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APNDICE 1
Introduccin
El cultivo de tejidos es una tcnica utilizada
para la micropropagacin vegetal. En el cultivo
de yuca (Manihot esculenta Crantz), la
micropropagacin vegetal ha sido aplicada con
xito para obtener vitroplantas de yuca.
Esta tecnologa permite producir, en forma
masiva, plntulas libres de plagas y
patgenos, aumentando as su productividad
y, en ciertos casos, su longevidad. En relacin
con la yuca se utiliza la micropropagacin in
vitro para producir plntulas libres de
patgenos, tales como cuero de sapo, mosaico
de la yuca y bacteriosis, entre otros. Esta
micropropagacin se puede realizar por el
medio tradicional, con tasas bajas de
multiplicacin, o mejorarlas a travs de
sistemas de multiplicacin ms eficientes,
como el Recipiente de Inmersin Temporal
Automatizado (RITA) (ver Captulo 21, esta
obra) y el Sistema de Inmersin Temporal
Automatizado (SITA).
Las plntulas producidas por cualquiera
de estos sistemas, al cabo de 6 a 11 meses de
estar bajo condiciones artificiales (luz,
572
Etapa 1
Actividades pre-operativas
El desarrollo normal de un PE exige una
planificacin previa que incluye un cronograma
detallado de todas las actividades que integran el
proceso, a saber, la seleccin del personal que lo
ejecuta; la seleccin y adecuacin de las
instalaciones; los anlisis de laboratorio; la
adquisicin de equipos, materiales e insumos; y
la solicitud al laboratorio de biotecnologa del
nmero de vitroplantas que pueden
endurecerse por semana.
La metodologa del PE permite aclimatar
302 plntulas de yuca por m2 de rea til de
invernadero o de casa de malla. Se describen
enseguida las principales actividades:
Recurso humano
Es conveniente que la mano de obra sea
calificada; si no lo es, que haya recibido, al
menos, entrenamiento sobre los aspectos
bsicos del PE. El nmero necesario de
operarios depende de su experiencia y de la
cantidad de plantas que entran al proceso: un
operario novato puede manipular unas
200 plantas por da y uno experto hasta 600
(ver Preparacin del trasplante, p. 577).
Instalaciones
Hay tres instalaciones principales: el rea de
trabajo y la casa de malla o el invernadero (o
ambos, a veces). Hay que seleccionar primero las
mejores entre las disponibles y luego, si es
necesario, adecuarlas.
Area de trabajo. Consta de los siguientes
espacios: un depsito para suelo y arena, una
minibodega para guardar los materiales e
insumos, un patio de suelos para hacer las
mezclas, y un sitio fresco para la operacin de
trasplante; este ltimo debe estar protegido de
los rayos solares y de los vientos fuertes y debe
tener, adems, un lavadero y una mesa
(Figura A1).
Casa de malla. Esta instalacin (Figura A2)
debe tener techo. Se debe adecuar luego con un
sistema de climatizacin automtico que tenga
microaspersores (ver Invernadero), tanto
suspendidos sobre las mesas o del techo como
dispuestos en el piso, con el fin de controlar la
temperatura y la humedad relativa,
especialmente en los primeros das del proceso.
Aunque se requiere alta luminosidad para
favorecer el desarrollo de las plntulas, hay que
evitar que stas reciban directamente los rayos
solares de la maana, del medio da y de la tarde
en los primeros 8 das de aclimatacin; por
tanto, debe instalarse una pantalla protectora
que puede ser una de estas tres soluciones:
573
Anlisis de laboratorio
Es necesario hacer inicialmente el anlisis
qumico y biolgico del suelo, de la arena y del
agua que se usar en las instalaciones. De este
modo pueden corregirse los problemas que
podran presentarse.
574
Pre-adaptacin de plntulas
Si las vitroplantas han sido transportadas
durante varios das en cajas cerradas, los
frascos se colocan como se indic antes hasta
que las plntulas se recuperen. Se sugiere
tambin dejar los frascos con las vitroplantas
A
Figura A3.
Etapa 2
Actividades operativas o tcnicas
El xito de un PE depende del manejo integral
de una serie de operaciones que van desde la
recepcin de las vitroplantas hasta su
trasplante.
Recepcin de vitroplantas
Del laboratorio de biotecnologa llegan
cajas que contienen los frascos con las
vitroplantas. Estos se retiran rpidamente de
las cajas y se colocan, dejando espacio entre
Figura A4.
575
Figura A5.
Preseleccin de vitroplantas
en sus frascos.
576
Figura A6.
Figura A7.
Figura A8.
