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biotecnologiay

Nanopartculas

verdes
Plantas do cerrado so usadas na produo de
nanossistemas para controle de patgenos e pragas
da agricultura, entre outras aplicaes
Dinorah Ereno

ascas, sementes, polpas e folhas


de rvores e plantas do cerrado
brasileiro como pequizeiro,
cajuzinho-do-cerrado, mangabeira, sucupira, burer e outras ,
alm de vrias espcies de cogumelos,
so as matrias-primas escolhidas por
pesquisadores da Embrapa Recursos
Genticos e Biotecnologia (Cenargen),
sediada em Braslia, para a obteno de
nanopartculas com potencial de utilizao em biossensores para deteco de
vrus em plantas, controle de larvas de
insetos, microrganismos, clulas tumorais e outras aplicaes. Investigamos
vrias espcies e recursos biolgicos
para encontrar os mais apropriados para realizar o processo de biorreduo,
visando produo de nanopartculas
metlicas, relata Luciano Paulino da
Silva, coordenador do grupo de nanobiotecnologia da Embrapa Cenargen.
A biorreduo um processo biolgico
mediado por molculas como enzimas,
protenas, aminocidos, polissacardeos
e metablitos encontrados nos extratos de cascas, sementes e folhas, por
exemplo, que transforma o on de prata

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(quando h ganho de eltrons) em prata


metlica, resultando na formao de
nanopartculas. Uma grande vantagem
do mtodo de sntese biolgico em vez
do qumico tradicional que parte das
molculas ativas tambm adere superfcie dessas nanopartculas, o que lhes
confere caractersticas diferenciadas
como atividade antibacteriana, antiviral
ou antialrgica dependendo do vegetal
ou cogumelo utilizado. Esse mtodo de
sntese de nanopartculas chamado de
nanotecnologia verde.
O extrato aquoso da casca da castanha
do cajuzinho-do-cerrado (Anacardium
othonianum), uma planta arbustiva, foi o
meio escolhido pela pesquisadora e estudante de doutorado Cnthia Caetano Bonatto, da Universidade de Braslia (UnB),
para estudar uma rota de sntese alternativa aos solventes nocivos ao ambiente,
como o hidrxido de sdio, utilizados no
mtodo tradicional. Durante a pesquisa
feita em seu doutorado, orientado por
Luciano Silva, da Embrapa Cenargen,
ela verificou que, durante o processo
de sntese, temperaturas mais elevadas
aceleram o crescimento, modulam o ta-

manho e aumentam a condutividade eltrica das nanopartculas, que mostraram


em testes ter propriedades antifngicas.
As partculas apresentam propriedades
pticas, estruturais, biolgicas e eltricas controladas pela temperatura a que
o meio reacional submetido durante a
sntese, diz Luciano Silva. Os resultados
foram publicados na revista Industrial
Crops and Products, em julho deste ano.
A mesma estratgia de utilizar temperaturas maiores no processo de sntese foi utilizada em outra pesquisa feita
por Cnthia, com folhas do pequizeiro
(Caryocar brasiliense). O extrato aquoso
de pequi tem, em relao a outras plantas testadas em laboratrio, um grande
potencial biorredutor, diz a pesquisadora. Aps a sntese e caracterizao,
incluindo a avaliao das propriedades
estruturais pelo tamanho e forma do
nanomaterial obtido, os pesquisadores
conseguem saber quais as melhores aplicaes para as nanopartculas. Na rea
agrcola, por exemplo, podemos desenvolver nanossistemas para controle de
patgenos e pragas, incluindo bactrias,
fungos e larvas de insetos, diz Luciano

Folhas de pequi
(alto esq.), casca
do cajuzinho-do-cerrado
(acima) e frutos
da mangabeira so
as matrias-primas usadas
na sntese biolgica

Silva. As estratgias de uso sero avaliadas de acordo com a necessidade de


aplicao. Para capturar pragas como
besouros ou cigarrinhas, por exemplo,
os nanossistemas podero ser colocados
dentro de armadilhas no campo. No caso
de fungos que atacam folhas, a aplicao
das nanopartculas pode ser feita por
pulverizao ou, se o ataque for na raiz,
diretamente no solo ou no tecido vegetal.

