45, 60, 90 e 120 min. filtradas com auxlio de seringas e membranas
filtrantes de 0,45 m, transferidas para vials e analisadas por mtodo validado de CLAE
(dados no publicados).
4.4. Resultados e discusso
4.4.1. Anlise de potncia
4.4.1.1. Teste de teor
As anlises de teor dos lotes estudados mostraram resultados de 97,84%, 100,64% e
97,83% para EFV 16.108, EFV 16.117 e EFV 16.237, respectivamente. Em consultas
pblicas a farmacopia americana sugere limites de 98 102% de teor, enquanto a
farmacopia internacional sugere limites entre 97 103% para o teor da matria-prima .
Dentre os resultados apenas o lote 16.117 apresentou resultados dentro dos limites de
98 102%, porm em relao especificao da farmacopia internacional, os trs
lotes encontram-se dentro dos limites estabelecidos. Na FIGURA 2 est mostrado o
cromatograma representativo das anlises de EFV nas condies cromatogrficas
empregadas.
97
Efavirenz/5.735
mV
600 Detector A:252nm
500
400
300
200
100
0
0.0
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
6.0
7.0
min
-1
FIGURA 2. Cromatograma representativo do EFV (120 gmL ).

4.4.1.2. Anlise do perfil de impurezas
Na anlise dos perfis de impurezas dos trs lotes analisados e da substncia qumica
de referncia (SQR) foram encontrados picos cromatogrficos semelhantes aos
reportados por MONTGOMERY et al., (2001). Nos cromatogramas pode-se notar
respostas com tempos de reteno prximos aos descritos para as impurezas e
produtos de degradao: SD573, SM097 e SR788 para a SQR e EFV 16.117, SD573,
SR695, SM097 e SR788 para o EFV 16.108 e SD573, SR695, SD572, SE563 e SR788
para o EFV 16.237.
As somas das reas das impurezas encontradas nas anlises representaram: 0,21%,
1,10%, 1,13 e 1,33% para SQR, EFV 16.108, EFV 16.117 e EFV 16.237,
respectivamente. Nenhum dos picos cromatogrficos apresentou percentual maior que
1,0% em relao ao pico do efavirenz. A FIGURA 3 mostra cromatograma
representativo das anlises de impurezas.
98
FIGURA 3. Cromatograma representativo da anlise de impurezas do EFV 16.237.

4.4.2.1. Espectroscopia no infravermelho
Anlises de infravermelho, espectroscopia vibracional, so realizadas na faixa de 400 a
4000 cm-1 e tem sua resposta baseada na vibrao das espcies moleculares e seu
espectro reflete a presena de grupamentos funcionais especficos, podendo
caracterizar hidratos, solvatos e diferentes formas cristalinas. As informaes sobre
formao de pontes de hidrognio auxiliam na caracterizao de diferentes polimorfos
(QIU et al., 2009).
As amostras de EFV apresentaram resultados com picos intensos e os espectros foram
comparados com o espectro da SQR. Os espectros de infravermelho das trs amostras
mostraram absoro conforme descrito por SOARES, 2011 com a presena de banda
em 1742,12 cm-1 referente deformao axial de C=O, a deformao axial de N-H
(amida I) com a banda 3319,83 cm-1, alm da deformao angular de N-H (amida II) em
99
1601,87 cm-1, caracterstico de amidas secundrias e a banda correspondente ligao

coordenada CC em 2250,06 cm-1.
Todos os IFAs foram confirmados frente SQR, comprovando a identidade qumica das
molculas e nenhum dos espectros indicou formao de pontes de hidrognio, levando
informao da presena da forma cristalina 1 (RADESCA et al., 1999).
4.4.3. Anlise em nvel de partculas
4.4.3.1. Anlises trmicas
Mtodos trmicos fornecem informaes fundamentais sobre os sistemas polimrficos.
O DSC , com larga margem, a mais popular tcnica trmica na caracterizao de
polimorfos. Propriedades fsico-qumicas, tais como a temperatura de transio (ou
seja, para determinar as relaes enantiotrpicas/monotrpicas entre as formas
polimrficas) ou temperatura de fuso, que podem ser facilmente observadas como um
evento exotrmico/endotrmico em termogramas DSC (CHIENG; RADES; AALTONEN
2011).
Na patente publicada (WO 99/6445) RADESCA et al. descrevem cinco formas
cristalinas distintas e caracteriza cada uma delas com anlises de DSC e DRX. Para
forma I a faixa de fuso observada foi de 138 - 140C, para as formas 2, 3 4 e 5, a
faixa de fuso observada foi de 116 - 119C, 108 - 110C, 95 - 100C and 108 110C, respectivamente.
Os resultados de DSC para o EFV 16.108, 16.117 e 16.237 mostraram picos
endotrmicos correspondente fuso do IFA nos intervalos de 136,92 139,79C,
138,36 141,38C e 137,86 141,17C (Tpico = 138,19C, 139,25C e 139,06C;
variao de entalpia (H) = 34,22 Jg1, 53,62 Jg1 e 47,72 Jg1), respectivamente.
Aps a fuso foi observado um pico, evento exotrmico, sugerindo a decomposio
trmica do EFV nos intervalos de 203302C, 215296C e 201302C apresentando
100
variaes de entalpia de 305,6 Jg1, 465,4 Jg1 e 469,7 Jg1, para EFV 16.108, EFV
16.117 e EFV 16.237, respectivamente.
Os resultados quando comparados com os descritos por Radesca et al, 1999 sugerem
que as trs matrias-primas analisadas encontram-se na forma cristalina mais
termodinamicamente estvel, forma 1. No foi possvel a deteco de transio vtrea
ou recristalizao nos picos exotrmicos na anlise de DSC que implica na ausncia de
forma amorfa nos IFAs analisados (CHIKHALIA et al., 2006).
As anlises de TG/DTG indicam que o processo de decomposio trmica do EFV
ocorre em um nico estgio nas faixas de temperaturas de 162,04 267,73C, 178,62
281,31C e 183,48 280,31C e perda de massas de 94,38%, 93,27%, 82,04% para
EFV 16.108, 16.117 e 16.237, respectivamente. Segundo os dados o percentual de
gua encontrado foi de 1,91%, 1,91% e 2,13%, para EFV 16.108, EFV 16.117 3 EFV
16.237, respectivamente.
As FIGURAS 4 e 5 mostram os resultados de analise de DSC e TG para amostra do
IFA EFV 16.108 ambos na razo de aquecimento de 10Cmin-1.
FIGURA 4. Anlise de DSC do lote EFV 16.108 na razo de aquecimento de 10Cmin-1.
101
FIGURA 5. Anlise de TG/DTG do lote EFV 16.108 na razo de aquecimento de

10Cmin-1.
4.4.3.2. Microscopia tica e eletrnica de varredura
O tamanho e a forma das partculas so indicadores da reprodutibilidade em um
processo de sntese, bem como fundamental fator de interferncia na solubilidade de
frmacos e conseguintemente na dissoluo in vitro e na biodisponibilidade
(DRESSMAN et al., 1998; PANCHAGNULA ; THOMAS, 2000).
A FIGURA 6 mostra as imagens obtidas atravs de microscopia tica e microscopia
eletrnica de varredura. Diferentes aspectos de aglomerados de partculas so
perceptveis nos trs lotes analisados.
As imagens obtidas por MEV mostram que as trs amostras exibem a mesma
morfologia acompanhando os resultados de DSC que mostraram faixas de fuso (ver
item 4.4.3.1.) compatveis com a forma cristalina 1 e os resultados de DRX (ver item
4.4.3.4.)
Os cristais mostraram formas cristalinas irregulares com formato ortorrmbico de
tamanho tambm irregular (FIGURA 6). Esses resultados esto de acordo com o
relatado por SOARES (2011).
102
FIGURA 6. Microscopia tica (A) e microscopia eletrnica de varredura (B).

A anlise de dissoluo aparente (ver item 4.4.4.3.) remete aos dados acima descritos,
quando descreve uma menor velocidade de dissoluo, assim como uma menor
quantidade dissolvida para o lote EFV 16.237 que pela anlise morfolgica atravs dos
dados apresentados na Figura 3 fica evidenciado uma maior aglomerao de
partculas, fato confirmado pela anlise da distribuio granulomtrica por difrao a
laser (ver item 4.4.3.3.).
4.4.3.3. Tamanho de partculas
O tamanho de partculas de um p pode ser um importante fator na velocidade de
dissoluo, pequenas partculas proporcionaro uma maior rea superficial que tero
maior interao com os solventes (DRESSMAN et al., 2007).
Os resultados (TABELA 1) reportam diferentes distribuies granulomtricas entre as
trs amostras analisadas. Resultados da distribuio de partculas a 10% (d(v,0,1)),
50% (d(v,0,5)) e 90% (d(v,0,9)) demonstram a diferena no volume de partculas em
cada faixa avaliada.
103
Os resultados da distribuio de partculas bem como do dimetro mdio das partculas

em volume (d[3,2]) reflete a velocidade de dissoluo aparente bem como a quantidade
de IFA dissolvido aps 120 minutos de anlise em clulas de fluxo (ver item 4.4.4.3.). O
lote (EFV 16.108) com o menor tamanho de partculas (137,22 m) foi o de maior
velocidade de dissoluo
TABELA 1. Distribuio granulomtrica das partculas de EFV.
Lotes EFV
EFV 16.108
EFV 16.117
EFV 16.237
d(v,0.1)
(m)
99,47
115,78
128,30
d(v,0.5)
(m)
197,83
223,87
240,82
d(v,0.9)
(m)
444,57
481,11
497,25
d[4,3]
(m)
232,78
258,20
274,00
d[3,2]
(m)
137,22
147,76
118,41
O efeito de partculas com tamanhos reduzidos, parece, depender da ingesto de

alimentos. Em um estudo realizado com um anlogo do EFV de segunda gerao, o
DPC961 (FIGURE 7B) (ANDRESEN; GUNDERSEN; RISE, 2001) tambm classe II, o
incremento da dissoluo in vitro e da absoro oral in vivo foi provado em condies
de jejum, entretanto o fenmeno no ocorreu sob condies de alimentao (AUNGST
et al., 2002), isto pode ser explicado pelas diferentes capacidades de solubilizao em
estado de jejum e alimentado (VAN DE WATERBEMD; TESTA, 2009).
B
NH
FIGURA 7. Estrutura molecular do EFV (A) e do DPC961 (B).
104
4.4.3.4. Difrao de Raios-X

A tcnica de difrao de raios X em ps consiste de padres de difratogramas gerados
caracterstica e distintamente para cada substncia, os quais so formados por um
conjunto de linhas ou picos, apresentando diferentes intensidades e posies
(distncias interplanares d ou ngulos de Bragg 2 ). Para uma dada substncia, as
posies dos picos so essencialmente fixas e caractersticas. Para o objetivo de
identificao da forma polimrfica, deve-se avaliar principalmente as posies dos
picos, considerando semiquantitativamente as intensidades (WEST, 1987).
Os difratogramas da DRX de ps dos IFAs de 5 to 56 2 mostraram padres de
difrao semelhantes entre si, com picos bem definidos indicando alta cristalinidade,
bem como semelhana no padro de difrao da forma cristalina 1 descrita por
RADESCA et al. (1999), caracterstico pela presena de um pico em 2 de 6,32 nos
trs lotes de IFA analisados como mostrado na FIGURA 8.
Contudo, a anlise de DRX de ps pode no ser sensvel o bastante para detectar
pequenas quantidades de diferentes formas cristalinas ou amorfas. Usualmente o limite
de deteco desta tcnica para material amorfo requer, no mnimo, 10% da quantidade
total (SALEKIGERHARDT; AHLNECK; ZOGRFI, 1994).
105
FIGURA 8. Difratogramas de Raios-X de ps dos trs IFA analisados, em destaque pico

caracterstico da forma polimrfica cristalina 1.
4.4.4.1. Densidade aparente e compactada
A densidade tambm pode ser uma importante propriedade com capacidade de
interferir na velocidade de dissoluo, atravs da disperso das partculas in vivo,
106
partculas mais dispersas levando ao incremento da dissoluo (SINKO; YEE; AMIDON,