Etapa 3
Actividades del proceso de trasplante
El trasplante es un proceso traumtico para
las plntulas, especialmente cuando la mano
de obra que lo ejecuta no es calificada o carece
de experiencia. Las plntulas sufren un estrs
microclimtico cuando pasan de los frascos a
las minicmaras hmedas, debido a los
siguientes factores: deshidratacin, paso de un
sustrato rico en nutrientes a otro muy pobre en
ellos (mezcla de suelo con arena), daos
mecnicos casi inevitables en varias partes de
la plntula (cofia, pelos absorbentes, races,
577
Seleccin
Se inicia el proceso con una primera
seleccin de los frascos que contengan las
plntulas ms vigorosas, o sea, las de color
verde intenso, que estn erguidas y cuyo tamao
oscile entre 5 y 7 cm.
Figura A9.
578
Trasplante
Con una mano se lleva la plntula a una
bolsa, introduciendo en sta su raz y la parte
inferior del tallito; esta mano debe mantenerse
rgida para evitar la rotura de pelos absorbentes
y de races de la plntula. Con la otra mano se
Etapa 4
Mantenimiento de las plntulas
trasplantadas
En esta etapa se debe prestar mucha atencin a
los cambios microclimticos que ocurran dentro
de las instalaciones, al riego que requieran las
plntulas, a su nutricin, y a la presencia en
ellas de plagas y enfermedades.
Se recomienda, adems, no mover las bolsas
con las plntulas durante el primer mes despus
del trasplante para no causar daos a las races
(especialmente en la cofia y en los pelos
absorbentes). Estas partes de la planta son
frgiles y quebradizas en esta etapa temprana
de su desarrollo. Los daos o roturas en los
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Riego
Si se han regado las plntulas con la
cantidad correcta de solucin nutritiva (ver
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Fertilizacin
El sustrato utilizado (3 partes de arena por
1 parte de suelo) es poco frtil; por tanto, es
indispensable trazar un programa de fertilizacin.
Cada 8 das se fertilizarn las plntulas con
macronutrientes y micronutrientes para que se
desarrollen normalmente (Figura A17).
581
Etapa 5
Separacin de las plntulas
De 30 a 34 das DDT, las plantas de yuca
necesitan ms luminosidad y mayor temperatura
para estimular su crecimiento y desarrollo. Por
tanto se colocan las plantas ms separadas en un
rea que sea el doble o el triple de la que
ocupaban inicialmente (Figura A18).
Etapa 6
Transplante en el campo
Las plantas permanecen en la casa de malla o
en el invernadero durante un lapso de 70 a
90 das; transcurrido este tiempo son llevadas
al campo.
Traslado
Al transportar las bolsas del invernadero (o de
la casa de malla) al campo, es necesario proteger
las plntulas de una corriente fuerte de aire que
podra causarles abrasin o deshidratacin
(Figura A19).
582
E
C
Figura A20. Trasplante en el sitio definitivo. (A) Adaptacin paulatina de las plntulas al nuevo ambiente en el campo.
(B) Trasplante al sitio definitivo en el campo. (C), (D), (E) Tres momentos del desarrollo en el campo de las
plntulas de yuca producidas en el laboratorio (vitroplantas) mediante la tecnologa descrita en este Apndice.
Bibliografa
Asher CJ; Edwards DG; Howeler RH. 1980.
Desrdenes nutricionales de la yuca. Centro
Internacional de Agricultura Tropical (CIAT),
Cali, Colombia. 48 p.
Escobar HR. 1991. Estudio comparativo de dos
mtodos de propagacin de la yuca (Manihot
esculenta Crantz) in vitro. Tesis. Universidad
Santiago de Cali, Cali, Colombia. 130 p.
583
APNDICE 2
Acrnimos
ACMV
ELISA
prueba inmunoenzimtica de
adsorcin (Enzyme-Linked
Immunosorbent Assay)
ESTs
FEDEYUCA
AFLP
polimorfismo en longitud de
fragmentos amplificados (ver RFLP)
BSA
FRDS
IBPGR
IITA
IPGRI
IVAG
IVBG
LB
MCA
anlisis de correspondencias
mltiples (Multiple Correspondence
Analysis)
CABs
CBB
CCMD
CCMV
CCSpV
CFSD
CEF
CEMILLA
PCR
CGIAR
PROAGRO
RAPD
CsXV
RFLP
CVMV
RITA
DRI
RSS
dsRNA
STS
584
TDF
UFC
cluster
contig
electroforacin
Abreviaturas
cM
kb
Trminos Tcnicos
cajuela
agujero de 20 20 20 cm hecho en
el suelo para plantar una estaca
(cangre) de yuca o una planta ya
endurecida.
cangre
centiMorgan
585
Francisco Motta
Gladys Rodrguez (asistente editorial)
Angela Arenas (asistente de compilacin)
Nidia Betancourth (asistente de compilacin)
Produccin:
Impresin: