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MANUAL
DE

-0-

.A

RUTINAS ANALITICAS

2000

INDICE
1. RUTINA DE ANALISIS
1
1.1 HARINA
a.
b.
c.
d.
e.
f.
g.
h.
i.
j.

Determinacin de Humedad
Determinacin de Protena Total
Determinacin de Protenas Solubles
Determinacin TBV-N (Bases Voltiles Totales Nitrogenadas)
Determinacin de Grasa
Determinacin de Acidos Grasos Libres (Acidez)
Determinacin de Cenizas Totales
Determinacin de Arenas
Determinacin de Cloruros
Determinacin de Histaminas
k. Determinacin de Remanente de Antioxidante
l. Digestibilidad ( Torry modificado)
m. Granulometra

1.2 FASE LIQUIDA

a.
b.
c.
d.
e.
f.
g.

Determinacin de Grasa en Licores por Centrifugacin

Medicin de Slidos en Licores
Determinacin de acidez en Aceite Crudo
Impurezas y Slidos en Aceite
Determinacin de Humedad en Aceite
Indice de Perxidos en aceite
Indice de Yodo en aceite

1.3 ANALISIS DE COMPOSITOS (Materia Prima, Licores, Tortas, Harina).

-1-

.A

a.
b.
c.
d.
e.
f.
g.

-2-

Determinacin de Humedad
Determinacin de Grasa
Determinacin de Protena Total
Determinacin de Cenizas
Determinacin de Cloruros
Determinacin de Acidez en Aceite
Determinacin de Granulometra.

1.4 TBVN EN MATERIA PRIMA Y CONCENTRADO (descarga y proceso)

1.5 ANALISIS DE AGUAS
a.
b.
c.
d.
e.
f.
g.

Determinacin
Determinacin
Determinacin
Determinacin
Determinacin
Medicin pH
Determinacin

de Slidos Totales Disueltos (STD)

de Cloruros
de alcalinidad hidrxida (OH)
de residual de sulfitos
de residual de fosfatos
de Dureza

1.6 LIMPIEZA DE P.A.C. Y CENTRIFUGAS

a. Valoracin de soda castica con una solucin normalizada de H2SO4 1N .
b. Valoracin de cido ntrico con una solucin normalizada de NaOH 0,1N.
c. Determinacin de pureza de soda castica en escamas

1.7 AGUA DE BOMBEO Y EFLUENTE

a.
b.
c.
d.

Determinacin de Humedad
Determinacin de Grasa
Determinacin de Protena
Medicin de pH

1.8 ANALISIS DEL CUERPO RECEPTOR

a.
b.
c.
d.
e.

Mediciones Fsicas (Temperatura aire-agua, Transparencia, Profundidad)

Medicin de pH
Determinacin de Demanda Bioqumica de Oxgeno disuelto al quinto da
(DBO5)
Determinacin de Slidos Totales
Salinidad

2. ANEXOS : PREPARACION Y ESTANDARIZACION DE SOLUCIONES E

INDICADORES
2.1
2.2
2.3
2.4
2.5

Soluciones Normalizadas
Soluciones Porcentuales.
Indicadores.
Preparacin de soluciones para anlisis de aceite: perxidos e ndice de yodo.
Soluciones Reguladoras o Tampn.

.A

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1. RUTINA DE ANALISIS
Cualquier muestra para anlisis qumico deber estar debidamente homogenizada
y pulverizada y debern archivarse hermticamente y separar una contramuestra.

1.1

HARINA

a. HUMEDAD

Fundamento
El mtodo consiste en determinar el porcentaje de agua contenida en
la muestra por la prdida de peso, debido a su eliminacin por
evaporacin bajo condiciones de tiempo y temperatura establecidas
por las normas.
Equipos y Materiales
-

Balanza Analtica con 0,1 mg de precisin

Estufa con termoregulador
Placas Petri de 100 x 15 mm.
Desecador 250 mm con slica gel

Procedimiento
-

Pesar 5,0 g. de muestra pulverizada en placas Petri por duplicado.

Poner en la estufa por 21/2 horas a 130C + 5C
Cumplido el tiempo, retirar las placas al desecador, dejar enfriar
unos 30 min. y luego proceder a pesar.

Clculo
% Humedad =
Donde:

W1 - W2
Wm

x 100

.A

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W 1 = Peso de placa + muestra hmeda (g)

W 2 = Peso de placa + muestra seca (g)
Wm = Peso de muestra (g)

Observaciones
-

Tener mucho cuidado con la tapa del desecador al momento de

introducir las placas calientes en el desecador y cuando se cierre la
llave de la tapa.
Regenerar la slica gel peridicamente.

Referencias
Asociation of Official Analytical Chemists, (A.O.A.C.) Official Methods of
Analysis, 930.15 15th Edition, published by A.O.A.C. USA, 1990.

b.

PROTEINAS TOTALES

Fundamento
Se basa en la conversin de nitrgeno orgnico en inorgnico. El Sulfato
de amonio formado se diluye y se alcaliniza con hidrxido de sodio; el
amonio liberado se recepciona en una solucin de cido sulfrico, el cual
se valora con una solucin de hidrxido de sodio normalizada.
Mtodo
Kjeldhal
Equipos y Materiales
- Equipo de Digestin y Destilacin Kjeldahl
- Balanza Analtica 0,1 mg. de precisin.
- Balanza de precisin.
- Balones Kjeldahl de 800 ml.
- Erlenmeyer de 500 ml.
- Papel filtro Whatman N 42 o papel Glas
- Bureta de 50 ml de 0,1 ml
- Probeta de 25 ml.
- Pipeta volumtrica o fiola de 100 ml.
- Vaso de 600 ml.
Reactivos:
Digestin: ( Estos pueden ser de las marcas Riedel de Haen,
Mallinckrodt o J.T. Baker)
- Sulfato de Potasio anhidro (K2SO4)
- Sulfato de Cobre pentahidratado (CuSO 4. 5 H2O)
- Acido Sulfrico concentrado p.a (H2SO4)
Destilacin :
- Solucin de Hidrxido de Sodio al 50%
- Receptor : Solucin H2SO4 0,1 N (valorado)
- Indicador : rojo de metilo 0,1%
- Titulante : Solucin de Hidrxido de sodio 0,1 N (valorado)

.A

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Procedimiento:
Digestin:
- Pesar 1,0 g. de muestra pulverizada en papel de filtro y colocar en el
baln Kjeldhal .
- Adicionar 15,0 g. de sulfato de potasio, 1,0 g. de sulfato de cobre y
25 ml. de cido sulfrico concentrado.
- Colocar los balones y encender las hornillas del equipo Kjeldhal
(reguladas a 3,5 amperios), proceder a digestar. Cuando el contenido
del baln haya tomado color verde esmeralda, dejar 45 minutos
adicionales.
- Dejar enfriar a temperatura ambiente y luego retirar los balones.
Destilacin
- Aadir con cuidado por las paredes del baln 400 ml. de agua
destilada, agitando hasta la total disolucin de las sales.
- Sumergir el extremo del tubo refrigerante en 100 ml de solucin
receptora H2SO4 0,1 N, de modo que quede completamente cubierto y
evitar prdidas de valores.
- En seguida, agregar con cuidado por las paredes del baln 70 ml de
Hidrxido de sodio al 50%, homogenizar el contenido con cuidado y
conectar el baln a la unidad de destilacin.
- Proceder a destilar hasta un volumen total de 300 ml.
- Apagar la hornilla, retirar el refrigerante y con ayuda de una pizeta
enjuagar y recoger la solucin restante del refrigerante en el mismo
erlenmeyer receptor.
- A continuacin, proceder a titular la solucin recepcionada con NaOH
0,1 N, usando como indicador 4 - 5 gotas de rojo de metilo. El viraje es
de rojo grosella a amarillo meln.
- Correr en paralelo una prueba en blanco, en las mismas condiciones
anteriormente descrita.

Clculo
%P = (Vb - Vg) x 0,014 x N x F x fs

x 100

Wm
Donde :
Vb
Vg
0,014
N
fs
F
Wm

= Gasto de NaOH 0,1 N de la prueba en blanco

= Gasto de NaOH 0,1 N de la muestra.
= Miliequivalente de nitrgeno.
= 0,1 N (Normalidad de la sol. NaOH)
= Factor de la solucin NaOH
= Factor de conversin de nitrgeno a protena
(6,25).
= Peso de muestra.

Resumido:
%P = (Vb - Vg) x 0,875 x fs
Wm

.A

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Cuando las soluciones tienen factor, la frmula es :

%P = ( V x f ) - (V x f ) x 0,875
Wm
Donde:
V x f
= Volumen y Factor del Acido Sulfrico 0,1 N
V x f = Volumen y Factor del Hidrxido de sodio 0,1N
Wm = Peso de la muestra

Referencia
AOAC , 7.037, 14 th Edition, USA, 1984

Observaciones
Tener cuidado con el extremo del tubo refrigerante al momento de
sumergirlo en la solucin receptora, su posicin debe ser de tal modo
que permita la evacuacin libre de los vapores condensados, porque
puede crear efecto de contrapresin y echar a perder el anlisis.
Comprobar peridicamente el factor de las soluciones.

.A

c.

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DETERMINACION DE PROTEINAS SOLUBLES

Fundamento

La solubilidad de la protena total es de suma importancia ya que indica

una mayor absorcin de la fraccin proteica de la harina y por lo tanto su
aprovechamiento aumenta considerablemente. El contenido de protenas
solubles en la harina es consecuencia directa de la proporcin de
concentrado adicionado a la mezcla de tortas. De esa forma se
comprueba que la harina es integral y que adems el contenido de
protenas y de aminocidos solubles le otorgarn una digestibilidad mayor.
Mtodo
Se basa en la disolucin en agua de la fraccin soluble de la harina y
posterior determinacin al filtrado del contenido de protenas por Kjeldhal
Equipos y Materiales
- Equipo Kjeldhal
- Balanza Analtica 0,1 mg de precisin.
- Balanza de precisin.
- Balones Kjeldhal de 800 ml
- Erlenmeyer de 500 ml
- Papel filtro lento N 92
- Bureta de 50 ml de 0,1
- Embudo de vidrio
- Fiola de 250 ml
- Calentador
- Termmetro de vidrio
- Pipeta volumtrica de 25 ml
- Bao Mara
Reactivos
Digestin :
- Sulfato de Potasio p.a: 15 g.
- Sulfato de Cobre pentahidratado p.a. : 1,0 g.
- Acido Sulfrico concentrado p.a. : 25 ml
Destilacin :
- Agua destilada : 400 ml
- Solucin de Hidrxido de Sodio 50%: 70 ml
- Receptor : 100 ml de H2SO4 0,1 N (valorada)
- Indicador : 4 gotas de rojo de metilo 0,1%
- Titulante : Solucin de Hidrxido de sodio 0,1 N (valorada)

.A

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Procedimiento
- Pesar 10,0 g. de muestra pulverizada en papel de filtro y colocarlo en
una fiola de 250 ml
- Agregar 150 ml de agua destilada y agitar por 5 minutos.
- Colocar en bao Mara a 90 - 95 C por 1 hora. Retirarlo y dejar enfriar
- Proceder a filtrar.
- Del filtrado previamente homogenizado, tomar 25 ml. de muestra y a
partir de all proceder a realizar el anlisis de la misma manera que
para la proteina total.
Clculo
% P Soluble = % P1 x 100
% PT
Donde: % P1 = ( Vb 1 - Vg1 ) x 0,875 / Fx = ( Vb1 - Vg1 ) x 0,525
Fx = 10 g de harina x 25 ml Muestra
150 ml de agua de dilucin
P1: Es la protena correspondiente al filtrado.
Fx: Es la cantidad de muestra disuelta proporcional en 25 ml.
Vb1: Gasto de la prueba en blanco.
Vg1: Gasto de la muestra (filtrado).
PT : Es la protena total de la muestra harina.