1990).
Os resultados da anlise da densidade aparente foram 0,238, 0,272 e 0,132 gmL-1, para
EFV 16.108, EFV 16.117 e EFV 16.237, respectivamente. Anlise estatstica de
comparao de mdias (teste t student) mostrou que as amostras so diferentes entre
si, em um intervalo de confiana de 95%.
Para a densidade aps 10, 500 e 1250 compactaes os trs IFAs apresentaram
diferenas estatisticamente relevantes quando comparadas as mdias pelo teste t de
studant em um intervalo de confiana de 95%. A TABELA 2 mostra os resultados da
avaliao da densidade.
TABELA 2. Densidade aparente e compactada para os trs IFA.
Compactaes
0
10
500
1250
16.108
Mdia (DP)
0,238 (0,008)
0,249 (0,004)
0,370 (0,007)
0,370 (0,007)
16.117
Mdia (DP)
0,272 (0,006)
0,330 (0,016)
0,501 (0,022)
0,501 (0,022)
16.237
Mdia (DP)
0,132 (0,003)
0,146 (0,018)
0,175 (0,001)
0,176 (0,002)
4.4.4.2. Umidade por titulao Karl Fischer

A anlise de adsoro/absoro de umidade por parte de um material slido, em muitos
casos, serve como ferramenta de anlise dos efeitos do processo de produo do
produto acabado, transporte, estocagem, acondicionamento, estabilidade, desempenho
e uso final do produto farmacutico, alm de possibilitar a visualizao da possvel
formao de hidratos, de menor solubilidade que a molcula anidra (GENTON,
KESSELRING, 1977).
Os resultados de umidade corroboram com os resultados de tamanho de partcula, pois
o IFA que mostrou maior percentual de umidade foi o que apresentou maior tamanho
107
mdio de partculas. Os percentuais de umidade foram 0,21, 0,29 e 0,62% para EFV
16.108, EFV 16.117 e EFV 16.237, respectivamente.
Quando comparados os resultados de percentual de gua gerados pela anlise TG,
apesar dos percentuais serem diferentes, mostrado uma mesma faixa de umidade
para EFV 16.108 e EFV 16.117 e um percentual maior de gua presente na amostra
EFV 16.237.
Apesar de terem adsorvido/absorvido pequena quantidade de gua os resultados
mostraram um maior tendncia de captao de umidade pelo EFV 16.237 que pode ter
influenciado no tamanho das partculas. Partculas maiores e a presena de gua
podem propiciar a formao de hidratos resultando em uma menor velocidade de
dissoluo (ver item 4.4.5.3.) do IFA.
4.4.5. Solubilidade e cintica de dissoluo
A estabilidade do EFV nos meios utilizados (FaSSIF, FeSSIF e LSS 1,0%) para anlise
da solubilidade foi analisada e mostrou resultados satisfatrios, sem a presena de
diferena estatstica entre os resultados de concentrao das amostras submetidas ao
estresse e as amostras recm preparadas.
4.4.5.1. Estudo de solubilidade
Os resultados de solubilidade para os IFAs analisados esto mostrados na TABELA 3.
A quantidade de EFV solubilizada ao final do tempo de anlise foi a mesma para as trs
amostras de acordo com avaliao estatstica para comparao de mdias, teste t
student, com intervalo de confiana de 95%.
A solubilidade em FaSSIF foi de 36,46, 39,89 e 36,65% menor que a solubilidade em
FeSSIF para EFV 16.108, EFV 16.117 e EFV 16.237, respectivamente. Esta diferena
108
pode ser explicada pelas concentraes do sal biliar taurocolato de sdio e do

fosfolipdio lecitina presentes na composio dos meios.
Os sais biliares afetam tanto a solubilidade quanto a dissoluo de frmacos pelo
processo
de
micelizao
pelas
propriedades
tensoativas
(BAKATESLOU;
OPPENHEIN; DRESSMAN, 1991), sendo estas propriedades de grande importncia na

absoro intestinal de frmacos de Classe II, que tem como etapa limitante a
solubilizao/dissoluo (VAN DE WATERBEEMD; TESTA, 2009).
Quando os sais biliares esto em quantidade acima de sua concentrao micelar crtica
(CMC) formam micelas submicrnicas mistas que elevam a solubilidade do frmaco que
chega solubilizado na membrana do entercito (AMIDON; HIGUCHI; HO, 1982;
PERSSON et al., 2005). No entanto quando estes sais esto presentes em quantidades
abaixo da CMC o principal mecanismo de incremento da sua solubilidade se d pela
propriedade da diminuio da tenso interfacial promovendo aumento da molhabilidade
(LUNER, 2000; LUNER; KAMP, 2001).
Segundo TAKANO et al., (2006) o EFV possui parmetro de dissoluo z igual a 0,053
0,004 mL/mg/min e concentrao de saturao de (Cs) 0,194 0,007 mgmL-1 quando
submetido a ensaios com o meio de dissoluo FaSSIF, nos experimentos realizados
foram encontrados valores de Cs de 0,1380,023 mgmL-1 para EFV 16.108,
0,1530,027 mgmL-1 para EFV 16.117 e 0,1380,035 mgmL-1 para o EFV 16.237.
Os valores apresentam diferenas estatsticas entre os resultados das amostras
analisadas neste estudo e a amostra analisada por TAKANO et al., (2006) que obteve o
IFA atravs de isolamento do EFV da formulao comercial (Stocrin) seguindo mtodo
proposto por RADESCA et al. (1999).
Os estudos de solubilidade em LSS mostraram uma relao no linear no intervalo de
concentrao entre 0,2 e 0,5% (r2 = 0,9237, r2 = 0,9293 e r2 = 0,9284 para EFV 16.108,
EFV 16.117 e EFV 16.237, respectivamente), entre 0,5 e 1,0% foi observado um plat.
Os resultados de solubilidade nos meios analisados esto descritos na Tabela 3.
109
TABELA 3. Dados da solubilidade das amostras de EFV
FaSSIF
FeSSIF
LSS 0,2%
LSS 0,25%
LSS 0,5%
LSS 1,0%
EFV 16.108
Mdia (gmL-1)
(DPR%)
137,50 (1,75)
377,17 (1,68)
118,60 (1,53)
229,52 (0,03)
380,20 (1,47)
378,66 (2,12)
EFV 16.117
Mdia (gmL-1)
(DPR%)
153,19 (1,75)
384,07 (0,97)
118,23 (1,57)
226,95 (0,38)
380,51 (0,16)
382,24 (0,06)
EFV 16.237
Mdia (gmL-1)
(DPR%)
138,03 (2,50)
376,64 (1,84)
122,68 (2,57)
229,84 (0,64)
380,26 (0,73)
380,65 (0,40)
4.4.5.2. Dissoluo intrnseca

A velocidade de dissoluo intrnseca a taxa de massa transferida da superficie de
um slido para a fase lquida (MILANI et al., 2009). A avaliao da dissoluo intrnseca
um meio de demonstrar a pureza qumica e a equivalncia de frmacos, por exemplo,
provenientes de diferentes fabricantes (YU et al., 2004).
O conhecimento da velocidade de dissoluo intrnseca til na previso de provveis
problemas de absoro relacionados velocidade de dissoluo. Tipicamente taxas de
dissoluo intrnseca maiores que 0,1mg/min/cm2, indicam que possivelmente a
absoro no est associada velocidade de dissoluo, ao passo que, taxas de
dissoluo intrnseca menores que 0,1mg/min/cm2 sugerem que a dissoluo ser a
etapa limitante para a absoro (YU et al., 2004).
No foram verificadas diferenas estatisticamente significantes (teste F, I.C. 95%) entre
as amostras analisadas na mesma presso de formao dos discos, nem entre
presses diferentes para uma mesma amostra. Para as amostras de 0,5 ton, os
resultados foram 0,00928, 0,00928 e 0,00895 mg/min/cm2 para EFV 16.108, EFV
16.117 e EFV 16.237, respectivamente.
110
Para a fora aplicada na formao do disco de 1,0 ton os resultados foram: 0,00983,
0,00942 and 0,00925 mg/min/cm2 para EFV 16.108, EFV 16.117 e EFV 16.237,
respectivamente.
Os resultados encontrados sugerem que as amostras analisadas apresentam a
velocidade de dissoluo como a etapa limitante do processo de absoro do EFV aps
administrao por via oral, visto que os resultados obtidos se mostraram abaixo de
0,1mg/min/cm2.
Os resultados das anlises em nvel molecular e em nvel de partculas por IV, DSC,
MEV e DRX convergiram para a concluso de que todos os IFA estudados
apresentaram a mesma forma cristalina, fato confirmado pela dissoluo intrnseca que
aps a fora de compresso sofreram processo de dissoluo semelhantes.
4.4.5.3. Dissoluo aparente
Entre os diferentes sistemas in vitro disponveis para testes com o IFA, a fluxo contnuo
atravs do sistema (aparato USP IV) oferece as melhores caractersticas. Utilizando
uma clula de fluxo especfica para ps possvel caracterizar um IFA em relao
sua taxa de dissoluo (BEYSSAC; LAVIGNE, 2005).
Foram utilizados meios convencionais e biorrelevantes, pois meios de dissoluo
convencionais para frmacos pouco solveis contm surfactantes sintticos, como lauril
sulfato de sdio, que formam micelas. Em contraste, FeSSIF e FaSSIF contm
tensoativos naturais que formam agregados de lipdios mais complexos (KLOEFER et
al., 2010) podendo proporcionar uma maior descrio do fenmeno in vivo.
Os resultados apresentados na Figura 9 mostram que, ao contrrio da avaliao da
dissoluo intrnseca, as amostras apresentam velocidade de dissoluo diferente. O
processo de dissoluo intrnseca governado pelo estado cristalino do p, rea da
superfcie e da solubilidade no meio de dissoluo (MARCOLONGO, 2003), enquanto
na dissoluo aparente as caractersticas em nvel de aglomerados de partculas
111
(tamanho e forma de partculas, densidade, umidade, etc) so capazes de interferir na