fotos 1 e 3 fbio colombini 2 Cnthia Bonatto

testes em laboratrio

No caso da pesquisa com folhas de pequi,


ensaios em laboratrio esto sendo feitos
para avaliar o seu potencial biotecnolgico. Testamos a possvel citotoxicidade
das nanopartculas em bactrias, fungos,
clulas normais e cancergenas de mamferos in vitro, em nematoides para controle de pragas e agora iniciamos os testes em
culturas de plantas em laboratrio para
avaliar o potencial efeito txico se forem
utilizadas no campo, relata Cnthia. Ela
ressalta que visualmente no foram observadas mudanas nas plantas saudveis
tratadas com nanopartculas de pequi em
comparao com as plantas-controle, sem
tratamento. Como elas so cultivadas em
pESQUISA FAPESP 223 z 71

laboratrio, dentro de recipientes, a aplicao feita diretamente no meio de cultivo lquido. O prximo passo da pesquisa
consiste em uma anlise morfolgica e
bioqumica das plantas, que engloba avaliao de clulas e do metabolismo, para
saber se elas sofreram algum efeito txico.
Algumas partculas apresentam uma
particularidade que as faz especiais, segundo Luciano Silva, porque possuem
uma diferena no sinal denominado ressonncia plasmnica de superfcie. Como so partculas nanoestruturadas, elas
acabam ganhando novas propriedades pticas e uma delas a absoro da luz pela
prata metlica em um comprimento de
onda que o metal, na sua forma inica, no
absorvia anteriormente. Essa diferena
confere a elas a propriedade de amplificao do sinal ptico nos sistemas em que
so utilizadas, tornando-os mais sensveis.
Com base nessa caracterstica singular,
estamos trabalhando no desenvolvimento de nanobiossensores para deteco de
hormnios de crescimento e de clulas
tumorais, alm de vrus em plantas.
Outra linha de pesquisa conduzida no
laboratrio o uso de nanopartculas em
superfcies como plstico ou vidro. Nesse
caso, o estudo desenvolvido por Luciane
Dias da Silva, mestranda orientada por
Luciano Silva, tem como foco a sntese
de nanopartculas de prata a partir de
extratos de frutos e folhas da mangabeira (Hancornia speciosa) para aplicao
em superfcies plsticas como o poli (tereftalato de etileno),
Miclios (coloridos
o conhecido PET. O
no computador),
objetivo a busca de
fase vegetativa
um mtodo alternade cogumelos,
tivo para controle de
produzidos em
meio de cultivo
larvas do mosquito
controlado

Sntese biolgica
Extratos de plantas transformam prata em nanopartculas metlicas
Biorreduo

meio de cultivo
Partculas de prata

Molculas
dos extratos
vegetais

ons de
prata
Cascas
Folhas

Prata
metlica

Sementes

Meio lquido

Cascas, sementes, folhas

Esse processo mediado por

Os tomos de

(extratos vegetais) e

enzimas, protenas, aminocidos,

prata metlica

partculas de prata so

polissacardeos e metablitos

comeam a se

colocadas em meio lquido,

secundrios de extratos vegetais,

agregar, formando

onde ocorre o processo

que transformam o on de prata

as nanopartculas

qumico de biorreduo

em prata metlica

de prata

Fonte luciano silva / embrapa cenargen

Aedes aegypti, transmissor da dengue.


Esse controle seria feito no por meio de
captura, mas pela toxicidade das nanopartculas s larvas depositadas no PET.
As possibilidades de aplicao do mtodo contemplam o uso de partculas em
suspenso em meio lquido ou a imobilizao e adeso de parte das partculas
na superfcie plstica, que ocorrem durante o processo de sntese. Os extratos
dos frutos da mangabeira foram obtidos
a partir da casca, da polpa e da semente, separadamente. As nanopartculas
obtidas do sal de prata juntamente com

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nucleao

seus respectivos extratos esto na fase


final de caracterizao e alguns ensaios
biolgicos j foram realizados, relata
Luciane. A prxima etapa ser a utilizao de tubos plsticos que do origem s
garrafas, chamados preformas PET, para
imobilizao e adeso das nanopartculas.
compostos bioativos