.A

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d. TBV-N (BASES VOLATILES TOTALES NITROGENADAS)

Objetivo
Determinar la calidad de la harina en funcin a las bases voltiles.
Principio
El MgO al reaccionar con la muestra a temperatura de ebullicin
acelera la liberacin de bases voltiles, las cuales son arrastradas por
una corriente de vapor de agua y recibidas en una solucin de cido
sulfrico y valoradas directamente con hidrxido de sodio 0,1N.
Mtodo
Kjeldhal
Equipos y Materiales
- Balanza Analtica 0,1 mg
- Balanza de Precisin
- Equipo Destilacin Kjeldhal.
- Erlenmeyers de 250 ml
- Papel libre de nitrgeno (filtro N 91 Glas)
- Bureta 10 ml de 0,05
- Pipeta volumtrica de 20 ml
- Balones Kjeldhal 800 ml
Reactivos
- Oxido de Magnesio
- Solucin receptora: 20 ml cido Sulfrico 0,1 N (valorada) y
completar a 50 ml con agua destilada.
- Solucin de hidrxido de sodio 0,1N(valorado).
- Indicador Rojo de Metilo 0,1%.
- Vaselina lquida
Procedimiento
- Pesar 10,0 g. de muestra pulverizada en papel Glas con una
precisin de 0,001g y transferir al baln Kjeldhal.
- Sumergir el extremo del tubo refrigerante en el erlenmeyer que
contiene la solucin receptora.
- Adicionar 2,0 g. de oxido de magnesio y 2 ml de vaselina lquida.
- Enseguida, agregar 150 ml de agua destilada , mezclar el
contenido y proceder a destilar por 10 min, contndose el tiempo a
partir del inicio de la ebullicin.
- Apagar la hornilla, desconectar el refrigerante y con ayuda de una
pizeta enjuagar y recoger la solucin restante de la alargadera en
el mismo erlenmeyer receptor.
- Agregar 3 gotas de indicador rojo de metilo al destilado.
- Titular con Hidrxido de Sodio 0,1 N, hasta un viraje de color
rosado a meln claro.

.A

10

- 10 -

Realizar un ensayo en blanco paralelamente con el anlisis

empleando el mismo procedimiento y las mismas cantidades de
reactivos, sin la muestra.

Clculo
Mg N2/100 g. de muestra = (Vb Vg) x Fc x 140
Wm
Donde
Vb =
Vg =
Fc =
Wm =

Volumen de gasto del blanco

Volumen de gasto de la muestra
Factor de correccin de NaOH 0,1 N
Peso de muestra

Observacin:
- Expresar el resultado con una precisin de 0,1 mg.
- Comprobar peridicamente el factor de la solucin titulante a fin de
considerar en el clculo.
- Las cocinillas del destilador debern ser revisadas peridicamente
a fin de obtener un rendimiento de volumen necesario,
aproximadamente 125 ml de volumen total.
- El agua destilada a usar debe ser recientemente obtenida y
enfriada.
Referencia
NTP 201.032- 1982

.A

11

- 11 -

e. GRASA
Fundamento
El contenido total de grasa es extrado de la muestra, usando como
solvente hexano y el extracto obtenido se pesa despus de haberse
evaporado el solvente.

Equipos y Materiales
- Balanza analtica con 0,1 mg de precisin
- Equipo extractor soxhlet
- Baln Soxhlet 250 ml
- Campana extractora de gases.
- Estufa con termoregulador
- Desecador con slica gel
- Papel filtro Whatman N 42 o Albet N 150.
Reactivos
- Hexano p.a.

Procedimiento
Pesar 2,0 g de muestra y elaborar un cartucho de papel filtro de tal
modo que la muestra se encierre hermticamente.
Retirar el baln soxhlet del desecador y pesar.
En la campana extractora de gases prendida, tomar aproximadamente
150 ml de hexano, agregar una parte del solvente al baln, colocar el
cartucho en la cmara de extraccin y aadir el solvente restante a la
cmara. Conectar la cmara con el baln y el tubo refrigerante.
Abrir la llave de ingreso de agua, encender la hornilla y regular a la
temperatura que permita de 10 12 sifoneos por hora.
Mantener estas condiciones durante 4 horas.
Finalizado la prueba se procede a recuperar el solvente, disminuyendo
la temperatura de la cocinilla y con el extractor de gases encendido.
Es necesario tener mucho cuidado en esta etapa.
Llevar el baln a la estufa de 30 40 min. a 105C para terminar la
evaporacin del solvente.
Enfriar en el desecador y proceder a pesar el baln.

Clculo
% Grasa = W 2 - W 1

x 100

Wm
Donde:
W1
W2
Wm

= Peso del baln vaco (g)

= Peso del baln + extracto (g)
= Peso de muestra (g)

Referencia
NTN 204.033 1985
A.O.A.C 7.062 , 14 th Edition , 1984
Observacin
Destilar el Hexano cuando se contamine.

.A

12

- 12 -

f. ACIDOS GRASOS LIBRES (Acidez - FFA)

Objetivo
Determinar Acidos Grasos Libres en Harina de pescado

Fundamento
Esta determinacin mide el grado de descomposicin lipoltica (hidrlisis),
esto es la formacin de cidos de peso molecular ms bajo, la acidez libre
se puede expresar como grados o ndice de acidez.
Se basa en la neutralizacin de los Acidos Grasos Libres con una solucin
alcalina.

Mtodo
Se basa en la titulacin del extracto graso de harina con solucin de
Hidrxido de sodio (grado de acidez) o con hidrxido de potasio (ndice de
acidez).

Equipos y Materiales
Probeta 50 ml
Micro bureta automtica 5 ml, 0,01
Plancha calentadora
Pipeta volumtrica, 2 ml

Reactivos
Alcohol etlico rectificado al 95% (neutralizado con soda 0,1 N)
Indicador Fenolftalena al 1%
Hidrxido de sodio 0,1 N estandarizada.

Procedimiento
- A partir del extracto obtenido en la determinacin de grasa, adicionar
50 ml de alcohol neutralizado.
- Proceder a calentar suavemente la solucin sin llegar al punto de
ebullicin.
- Dejar enfriar y agregar 2 ml de fenolftalena al 1%.
- Titular con hidrxido de sodio 0,1 N, agitando vigorosamente hasta la
aparicin del primer color rosado que permanezca por lo menos 30
segundos de intensidad similar al obtenido en la neutralizacin del
alcohol.
Calculo
% FFA = Vg x fc x 2,82
Wm
Donde :
FFA
Fc
Wm

= Porcentaje de acidez libre (expresado como cido oleico)

= Factor de correccin de NaOH 0,1N
= Peso del extracto (grasa)

Referencia
AOAC Ca 5 - 40, Volumen B (1993)

.A

13

- 13 -

g. CENIZAS TOTALES

Fundamento
El mtodo se basa en la descomposicin de la materia orgnica por
calcinacin entre 550 600C

Equipos y Materiales
- Balanza analtica de 0,1 mg de precisin.
- Horno Mufla elctrica
- Cocinilla elctrica
- Campana extractora de gases.
- Crisol de porcelana (26 mm.)
- Desecador con slica gel.
- Pinza 40 cm.

Procedimiento
Calentar los crisoles durante 30 min. a 500C en la mufla, luego retirar
y dejar enfriar en el desecador.
Pesar en el crisol 1,0 g. de muestra. Proceder a quemar en la cocinilla
bajo la campana extractora hasta la total carbonizacin de la muestra.
Encender la mufla elctrica.
Calcinar la muestra en la mufla a 550C por 4 horas hasta la
formacin de cenizas blancas o blanco grisceo. Al finalizar la prueba,
apagar el equipo y dejar el crisol unos 10 minutos
Retirar los crisoles y colocarlo en el desecador, dejar enfriar a
temperatura ambiente y pesar el residuo. Se debe tener cuidado al
momento de poner los crisoles calientes dentro del desecador, para
esto es preferible abrir la llave de la tapa y esperar unos segundos y
despus se vuelve a cerrar la llave.
Clculo
% Cenizas = W 2 - W 1 x 100
Wm

Donde :
W 1 = Peso del crisol vaco (g)
W 2 = Peso del crisol + residuo (g)
Wm = Peso de muestra (g)

Referencias
A.O.A.C. 7.009,14 th Edition (1984)
N.T.N. 204.022

.A

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- 14 -

h. ARENAS

Definicin
Arena : Es la ceniza insoluble en cido clorhdrico.

Principio del Mtodo

Se basa en el tratamiento dado a las cenizas obtenidas con cido
clorhdrico, seguido de : filtracin, secado, incineracin y pesada del
residuo (slice).

Equipos y Materiales
Balanza analtica, 0,1 mg
Crisoles de porcelana Gooch
Vasos de 250 ml
Mufla elctrica
Plancha de calentamiento
Estufa
Desecador
Papel filtro N42
Campana extractora de gases

Reactivos
Acido Clorhdrico 3 N

Procedimiento
- Se pesa aproximadamente 5 g. de muestra
y se hace la
determinacin de cenizas.
- Se transfiere la ceniza obtenida a un vaso agregando 75 ml de HCl
3N.
- Se hace hervir por 15 min. a temperatura moderada, luego filtrar la
solucin tibia empleando dos hojas de papel filtro. Lavar el residuo
con agua destilada
caliente hasta dejarlo libre de cido.
- Tomar un crisol y tararlo. Acomodar el papel filtro dentro del crisol y
llevar a estufa a 103C por 1 hora. Luego incinerar en la mufla a
550C por 30 min.
- Retirar el crisol y dejar enfriar en el desecador, luego proceder a pesar.

Clculo
% Arena = (M2 - M1)

x 100

Wm
Donde :
M1
M2
Wm

= Peso del crisol vaco (g)

= Peso de crisol + residuo(arena) (g)
= Peso de muestra

Referencia
N.T.N. 204.024 1982

.A

15

i.

- 15 -

CLORUROS

Principio
Esta basado en la insolubilidad del Tiocianato de plata y la reaccin de
un ligero exceso con el indicador frrico.

Mtodo
Vollhard

Equipos y Materiales
Balanza analtica 0,1 mg
Campana extractora de gases.
Erlenmeyer de 250 ml
Bureta de 25 ml, 0,1 ml
Plancha u hornilla elctrica
Pipetas de 10 y 5 ml

Reactivos
Acido Nitrico concentrado al 70% p.a.
Nitrato de Plata 0,1N. normalizado
Tiocianato de Amonio 0,1 N. normalizado
Indicador : Solucin saturada de Sulfato Frrico de Amonio al 40%.