velocidade de dissoluo, alm das caractersticas em nvel de partculas (MANADAS;
PINA; VEIGA, 2002).
A dissoluo nos meios FaSSIF (79,15%, 69,93% e 54,22%, em 120 min., para EFV
16.108, EFV 16.117 e EFV 16.237, respectivamente) e FeSSIF (98,79%, 105,28% e
95,77% em 120 min., para EFV 16.108, EFV 16.117 e EFV 16.237, respectivamente)
apresentaram resultados com uma maior velocidade de dissoluo, assim como uma
quantidade maior dissolvida no meio de maior concentrao de tensoativos (FeSSIF).
Os perfis de dissoluo mostrados na FIGURA 9 mostram que as anlises seguem um
padro de velocidade de dissoluo e de quantidade total dissolvida, sendo o EFV
16.237 com a menor taxa e extenso de dissoluo. Apenas no meio FaSSIF a
quantidade total dissolvida foi diferente entre as trs amostras, isso pode ser explicado
pela baixa concentrao de taurocolato de sdio e de lecitina: 3,0 mM e 0,75 mM no
FaSSIF, respectivamente, quando comparada ao FeSSIF, 15,0 mM e 3,75 mM,
respectivamente (DRESSMAN et al., 1998).
Anlises de eficincia de dissoluo (KHAN, 1975) nos pontos de coleta 5, 30 e 120
minutos foram realizadas para a comparao entre as amostras, a FIGURA 10 mostra a
representao grfica dos resultados plotados. possvel a verificao do mesmo
padro de dissoluo nos trs tempos de dissoluo, com EFV 16.108 apresentando
maior velocidade de dissoluo que o EFV 16.117, que por sua vez apresenta-se maior
que o EFV 16.237.
112
FIGURA 9. Perfis de dissoluo dos IFAs analisados nos diferentes meios de

dissoluo.
113
FIGURA 10. Eficincia de dissoluo nos meios analisados em 5 min. (A), 30 min. (B) e
120 min. (C).
As anlises em nvel de aglomerado de partculas de microscopia ptica, distribuio
granulomtrica, densidade aparente e compactada alm da umidade (TG e Karl
Fischer) mostraram diferenas no tamanho das partculas bem como diferentes
densidades, os dados de dissoluo aparente foram confirmatrios para as diferenas
evidenciadas com as diferentes eficincias de dissoluo.
114
4.5. Concluses
Por ser o EFV um frmaco de classificao biofarmacutica de classe II, que tem a
dissoluo in vivo como a etapa limitante no processo de absoro se faz necessrio o
controle de variveis do IFA.
Com base nos resultados encontrados evidente que em nvel molecular (identidade
qumica) e em nvel de partculas (forma cristalina) os IFAs apresentam qualidades
semelhantes. No entanto quando avaliadas as propriedades em nvel de aglomerados
de partculas (estrutura dos agregados), so notadas diferenas, estas provavelmente
foram responsveis pela interferncia na velocidade de dissoluo quando avaliados
em meios de dissoluo convencionais e em meios biorrelevantes.
Em face ao exposto imperativo que para avaliao da qualidade do EFV se faz
necessrio a incluso do conceito de Quality by Design para imposio de limites com
especificaes bem definidas para parmetros como tamanho de partculas, umidade e
densidade. Esses fatores podem ser limitados com o delineamento de um Design space
que evidencie a faixa ideal para os fatores em nvel de aglomerados de partculas.
No presente estudo os resultados apresentados pelo IFA EFV 16.108, EFV 16.117 e
EFV 16.237 mostraram a necessidade de incluso de mais cincia no processo de
desenvolvimento de um IFA pertencente casse II SCB, alm de mostrar que os
ensaios farmacopicos tradicionais no so capazes de evidenciar as diferenas
encontradas na dissoluo aparente, sendo necessria a realizao de ensaios
complementares com especificaes pr-estabelecidas.
4.6. Agradecimentos
Aos laboratrios parceiros na conduo dos experimentos: Cristlia produtos qumicos
e farmacuticos LTDA, CETENE - Centro de Tecnologias Estratgicas do Nordeste,
IDEF - Instituto de Desenvolvimento e Estudos Farmacuticos, NUDFAC Ncleo de
Desenvolvimento Farmacutico e Cosmtico, LTM-UFPE, Laboratrio de Tecnologia de
115
Medicamentos, ERT-CIDAM da Faculdade de Farmcia da Universidade Dauvergne,

Frana.
4.7. Referncias
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123
Captulo 3
Avaliao de cinticas
de dissoluo
124
5. Captulo 3 Avaliao biofarmacutica de duas formulaes do

antiretroviral efavirenz: dissoluo em meios biorrelevantes.
5.1. Resumo do captulo
O efavirenz (EFV) um inibidor da transcriptase reversa no anlogo de nucleosdeo e
o primeiro medicamento anti-HIV registrado para utilizao em dose nica. O EFV
classificado como de classe biofarmacutica II (SCB classe II), alm de possuir cinco
diferentes polimorfos descritos. Para frmacos SCB II a dissoluo a etapa limitante
no processo de absoro in vivo, por isso quanto mais prximo for o ensaio in vitro da
condio in vivo mais preditivo ser o resultado. Para tanto so utilizados diferentes
sistemas de dissoluo com diferentes meios de dissoluo com tensoativos sintticos
e meios biorrelevantes. O presente trabalho teve o objetivo de avaliar a equivalncia
farmacutica e a bioequivalncia entre um medicamento teste e o medicamento
referncia e realizar ensaios de dissoluo de forma a encontrar um sistema mais
prximo da situao in vivo, para tanto foram utilizados os aparatos 2 (p) e 4 (clula de
fluxo contnuo) com meios clssicos e meios biorrelevantes (FaSSIF e FeSSIF). Foram
utilizados meios de dissoluo para manuteno das condies sinc e meios para
condio no sink. Foram realizadas anlises com o IFA puro e dos comprimidos
macerados. Os resultados das anlises em condio sink demonstraram uma maior
velocidade de dissoluo e quantidade dissolvida do IFA em relao ao comprimido
macerado. Em relao comparao entre as formulaes o medicamento de
referncia apresentou velocidade de dissoluo mais rpida que o medicamento teste,
porm com a mesma quantidade dissolvida a partir de 30 minutos de anlise, exceto no
meio FeSSIF que se mostrou resultado inverso com o medicamento teste mostrando
maior velocidade e quantidade dissolvida. Em todos os meios de dissoluo em
condio sink no foi possvel discriminar as diferenas apresentadas no estudo in vivo.
Apenas com sistema no sink o resultado foi compatvel com aquele apresentado no
estudo de bioequivalncia, apesar da pequena quantidade dissolvida. O presente
trabalho representa um exemplo em que os dados de dissoluo no so preditivos dos
resultados da absoro in vivo.
Palavras chave: Efavirenz,cintica de dissoluo, meios biorrelevantes
125
5.2. Introduo
O efavirenz (EFV) (S)-6-cloro-4-(ciclopropiletinil)-1,4-dihidro-4-(trifluorometil)-2H-3,1benzoxazina-2-ona (BEST; GOICOECHEA, 2008) um inibidor da transcriptase reversa
no anlogo de nucleosdeo (DE CLERCQ, 1998) e o primeiro medicamento anti-HIV
registrado para utilizao em dose nica. Esta indicao posolgica atribuda
elevada meia vida plasmtica, que indica a manuteno de concentraes plasmtica
efetivas por longos perodos (HILLERY, 1999).
O EFV classificado com classe II, de acordo com o sistema de classificao
biofarmacutica, por possuir baixa solubilidade e alta permeabilidade (YANG; GREY;
DONEY, 2010). De acordo com a classificao biofarmacutica provisional, que se
utiliza de propriedades como o nmero de dose e coeficiente de partio (KASIM et al.,
2004), o EFV classificado, tambm, como classe II (SUGANO et al., 2007).
Frmacos de classe II apresentam a absoro in vivo e a biodisponibilidade limitadas
pela dissoluo in vivo (GALIA et al., 1998), por esta razo os ensaios de dissoluo
necessitam ser realizados de forma a promover dados discriminativos, afim de
refletirem o fenmeno in vivo (YU, 2001).
Para as forma farmacuticas slidas de uso oral que veiculam frmacos poucos
solveis, a dissoluo se apresenta como a principal ferramenta de avaliao da
qualidade biofarmacutica, visto que, a taxa na qual frmacos com baixa solubilidade
em gua se dissolvem a partir da forma farmacutica, intacta ou desintegrada, no trato
gastrintestinal, geralmente limitante para a absoro sistmica dos mesmos. Portanto,
a dissoluo de ativos fracamente solveis a partir de formas farmacuticas de
liberao imediata possui muitos desafios (BROWN et al., 2004).
Os ensaios de dissoluo esto envolvidos nas principais etapas da cadeia de
produo de um medicamento: desenvolvimento da formulao e do processo de
produo, controle de qualidade, base para correlao in vitro/in vivo e bioisenes
(MANADAS; PINA; VEIGA, 2002).
126
O desenvolvimento racional de medicamentos (formas farmacuticas slidas de uso

oral) frequentemente otimizado com o auxlio de uma importante ferramenta:
correlao in vitro in vivo CIVIV, que auxilia na reduo do nmero de pesquisas
envolvendo seres vivos, possibilita o estabelecimento de critrios de dissoluo e
funciona como indicativo de bioequivalncia entre dois produtos, viabilizando os
registros atravs da bioiseno (CARDOT; BEYSSAC; ALRIC, 2007).
Para tanto vrios pesquisadores vem investindo ateno especial ao desenvolvimento
de meios de dissoluo e condies experimentais que se assemelhem s condies a
serem encontradas in vivo. Isto inclui a mimetizao do pH do trato gastrintestinal nas
condies de jejum e ps-prandial, alm de meios biorrelevantes que utilizam sais
biliares e sistemas de tampes para manuteno da osmolaridade (DRESSMAN et al.,
1998).
As duas formulaes estudadas (EFV 600 mg, comprimidos revestidos), neste trabalho,
foram submetidas a ensaios de equivalncia farmacutica e avaliao dos perfis de
dissoluo. Foram considerados equivalentes farmacuticos e com perfis de dissoluo
semelhantes segundo avaliao pelo mtodo modelo independente que emprega um
fator de diferena (f1) e um fator de semelhana (f2).
As mesmas formulaes, no entanto (mesmos lotes) foram submetidas a um ensaio de
bioequivalncia com o resultado mostrando a sua no bioequivalncia (BEDOR et al.,
2011).
O presente trabalho teve o objetivo de avaliar, atravs de ensaios de cinticas de
dissoluo, as duas formulaes em sistemas com surfactantes convencionais e meios
biorrelevantes.
127
5.1.
Materiais e mtodos
5.1.1. Materiais
5.3.1.1. Equipamentos e acessrios
Para as anlises de equivalncia farmacutica foram utilizados os seguintes
equipamentos: balana analtica (Sartorius, CP225D, Alemanha), dinammetro (Vankel,
VK 200, EUA), desintegrador (Nova tica, 301AC 03, Brasil), Dissolutor (Vankel, VK
7010, EUA) com amostrador automtico (Vankel, VK 8000, EUA). Para as
quantificaes foi utilizado um cromatgrafo a lquido de alta eficincia (Shimadzu,
HPLC10ADvp, Japo).
Os perfis de dissoluo do IFA foram obtidos em equipamento CE70 (Sotax) para
aparato USP IV, acoplado ao coletor de amostras MS70 (Sotax), FIGURA 1.
Os perfis de dissoluo dos comprimidos macerados foram obtidos em equipamento
CH 4008 (Sotax) para aparato USP IV FIGURA 2.
Para anlise foi utilizado um sistema Hitachi HPLC composto por uma bomba
quaternria (L-2130), compartimento de coluna termostatizado (L-2300), detector
ultravioleta (L-2400), amostrador automtico (L-2600), o controle do equipamento e
processamento dos dados foi realizado atravs do software EzChrom v.3.3.2, agilent.
128
FIGURA 1.Equipamento utilizado na anlise de cintica de dissoluo de IFA.
FIGURA 2. Equipamento utilizado na anlise de cintica de dissoluo dos

comprimidos.
129
5.3.1.2. Reagentes e materiais de referncia

Acetonitrila (Merck, Alemanha) e gua ultrapura (ELGA, Inglaterra), fosfato de amnio e
o cido fosfrico (Merck, Alemanha). Taurocolato de sdio (Prodotti Chimici Alimentari
S.P.A, Italia) e lecitina (lipoid, Suia), lauril sulfato de sdio (Vetec, Brasil), todos
utilizados na preparao dos meios de dissoluo.
5.3.1.3. Substncia qumica de Referncia (SR) e Matrias primas
O EFV utilizado para anlise do perfil de dissoluo do IFA foi o EFV 16.108, produzido
por empresa farmoqumica nacional.
A SQR utilizada no estudo foi adquirida na
farmacopia americana (USP), lote F0G376, 99,80%.

5.3.1.4. Produtos farmacuticos
O medicamento teste utilizado foi produzido pelo Laboratrio Farmacutico do Estado
de Pernambuco Governador Miguel Arraes (LAFEPE), efavirenz 600 mg, comprimido
revestido, lote 0810LPSo62, fabricado em 10/2008. O medicamento de referncia
adquirido junto ao programa DST/AIDS do Ministrio da Sade (MS), Stocrin,
efavirenz 600 mg, comprimido revestido, lote A003352, fabricado em 02/2006 da Merck
Sharp & Dohme (referncia).
5.1.2. Mtodos
5.3.2.1. Equivalncia Farmacutica - EQFAR
O estudo de equivalncia farmacutica entre o medicamento teste e o medicamento de
referncia (Stocrin), lote A003352, foi realizado para verificao da semelhana
farmacutica entre os mesmos e como requisito prvio realizao do estudo de
bioequivalncia.
130
Para realizao do ensaio foi produzido um biolote utilizando a matria-prima EFV

16.108 produzido pelo patrocinador do estudo na forma de comprimidos de 600 mg de
efavirenz, 0810LPSo62. Os ensaios realizados e os procedimentos seguidos foram
descritos na TABELA 1.
TABELA 1. Ensaios, especificaes e referncia da equivalncia farmacutica
Ensaios
Descrio
Peso mdio
Dureza
Desintegrao
Identificao
(Espectrofotometria/CLAE)
Dissoluo
(espectrofotometria)
Uniformidade de dosagem
Teor do IFA
(CLAE)
Especificaes
Acima de 300 mg 5%
Mnimo 3,0 Kgf/cm2
Mximo 30 min.
Efavirenz
(C14H9ClF3NO2)
T 80% (em 45 min.)
85 115%
(DPR = 6,0%)
90 -110%
Referncia
Farm. Brasileira 4 edio
Mtodo do fabricante do
medicamento Teste (Validado).
CLAE Cromatografia Lquida de Alta Eficincia

DPR Desvio Padro Relativo
T Teor de IFA dissolvido no meio de dissoluo
5.3.2.2. Dissoluo do Insumo Farmacutico Ativo (IFA)

Amostras de 60 mg de cada lote foram pesadas em trs rplicas e transferidas para
clulas de fluxo para p de 12 mm. Os estudos foram conduzidos nos meios de
dissoluo LSS 0,5% e 1,0%, em gua deionizada e os meios biorrelevantes FaSSIF e
FeSSIF, segundo mtodo descrito (DRESSMAN et al., 1998). Devido aos resultados
apresentados no estudo de solubilidade os meios LSS 0,2% e 0,25% no foram
realizados por no oferecerem condies sink para a anlise.
Para cada anlise foram utilizados 500 mL de meio a 37 C 0.5 C, bombeados a uma
vazo de 20 mLmin-1 em um sistema fechado. As amostras foram coletas em 5, 10, 15,
20, 30, 45, 60, 90 e 120 min., filtradas com auxlio de seringas e membranas filtrantes
de 0,45 m, transferidas para vials e analisadas por mtodo validado de CLAE (dados
no publicados). Para a montagem das clulas foi utilizada uma esfera de rubi para
131
evitar contra fluxo na entrada do meio de dissoluo, esferas de vidro para promover
um fluxo laminar, evitando o fluxo turbulento e filtros com malha de 0,7 m na entrada e
na sada do meio de dissoluo (FIGURA 3).
Sada do meio de dissoluo
Amostra
Esferas de vidro
Filtros 0,7 m
Esfera de Rubi
Entrada do meio de dissoluo
FIGURA 3. Esquema de clula de fluxo contnuo para dissoluo do IFA.

5.3.2.3. Dissoluo dos produtos farmacuticos
5.3.2.3.1. Dissoluo dos produtos farmacuticos (aparato 2 p)
Os perfis de dissoluo dos comprimidos de EFV 600 mg (Teste e referncia) foram
realizados sob as condies experimentais apresentadas anteriormente.
O equipamento utilizado foi um dissolutor Vankel (VK 7010) com coletor automtico
Vankel 8000. As amostras foram quantificadas em mtodo espectrofotomtrico validado
(dados no publicados) utilizando um espectrofotmetro Shimadzu (UV-2450).
O meio de dissoluo utilizado foi laurilsulfato de sdio (LSS) 0,5%, temperatura do
meio 37C, 900 mL, aparato p, rotao de 50 rpm. Foram coletadas amostras de 2 mL
nos tempos de 2, 5, 10, 15, 20, 45, e 90 minutos aps o incio da dissoluo.
132
As amostras dos perfis de dissoluo foram preparadas utilizando 12 amostras em 12

cubas tanto para o medicamento teste quanto para o medicamento de referncia, as
memas foram coletadas, diludas para concentrao de trabalho e analisadas.
Utilizando a mesma metodologia acima descrita, porm 3 rplicas dos medicamentos
em estudo, foi avaliado o perfil de dissoluo de ambas as formulaes no meio de
dissoluo gua deionizada. Para o experimento foi levado em considerao a
presena do LSS nas duas formulaes e forar uma condio no sink para evidenciar
possveis diferenas da atuao do LSS no mecanismo de dissoluo do EFV.
5.3.2.3.2. Dissoluo dos produtos farmacuticos (aparato 4 clula de fluxo)
As amostras de comprimidos foram pesadas individualmente, trituradas com auxlio
pistilo e almofariz, tamizadas para a remoo da pelcula de revestimento, em seguida,
pesou-se o equivalente a 60 mg de efavirenz e transferiu-se para clulas de fluxo de
22.3 mm.
Os estudos foram conduzidos nos meios de dissoluo LSS 0,5% e 1,0% em gua
deionizada e os meios biorrelevantes FaSSIF e FeSSIF, segundo mtodo descrito
(DRESSMAN et al., 1998). Devido aos resultados apresentados no estudo de
solubilidade os meios LSS 0,2% e 0,25% no foram realizados por no oferecerem
condies sink para a anlise.
O procedimento de operao do sistema de dissoluo foi o mesmo descrito no item
5.3.2.2. utilizado na dissoluo do IFA. Para a montagem das clulas foi utilizada uma
esfera de rubi para evitar contra fluxo na entrada do meio de dissoluo, duas camadas
de esferas de vidro, sendo a amostra depositada entre as camadas, para promover um
fluxo laminar, evitando o fluxo turbulento e filtros com malha de 1,2 e 0,7 m na sada
do meio de dissoluo, o filtro inicial de maior abertura foi utilizado para evitar
entupimento que acarretaria em aumento da presso do sistema (FIGURA 4).
133
Esses cuidados foram tomados para a manuteno da amostra no corpo da clula,

evitando o depsito no filtro de sada do meio de dissoluo e para garantir uma maior
molhabilidade (BHATTACHAR et al., 2002) do EFV, visto que um frmaco de classe
II.
Sada do meio de dissoluo
Filtros 0,7 m
Amostra
Filtros 1,2 m
Esferas de vidro
Esfera de Rubi
Entrada do meio de dissoluo
FIGURA 4. Esquema de clula de fluxo contnuo para dissoluo do comprimido.

As amostras foram quantificadas segundo mtodo validado por CLAE (dados no
publicados).
5.2.
Resultados e discusso
5.2.1. Equivalncia Farmacutica

Os resultados do estudo de equivalncia farmacutica (EQFAR) esto descritos na
TABELA 2. A formulao teste mostrou-se semelhante formulao referncia quando
comparados os parmetros farmacuticos atravs dos ensaios de controle de qualidade
farmacopicos.
O medicamento teste foi considerado equivalente farmacutico ao medicamento de
referncia, visto que, os resultados mostrados na TABELA 2 evidenciam qualidade
farmacutica semelhante pelos parmetros avaliados e a diferena de teor de IFA entre
134
o medicamento referncia e o medicamento teste foi de 0,07%, atendendo ao critrio de

aceitao que 5% (BRASIL, 2010).
Em estudo descrito, a desintegrao in vitro de duas diferentes formulaes (A e B) de

comprimidos de EFV 300 mg e cpsulas de 200 mg foram avaliadas em 900 mL de
LSS 1% e foram encontrados os resultados de 2,7 0,6, 7,5 0,8 e 3,1 0,5 min para
o comprimido A, comprimido B e a cpsula, respectivamente. Sendo o comprimido B o
Stocrin (GAO et al., 2007).
Quando comparamos os resultados obtidos no presente estudo: 8,0 e 10,0 minutos
para o medicamento teste e o medicamento de referncia, respectivamente, apesar de
existirem diferenas nos valores absolutos, notamos que o resultado do Stocrin
evidencia um maior tempo de desintegrao in vitro em ambos os casos.
As diferenas nos tempos de desintegrao so explicadas pela utilizao de LSS 1%
como meio no estudo de GAO et al., (2007) e no estudo de EQFAR o meio foi gua.
135
TABELA 2. Resultados da EQFAR entre o medicamento teste e o medicamento de referncia Stocrin.
Ensaios
Descrio
Peso mdio
Dureza
Desintegrao
Identificao
(Espectrofotometria/CLAE)
Dissoluo
(espectrofotometria)
Uniformidade de dosagem
Teor do IFA
(CLAE)
Especificaes
Medicamento Teste
oblongo, cor amarela
Medicamento Referncia
oblongo, cor amarela,
gravado com o nmero 225
Acima de
871,5 mg
1.231,30 mg
300 mg 5%
(858,6 mg 882,8 mg)
(1.214,5 mg 1.251,5 mg)
22,09 Kgf/cm2
27,57 Kgf/cm2
8 minutos
10 minutos
Positivo
Positivo
91,36 %
94,22 %
590,02 mg/comp.
594,48 mg/comp.
(98,33 %)
(97,36 %)
DPR = 0,71 %
DPR = 0,64 %
589,63 mg/comp.
594,96 mg/comp.
(98,27 %)
(99,18 %)
Mnimo
3,0 Kgf/cm2
Mximo
30 min.
Efavirenz
(C14H9ClF3NO2)
T 80%
(em 45 min.)
85 115%
(DPR = 6,0%)
90 -110%
136
5.2.2. Dissoluo do IFA

Os resultados (FIGURA 5) de dissoluo do IFA EFV 16.108, componente da
formulao do medicamento teste, mostraram que o aumento da concentrao do
surfactante LSS, no influenciou o processo de dissoluo de modo a alterar a
velocidade e a quantidade de EFV dissolvido em funo do tempo.
J a anlise nos meios biorrelevantes (FaSSIF e FeSSIF), corroboram com os
resultados in vivo que apontam para um aumento de 50% da quantidade de EFV
biodisponvel com o aumento de calorias (maior percentual de gordura) em estudos de
farmacocintica com indivduos alimentados (KAUL et al., 2010; PORCHE, 2000).
No presente estudo, a quantidade total de EFV dissolvida aps 120 min em FaSSIF foi
de 94,34 gmL-1 e no meio FeSSIF foi 118,87 gmL-1 , um incremento de 26%, valor
equivalente ao aumento de rea sob a curva (ASC) quando o EFV administrado com
uma refeio rica em gorduras com 894 Kcal (KAUL et al., 2010).
FIGURA 5. Perfis de dissoluo do EFV 16.108 nos diferentes meios.
137
As anlises realizadas em comparao do perfil de dissoluo do IFA isolado com o

produto farmacutico (FIGURA 6.) composto pelo mesmo lote do EFV mostram que em
todos os meios de dissoluo estudados, tanto a velocidade com que o EFV se dissolve
como a quantidade total dissolvida aps 120 min. so maiores no frmaco isolado.
Tomando como partida o fato da anlise dos produtos acabados terem sido realizadas
aps macerar os comprimidos, pode-se levar em considerao que a formulao do
medicamento teste pode estar levando a uma menor liberao do princpio ativo.
Perfil de dissoluo- FeSSIF
Perfil de dissoluo - FaSSIF
100
90
80
o
d
i 70
lv 60
o
s
s
i 50
d
%40
30
20
100
90
80
o
d
iv70
l
60
o
s
s
i 50
d
%40
30
IFA 16.108
20
0810LPSo62
15
30
45
60
75
90
105
IF A 16.108
0810LPSo62
10
0
10
120
15
30
45
60
75
Tempo (min.)
90
105
120
Tempo (min.)
Perfil de dissoluo - LSS 0,5%

100
90
80
o70
d
i 60
v
l 50
o
s40
s
i
d30
%20
10
0
Perfil d e dissoluo - LSS 1,0%
IFA 16.108
0810LPSo62
C
0
15
30
45
60
75
90
105
120
Tempo (min.)
100
90
o 80
id 70
lv 60
o
s
50
s
i 40
d
30
%20
10
0
IFA 16. 108

0810LP S o62
D
0
15
30
45
60
75
90
105
12 0
Time (min.)
FIGURA 6. Perfil de dissoluo IFA x Produto acabado (LAFEPE) em FaSSIF (A),

FeSSIF (B), LSS 0,5% (C) e LSS 1,0% (D).
138
5.2.3. Dissoluo dos produtos acabados

5.4.3.1. Perfil de dissoluo aparato 2
As anlises realizadas apresentaram um resultado (FIGURA 7) onde as duas
formulaes seguiam a mesma cintica de dissoluo conforme anlise estatstica pelo
mtodo modelo independente que emprega um fator de diferena (f1) e um fator de
semelhana (f2), onde f1 = 10,79 (f1 < 15) e f2 = 51,41 (f1 > 50).
Teste
Referncia
Figura 7. Perfil de dissoluo em LSS 0,5% (teste e referncia).

Na anlise realizada com o meio de dissoluo gua, tornando o meio mais restritivo
solubilizao do EFV, as formulaes mostraram resultados de perfil bastante
diferentes, como pode ser observado na FIGURA 8.
FIGURA 8. Perfil de dissoluo em gua (teste e referncia).
139
5.4.3.2. Perfil de dissoluo aparato 4

Nas anlises de perfil de dissoluo utilizando o aparato 4, os comprimidos macerados
apresentaram resultados que atravs do clculo de eficincia de dissoluo (Tabela 3)
mostraram que o medicamento de referncia tem maior velocidade de dissoluo, at o
tempo de 30 minutos, porm os dois medicamentos analisados tem uma quantidade
total de EFV dissolvido semelhantes segundo dados da TABELA 9. As anlises
estatsticas foram ANOVA e teste de Tukey com intervalo de confiana de 95%.
No caso da anlise em FeSSIF, os resultados obtidos mostram um fenmeno diferente,
com o medicamento teste mais rpido e com maior quantidade dissolvida em 120
minutos.
TABELA 3. Eficincia de dissoluo nos diferentes meios analisados.
FaSSIF
FeSSIF
LSS 0,5%
LSS 1,0%
Teste
Referncia
Teste
Referncia
Teste
Referncia
Teste
Referncia
5 min.
0,14
0,22
0,40
0,37
0,66
0,59
0,71
0,84
30 min.
5,05
5,51
6,73
5,68
13,97
14,24
14,73
15,49
120 min.
39,27
40,18
46,09
33,93
77,71
79,15
82,10
79,11
A comparao dos perfis de dissoluo pelo mtodo modelo independente (clculo dos
parmetros f1 e f2) no pode ser aqui aplicada, uma vez que s foram analisadas trs
rplicas em cada experimento.
Os dados dos experimentos no condizem com o encontrado in vivo para os dois lotes
de medicamentos analisados segundo mostrado na FIGURA 10, quando administrados
a voluntrios sadios em estado de jejum (BEDOR et al., 2011).
140
FIGURA 9. Perfis de dissoluo: FaSSIF (A), FeSSIF (B), LSS 0,5% (C) e LSS 1,0%
(D).
FIGURA 10. Perfil farmacocintico mdio (30 voluntrios), em estado de jejum
141
Em estudo comparativo realizado entre dois comprimidos de 300 mg de EFV (A e B) mg

e cpsulas de 200 mg foram mostrados resultados em que o comprimido com maior
tempo de desintegrao in vivo e in vitro, foi o que mostrou dissoluo em menor
velocidade e menor quantidade, porm na anlise in vivo os resultados mostraram
parmetros farmacocinticos em que a formulao B tem biodisponibilidade semelhante
cpsula e a formulao A, menor velocidade e quantidade absorvida (GAO et al.,
2007).
Esse fenmeno foi similar ao ocorrido no nosso estudo, onde o tempo de desintegrao
do medicamento teste foi de 8,0 min. e para o medicamento de referncia foi de 10,0
min. com o maior biodisponibilidade para o medicamento de referncia.
Os autores explicam o fato atravs do tamanho das partculas aps a desintegrao,
onde provavelmente, a formulao A tem partculas maiores devido a um menor efeito
do desintegrante. Altos nveis de superdesintegrantes tambm podem levar formao
de um gel que serve de barreira para a difuso do frmaco (GAO et al., 2007).
Em outro estudo utilizando solues de EFV com a ajuda de surfactantes para criao
de micelas foi relatado que as solues com a menor velocidade de liberao in vitro
foram as que apresentaram a maior biodisponibilidade. O fenmeno foi explicado pelo
fato da absoro do EFV ser um efeito combinado entre a concentrao do frmaco
(gradiente de concentrao) e do tamanho das micelas (CHIAPPETTA et al., 2007).
Os dados descritos por CHIAPPETTA et al. (2007) mostram que micelas maiores levam
a uma menor taxa e extenso da absoro, este resultado pode ser correlacionado com
a quantidade dissolvida no FeSSIF ser maior que no FaSSIF que tem micelas maiores
(KLOEFER et al., 2010) e que corroboram com os resultados in vivo que mostram
refeies ricas em gorduras com maior absoro do EFV (KAUL et al., 2010).
Os ensaios aqui apresentados no forneceram informaes discriminantes do
fenmeno ocorrido in vivo, em nenhum dos meios de dissoluo e aparatos utilizados
142
pode-se verificar comportamento condizente com os resultados mostrados no perfil

farmacocintico (FIGURA 10.)
A anlise que demonstrou resultado qualitativamente mais prximo do ocorrido no trato
gastrintestinal foi no meio de dissoluo gua (FIGURA 8) em condies no sink. Os
percentuais de dissoluo em gua foram muito baixos, porm indicam que para
obteno discriminativa do que ocorre in vivo, se faz necessria a avaliao in vitro com
meios de dissoluo em condies no sink.
5.3.
Concluso
Diante dos resultados mostrados, os medicamentos foram considerados equivalentes

farmacuticos, porm nenhum dos ensaios de dissoluo foi capaz de mostrar a
diferena de comportamento das formulaes encontrada in vivo.
As anlises em diferentes meios de dissoluo e com diferentes aparatos (2 e 4) no
foram restritivas o suficiente para evidenciar o comportamento in vivo, mesmo sendo o
EFV um frmaco de classe II.
Anlises de frmacos SCB II em meios biorrelevantes podem levar a correlaes in vitro
in vivo pelo fato da dissoluo ser a etapa limitante, porm dificilmente ser
estabelecida, se o fator limitante for a liberao do IFA a partir da forma farmacutica,
como no caso da formao de um gel que impede a difuso do frmaco, fato
confirmado na comparao dos perfis de dissoluo do IFA puro e do medicamento
teste.
O presente trabalho representa um exemplo em que os dados de dissoluo no so
preditivos dos resultados da absoro in vivo.
143
5.4.
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Ramosa; Talita Mota Gonalvesa; Carlos Eduardo Miranda de Sousaa; Davi Pereira de
Santanaa.
a
Departamento de Cincias Farmacuticas, Rua Professor Arthur de S s/n, Cidade
Universitria,
CEP
50740-520,
danilo.bedor@nudfac.com.br,
Recife,
Pernambuco,
Brasil,
e-mail:
148
6.1. Resumo
Foi desenvolvido um mtodo de cromatografia lquida de alta eficincia acoplada
espectrometria de massas seqencial para determinao de efavorenz (EFV) em
plasma humano utilizando hidrclorotiazida como padro interno (P.I.). Uma ionizao
por eletronebulizao em modo negativo com monitorao de reaes mltiplas foi
utilizada
para
moitoramento
das
transies
m/z
313.8869.24
(EFV)
and
296.02204.76 (P.I.). As amostras foram extradas usando extrao lquido-lquido. O

tempo de anlise foi de 2,0 min. A separao cromatogrfica foi obtida com uma coluna
de fase reversa monoltica, a faixa de linearidade foi de 100 5000 ng mL-1. A
recuperao mdia foi de 83%, a preciso intralote e interlote foi 9.5% and < 8.9%,
respectivamente e a exatido em um intervalo de 8.33%. O mtodo foi satisfatrio
para aplicao em um estudo de bioequivalncia.
Palavras chaves: Efavirenz, bioequivalncia, CL-EM/EM.
149
6.2. Introduo:
Efavirenz (EFV) (Figura 1), (S)-6-cloro-4-(ciclopropiletinyl)-1,4-dihidro-4-(trifluorometil)2H-3,1-benzoxazin-2-ona (BEST; GOICOECHEA, 2008) um inibidor da transcriptase
reversa no anlogo de nucleosdeo (DE CLERQ, 1998) e o primeiro frmaco anti-HIV
liberado para utilizao uma vez ao dia, isto por conta da sua alta meia vida de
eliminao plasmtica, que indica a manuteno de concentraes efetivas por longos
perodos (HILLERY, 1999).
Muitos mtodos para quantificao de EFV em fludos biolgicos esto descritos na
literaura por cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) com deteco ultravioleta
(CLAE-UV) (VELDKAMP et al., 1999; MARZOLINI et al., 2000; AYMARD et al., 2000;
PROUST et al., 2000; SARASA-NACENTA et al., 2001; SIMON, THIAM, LIPFORD,
2001; LANGMANN et al., 2001; REZK, TIDWELL, KASHUBA, 2002; TURNER et al.,
2003; KAPPELHOFF et al., 2003; REZK, TIDWELL, KASHUBA, 2004; DAILLY, RAFFI,
JOLLIET, 2004; COLOMBO et al., 2006; RAMACHANDRAN et al., 2006; NOTARI et al.,
2006; WELLER et al., 2007; SAILAJA et al., 2007; REBIERE et al., 2007; KWARA et al.,
2008), CLAE com deteco por florescncia (MATTHEWS et al., 2002), CLAE com
deteco por espectrometria de massas (CL-EM) (DAVOLIO et al., 2007), CLAE com
deteco por espectrometria de massas sequncial (CL- EM/EM) (VOLOSOV et al.,
2002; RENTSCH, 2003; ROUZES, 2004; COLOMBO, 2005; HEINE et al., 2008) e
Ionizao por desoro de matriz por laser e deteco por espectrometria de massas,
tempo de vo, seqencial (MALDI-TOF/TOF) (NOTARI et al., 2008).
Quando o nmero de amostras para anlise elevado, como aplicao em estudos
farmacocinticos, o desenvolvimento de mtodos robustos e com tempo de anlise
curto uma importante fator (QUEIROZ, COLLINS, JARDIM, 2001; PEREIRA,
BICALHO, DE NUCCI, 2005; XU et al., 2007).
A proposta deste estudo foi desenvolver e validar um mtodo bionaltico rpido e
sensvel, utilizado para a quantificao de EFV em amostras de plasma humano com
150
seletividade, sensibilidade e capacidade de anlise de um grande nmero de amostras