Procedimiento
Pesar 1,0 g. de muestra y transferir a un erlenmeyer de 250 ml
Dentro de la campana y con el extractor encendido, adicionar 10 ml de
solucin nitrato de plata y 4,0 ml de cido ntrico por las paredes del
erlenmeyer.
Poner a calentar (suavemente) el contenido en la plancha elctrica,
hasta que todos los slidos a excepcin del cloruro de plata, se hayan
disuelto.
Retirar y dejar enfriar a temperatura ambiente.
A
continuacin adicionar 50 ml de agua
destilada y 3,0 ml de solucin indicadora.
Proceder a titular con la solucin de tiocianato de amonio hasta que
una coloracin rojo ladrillo persista por 1 minuto.
Realizar un ensayo en blanco, usando los mismos reactivos y
procedimiento pero omitiendo la muestra.
Clculo
%Cl = (Vb - Vg) x 5,845 x 0,1

Wm
Donde
Cl = % Cloruro de sodio
Wm = Peso de la muestra
Vg = Volumen de gasto de Tiocianato de amonio 0,1 N
(muestra)
Vb = Volumen de gasto de Tiocianato de amonio 0,1 N (blanco)

Referencia
NTP 204 031 1985

.A

16

- 16 -

j. HISTAMINAS
Objetivo
Determinacin de histamina presente en la harina de pescado.
Principio
La histamina se extrae de la muestra con cido tricloroactico, se aisla
del extracto por cromatografa de intercambio catinico luego se deriva
con OPA (o-ftalaldehido) a fluophoro, el cual es determinado por anlisis
fluoromtrico.
Mtodo
Fluoromtrico.
Equipos y Materiales
- Fluormetro : Longitud de onda EX = 360 nm y EM = 450 nm.
- Balanza analtica y de precisin.
- Agitador magntico
- peachmetro.
- Cronmetro con alarma.
- Micropipeta
: 1 a 40 ul y 40 a 200 ul.
- Erlenmeyer
: 250 ml.
- Fiola
: 10, 25, 50, 100, 1 000 y 2 000 ml.
- Vasos
: 50, 100, 250 y 1 000 ml.
- Pipeta volumtrica
: 1 y 2 ml.
- Pipeta graduada
: 10 y 25 ml.
- Probeta
: 10 y 25 ml.
- Columna cromatogrfica con llave de tefln
- Embudo.
- Bagetas de vidrio
- Papel de filtro .
- Lana de vidrio
Reactivos
- Acetato de sodio (p.a.)
- Resina de intercambio catinico - Amberlite CG-50.
- Acido actico glacial p.a..
- Metanol.
- Hidrxido de sodio (p.a.)
- Acido tricloroactico.
- Acido clorhdrico.
- Histamina dihidrocloruro (p.a.)
- OPA (o-ftalaldehido) 97 % (p.a.)
Procedimiento
Preparacin de muestra:
1. Pesar 5 g. de muestra, aadir 90 ml. de cido tricloroactico al 5%.
Agitar por 5 min, dejar sedimentar y luego filtrar en papel whatman N
42.
2. Pipetear 0,2 ml. (200 ul. con micropipeta) del extracto (filtrado) a una
fiola de 25 ml enrasar con buffer de acetato de sodio 0,2 N y
homogenizar.

.A

17

- 17 -

Preparacin de columna
1. Pesar 1,0 g. de resina amberlite y depositarlo en la columna donde
previamente se ha colocado lana de vidrio. Agregar 50 mal de buffer
de acetato 0,2N (pH = 4,62).
2. Drenar el buffer de la columna sin dejarla seca y transferir
cuantitativamente los 25 ml de sal muestra, enjuagando el contenido
de la fiola con tres porciones de 5 ml de agua destilada.
3. Lavar la columna con 130 ml de buffer y descartar los lavados.
Elucin
Desorber (Eluir) la histamina retenida en la resina con 18 ml de HCl 0,2N
(en 3 porciones de 6 ml) y al final 2 ml de agua destilada. El drenaje debe
ser gota a gota y se recibe en una fiola de 25 ml
Regeneracin de resina
Lavar la columna con 25 ml de buffer. Agregar 50 ml de HCl 0,2N y hacer
drenar lentamente y descartar. Luego seguir agregando buffer hasta que
el lquido de descarte tenga un pH de 4,62 ( 150 ml aproximadamente).
Preparacin para la lectura
De la solucin eluida, tomar 2 ml de muestra previamente homogenizada,
agregar 1ml. de NaOH 1N. y 0,1 ml (100ul) de OPA al 1% en metanol;
mezclar y dejar en reposo por 3,5 min, evitando la luz directa. Luego
agregar 2 ml de HCl 0,7N agitar y leer en el equipo inmediatamente.
Preparacin de Curva Standard
1. Pipetear 200 ul (0,2 ml) de los estndares de Histamina p.a. ya
preparados ( 0,0 - 2,5 - 5,0 - 7,5 - 10,0 - 15,0 y 20,0 ppm) en fiolas de
25 ml y enrasar con solucin buffer 0,2 N, y mezclar.
2. Transferir cuantitativamente la sal muestra a la columna que ya esta
lista para usar, luego enjuagar con 3 porciones de 5 ml de agua
destilada.
3. Lavar la columna con 130 ml de buffer y descartar los lavados.
4. Eluir la histamina retenida en la columna con 18 ml de HCl 0,2 N y 2
ml de agua destilada.
5. Tomar 2 ml de muestra eluida + 1 ml de NaOH 1 N. y 0,1 ml de OPA
1%. Mezclar y dejar reposar por 3,5 min.
6. Adicionar 2 ml de HCl 0,7 N. y leer en el fluormetro.
Todo este procedimiento es idntico al realizado con la muestra de
harina.
Clculo
1. Elaborar la curva Standard vs. concentracin de histamina (ppm) con
los estndares. Esto se hace en el equipo.
2. Comparar la fluorescencia de la muestra con la curva Standard y
determinar la concentracin de histamina de la muestra.
Hm = [ ] x f d.
Donde : Hm = Concentracin de Histamina en ppm
[ ] = concentracin
fd = factor de dilucin.
Referencia
METODO SHIMADZU - CIA LABORATORIO JAPON 1994

.A

18

Concentracin

FI

0,000

2,217

2,500

24,705

5,000

45,362

7,500

74,143

10,000

98,026

15,000

135,070

20,000

186,820

25,000

225,850

- 18 -

CURVA STANDAR
FI

250,000
200,000
150,000

100,000
50,000
0,000
0,000

5,000

10,000

20,000

CONCENTRACIN

Estndares de Histaminas
TCA 5%
Concen
tracin
ppm

50 ml

100 ml

Hm p.a.
mg

Hm p.a.
mg

0,0

0,000

0,000

2,5

0,125

0,250

5,0

0,250

0,500

7,5

0,375

0,750

10,0

0,500

1,000

15,0

0,750

1,500

20,0

1,000

2,000

25,0

1,250

2,500

.A

19

- 19 -

k. REMANENTE DE ANTIOXIDANTE
Fundamento
Determinar el contenido de remanente de antioxidante presente en la
harina de pescado
Principio
La determinacin es por fluorescencia,
interferencias naturales por extraccin.

luego

de

remover

las

Equipos y Materiales
-

Fluormetro: Longitud de onda EX = 360 nm y EM = 450 nm

Balanza analtica y de precisin

Pera de decantacin de 250 ml

Fiola 50 , 100 ml

Vasos 250 ml

Embudo

Pipeta volumtrica 25 ml

Probeta 100 ml

Papel de filtro N 91

Reactivos
-

Etoxiquina

Metanol

Eter de Petrleo

Cloruro de sodio
Sulfato de sodio anhidro

Preparacin de Curva de Calibracin:

Solucin Standard de Etoxiquina
Pesar 100 mg de etoxiquina pura y enrasar a 100 ml con ter de
petrleo, disolver hasta completa disolucin ( esta es la solucin A; 1
mg/ml )
-

Solucin A = 1000 ug/ml ( 1 000 ppm )

Diluir 5 ml de la solucin A en 100 ml de ter de petrleo

-

Solucin B = 50 ug/ml ( 50 ppm )

Diluir 1 ml de la solucin B en 50 ml de ter de petrleo

-

Solucin C = 1 ug/ml ( 1 ppm )

Diluir 2 ml de la solucin B en 50 ml de ter de petrleo

-

Solucin D = 2 ug/ml ( 2 ppm )

Diluir 3 ml de la solucin B en 50 ml de ter de petrleo

-

Solucin E = 3 ug/ml ( 3 ppm )

.A

20

- 20 -

Diluir 4 ml de la solucin B en 50 ml de ter de petrleo

-

Solucin F = 4 ug/ml ( 4 ppm )

Diluir 5 ml de la solucin B en 50 ml de ter de petrleo

-

Solucin G = 5 ug/ml ( 5 ppm)

Agitar las muestras y leerlas directamente en el fluormetro. A partir

de estos valores elaborar en el equipo la curva standard
Procedimiento
-

Pesar 5g. de muestra en una fiola, agregar 20 ml de Metanol y agitar

por 10 min, luego enrasar con metanol a 50 ml y volver agitar por 10
min adicionales. Dejar decantar por 30 min.

Trasladar con sumo cuidado una alcuota de 10 ml de muestra

solucin a una pera de decantacin de 250 ml Adicionar
aproximadamente 100 ml de agua destilada, 50 ml de ter de petrleo,
luego agitar vigorosamente por 5 min.

Dejar reposar unos minutos y agregar 10 ml de solucin salina

saturada y agitar. Una vez que la emulsin se rompa (formacin de
fases), recibir la parte acuosa en un vaso de 250 ml.

La fase etrea se recibe en una fiola de 100 ml, en la que previamente

se ha colocado un embudo con papel de filtro y 1 g. de sulfato de
sodio anhidro.

Lo recibido en el vaso se vierte nuevamente a la pera, se enjuaga con

25 ml de ter de petrleo se agita por 3 min y se deja decantar.

La fase acuosa se recupera nuevamente en el vaso y la parte etrea

se sigue recibiendo en la fiola de 100 ml

La fase acuosa se agrega nuevamente a la pera con 25 ml de ter de

petrleo, se agita por 1 min, se deja decantar.

Finalmente la fase acuosa se descarta y la etrea se recibe en la fiola,

se enjuaga la pera el vaso y se enrasa la fiola a 100 ml

Se agita bien y se procede a realizar la lectura en el fluormetro .

Emisin = 450

Excitacin = 360

Clculo
1. Elaborar la curva standard vs. Concentracin de etoxiquina (ppm).
2. Comparar la fluorescencia de la muestra con la curva Standard y
determinar la concentracin de etoxiquina de la muestra.
A/O =

[ ] x fd
Wm

Donde:
A/O = Concentracin de A/O en ppm en la muestra (harina)
[ ] = concentracin en ppm
fd = factor de dilucin

.A

21

- 21 -

CONCENTRACION

FI

0,227

0,1

10,448

40

0,2

15,444

35

0,3

23,393

30

0,4

30,431

25

0,5

35,853

FI

CURVA STANDAR

20
15
10
5
0
0

0,1

0,2

0,3

CONCENTRACION

0,4

0,5

.A

22

- 22 -

i. DIGESTIBILIDAD (TORRY MODIFICADO)

Objetivo
Determinar la cantidad de protena total que puede solubilizarse en
presencia de una solucin acidificada de pepsina.
Principio
Se coloca la muestra con una solucin acidificada de pepsina en un
digestor por 16 Horas, manteniendo una temperatura de 45 C, luego se
retira y filtra.
Se determina protena por el mtodo Kjeldhal.
Equipos y Materiales:
- Balanza analtica de 0,1 mg y de precisin
- Estufa con agitador incorporado
- Equipo de filtracin: Kitasato 500 ml, Buchner , papel de filtro # 541 y
Bomba de vaco
- Frascos 250 ml con tapa rosca
- Fiola 100 y 1 000 ml
- Vasos 250 ml
- Pipeta volumtrica 2 ml
- Probeta 100 ml
- Todo lo necesario para determinar protena total
Reactivos:
- HCl 0,075 N
- Pepsina en solucin Acida 0,0002 % (Actividad 1:10 000)
(0,1 g. en 100 ml de HCl 0,075 N Solucin A ==> 2 ml Sol A en 1000 de
HCl 0,075 N)
Procedimiento:
- Pesar 1,0g. de muestra, pulverizar ( pasar por malla N 18 ) y colocarla
en un frasco de 50 ml
- Aadir 150 ml de solucin de pepsina/HCl 0,0002%
mezclar para homogenizar

(42 a 45 C),

- Incubar a 45 C por 16 hr, con agitacin constante (20 rpm

aproximadamente).

.A

23

- 23 -

- Enfriar y filtrar a travs del embudo buchner con papel de filtro , usar la
bomba de vaco a presin reducida durante el proceso de filtrado,
luego

lavar con agua tibia ( 40 oC) el residuo por lo menos tres veces
incluyendo los bordes.
- Secar el papel de filtro y su contenido en la estufa.
- Determinar Nitrgeno por el mtodo Kjeldhal.
Clculo:
% d = PT - PI x 100
PT
Donde:
d = Digestibilidad a la pepsina
PT = Protena total
PI = Protena Insoluble

.A

24

- 24 -

m. GRANULOMETRIA
Fundamento
La granulometra es el ndice del tamao de las partculas que componen
la harina, esto es especialmente importante para los fabricantes de pellets
que requieren tamaos con altos porcentajes de finos.
La granulometra permite controlar la operacin de los equipos de
molienda.
Mtodo
Tamizado mecnico en mallas de diferentes dimetros de aberturas, para
cuantificar las retenciones en cada una de ellas.
Aparatos y materiales
- Vibrador de tamices
- Balanza de precisin
- Juego de tamices N12 y 18
- Vaso de plstico de 250 ml

Procedimiento
Pesar 100 g. de harina previamente homogenizada.
Armar el juego de mallas N 12 y 18 U.S. Standard, agregar la
muestra.
Poner el juego de mallas en el Vibrador por cinco minutos o agitar
enrgicamente a mano.
Retirar las mallas y proceder a pesar la fraccin retenida de cada una
de ellas. Por diferencia determinar el porcentaje de finos que pasa la
malla N18.

Referencia
MANUAL DE CERPER . 1990.

.A

25

- 25 -

1.2 FASE LIQUIDA

a. MEDICION DE GRASA EN LICORES
Fundamento
Se basa en la accin del cido sulfrico al carbonizar la materia orgnica
y la separacin del contenido graso por la accin del alcohol amlico
ayudado por la fuerza centrfuga ( mtodo Gerber).
Se aplica al agua de cola, concentrado y licor de separadora.
Equipos y Materiales
-

Equipo de Centrifugacin 1420 r.p.m., 65C

Butirmetros 0 8%
Gradilla para butirmetros
Pipetas graduadas de 1, 10 y 20 ml

Reactivos
-

Acido sulfrico industrial 85%

Alcohol amlico

Procedimiento
-

Con una pipeta tomar 11 ml de muestra y verterlo en el butirmetro.

Agregar con cuidado por la pared del butirmetro 10 ml de cido
sulfrico y enseguida 1 ml de alcohol amlico y taparlos.
Mezclar el contenido invirtiendo el butirmetro (suavemente).
Colocar en los tubos de la centrfuga de tal modo que los butirmetros
estn balanceados
Centrifugar por cinco minutos.
Invertir la posicin del butirmetro y proceder a leer el contenido de
grasa en la escala.

Nota
La muestra de concentrado es recomendable diluirlo a la mitad con la
finalidad de que el cido sulfrico no carbonice demasiado los slidos y
provoque el espumeo y derrame de muestra.
Al momento de hacer la lectura duplicar el valor ledo.

.A

26

- 26 -

b. MEDICION DE SOLIDOS EN LICORES

Fundamento
Se basa en la refraccin de la luz que incide sobre el prisma que es
proporcional a la concentracin de slidos en la muestra.
Es aplicable al agua de cola, licor de separadora, licor de prensa y
concentrado.

Instrumentos y Materiales
- Refractmetros de mano, escala: Brix (0-32%), (28-62%)
- Baguetas

Procedimiento
-

Homogenizar una cantidad representativa de muestra y con la

ayuda de una bagueta poner de una a dos gotas en el prisma y cerrar
suavemente la tapa, la muestra debe ser totalmente esparcido sobre
la superficie del prisma.
Observar por la mirilla y leer la escala donde la lnea intercepta el
lmite.
Limpiar el prisma con un algodn hmedo.

Observacin
Calibrar peridicamente los refractmetros como est establecido en el
Manual de Instrumentos.

.A

27

- 27 -

c. DETERMINACION ACIDEZ EN ACEITE CRUDO

Fundamento
Se basa en la neutralizacin de los cidos grasos libres presentes en el
aceite con una solucin valorada de Hidrxido de sodio.
La acidez refleja el grado de aejamiento de la materia prima.

Aparatos y Materiales
- Balanza analtica 0,1 mg
- Plancha de calentamiento
- Erlemneyer de 250 ml
- Probeta de 50 ml
- Bureta de 10 ml de 0,05ml.

Reactivos
Hidrxido de sodio 0,1 N
Alcohol neutralizado
Fenolftalena al 1%
Procedimiento
Pesar 10 g de muestra en un erlenmeyer.
Agregar 50 ml de alcohol neutralizado.
Calentar el contenido sin llegar a ebullicin, retirar y dejar enfriar a
temperatura ambiente.
Agregar 6 7 gotas de fenolftalena.
Proceder a titular con hidrxido de sodio 0,1 N., el viraje es hasta un
rojo grosella similar al del alcohol neutralizado, que debe persistir por
lo menos un minuto.
Clculo
%FFA = Vg x 2,82 x fc
Wm
Donde:
Vg

= Volumen de gasto de hidrxido de sodio 0,1N

2,82 = Factor de conversin expresado en acidez olica
fc
= Factor del hidrxido de sodio
Wm = Peso de muestra

d. IMPUREZAS Y SOLIDOS EN ACEITE

.A

28

- 28 -

Fundamento
Se basa en la separacin mecnica ejercido por la fuerza centrfuga
generada por la alta velocidad rotacional de la centrifugadora.
Equipo y Materiales
- Centrfuga 1420 r.p.m.
- Tubos graduados 15 ml
- Gradilla para tubos
Procedimiento
- Tomar una muestra representativa y homogenizada y verterlos en los
tubos hasta la marca de 10
- Colocar los tubos en la centrfuga de tal manera que los tubos se
encuentren en posiciones balanceadas
- Poner a centrifugar por 5 minutos.
- Retirar los tubos y proceder a leer multiplicando el valor por 10.
Observacin
En este procedimiento se separa tambin el contenido de agua y se
puede leer de una forma aproximada.

e. HUMEDAD EN ACEITE
Fundamento

.A

29

- 29 -

Se basa en la evaporacin de partculas de agua presentes en el aceite

en forma de burbujas.

Aparatos y Materiales
-

Balanza analtica, 0,1 mg

Estufa
Vasos de 50 ml
Desecador con slica gel

Procedimiento

Pesar 5 g. de muestra en un vaso.

Llevar a estufa a 105C hasta que desaparezcan las burbujas, tener
cuidado de no sobrepasar la evaporacin.
Retirar y colocar en el
desecador y dejar enfriar.
Volver a pesar el vaso.
Clculo
% Humedad =

W1 - W2

x 100

Wm
Donde:
W 1 = Peso de vaso + muestra hmeda (g)
W 2 = Peso de vaso + muestra seca (g)
Wm = Peso de muestra (g)

Observacin
Se puede emplear placas Petri en lugar de vasos.

f. INDICE DE PEROXIDOS EN ACEITE

Fundamento:
Los perxidos se determinan cuantitativamente por su capacidad para
liberar Iodo al reaccionar con KI en presencia de cido actico Glacial.

.A

30

- 30 -

El ndice de perxidos de una grasa es una medida de su contenido en

O2 por K de grasa.

Materiales y Equipos:
Balanza de precisin
Frascos Erlenmeyer con tapa de vidrio esmerilada (250ml.)
Pipetas
Probeta
Bureta de 25 ml de 0,1 ml divisin

Reactivos:
- Mezcla de Acido Actico y Cloroformo (60ml. cido actico y 40ml.
cloroformo)
- Solucin de Ioduro de Potasio(5g en 2ml de agua destilada. Usar
frasco mbar)
- Solucin Tiosulfato de Sodio 0.01N(se toma 100ml. de tiosulfato 0.1N.
para un litro)
- Solucin indicadora de almidn.
Procedimiento:
- Se pesa 5 g. de muestra (balanza de precisin) en un frasco
Erlenmeyer de 250ml.
- Adicionar 30ml. mezcla de cido actico y cloroformo (probeta) se tapa
y homogeniza.
- Luego agregar 0.5ml. de KI saturado (pipeta graduada), agitar por 10
minutos y dejar reposar por un minuto.
- Despus agregar 30ml. de agua destilada mas 10 gotas de almidn.
- Titular con Tiosulfato de sodio, gota a gota hasta que el color rojo
desaparezca.
Calculo:
% perxidos = Vg x N x 1000
Wm
Donde :
Vg
= volumen gasto (solucin Tiosulfato de sodio usado en la
titulacin)
N
= normalidad de la solucin Tiosulfato de sodio.
1000 = miliequivalente de perxido por 100g. de muestra.
Wm = Peso de muestra

g. DETERMINACION DE INDICE DE YODO: METODO DE WIJS

Fundamento:
El ndice de iodo es una medida de la no saturacin de los aceites y
grasas y se expresan en trminos del nmero de centigramo de iodo
absorbido por g. de muestra (% de iodo absorbido).

.A

31

- 31 -

Materiales y Equipos:
- Balanza analtica
- Vaso 50 ml
- Erlenmeyer con tapa de vidrio esmerilada (500ml)
- Pipeta volumtrica 20ml y 25ml
- Bureta 50ml
Reactivos:
- Tetracloruro de Carbono (CCL4)
- Solucin wijs
- Solucin Ioduro de Potasio.
- Solucin de Tiosulfato de sodio al 0,1N(estandarizado)
- Solucin indicadora de almidn.
Procedimiento:
-

Verter en un vaso 20ml. de muestra homogeneizada y llevar a la

estufa por 30 minutos.
Despus de evaporar la humedad sacar la muestra a enfriar y pesar
de 0,15 a 0,17g. en un frasco erlenmeyer de 500ml.
Luego, agregar 20 ml. de CCL4 mas 25ml. de solucin wijs
Guardar por media hora en lugar oscuro.
Agregar 20 ml de KI(15%) ms 100ml. de agua destilada, agitar
vigorosamente.
Titular con Tiosulfato de sodio 0,1N. gota a gota hasta un color
amarillo, agitando vigorosamente.
Luego agregar 5gotas de indicador almidn al 1%, seguir titulando
hasta que desaparezca la coloracin azul.
Correr un blanco, al empezar una nueva solucin wijs Tiosulfato de
sodio 0,1N.