de matrizes complexas.
O mtodo foi satisfatoriamente aplicado a um estudo de bioequivalncia com duas
formulaes de comprimidos de EFV 600 mg. Recentemente um mtodo com alta
sensibilidade e alta seletividade por CLAE (MOGATLE, KANFER, 2009) foi utilizado
descrito na literatura, porm com um longo tempo de anlise (10 min.), incompatvel
com o nmero de amostras e velcocidade requeridas em um estudo de farmacocintica.
Quando comparado a sensibilidade do mtodo aqui descrito (Limite Inferior de
Quantificao (LIQ) de 0,5 pg na coluna) e tempode anlise de 2,0 min que
corresponde a um tempo cinco vezes mais rpido do que o descrito na literatura
(MOGATLE, KANFER, 2009)
O mtodo foi validado e aplicado a um estudo farmacocintico com 30 voluntrios
sadios aps a administrao de comprimidos revestidos de efavirenz 600 mg.
A
B
Figura 1. Estrutura molecular do efavriez (A) e padro interno (B).
6.3. Material e Mtodo

6.3.1. Substncias e reagentos qumicos
A substncia qumica de referncia EFV (99,97%) foi adquirida do laboratrio Cristlia
Produtos Farmacuticos e a hidroclorotiazida da farmacopia brasileira Intituo
151
Nacional de Controle de Qualidade em Sade (INCQS, Rio de Janeiro, Brasil). O Metil

tert-butil ter, a acetonitrila e o isopropanol (grau CLAE) utilizados foram aquiridos da
J.T. Baker (Phillipsburg, NJ, EUA) e a gua ultra pura foi obtida utilizando sistema
purifucador MilliQ da Milipore (Billerica, MA, EUA).
6.3.2. Equipamentos
O sistema de cromatografia lquida de alta eficincia acoplado ao espectrmetro de
massas coissitiu de uma bomba quartenria de baixa presso (LC 10ADvp), um
autoinjetor (SIL 10ADvp), um degaseificador (DGU-14A), um sistema controlador (SCL
10Avp) todos da Shimadzu (Kioto, Japo), um triplo quadrupolo (Quattro LC) com fonte
de ionizao por eletronebulizao e programa de controle e aquisio de dados
Masslynx Software v3.5 (Micromass, Manchester, RU).
Para extrao foi utilizada uma centrfuga refrigerada M23i da Jouan (St. Herblain,
France), as amostras foram armazenadas a -70 C em um frezer REVCO (Asheville,
NC, USA) at a anlise.
6.3.3. Condies cromatogrficas
A separao cromatogrfica foi realizada em uma coluna Onix C18 (50 mm x 4,6 mm,
monoltica)
co
eluio
em
modo
isocrtico
da
fase
mvel
constituda
de
acetonitrila/gua (50:50 v/v + 5% de isopropanol) sob uma vazo de 1,5 mL min-1. A

temperatura do forno de colunas foi de 35 C. Antes da utilizao a fase mvel foi
filtrada por um filtro de nilon de 0,45 m. O volume de injeo foi de 5 L com tempo de
anlise de 2,0 min..
152
6.3.4. Condies espectromtricas

O eluente do cromatgrafo teve o fluxo dividido em 1:10 com 150 L min-1 introduzidos
no espectrmetro de massas que foi operado com ionizao por eletronebulizao em
modo negativo (ESI -) e aquisio foi realizada por monitoramento de reaes mltiplas
(MRM). O fluxo do gs de desolvatao (UHP N2) foi de 389 L h-1. O dwell time foi de
0,5 s para cada transio de massas, o intervalo de troca de transio de massas (m/z
313.8869.24 e 296.02204.76 para EFV e P.I., respectivamente) foi de 0,1 s.
6.3.5. Preparo dos padres de calibrao e das amostras de controle de qualidade
As solues estoque de EFV (1.0 mg mL-1) e P.I. (1.0 mg.mL-1) foram preparadas em
acetonitrila/gua (50:50 v/v), as solues de trabalho do EFV foram preparadas de 100
a 5000 ng mL-1. As solues de P.I. foram preparadas na fase mvel at obteno da
concentrao de 3000 ng mL-1. As solues estoque do EFV foram ajustadas para
obteno de amostras 10 vezes mais concentradas que os nveis de calibrao.
A curva de calibrao para o EFV foi preparada em plama humano com nove nveis de
concentrao: 100, 200, 400, 800, 1000, 1500, 2500, 3500 and 5000 ng mL-1. As
amostras de controle de qualidade foram preparadas em plasma humano nas seguintes
concentraes: 100 (LIQ), 300 (Controle de qualidade baixo CQB), 2000 (Controle de
qualidade mdio CQM) e 4000 (Controle de qualidade alto CQA) ng mL-1.
As amostras de calibrao de controle de qualidade foram preparadas adicionando 100
L de solues estoque de EFV a 9900 L de plasma humano, de um pool de 6
voluntrios.
As amostras de plasma branco para preparo dos nveis de calibrao e controle de
qualidade foram adquiridas do Hemocentro de Pernambuco (HEMOPE) (Recife, PE).
153
6.3.6. Mtodo de extrao

Uma alquota de 25 L do P.I. e 1000 L de Metil tert-butil ter foram adicionados a 100
L de amostras de plasma humano em um tubos de polipropileno de 2 mL com tampa e
homegeizadas com agitao do tipo vortex por 1 min., aps a agitao a fase orgncia
foi separada da fase aquosa por centrifugao a 2000 x g por 5 min.. A fase aquosa foi
desprezada e a fase organica transferida para um tubo limpo e evaporada a 40C sob
fluxo de N2. O resduo do tubo foi ressuspendido em 400 L de fase mvel, de onde
200 L foram tranferidos para vials e colocados no autoinjetor do equipamento. O
volume de injeo foi de 5 L.
6.3.7. Desenho do estudo de bioequivalncia
O estudo de bioequivalncia foi cruzado 2x2, aberto, dois perodos (com trs semanas
de intervalo entre os dois perodos), duas sequncias e aleatrio em 30 voluntrios
sadios entre 18 e 45 anos. Todos os voluntrios assinaram um termo de consentimento
livre e esclarecido de acordo com protocolo de pesquisa clnica aprovado pelo Comit
de tica em Psquisa da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) assim como os
critrios de incluso e excluso.
Critrios de incluso
Sexo masculino;
Idade entre 18 e 45 anos;
Peso acima de 70 kg;
Relao peso altura dentro do peso ideal 10%;
Presso sangunea sistoltica entre 110 e 120 mmHg e diastoltica entre 70 e 80
mmHg;
Exames hematolgicos dentro das especificaes;
Exames bioqumicos da funo heptica e funo renal dentro da normalidade;
Eletrocardiograma e parecer de cardiologista, atestando normalidade;
Exames de HIV e hepatites B e C negativos
154
Critrios de excluso
Uso abusivo de lcool e outras drogas;
Fumante;
Estar fazendo uso de medicamento;
Histrico de doenas;
Alergia ao frmaco ou histria de alergia a medicamentos;
No atendimento aos critrios de incluso.
Amostras de sangue (8 mL) foram coletadas em cateter endovenos (BD Angiocath,
Becton, Dickinson and Company, Franklin Lakes, New Jersey, EUA) em veia do
antebrao. As amostras foram coletadas antes da administrao e a 0,5; 1,0; 1,5; 2,0;
2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 5,0; 6,0; 8,0; 10,0; 12,0; 24,0; 36,0 e 48,0 horas aps a administrao.
Aps a coleta de cada amostra 1 mL de soluo salina de heparina 10 UI/mL
(Blausiegel Ind. E Com. Ltda., Cotia, Brasil) foi injetado no cateter, as amostras foram
imediatamente transferidas para tubos de 4 mL contendo EDTA (ZheJiang GongDong
Medical Technology Company, Ltd., Taizhou, Zhejiang, China) e centrifufgadas a 25 C
por 5 minutos a 1350 x g (JOUAN SA, Saint-Herblain, France).
As amostras de plasma foram separadas e transferidas para tubos criognicos com
tampa e armazenadas a 70 C at a anlise.
6.3.8. Anlise farmacocintica e estatstica
A etapa estatstica foi realizada de forma a garantir que o clculo de bioequivalncia
mdia entre as formulaes em questo indicasse o resultado com confiabilidade, para
isso, foi utilizado um Software para anlise de parmetros farmacocinticos,
WinNonlin Professional Software version 5.1 (Pharsight Corporation, Mountain View,
California).
155
As concentraes plasmticas de EFV foram analisadas em funo do tempo. Os

parmetros farmacocinticos a seguir foram calculdos para cada uma das formulaes:
Concentrao plasmtica mxima (Cmx), tempo necessrio para alcanar o Cmx (Tmx),
rea sob a curva do tempo zero hora at o ltimo ponto com concentraes
quantificveis (ASC0-t) e rea sob a curva do tempo zero hora at o infinito (ASC0-inf).
Cmx e Tmx foram obtidos diretamente dos dados originais, a ASC0-t foi obtida atravs do
clculo dos trapezides.
ASC0-inf foi calculada atravs da relao ASC0-t + Ct/ke, onde Ct a ltima concentrao
quantificada e ke (constante de eliminao), que foi calculada utilizando a regresso
linear dos dados transformados (logN) da fase de eliminao do grfico concentrao
tempo. A meia vida plasmtica (t1/2) foi calculada pela relao ln2/ke.
Os valores de Tmx foram comparados estatisticamente atravs do teste de Wilcoxon.
Os parmetros de Cmx, ASC0-t e ASC0-inf, foram comparados atravs de ANOVA aps
transformao dos dados originais para o logartimo natural seguindo um modelo no
compartimental para um desenho cruzado 2x2 levando em considerao os efeitos de
perodo, sequncia, voluntrios e formulao.
Os intervalos de confiana de 90% para as razes entre as mdias geomtricas do
Cmx, ASC0-t e ASC0-inf, entre teste e referncia foram calculadas e comparadas atravs
de teste t bicaudal, para a aprovao foram seguidos os critrios de aceitao da
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA) and Food and Drug administration
(FDA) para a bioequivalncia, onde os limites inefrior e superior das razes calculadas
devem estar compreendidos no intervalo de 80 a 125%.
6.4. Resultados e discusso