Clculo:
% Indice Iodo = (Vb - Vg) x N x 12,69
Wm.
Donde:
Vb = volumen de gasto (blanco)
Vg = volumen de gasto (muestra)
N = normalidad de tiosulfato de sodio.
Wm = Peso de muestra

.A

32

- 32 -

1.3 ANALISIS DE COMPOSITOS (Materia Prima, Licores, Tortas y harina)

Los licores que se analizan son: Agua de cola, licor de prensas, licor de
separadoras y concentrado.
Las tortas que se analizan son: Torta de prensa y de separadoras.

a. DETERMINACION DE HUMEDAD
Equipos y Materiales
-

Balanza Analtica con 0,1 mg de precisin

Estufa
Licuadora y procesador de alimentos.
Placas Petri de 100 x 15mm.
Placas Petri de 120 x 20 mm.
Vasos de plstico de 100ml.
Baguetas
Desecador 250 mm con slica gel.

Procedimiento
-

Homogenizar todas las muestras de compsito antes de realizar

cualquier anlisis.
Pesar 5 g. de muestra de cada compsito en placas Petri de 100 x 15
por duplicado, a excepcin de los licores de prensa y de separadoras
que debe hacerse en placas de 120 x 20 y de 25 g por duplicado, con
la finalidad de determinar su contenido de grasa en base seca.
Colocar las muestras en la estufa a 130 C por 3 horas con excepcin
de la harina que debe ser retirada a las 2,5 horas.
Retirar al desecador y dejar enfriar.
Pesar las placas.
Anotar todos los datos en el cuaderno de compsitos.

Clculo
Se procede de la forma conocida.
Observacin
-

La humedad se determina a todas las muestras de compsito sin

excepcin.
La materia prima deber ser triturada para el anlisis.

.A

33

- 33 -

b. DETERMINACION DE GRASA
Procedimiento
Se usa los mismos aparatos, materiales y reactivo que en el
anlisis de harina.
Para Materia Prima y Tortas :
- Pesar 2 g. de muestra y llevar a secar en la estufa de 30 a 40
min. a 105 C para evaporar parte de la humedad.
- Retirar y dejar enfriar.
- En adelante, proceder de la misma forma que para la
determinacin de grasa en la harina.
Para el compsito de licores, solamente se determina la grasa por
este mtodo al licor de prensa y de separadoras, a partir del
residuo que resulta de la determinacin de la humedad,
previamente pulverizadas en un mortero, y se procede de la forma
conocida.
Para el compsito de harina se procede de igual forma que la
indicada en el anlisis de harina.

c. DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES

Se hace la determinacin de protena total al compsito de materia
prima y harina. El procedimiento a aplicarse es igual que para el
anlisis de harina.

d. DETERMINACION DE CENIZAS TOTALES

Se hace la determinacin de cenizas totales al compsito de materia
prima y harina. El procedimiento a aplicarse es igual que para el
anlisis de harina.

e. DETERMINACION DE CLORUROS
Se hace la determinacin de cloruros al compsito de materia prima y
harina. El procedimiento a aplicarse es igual que para el anlisis de
harina.

f. DETERMINACION DE ACIDEZ EN ACEITE

Se procede de igual manera que en la determinacin que se realiza al
aceite crudo.

g. GRANULOMETRIA EN HARINA DE COMPOSITO

Se procede de igual manera que en la harina de rumas.

.A

34

- 34 -

1.4 TBV-N EN MATERIA PRIMA ( DESCARGA, PROCESO) Y

CONCENTRADO
Se aplica el mismo principio, mtodo, procedimiento, los mismos equipos,
materiales y reactivos que en el anlisis de harina.
La diferencia esta en las cantidades de solucin receptora;
Para materia prima: 10 ml de cido sulfrico 0,1 N
Para concentrado: 20 ml de cido sulfrico 0,1 N ; ambos se completan
hasta un volumen de 50 ml con agua destilada.
Ambas muestras se deben pesar en vaso de vidrio
A la materia prima se aade 1 ml de vaselina y al concentrado 2 ml
El volumen total recibido es aproximadamente 125 ml.
El clculo es igual que en la harina.
Los valores determinados se anotan en el formato correspondiente y
peridicamente se comprueba el factor de las soluciones.

1.5

ANALISIS DE AGUA DE CALDEROS, AGUA DE ALIMENTACION,

AGUA BLANDA, CONDENSADO Y AGUA DURA

.A

35

- 35 -

a. DETERMINACION DE SOLIDOS TOTALES DISUELTOS (STD)

Fundamento:
Los slidos disueltos corresponden a la materia soluble en el agua.
La medida de la conductividad especfica de una muestra de agua de
caldera neutralizada, es una forma rpida y precisa para determinar la
concentracin de slidos disueltos.
Cuando el agua se evapora en el caldero, el vapor se forma de agua pura
y no arrastra slidos.
En consecuencia, los slidos se van concentrando en el agua de caldero.
Para controlar estos slidos hay que purgar los calderos y reponer el agua
descargada con agua de alimentacin que contiene menor cantidad de
slidos.
Mtodos de Determinacin:
1) Por evaporacin y
2) Por conductividad

1) POR EVAPORACION:
Materiales y Equipos
-

Estufa con termorregulador

Balanza Analtica 0,1 mg
Placas Petri de 100 x 15 mm
Pipeta Volumtrica de 5 ml

Procedimiento:
-

Tomar 5 ml de muestra homogenizada con una pipeta

volumtrica y verter en una placa previamente tarada.
Llevar a estufa a 105C hasta total evaporacin.
Retirar la placa y dejar enfriar en el desecador y proceder
pesar.

Clculo:
STD = (W 1 W o ) = g. 10 3 mg x 103 ml = ( ) 200 000 ppm
Vm
(5 ml) g L
Donde:
Wo
= Peso de placa
W1
= Peso de placa + residuo
Vm
= Volumen de muestra (5 ml).
1 ppm = 1 mg/ L

2) METODO DE CONDUCTIVIDAD
Materiales y Equipos

.A

36

- 36 -

- Conductmetro
- Vasos de vidrio de 100 ml
Reactivos
-

Solucin de cido sulfrico 0,1N

Fenolftalena al 1%

Procedimiento:
- Medir 100 ml de muestra sin filtrar.
- Agregar 2 3 gotas de indicador Fenolftalena,
- Neutralizar la muestra con cido sulfrico 0,1N hasta que la
muestra retome su color original, ya que OH presente o
alcalinidad libre altera los resultados.
- Sumergir la celda de medicin en una solucin 0,01 mol/l. KCl.
Realizar el ajuste de la constante de celda y la compensacin de
temperatura. La medicin se realiza directamente y se expresa
en mg/l.
- Para mayor informacin ver la traduccin del conductmetro
Schott Handylab LF1 con celda LF513 T
Comentario: Los slidos disueltos influyen en el arrastre por
formacin de espumas.
Control : Mximo 5 000 ppm ( para agua de calderos ).
Mximo 100 ppm ( para retorno de condensados ).
Mximo 650 ppm ( para agua de alimentacin ).

b. DETERMINACION DE CLORUROS
Fundamento:
El agua contiene impurezas en suspensin, gases y cidos en solucin,
lcalis libres y sales solubles, que tienen influencia en la generacin de
vapor.

.A

37

- 37 -

Los cloruros generalmente permanecen inalterables durante el proceso

de tratamiento de agua y en el agua interna de calderos, su determinacin
resulta un mtodo til para:
- Efectuar una relacin entre el total de slidos disueltos y los cloruros.
- Calcular el porcentaje de purgas en la caldera.
- Determinar la regeneracin y enjuague apropiados en los
ablandadores.
METODO VOLUMETRICO (MOHR)
Por el mtodo de mohr puede determinarse cloruros en solucin neutra,
utilizando K2CrO4 como indicador y titulando con solucin valorada de
Nitrato de plata.
El mtodo es aplicable slo para la titulacin en un medio neutro o
dbilmente alcalino (pH = 6,5 - 10) por cuanto el Ag 2CrO4 es soluble en
cidos y en su presencia no precipita.
Cl +

AgNO3

-------------

AgCl +

NO 3

Materiales
- Bureta de 25 ml 0,1
- Erlenmeyer de 100 ml
- Pipeta de 1 ml

Reactivos
Solucin de Nitrato de plata 0,1 N Estandarizado.
Solucin indicadora de Cromato de potasio al 10%

Procedimiento:
Medir 10 ml de muestra filtrada. Si el agua tiene acidez aadir
Na2CO3 y si es alcalina aadir H2SO4 hasta neutralizacin (opcional).
- Aadir 3 gotas de indicador Cromato de potasio al 10%.
- Titular con Nitrato de plata 0,1N lentamente, agitando constantemente
la muestra hasta un viraje a un color rojo ladrillo estable.
- Efectuar la misma prueba simultneamente con agua destilada que
sirve de comparacin (blanco).
-

Clculo:
%NaCl = (Vg - Vb) X 585
Donde:
Vg = Volumen gastado de Nitrato de plata 0,1 N
Vb = Volumen gastado de Nitrato de plata 0,1 N en el agua
destilada
585 = Equivalente-gramo de NaCl expresado en ppm.

c. DETERMINACION DE ALCALINIDAD
Fundamento:

.A

38

- 38 -

Corresponde principalmente a la presencia de carbonatos, bicarbonatos

y/o hidrxidos.
Mtodo:
Se determina por titulacin de la muestra con una solucin valorada de
cido sulfrico, estableciendo los puntos sucesivos en equivalencias de
bicarbonato y cido carbnico.
Existen tres tipos de alcalinidad:
Alcalinidad P (parcial) o F (Fenolftalena) pH = 8,3
Alcalinidad T (total) o M (anaranjado de metilo) pH = 4,3
Alcalinidad Hidrxida : OH
Materiales:
-

Bureta automtica de 10 ml; 0,05 ml divisin

Probeta de 100 ml de plstico
Erlenmeyer de 100 ml

Reactivos:
-

Solucin cido Sulfrico 0,1 N

Indicador Fenolftalena 1%
Anaranjado de metilo 0,2%

Procedimiento:
Alcalinidad Parcial:
Tomar 50 ml de muestra, si esta presenta altos niveles de turbidez que
impidan apreciar el punto final de la titulacin, proceder a filtrar
Aadir 2 gotas de solucin de Fenolftalena, la muestra tomar una
coloracin rojo grosella.
Titular con cido sulfrico 0,1 N hasta desaparicin del color rojo grosella.
Anotar el volumen de gasto y no enrasar la bureta.
Alcalinidad Total:
Agregar 3 gotas de anaranjado de metilo al contenido de la muestra
anterior, esta tomar una coloracin naranja.
Continuar la titulacin hasta la aparicin de un color naranja rosado.
Anotar el gasto.
Clculo:
AP = Vg x 100

AT

= Vg t x 100

A(OH) = 2 AP AT
Donde:
Vg = Volumen de gasto (H2SO4 0,1 N)

.A

39

- 39 -

Vgt = Volumen de gasto total (H2SO4 0,1 N)

Comentario:
-

Se debe mantener suficiente alcalinidad para prevenir corrosiones

(pH= 10 - 11,7)
Una elevada concentracin de lcali ocasiona espumaje y arrastre en
el vapor y tambin corrosin custica en el caldero.
Alcalinidad por CO3.HCO3 produce CO2 con el vapor y es la fuente
de corrosin de condensados.

Control:

150 - 1 000 ppm ( para agua de calderos ).

d. DETERMINACION DE RESIDUAL DE SULFITOS

Fundamento:
El agua de alimentacin del caldero contiene oxigeno disuelto l cual si no
es eliminado puede provocar corrosin en el sistema de tubera interna
del caldero. Existen productos qumicos secuestradores de oxgeno
basndose en sulfito de sodio catalizado.
Mtodo:

.A

40

- 40 -

Consiste en la determinacin de la concentracin en ppm del remanente

de producto como medio de proteccin contra la corrosin.
Materiales:
-

Erlenmeyer de 250 ml
Probeta de 100 ml plstico.
Bureta de 25 ml 0,1
Pipeta de 1 ml

Reactivos:
Solucin de Almidn 1,0 % en agua destilada (conservar en refrigeracin)
Solucin de cido sulfrico 50 %
Solucin de Ioduro - Yodato (Titulante)
0,31 g. Bicarbonato de sodio
4,35 g. Ioduro de potasio
0,45 g. Yodato de potasio
Disolver en 1,0 litro de agua destilada.
Procedimiento:
-

Tomar 100 ml de muestra a temperatura ambiente hermticamente

cerrado
Agregar 10 gotas de solucin de almidn y agitar.
Agregar 10 gotas de cido sulfrico al 50 % y agitar.
Titular con Ioduro Yodato hasta un viraje de color celeste cielo.

Clculo:
ppm = Gasto x 5
Control:

20 - 40 ppm ( para agua de calderos ).

DETERMINACION DE SULFITOS (METODO NALCO )

Procedimiento:
-

Tomar 25 ml de muestra (agua de caldera enfriada a temperatura

ambiente en un recipiente cerrado).
Agregar 1,0 ml del reactivo SO 726 y agitar.
Agregar 1,0 ml del reactivo SO 270 y agitar

.A

41

- 41 -

Titular gota a gota con el reactivo SO 271, hasta que la muestra

cambie a color celeste - cielo.

Clculo:
ppm SO3 = ml gastados SO 271 x 10

e. DETERMINACION DE RESIDUAL DE FOSFATOS (METODO NALCO)

Fundamento:
El agua de alimentacin del caldero conserva una cantidad de dureza la
cual debe de ser solubilizada mediante un mecanismo que inhiba la
formacin de incrustaciones a travs de un producto qumico.
Mtodo:
Consiste en la determinacin de la concentracin en ppm del remanente
de producto como medio de solubilizacin de la dureza, dispersin del
hierro y otros slidos suspendidos.

.A

42

- 42 -

Equipo y Materiales:
- Caja y Disco comparador de fosfatos.
- Pipetas de 1 ml y 10 ml
- Cronmetro.
Reactivos:
- Solucin Nalco SO-726
- Solucin Nalco SO-355
- Solucin Nalco SO-5091 (xp-2) al 1% en agua destilada.
Procedimiento:
- Verter 10 ml de muestra tanto a la celda de la izquierda (blanco), como
a la celda de la derecha
- Pipetear 0,5 ml de solucin Nalco SO-726 al contenido de la celda
izquierda y 0,5 ml de Nalco SO-355 al contenido de la celda derecha y
agitar.
- Pipetear 0,5 ml de solucin Nalco SO-0191 (xp-2) al contenido de
ambas celdas, agitar y dejar en reposo por 10 minutos.
Lectura:
- Hacer girar el disco hasta la posicin en la cual la muestra es
comparable con el color que presenta el blanco
- La posicin que indique (de 0 a 24) es su valor correspondiente en
ppm.
- Se pueden hacer diluciones en caso que el color de la muestra
excediera los colores del rango de la celda de comparacin.
Control :

15 - 25 ppm ( para agua de calderos ).

f. MEDICION DE pH
Fundamento:
El pH o potencial de hidrgeno (hidronio H 3 O+) de una solucin acuosa
es la medida de la acidez, neutralidad o alcalinidad de la solucin.
Matemticamente se define de la siguiente manera:
pH = Log 1
[H+]
pH = - Log [H+]

.A

43

- 43 -

En la prctica es una escala de 0 a 14, donde el tramo ascendente desde

0 a 7 (cido), 7 es neutro y de 7 a 14 (alcalino).
Mtodos de Medicin:
-

Tiras de papel impregnados de reactivos, en contacto con las

muestras cambian de color o de tonalidad en funcin del valor del pH.

Aparatos llamados pH metros o potencimetros, basados en las

leyes de la electro-qumica y son aplicados en mediciones directas
sobre muestras de agua.

Calibracin del pH Metro:

- Ajuste instrumental o calibracin del potencimetro siguiendo las
instrucciones del fabricante (manual del equipo).
Procedimiento:
- En un vaso de precipitacin adicionar aproximadamente 50 ml de
muestra de agua filtrada.
- Introducir el electrodo de referencia y el compensador de temperatura
en la muestra. La temperatura de la muestra debe ser igual a la que
marca el control respectivo del instrumento, pues un desfase hace
variar los resultados.
- Anotar el valor obtenido que se mostrar en pantalla y repetir el
procedimiento para las dems muestras.
- Retirar el electrodo, lavarlo con agua destilada y secarlo
cuidadosamente con papel secante.
- Dejar sumergido en solucin Buffer pH = 4,01
Control :

10,5 - 12 ( para agua de calderos ).

h. DETERMINACION DE DUREZA
Fundamento:
Las aguas son duras o blandas. Las sales presentes en una agua dura
son los bicarbonatos, carbonatos, cloruros, sulfatos de calcio y magnesio.
Mtodo:
Titulacin con EDTA
En la determinacin de la dureza total de una agua se titula la muestra
con un agente secuestrante, como la sal disdica del cido
Etilendiaminotetraactico (EDTA) que permite un clculo fcil y exacto. El
reactivo forma iones complejos solubles con los iones calcio y magnesio

.A

44

- 44 -

en presencia de un tinte orgnico (eriocromo) por el cual se logra

determinar visualmente el punto final de la titulacin.
La dureza mide el contenido de Ca y Mg en trminos de carbonato de
calcio (CaCO3).
Materiales:
-

Bureta de 10 ml 0,05
Erlenmeyer de 250 ml
Pipeta de 1 ml
Probeta de 100 ml de plstico

Reactivos:
1)Solucin de EDTA 0,01M :
Pesar: 4,0 g de EDTA + 0,86 g. de NaOH, enrasar a 1 litro con agua
destilada
2) Solucin Buffer pH = 9
Pesar: 10,0 g. Hidrxido de sodio p.a.; 10,0 g. Sulfito de sodio p.a.; 40,0
g. Tetraborato de sodio p.a.; 10,0 g. Tartrato de sodio y potasio p.a.
Disolver todos estos reactivos en un fiola y enrasar a 1 litro con agua
destilada
3) Indicador negro de eriocromo
Pesar 1,0 g. de negro de eriocromo
Agregar 30 ml de carbonato de sodio al 0,2%.
Disolver en fiola y enrasar con alcohol isoproplico (2-propanol) a 100 ml
VIRAJE: rojo vino ----- azul celeste.

Procedimiento:
- Medir 100 ml de muestra a temperatura ambiente, transferirlo a un
erlenmeyer de 250 ml
- Adicionar 1 ml de solucin buffer pH = 9 y agitar
- Aadir 3 gotas de solucin indicadora negro de eriocromo y agitar.
- Titular con solucin EDTA.
viraje de color rojo vino a azul - celeste.
Clculo:
DUREZA CaCO3 ppm = Vg x f x 1000
Vm
Donde:

f = factor del EDTA.

.A

45

- 45 -

Vg = ml gastados de EDTA
Vm = muestra (100 ml)
Por lo tanto la frmula resumida para aguas de baja dureza es:
DUREZA CaCO3 ppm = Vg x 10
Si la muestra es agua dura (agua de pozo), tomar solo 25 ml de muestra.
Y para aguas de alta dureza la frmula es:
DUREZA CaCO3 ppm = Vg x 40
Observaciones:
-

Preparar todas las soluciones con agua destilada hervida y filtrada.

Las soluciones que presentan coloracin deben ser filtradas antes del
anlisis.
Control : Mximo 8 ppm ( para agua blanda )
Mximo 5 ppm ( para agua de alimentacin a calderos )

1.6 LIMPIEZA DE P.A.C. Y CENTRIFUGAS

a.

VALORACION DE SODA CON UNA SOLUCION NORMALIZADA DE

H2SO4 1N.
Fundamento:
Corrientemente se emplean soluciones valoradas de cido clorhdrico o
de cido sulfrico.
La concentracin de soda se determina titulndola con la solucin de
H2SO4 , cuya concentracin ha sido determinada a partir de la sustancia
patrn primario (borato de sodio).
Materiales:
- Erlenmeyer de 250 ml
- Pipeta volumtrica de 5 ml
- Bureta de 25 ml de 0,1 ml divisin

.A

46

- 46 -

Reactivos:
- Solucin de H2SO4,1N
- Fenoltalena al 1%
Procedimiento:
- Tomar 5 ml de muestra de soda homogenizada
- Diluir a 50 ml con agua destilada (opcional)
- Agregar 5-6 gotas de fenolftalena
- Colocar la solucin de H2SO41N en la bureta
- Titular hasta desaparicin del color rosado
Clculo:
NNaOH x Vm = N x Vg
NNaOH =

1 x Vg = 0,2 Vg
5

NNaOH = # Eq

; # Eq
Volumen

x = 0,8 Vg

=W
Peq

; Peq =
M
Valencia

W = NNaOH x Peq x volumen = NNaOH x 40 x 1L

W = 0,2 x 40 x 1 = 8 Vg
W
------- 1 000 ml
x (g) ------- 100 ml

x = W/10 = 8 Vg 10

Donde:
Vg = Volumen gastado de HCl
x = % de soda en la muestra
b.

VALORACION DE ACIDO NITRICO CON UNA SOLUCION

NORMALIZADA DE HIDROXIDO DE SODIO 0,1N

Fundamento:
Para tener la posibilidad de determinar el contenido de diferentes cidos
en soluciones se prepara una solucin valorada de un lcali, por ejemplo
NaOH.
Reactivos:
- Solucin de NaOH 0,1N:
- Indicador: fenolftalena al 1%
Procedimiento:
- Tomar 5 ml de muestra de cido ntrico.
- Diluir a 50 ml con agua destilada (opcional).
- Agregar 2 a 3 gotas de fenolftalena .

.A

47

- 47 -

- Colocar la solucin de NaOH 0,1 N en la bureta.

- Titular hasta la aparicin de un color rojo grosella.
Clculo:

NHNO3 x Vm = NNaOH x Vg
NHNO3 =
NHNO3 =

0,1 x Vg = 0,02 Vg
5
# Eq
;
Volumen

# Eq = W ;
Peq

Peq =

M
Valencia

W = NHNO3 x Peq x volumen = NHNO3 x 63 x 1L

w = 0,02 x 63 x 1 x Vg = 1,26 Vg
W
--------- 1 000 ml
x (g) --------- 100 ml
x = W/10 = 1,26 Vg 10
x = 0,126 x Vg
Donde:
Vg = Volumen gastado de NaOH
x = % en peso de cido Ntrico en la muestra

c.

DETERMINACION DE PUREZA DE SODA (ESCAMAS)

Procedimiento
-

Pesar 1,0 g de soda (escamas o lentejas).