6.4.1. Otimizao da cromatografia lquida de alta eficincia
A otimizao do mtodo de separao foi realizada atravs da variao do percentual
de solvente orgnico (metanol e acetonitrila) e acetato de amnio utilizado na fase
156
mvel para incremento da ionizao por eletronebulizao em modo negativo. A

eficincia na ionizao foi maior na presena de acetonitrila que na de metanol.
Um aumento no pecentual de acetonitrila na fase mvel (80%, v/v ou maior)
proporcionaram um menor tempo de anlise e melhores caractersticas da formao do
cone de Taylor com uma melhor desolvatao, porm a separao do analito em
relao aos interferentes da matriz biolgica no foram satisfatrias com esse
percentual de modificador orgnico.
O isopropanol foi adicionado com a finalidade de melhorar o formato de pico, por esta
razo, acetonitrila/gua (50:50 v/v + 5% isopropanol) foi adotada como a fase move por
apresentar os melhores resultados de separao dos interferentes e maior estabilidade
do sinal do espectrmetro de massas.
6.4.2. Otimizao da espectrometria de massas
A figura 2 mostra o espectro de massas para o EFV por eletronebulizao em modo
negativo. Os ons precurssores desprotonados [M - H]
para EFV e P.I. foram m/z
313,88 e 296,02, respectivamente e os ons produtos do EFV e P.I. observados nos

espectros aps fragmentao foram m/z 69,24 and 204,76, respectivamente
A temperatura da fonte, assim como a temperatura de dessolvatao foram otimizadas
de acordo com a composio e vazo da fase mvel para 110 C e 300 C,
respectivamente. A vazo do gs de dessolvatao foi de 389 L h1. A voltagem do
capilar foi fixada em 3,2 kV, enquanto a voltage do cone foi especificada em 27 V e 37
V para o EF e P.I., respectivamente. A energia de coliso foi otimizada para 40 V e 23 V
para EFV e P.I., respectivamente, enquanto a presso do argnio utilizado na cmara
de coliso foi de 1,88x10-3 psi. A energia do detector foi de 800 V.
157
Figura 2. Espectro de massas do EF em modo negative (on produto)

6.4.3. Validao do mtodo
6.4.3.1. Seletividade
A seletividade (Figura 3) foi avaliada atravs da comparao de sete diferentes plasmas
humanos broncos (isentos de EFV) incluindo plasma lipmico, plasma hemolisado e
plasma adicionado do anticoagulante utilizado no estudo de bioequivalncia (EDTA)
com plasma fortificado com o EFV e o P.I..
O efeito matriz foi avaliado pela monitorizao do sinal do espectrmetro de massas
pelo mtodo de infuso ps coluna de uma soluo de EFV e injeo de amostras de
plasma branco
No foram verificados interferentes no tempo de reteno do EFV e do P.I., bem como
no foram evidenciados efeitos da matriz biolgica na resposta analtica dos
compostos.
158
Figura 3. Cromatogramas demonstrativos da seletividade e do efeito matriz. Amostras

de plasma branco (A) e amostras fortificadas com analito e P.I. na concentrao do LIQ
juntamente com o experimento do efeito matriz (B)
6.4.3.2. Linearidade
A qualidade de um dado bioanaltico fortemente dependente da qualidade da curva de
calibrao e do modelo estatstico utilizado na sua gerao (NAGARAJA, PALIWAL,
GUPTA, 1999; SINGTOROJ et al., 2006). A curva de calibrao para quantificao do
EFV foi construda no intervalo de 100 a 5.000 ng mL-1 (100; 200; 400; 800; 1.000;
1.500; 2.500; 3.500 e 5.000 ng mL-1) com uma equao de reta mdia (N = 3): y =
0,9792 ( 0,0331) x + 0,0377 ( 0,0761), r2 = 0,994587 ( 0,002640).
159
O mtodo utilizado para construo da curva de calibrao foi a regresso linear pelo
mtodo dos mnimos quadrados com ponderao de 1/x2. A Tabela 1 mostra os
resultados obtidos no ensaio da linearidade.
Tabela 1. Resultados da preciso e exatido dos nveis de concetrao.
Concentrao
Concentrao experimental
Preciso
Exatido
nominal
(ng mL-1)
(%)
(%)
(ng mL-1)
(Mdia) (n=3)
100
97,263
2,7
- 2,7
200
212,925
6,6
6,5
400
431,140
1,3
7,8
800
831,694
5,2
4,0
1.000
1018,038
12,6
1,8
1.500
1466,842
9,5
-2,2
2.500
2549,049
12,5
2,0
3.500
3460,183
0,4
- 1,1
5.000
4913,297
5,1
-1,7
6.4.3.3. Recuperao
A recuperao do EFV foi avaliada atravs da anlise de trs nveis de controles de
qualidade (baixo - CQB, mdio - CQM e alto - CQA) comparando as razes dos picos
cromatogrficos (rea do pico em soluo/area do pico aps extrao da amostra de
plasma).
A mdia de recuperao do EFV no CQB (300 ng mL-1), CQM (2.000 ng mL-1) e CQA
(4.000 ng mL-1), foi de 83 3%, 79 6%, 88 9%, respectivamente (N = 6). A mdia da
recuperao do padro interno (3.000 ng mL-1) foi de 84 2% (N=6).
160
6.4.3.4. Preciso e exatido

Os resultados para a preciso e exatido intralote para as amostras de controle de
qualidade LIQ, CQB, CQM e CQA do EFV esto reportadas nas Tabela 2. A preciso
intralote (desvio padro relativo DPR) variou de 2,8 a 9,3%. A preciso interlotes
(DPR) para o LIQ foi de 7,4% e intralote variou de 4,6 a 8,7% (N = 3).
Apesar de vrios mtodos para quantificao de EFV estarem descritos na literatura
(VELDKAMP et al., 1999; NOTARI et al., 2008; MOGATLE, KANFER, 2009), o mtodo
aqui descrito mostrou-se preciso e exato para a determinao deste analito em plasma
humano de acordo com padres internacionais e traz a vatagem de um curto tempo de
anlise, ideal para quantificao de um elevado nmero amostras em pouco tempo,
caso dos estudos de bioequivalncia.
Tabela 2. Preciso e exatido do EFV
Conc.
Nominal
(ng mL-1)
100
300
2.000
4.000
Intralote (ng mL-1) (N = 6)
Interlotes (ng mL-1) (N = 24)
Dia 1
Dia 2
Dia 3
Mdia
Mdia
Mdia
(DPR%)
(DPR%)
(DPR%)
106,295
103,021
110,173
106,496
(7,23)
(8,73)
(4,64)
(7,913)
324,372
330,082
287,083
315,943
(5,48)
(2,79)
(8,36)
(26,381)
1.893,604
2.145,503
1.949,428
1.995,195
(9,24)
(5,55)
(7,40)
(177,772)
4.196,729
3.810,731
3.927,206
3.968,348
(5,77)
(5,77)
(9,30)
(339,691)
Mdia
Prec.
Exat.
(DP)
(DPR%)
(ER%)
7,4
6,5
8,4
5,3
8,9
- 0,2
8,6
- 0,8
161
6.4.3.5. Estudo de estabilidade

Os estudos de estabilidade foram realizados em dois nveis de concentrao CQB e
CQA. A Tabela 3 reporta os dados dos ensaios de estabilidade de bancada,
estabilidade
em
autoinjetor,
estabilidade
em
ciclos
de
congelamento
descongelamento e estabilidade de longa durao.

A estabilidade de bancada foi investigada para garantir que o EFV permanea estvel
na temperatura ambiente por um perodo que contemple o tempo de preparao das
amostras em plasma. Dois grupos de amostras em plasma nas concentraes de CQB
e CQA foram deixados na bancada sob a temperatura da sala (23 C) por seis horas,
quando as amostras foram extradas, analizadas e comparadas com os resultados de
uma curva de calibrao e de um grupo de CQB e CQA recm preparados. Os
resultados indicaram que o EFV estvel nas condies estudadas.
Em funo da necessidade de injees ou reinjees de amostras extradas e
organizadas no autoinjetor aps um longo tempo, a estabilidade no autoinjetor na
temperatura ambiente (23 C) foi avaliada. Dois grupos de amostras em plasma nas
concentraes de CQB e CQA foram extradas e organizadas no autoinjetor e mantidas
por 33 h antes da injeo, quando as amostras foram extradas, analizadas e
comparadas com os resultados de uma curva de calibrao e de um grupo de CQB e
CQA recm preparados. Os resultados indicaram que o EFV estvel nas condies
estudadas.
Para a avalia da estabilidade frente a ciclos de congelamento e descongelamento
amostras de CQB e CQA foram submetidas a trs ciclos de gelo e degelo, cada ciclo
consistiu em remover as amostras do frezer (-70 C) e deixar em repouso por 3 h na
temperatura ambiente e aps esse perodo recongelar a -70 C. Aps trs ciclos as
amostras foram extradas juntamenete com uma curva de calibrao e amostras de
CQB e CQA recm preparadas. Os resultados indicaram que o EFV estvel aps trs
cilcos de congelamento e descongelamento.
162
A estabilidade longa durao em temperature de armazenamento de 70 C tambm

foi estudada com amostras de CQB e CQA. A estabilidade foi monitorada durante a
validao e durante o perodo de armazenamento das amostras do estudo de
bioequivalncia e no foram observadas degradaes significantes nas amostras. Os
dados da estabilidade durante 10 semanas esto reportados na Tabela 3.
Tabela 3. Resultados do estudo de estabilidade do EFV em matriz biolgica.
Efavirenz (n=4)
Ensaio de estabilidade
Estabilidade de bancada
Estabilidade de autoinjetor
Estabilidade de gelo e degelo
Estabilidade de longa durao
Estabilidade de solubilidade
Conc. Nominal
Preciso
Exatido
(ng mL-1)
(DPR) (%)
(ER) (%)
300
8,1
-2,1
4.000
3,6
-1,6
300
10,0
-6,8
4.000
10,4
5,3
300
10,3
-2,6
4.000
8,4
0,8
300
6,0
5,3
4.000
7,9
1,9
300
5,2
-2,6
4.000
4,9
-3,8
6.4.4. Anlises estatsticas e parmetros farmacocinticos

A Figura 4 mostra a curva mdia da concentrao plasmtica versus o tempo para o
EFV aps administrao das formulaes teste e referncia. A formulao referncia foi
STOCRIN (MERCK SHARP & DOHME) em comprimidos revestidos de 600 mg de
EFV. A formulao teste foi administrada sob o mesmo regime e consistiu de um
comprimido revestido de 600 mg de EFV.
A Tabela 4 reporta os valores dos principais parmetros farmacocinticos utilizados no
clculo da bioequivalncia: Cmx, AUC0-t, AUC0-inf, Tmx.
163
A media do Cmx para o produto referncia foi 2,961 1,032 g mL-1 corroborando com
recente publicao (RAMACHANDRAN et al., 2006), a meia vida plasmtica obtida
neste estudo foi de 45,485 h para a formulao teste de acordo com dados da literatura
(PORCHE, 2000).
O intervalo de confiana clssico (90%) para a razo do Cmx foi 36,1% (limite inferior) e
45,3% (Limite superior). A mdia do Cmx calculada pelo mtodo dos mnimos
quadrados para o referncia foi 2,8 g mL-1 e 1,1g mL-1 para o teste, resultando em
uma razo (Cmx teste/ Cmx referncia) de 40,04 e um poder de teste de 94,3%
A ASC0-t teve um lmite inferior e um lmite superior, segundo interval de confiana (90%),
de 61,9 e 79,%, respectivamente. A mdia da ASC0-t calculada pelo mtodo dos
mnimos quadrados para o referncia foi 63,7 g (mL.h)-1 para o medicamento de
-1
referncia e 44,6 g (mL.h) para o teste, resultando em uma razo (teste/referncia) de
70,0 e um poder de teste de 91,2%.

Quando a ASC0-inf foi calculada, os limtes inferior e superior, com intervalo de confiana
de 90%, foram 68,18 e 87,70%, respectivamente. A mdia da ASC0-inf calculada pelo
mtodo dos mnimos quadrados para o referncia foi 81,7 g (mL.h)-1 para o
medicamento de referncia e 63,2 g (mL.h)
-1
para o teste, resultando em uma razo
(teste/referncia) de 77,3 e um poder de teste de 90,1%.
164
Figura 4. Curva media da concentrao plasmtica versus o tempo aps administrao

das formulaes teste e referncia.
Tabela 4. PArmetros farmacocinticos para as formulaes teste e referncia
Parmetro
Mdia formulao teste Mdia
formulao
farmacocintico
(DPR%)
referncia (DPR%)
ASC0-t g (mL.h)-1
48,769 18,8
66,887 21,1
ASC0-inf g (mL.h)-1
68,788 24,8
86,842 31,2
Cmx g mL-1
1,225 0,6
2,961 1,0
tmx h
7,00 6,6
3,233 2,1
t1/2 h
49,173 20,5
45,485 20,9
165
6.4.5. Discusso
Em muitas aplicaes bioanalticas, a preparao da amostra e o tempo total da anlise
podem reduzir significativamente os problemas causados pelo elevado nmero de
mostras de um procedimento analtico (RENEW, HUANG, 2004; SOVERAIN, RUDAZ,
VEUTHEY, 2004; ALNOUTI et al., 2005; THERON, 2010). Este um parmetro crtico
em aplicaes de mtodos, como o caso de estudos farmacocinticos que necessitam
a mainpulao de um elevado nmero de amostras. Theron et al. descreveu um mtodo
para quantificao de EFV em saliva humana com um LIQ de 6,11 ng mL-1, porm com
um longo tempo de anlise (8,5 min).
Rencentes avanos aplicados no aumento da produtividade em aplicaes com elevado
nmero de amostras incluem o uso simultneo dais ionizaes por eletronebulizao
em modo negativo e modo positivo (ZHANG et al., 2007) e o uso da cromatografia
lquida de ultraeficincia (CLUE) para diminuio do tempo de anlise (KAY et al.,
2007).
Muitos mtodos CLAE-EM/EM descritos na literatura foram desenvolvidos para
quantificao simultnea de vrios frmacos anti-HIV com tempos de anlises longos
(COLOMBO et al., 2006; DAVOLIO et al., 2007; RENTSCH, 2003; ROUZES et al.,
2008; ELENS et al., 2009). O mtodo aqui descrito para a quantificao do EFV em
plasma mostrou um tempo de anlise de 2,0 min e foi aplicado com sucesso a um
estudo de bioequivalncia.
O uso da espectrometria de massas com deteco em modo de monitorizao de
reaes mltiplas (MRM) demanda menos sofisticao na cromatografia para
separao do analito e dos interferentes da matriz por ter alta seletividade, ocasionando
em tempos de anlise menores com menor efeito matriz.
Muitos mtodos descrevem mtodos para quantificao de EFV em fludos biolgicos,
porm no reportam aplicao perfis farmacocinticos comparativos que demandam
anlises de um elavado nmero de amostras. A maior parte dos mtodos so aplicados
166
na monitorizao teraputica de frmacos (VELDKAMP et al., 1999; AYMARD et al.,

2000; KAPPELHOFF et al., 2003; MATTHEWS et al., 2002).
Em 2006 Ramachandran et al. descreveu um mtodo bioanaltico por CLAE com
deteco por ultravioleta e aplicao em trs voluntrios com dez amostras coletadas
em tempos diferentes aps a administrao de EFV, porm no aplicou em elevado
nmero de amostras.
Neste estudo o mtodo por CLAE-EM/EM com extrao lquido-lquido descrito para
quantificao de EFV em plasma humano demostrou seletividade, boa preciso e
exatido e linearidade com um pequeno tempo de anlise, reduzindo o tempo total de
anlise.
6.5. Concluso
Ns descrevemos um simples e rpido mtodo por CLAE-EM/EM para quantificao de
EFV em plasma humano, o qual mostrou aceitvel preciso e sensibilidade adequada.
O mtodo mostrou-se capaz de ser aplicado a um elevado nmero de amostras como
na rotina de um estudo de bioequivalncia. Apesar do resultado de no bioequivalncia
(teste estatisticamente diferente do referncia), o mtodo mostrou adequabilidade para
determinao das diferenas entre as formulaes farmacuticas e demostrou robustez
na anlise de 1260 amostras.
6.6. Referncias
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174
Concluso
175
7. Concluso
O estudo aqui desenvolvido partiu do resultado de no bioequivalncia entre duas
formulaes
farmaceuticamente
equivalentes
com
perfis
de
dissoluo
semelhantes quando avaliados nas condies indicadas pelo fabricante do

medicamento de referncia.
A partir de ento foi realizada a caracterizao do estado slido do IFA produzido
por farmoqumicas nacionais que apresentou resultados satisfatrios em nvel de
teor, em nvel molecular e em nvel de partculas, porm com desvios em nvel de
impurezas e em nvel de aglomerados de partculas que levaram a desvios em
parmetros crticos como tamanho de partculas e densidade. Tais desvios
implicaram em substanciais diferenas na dissoluo aparente dos IFAs.
Em face ao exposto imperativo que para avaliao da qualidade do EFV se faz
necessrio a incluso do conceito de Quality by Design para imposio de limites
com especificaes bem definidas para parmetros como tamanho de partculas,
umidade e densidade. Esses fatores podem ser limitados com o delineamento de um
Design space que evidencie a faixa ideal para os fatores em nvel de aglomerados
de partculas
As anlises dos perfis de dissoluo in vitro quando comparada aos resultados de
absoro in vivo mostraram que nenhum dos mtodos que seguiram as condies
sink foram capazes de se correlacionar com parmetros encontrados no estudo de
bioequivalncia. Em contrapartida o ensaio realizado em condies no sink
demonstrou a diferena entre as formulaes, apesar da pequena quantidade
dissolvida.
176
Perspectivas
177
8. Perspectivas
Investigao dos resultados encontrados na dissoluo em FeSSIF;
Realizao de dissoluo em aparato 4 utilizando sistemas abertos dos

comprimidos macerados;
Realizao de dissoluo em aparato 4 utilizando sistemas abertos dos

comprimidos intactos;
Investigao das condies no sinc ideais para obteno da CIVIV;
Estudo do mecanismo de absoro do EFV (transporte passivo, transporte

ativo) atravs de modelos in vitro (cultura celular);
Avaliao da dissoluo em FaSSSIFv2 e FeSSIFv2;
178
Apndice
179
Apndice A. (publicado na Qumica nova, v.34, n.6, p.950-955,2011)

Avaliação Biofarmacotécnica

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO

CENTRO DE CINCIAS DA SADE

Avaliao biofarmacotcnica do Efavirenz um frmaco

DANILO CESAR GALINDO BEDOR

UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO

Avaliao biofarmacotcnica do Efavirenz um frmaco

Tese apresentada ao Programa de PsGraduao em Cincias Farmacuticas do

Universidade Federal de Pernambuco, para

Doutorando: M.Sc. Danilo Csar Galindo Bedor

Bedor, Danilo Cesar Galindo

UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO

minha me, irmos, amigos e familiares

medicamentos que atuam em fases distintas do ciclo de replicao. O efavirenz

Keywords: AIDS, Efavirenz, Quality by Design, Bioequivalence.

Figura 8. Difratogramas de Raios-X de ps dos trs IFA analisados ...................... 105

Captulo 4 Avaliao da bioequivalncia

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

FeSSIF - Fludo intestinal simulando alimentao

g mL-1 micrograma por mililitro

1.1. Referncias bibliogrficas ................................................................................. 32

2.1. Objetivo geral ..................................................................................................... 35

Captulo 1 - Reviso bibliogrfica ..................................................................... 37

3.1. Avanos na terapia antiretroviral....................................................................... 37

Captulo 2 - Caracterizao de estado slido do Efavirenz um frmaco SCB

4.1. Resumo do captulo ........................................................................................... 86

4.4.1. Anlise de potncia ......................................................................................... 96

Captulo 3 Avaliao biofarmacutica de duas formulaes do antiretroviral

5.1. Resumo do captulo ......................................................................................... 124

Materiais .............................................................................................. 127

5.3.1.1. Equipamentos e acessrios ....................................................................... 127

Mtodos ............................................................................................... 129

5.3.2.1. Equivalncia Farmacutica - EQFAR ......................................................... 129

Equivalncia Farmacutica ......................................................................... 133

Dissoluo do IFA....................................................................................... 136

Dissoluo dos produtos acabados ............................................................ 138

5.4.3.1. Perfil de dissoluo aparato 2 .................................................................... 138

Captulo 4 Avaliao da bioequivalncia .................................................. 147

(publicado na Qumica nova, v.34, n.6, p.950-955,2011) Apndice A..................... 147

Concluso ....................................................................................................... 175

Perspectivas ................................................................................................... 177

Apndice A. (publicado na Qumica nova, v.34, n.6, p.950-955,2011).................... 179

AIDS) em 04 de maio de 2007, o Presidente da Repblica Federativa do Brasil assinou

ativo (IFA). Avaliou-se ainda a equivalncia farmacutica e a bioequivalncia da forma

Pharmaceutics, v.366 p. 1-13, 2009.

3. Captulo 1 - Reviso bibliogrfica

com multifrmacos capazes de suprimir a replicao viral na maioria dos pacientes

FIGURA 1. Ciclo de replicao do HIV. 1 adsoro; 2 fuso; 3 desencapeamento; 4

FIGURA 2. Possibilidades, tericas, de combinaes de frmacos ARVs. (Adaptada de

frmacos com melhores perfis de resistncia tm sido desenvolvidos, dentre eles a

2 ITRNs e 1 IP. Para ITRNs, a primeira escolha a

administrao de zidovudina e lamivudina, em casos de intolerncia zidovudina, a

TABELA 1. Antiretrovirais aprovados pelo FDA

* Didanosina (Comprimidos gastroresistentes) ** Tenofovir disoproxil fumarato.

3.2. Efavirenz (EFV)

O produto Atripla composto por uma associao de trs frmacos (efavirenz /

comercializao desde 13 de dezembro de 2007 (EMEA, 2009).

No Brasil, encontram-se registrados na Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria

O efavirenz o principal composto de um grupo de molculas da classe das

FIGURA 3. Rota de sntese do composto DMP-266 (efavirenz) (Adaptada de YOUNG et

Pharmacare em uma joint venture com matriz na ndia (PINHEIRO; ANTUNES;

A concentrao plasmtica mxima (Cmx) encontrada no plasma humano aps

cefalorraquidiano com concentraes em mdia de 0,69% (0,26 e 1,19) da

A eliminao do EFV caracterizada pela elevada meia vida e possui um clearence