Completar a 50 ml con agua destilada.
Aadir 3 4 gotas de indicador fenolftalena al 1%.
Titular con solucin de cido sulfrico 0,5N (N1), anotar el gasto (V1) .
Aadir 3 4 gotas de anaranjado de metilo 0,1%
Titular con solucin de cido sulfrico 0,05N (N2) , anotar el gasto
(V2).

Clculo :
NaOH = ( N1 V1 - N2 V2 ) X 4,0 W
Donde :
N1 = 0,5
N2 = 0,05

.A

48

- 48 -

W = Peso de la soda.
Ejemplo :
W de la soda en escamas = 1,0144 g
V1 = 49,1 ml
V2 = 1,8 ml
Concentracin de Na OH = 96,45 %
Referencias :
CATALOGO DE PROVEEDOR : INDUSTRIAL Y COMERCIAL QUIMICA
ANDINA S.A

.A

49

- 49 -

1.7 AGUA DE BOMBEO Y EFLUENTE

El tratamiento del agua de bombeo de pescado ( Descarga) se realiza en los
equipos de recuperacin de primera y segunda fase. El objetivo es recuperar
los slidos, grasa y eliminar un efluente tratado ( Emisor).
As, el nivel de contaminacin del cuerpo receptor se puede controlar para
reducir el impacto ambiental sobre las aguas circundantes a la tubera
emisor.
Por esta razn se muestrea el agua de bombeo y el efluente de tratamiento
para hacer las determinaciones analticas que a continuacin se describen:

a. DETERMINACION DE HUMEDAD
El principio, el mtodo, los equipos y materiales son los mismos que en
la determinacin de la humedad en la harina.
Procedimiento:
- Licuar previamente las muestras
- Pesar 30 g. de muestra en placas Petri 120 x 20 mm por triplicado.
- Colocar en estufa por 4 horas a 105C + 5C
- Observar que el contenido de agua haya evaporado totalmente.
- Retirar de la estufa y dejar enfriar en el desecador unos 30 a 40
min. Y luego pesar.
- El clculo que se aplica es igual
- Todos los datos se anotan en el formato correspondiente.

b. DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES

Se realiza de la misma forma que para el anlisis de Harina.
La muestra se obtiene a partir del residuo que resulta de la evaporacin
de la muestra.
Proceder con la ayuda de una esptula a remover los residuos de las
placas, y a continuacin pulverizarlas en un mortero.

c. DETERMINACION DE GRASA
Se realiza de la misma forma que para el anlisis de Harina. La muestra
es obtenida a partir del residuo pulverizado.

D. MEDICION DE pH
Se procede de la misma forma que para el anlisis de agua.

1.8 ANALISIS DEL CUERPO RECEPTOR.

.A

50

- 50 -

El objetivo consiste en medir el grado de contaminacin que se ocasiona al

entorno por el vertimiento del efluente de tratamiento, fundamentalmente
debido a la presencia de material orgnico y coliformes fecales.
La seleccin de los puntos de Muestreo, Procedimientos de Muestreo y
Metodologa de los anlisis estn dados en el Protocolo de Monitoreo de los
Efluentes de la Industria Pesquera de Consumo Humano indirecto aprobado
por el Ministerio de Pesquera y propuesto por el IMARPE.
El muestreo de las aguas de las estaciones se tomar a nivel de superficie.
La frecuencia ser una vez al mes.

a . Mediciones Fsicas : (Temperatura del aire - agua,

transparencia, profundidad).
Objetivo
Conocer las condiciones ambientales a las que se encuentra el aire y
el agua. Todas estas mediciones se realizan in situ.
Materiales e Instrumentos
-

Balde de 20 l.
Termmetro de vidrio
Disco Sechi con su respectivo cable sealizado cada metro.

Procedimiento:
Medir y anotar la temperatura ambiental en
correspondiente, as como la temperatura del agua.

el

formato

- Transparencia:
Dejar caer el Disco Sechi hasta una profundidad donde se pueda
apreciar el color del disco (blanco).
Anotar dicho valor en el formato.
- Profundidad:
En la medicin anterior dejar caer hasta que el disco toque el
fondo marino.
Anotar dicho valor en el formato.

b. Medicin de pH
Es la primera medicin que se realiza una vez que las muestras han sido
tradas al Laboratorio y se procede de la misma forma como se hace en
el agua.

c. Determinacin de la Demanda Bioqumica de Oxgeno al 5to. da

(DBO5)

.A

51

- 51 -

1. Por mtodo del oxmetro:

Objetivo:
Se hace con la finalidad de cuantificar el oxgeno disuelto
consumido bajo condiciones especficas por oxidacin biolgica de
la materia orgnica en el agua.
Instrumentos y Materiales:
-

Oxmetro.
Agitador Magntico
Difusor de Aire
Fiola 2 l.
Probeta 50 ml
Frascos DBO de 300 ml de tapa esmerilada (color mbar)

Reactivos:
Sales de dilucin:
Sol. fosfato :
- KH2PO4
8,5 g.
- K2HPO4
21,75 g
- Na2HPO4.7H2O
33,4 g
- NH4Cl
1,7 g
Pesar estas cantidades y enrasar a 1L con agua destilada.
Por separado preparar las sgts. Soluciones:
- Sulfato de Magnesio heptahidratado: 22,5 g L
- Cloruro de calcio:
27,5 g L
- Cloruro frrico hexahidratado:
0,25 g L
Procedimiento:
- La muestra debe tener pH entre 6 - 8 ( de lo contrario neutralizar
con NaOH 20 g L HCl 0,5 mol/l.)
- Preparar agua de dilucin aadiendo 1 ml de cada sal de dilucin
y enrasar a 1L con agua destilada, en cantidad suficiente a la
que se requiera para realizar todas las diluciones necesarias de
las muestras de las estaciones.
- Airear por 1 hora a temperatura ambiente el agua de dilucin.
- Proceder a hacer la lectura de oxgeno disuelto de cada muestra
de estacin (inicial)
- Hacer diluciones convenientes (1:50 , 1:20)
- Preparar frascos de DBO5 por duplicado. Sembrar en replica las
diluciones realizadas en el paso anterior y enrasarlo con agua de
dilucin evitando la formacin de burbujas.
- Determinar el oxgeno inicial (0 das) de cada una de las replicas
(muestras de estaciones, mediante el mtodo del oxmetro).
Considerar un blanco.
- Incubar la segunda replica de la serie a una temperatura de 20C
1C por 5 das y proceder a realizar la medicin de oxgeno
disuelto final (5to da ).

.A

52

- 52 -

- Considerar un blanco.
Clculo:
DBO5 = (C1 - C2) Vt Ve * (C3 - C4) Vt
Vt
Ve
Donde:
C1, C2: Concentracin de oxgeno disuelto (OD) en mg./l.
C1
: OD inicial de la muestra estacin
C2
: OD final de la muestra estacin
C3
: Concentracin de oxgeno disuelto en mg/l de la soluc. blanco,
tiempo cero
C4
: Concentracin de oxgeno disuelto en mg/l de la soluc. blanco,
tiempo 5 das
Ve
: Volumen (ml) de la muestra para preparar la dilucin prueba.
Vt
: Volumen total (ml) de la solucin problema.
El blanco es agua de dilucin.
Nota:
Para obtener el oxgeno residual o el consumo de OD se exige un
criterio tal que:
C1 < (C1 - C2) < 2 C1
3
3
2. Mtodo Winkler modificado
Objetivo:
Proporcionar

un mtodo tcnico - prctico para ejecutar las

acciones de monitoreo de

los efluentes de la industria pesquera de consumo humano

indirecto, al cual deben sujetarse los responsables de las
emisiones y vertimientos de desechos al medio marino.
Fundamento:
La muestra a analizar debe ser tratada con una solucin alcalina de
sal manganosa, al mismo tiempo que se le protege del aire para
evitar la oxigenacin. Al principio se forma un precipitado blanco de
hidrxido de manganoso.
Mn+2 Cl-21 + 2NaOH-

Mn+2(OH)- 21 + 2Cl -1 Na+1

Este precipitado en presencia de oxgeno disuelto toma un color

marrn y reacciona con el hidrxido manganoso, transformndose
en hidrxido mangnico.
2Mn+2(OH) -21 + 1/2 02 + H2O

2Mn

+3

(OH) -31

.A

53

- 53 -

Cuando este precipitado es acidulado en exceso en presencia de un

yoduro, el yodo es liberado en una cantidad de oxgeno disuelto en
la muestra.
Mn+3(OH) 3- + 3H2SO4 + 2NaI

2Mn+SO4 + Na2SO4 + 6H2O + I20

El yodo liberado es titulado con una solucin valorada

tiosulfato de sodio :
I2

2Na2S2O3

0.02 de

2NaI + Na 2S4O6

Mtodo:
Por el reactivo Winkler. Se basa en la titulacin de yodo libre con la
solucin de tiosulfato de sodio.
Equipos y Materiales :
- Frascos DBO, tapa esmerilada de 300 ml de preferencia mbar.
- Erlenmeyer de 500 ml
- Bureta de 10 ml
- Pipeta volumtrica de 10 ml
- Pipeta volumtrica de 1 ml
- Agitador magntico.
- Balanza analtica.
- Incubador DBO: 20 1 C.
Reactivos :
Cloruro Manganoso:
Disolver 600 g. de MnCl2. 4H2O en un litro de agua destilada.
Solucin de Hidrxido de Sodio-Ioduro de Sodio:
Disolver 320 g de NaOH y 600 g de ni se disuelve en agua
destilada por separado, luego se mezcla y se diluye a 1 litro . Se
guarda en frascos mbar.
Acido Sulfrico 10 N:
Disolver 280 ml. de H2SO4 concentrado en un litro de agua.
Solucin Indicador de Almidn 2%:
Aadir 2 g. de almidn soluble en 100 ml de agua caliente, mezclar
y filtrar. Agregar 0.5 ml de formol como preservante. Este indicador
es estable por 30 das.
Solucin de Tiosulfato de Sodio 0.02 N:
Disolver 5 g de Na2S2O3. 5H2O y 0.1 de NaCO 3 en agua destilada
previamente hervida para expeler el CO 2 y se completa a 1 litro.
Solucin Standard 0,01N:
Disolver 0,3567g. de KIO3 en 1 litro de agua destilada.
Procedimiento :
- Quitar la tapa de la botella y agregar 1 ml de solucin MnCl 2 y 1
ml de la solucin NaOH - NaI introducir la pipeta con las

.A

54

- 54 -

soluciones de pulgada por debajo de la superficie del lquido.

Se formar un precipitado que se hunde rpidamente hacia el
fondo de la botella.
- Tapar la botella de tal manera que no queden atrapadas burbujas
en la misma, entonces agitar vigorosamente para mezclar el
precipitado. Dejar sedimentar por 5 minutos
y
mezclar
nuevamente.
- Dejar sedimentar el precipitado aproximadamente hasta la mitad
del volumen de la botella; entonces quitar la tapa de la botella y
agregar 1 ml de H2SO4 10 N. Tapar nuevamente y agitar
vigorosamente hasta que todo el precipitado se haya disuelto. La
introduccin del cido puede causar la formacin de burbujas por
la liberacin de CO2 y N2 ; esto no afecta sin embargo, dado que
la muestra se analiza sobre una alcuota de 200 ml. La muestra
est lista para ser titulada.
Anlisis de comprobaciones
Determinacin del blanco
Se lleva a cabo para determinar la correccin a aplicar con motivo
de la cantidad de sustancias oxidantes capaces de liberar I2 o
sustancias reductoras presentes como impurezas en los reactivos.
El blanco debe determinarse despus de haberse preparado los
reactivos para comprobar que son satisfactorios y que el equipo de
titulacin funciona correctamente. Adems los blancos deben ser
determinados antes de cada serie de anlisis de muestras de
oxgeno.
En un erlenmeyer que contiene 50 ml de agua destilada se agrega
1 ml de H2 SO4 y 1 ml de la solucin NaOH - NaI, se agita.
Despus se agrega 1 ml de la solucin Mn Cl 2. Si no aparece
coloracin azul los reactivos estn libres de oxidantes. Si aparece
este color se titula.
Si se gasta mas de 0,05 ml de la solucin de tiosulfato de sodio
deber verificarse cual de los elementos contiene sustancias
oxidantes. Si en alguno de los reactivos existen sustancias
oxidantes en mnima cantidad deber hacerse una correccin en
blanco.
Normalizacin:
Es el proceso que tiende a determinar los pequeos cambios que
ocurren en la solucin de tiosulfato de sodio. La normalizacin debe
llevarse a cabo ante de cada serie de anlisis. .
Pipetear 10 ml de la solucin de Yodato de Potasio a un erlenmeyer
de 125 ml y agregarle 50 ml de agua destilada.
Agregar 1ml de H2SO4 10N mas 1ml de solucin de NaOH - NaI y
agitar vigorosamente. Titular con la solucin de tiosulfato de sodio
0.02N hasta que la solucin anaranjada (Iodo liberado) se torne
amarillo plido.
Agregar 1ml. de solucin de almidn, esto har que la solucin se
torne azul, continuar agregando hasta que el color azul
desaparezca y se vuelva incoloro.
Leer la bureta y anotar el gasto en V (primera determinacin).

.A

55

- 55 -

Repetir los pasos anteriores de 3 a 5 veces , anotar los gastos y

calcular el V(promedio)
El factor (F) es calculado de la siguiente manera:
F=

5
V
Donde:
V = consumo de tiosulfato para 10 ml. de Yodato de
potasio.

Titulacin
Las muestras de oxgeno deben ser titulados dentro de las 4 hr del
momento en que fueron tratadas, siempre seguir la misma tcnica
para cada muestra.
Llenar la bureta.
Colocar en un erlenmeyer limpio una barrita de agitador magntico,
deben enjuagarse con agua destilada entre cada valoracin.
Agitar vigorosamente la botella de muestra, quitar la tapa de la
botella lentamente, medir la cantidad de muestra a titular.
Colocar el matraz bajo el pico de la bureta, poner en marcha el
agitador y agitar constantemente sin provocar salpicaduras,
comenzar a titular con tiosulfato de sodio hasta que el amarillo
profundo de la muestra se vuelva amarillo plido.
Agregar 1ml de solucin de almidn. Esto producir un color azul
profundo, continuar agregando el tiosulfato gota a gota hasta la
decoloracin de la solucin.
Clculo
Despus que las muestras han sido valoradas, se calcula de la
siguiente forma:
1 equivalente de tiosulfato = 8 g de oxgeno.
1ml 0,02N = 0,16 mg de oxgeno.
= 0,112 ml de oxgeno
O2 (mg/L) =

a x F x 8 x 1 000
50 (b-2)

Donde:
a = consumo de tiosulfato en la titulacin.
b = volumen de la muestra a titular.
F = factor del tiosulfato = 5
V

d. Determinacin de Slidos Totales:

Fundamento:
Tambin considerado como residuo total. Es el material que queda en el
recipiente despus de un secado a una temperatura definida de105C.

.A

56

- 56 -

Comprende el residuo filtrable. Est constituido por partculas orgnicas e

inorgnicas.
Equipos y Materiales:
-

Estufa
Balanza analtica 0,1 mg
Desecador
Placas Petri de 120 x 20 mm
Pipeta volumtrica de 10 ml

Procedimiento:
-

Tomar 10 ml y verterlo en las placas Petri, previamente tarada, por

duplicado y colocarlo en la estufa a 70C hasta sequedad.
Luego subir la temperatura a 103 - 105 C por 1 o 2 horas.
Dejar enfriar en el desecador y luego proceder a pesar.

Clculo:
ST = (W2 - W1) x 1 000,000
Vm
Donde:
W2
: Peso de placa + residuo g.
W1
: Peso de placa g.
Vm
: 10 ml
1 000,000: Factor de conversin a mg/l.

e. Determinacin de Salinidad.
Materiales:
-

Erlenmeyer de 250 ml
Bureta de 25 ml de 0,1 ml de graduacin.
Pipeta volumtrica de 1 y 10 ml

.A

57

- 57 -

Reactivos
- Solucin de Nitrato de Plata 0,1 N(titulante).
- Solucin indicadora de Cromato de Potasio al 10%.
Procedimiento:
-

Homogenizar y con la pipeta volumtrica tomar una alcuota de 10 ml

de muestra.
Transferir al Erlenmeyer y completar a 30 ml con agua destilada
(opcional).
Proceder a titular agregando previamente de 4 a 5 gotas de indicador.
El viraje es de amarillo a rojo ladrillo.
Anotar el volumen de gasto y proceder al calcular.

Clculo:
% Cl = Vg x 35,4 x NAgN0 3 / Vm
% Sal = 0,030 + 1,805 ( %Cl )

2. ANEXOS : PREPARACION Y STANDARIZACION DE SOLUCIONES E

INDICADORES
2.1

Soluciones Normalizadas
a. NaOH 0,1 N
4,3 g

1 L H2O

.A

58

- 58 -

Estandarizar con Biftalato de potasio (BK)

0,2042 g

10 ml H2O

Calentar ligeramente hasta disolucin total

Indicador : Fenolftalena al 1% ( 3 gotas)
Viraje: de incoloro a rojo grosella.
Nota: Secar el biftalato de potasio a 125C por 2 horas. y conservarlo
en desecador.
b. H2SO4 0,1 N.
3,0 ml

1 L H2O

Estandarizar con Tetraborato de Sodio

0,1907 g 10 ml H2O
Calentar ligeramente hasta disolucin total
Indicador : Rojo de metilo 0,1 % (3 gotas)
Viraje: de rojo a meln claro
Nota: El patrn no debe ser secado, solamente debe conservarse en
el desecador.
c. Ag NO3 0,1 N.
17,3 g.

1 L H2O

Estandarizar con Cloruro de Sodio

0,0584 g 10 ml H2O
Disolver completamente

Indicador : Cromato de Potasio al 10 % ( 3 gotas)

Viraje: de amarillo a rojo ladrillo.
Nota: Secar el cloruro de sodio a 125C por 2 horas. y conservarlo en
desecador.
d. NH4 SCN 0,1 N. (Tiocianato de amonio)
8,0 g.

1 L. H2O

.A

59

Estandarizar con AgNO 3 0,1 N Normalizado

Volumen sol. Patrn :

20 ml

Indicador : 3 4 gotas de solucin saturada de Sulfato frrico de

amonio( al 40%)
Viraje: de amarillo a rojo ladrillo
e.

H2SO4 1 N.

30 ml

1 L H2O

Estandarizar con Tetraborato de Sodio

0,9534 g 5 ml H2O ( llevar a 10 ml )
f.

H2SO4 0,5 N.

15 ml

1 L H2O

Estandarizar con Tetraborato de Sodio

0,4767 g 5 ml H2O ( llevar a 10 ml )
g.

H2SO4 0,05 N.

1,6 ml

1 L H2O

Estandarizar con Tetraborato de Sodio

0,0953 g 10 ml H2O

h.

NaOH 1 N
43 g

1 L H2O

Estandarizar con Biftalato de potasio (BK)

1,0211 g

5 ml H2O (llevar a 10 ml)

2.2 Soluciones Porcentuales

a.

H2SO4 al 85,0% ( industrial)

( d = 1,80 y % Pureza = 90,5 )

- 59 -

.A

60

522 ml
b.

1L

H2SO4 al 50% ( p.a.)

d = 1,84 ; pureza = 96,9%
28,04 ml

c.

100 ml agua destilada

H3BO3 1%
Disolver 10 g de cido brico en 1 L agua destilada
Nota: El cido se disuelve mejor en agua caliente.

d.

H3BO3 2%
Disolver 20 g de cido brico en 1 L agua destilada

2.3 Soluciones Indicadoras

a. Fenolftalena al 1%
1,0 g

100 ml de alcohol etlico absoluto

b. Rojo de Metilo al 0,1%

0,1 g

100 ml de alcohol etlico absoluto

c. Anaranjado de Metilo al 0,2%

0,2 g

100 ml de agua destilada

d. Cromato de Potasio al 10% K2CrO4

10,0 g

100 ml de agua destilada

e. Solucin saturada de Sulfato frrico de amonio (SO4)2NH4Fe

40 g

100 ml de agua destilada

f. Negro de eriocromo
Ver anlisis de aguas (dureza)
g. Solucin de almidn al 1%
1g

100 ml de agua destilada

Disolver en caliente hasta total disolucin, dejar enfriar y filtrar.

- 60 -

.A

61

- 61 -

Conservar en refrigeracin
h. Tashiro (TBVN mtodo Buchi)
125 mg de rojo de metilo + 82,5 mg de azul de metileno disueltos en
100 ml de alcohol etlico absoluto.
Conservar en gotero mbar.
i. Indicador Protena (mtodo Buchi)
50 ml sol. 0,1% Verde de bromocresol en alcohol absoluto + 35 ml
sol. rojo de metilo 0,1% en alcohol absoluto.
Mezclar ambos y conservar en gotero mbar.

2.4 Preparacin de soluciones para anlisis de aceite

a. Solucin Patrn de Bicromato de Potasio
4,9035 g ----------------- 1,0 L.
b. Solucin Tiosulfato de Sodio 0,1 N
24,8112 g ---------------- l,0 L.
c. Solucin de Ioduro de Potasio al 15 %
15 g -----------------

100 ml

d. Solucin Saturada de Ioduro de Potasio

5g

----------------

2 ml

e. Mezcla de Acido Actico Glacial y Cloroformo

3/2

---------------

l,0 L.

2.5 Solucin Reguladora, amortiguadora o tampn

Son soluciones caracterizadas por que su pH permanece invariable a la
disolucin y por que admiten cantidades moderadas de cido o lcali, sin
que con ello su pH cambie prcticamente. Contiene siempre:

Un cido dbil

Un exceso de una base conjugada

Ejemplo:
a)

Acido Actico y Acetato de Sodio, pH = 4,62

Pesar 32,2 g de acetato de sodio
Disolver en agua destilada
Agregar 23,4 ml de Acido Actico glacial
Enrasar a 4,0 litros de agua destilada

b)

Amoniaco y cloruro de amonio pH = 10

Disolver 65,5 g de cloruro de amonio en 300 ml de agua destilada
Agregar 570 ml de hidrxido de amonio y completar a 1 litro

.A

62

- 62 -

c) Acido brico y Borato de sodio

Aplicaciones:
Las soluciones reguladoras son muy empleadas en anlisis siempre
que se debe fijar el pH de un medio y que este permanezca
inalterable en operaciones sucesivas.
d) Buffer pH= 9
Ver anlisis de aguas (dureza)