Alm de plantas do cerrado, vrias espcies de macrofungos (cogumelos) tambm esto sendo estudadas pelo grupo.
Os cogumelos so fontes de compostos
bioativos que apresentam diversas atividades biolgicas, como ao antitumoral,
antiviral, antimicrobiana, anti-inflamatria, antioxidante, entre outras, diz a
pesquisadora Vera Lcia Perussi Polez,
que trabalha com espcies provenientes
do Banco de Cogumelos da Embrapa Cenargen. Por isso decidimos utilizar esse
material como fonte tanto para reduzir os
metais quanto para estabilizar as nanopartculas. A fonte biolgica para a sntese de
nanopartculas de prata pode ser tanto o
corpo frutfero, o chamado chapu, como
o miclio, que a fase vegetativa do fungo.
A escolha da pesquisadora recaiu sobre o miclio, porque, na sua avaliao,
ele apresenta vantagens em relao ao
corpo frutfero, como o crescimento mais

crescimento das nanopartculas

atividade biolgica

Temperatura

Nutrientes

pH

imagem arquivo pessoal vera lcia perussi polez infogrfico ana paula camposIlustraO alexandre affonso

Nanopartcula com
propriedades

Outros ons metlicos so

Parte das molculas do extrato

biorreduzidos e novos tomos

vegetal adere superfcie das

de prata metlica agregam-se ao ncleo

nanopartculas, o que lhes confere

da nanopartcula formada, etapa que

caractersticas como atividade

pode ser controlada por temperatura,

antibacteriana, antifngica,

pH e concentrao dos reagentes

antiviral ou antioxidante

rpido. Alm disso, a produo dos componentes qumicos presentes no miclio


mais homognea, porque trabalhamos em
condies controladas no meio de cultivo
lquido, como nutrientes, pH, temperatura, oxigenao, entre outras. Com isso
conseguimos manter a reprodutibilidade
desse material biolgico, diz. A quantidade de compostos qumicos presentes
nesses organismos depende de fatores como a espcie e seleo de linhagens, a fase
de desenvolvimento corpo frutfero ou
miclio e o tipo de substrato utilizado.
A pesquisa para obteno de nanopartculas dos cogumelos comeou h dois
anos. Fizemos um desenho experimental
de maneira a manter o material biolgico
reprodutvel na forma mais homognea
possvel, relata Vera. Aps aperfeioar
as condies de crescimento dos miclios, de sntese de nanopartculas e suas
caracterizaes fsicas, qumicas e estruturais, a pesquisa entrar agora na fase de
caracterizao das atividades biolgicas
das nanopartculas. O cuidado se explica
pelo grande potencial de aplicao farmacutica, medicinal, agrcola e industrial
dos compostos presentes nos cogumelos.
Entre os compostos bioativos esto as
beta-glucanas, carboidratos complexos
com propriedades imunorreguladoras e

At o substrato
utilizado
interfere na
quantidade
de compostos
qumicos
presentes nos
cogumelos
antitumorais, as lectinas, protenas com
propriedades antitumorais e de imunorregulao, os triterpenos, substncias com
ao anti-hipertensiva, antiviral, antitumoral e antialergnica, os fenlicos,
compostos com atividade antiplaquetria,
antioxidante e anti-inflamatria, alm de
outros com ao antimicrobiana.
Alm de pesquisadores da Embrapa e
alunos de iniciao cientfica, mestrado e
doutorado, o grupo conta com a colaborao de pesquisadores de outras institui-

es, como o professor Elmo Salomo Alves, do Departamento de Fsica da Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG).
o grupo liderado pelo professor Elmo
que desenvolve as superfcies contendo
grafenos [forma cristalina do carbono],
nas quais so incorporadas as molculas
de reconhecimento, como anticorpos e
ligantes de receptores, e depositadas nas
nanopartculas de prata para a produo
de nanobiossensores, diz Luciano Silva.
Outros parceiros nas pesquisas so os professores Eduardo Fernandes Barbosa, da
Universidade Federal da Bahia (UFBA),
especialista em enzimologia, e Alexsandro Galdino, da Universidade Federal de
So Joo Del-Rei (UFSJ), especialista em
gentica molecular de microrganismos.
Estamos trabalhando no desenvolvimento de superfcies nanoestruturadas para a imobilizao de enzimas que
podem ser aplicadas na indstria para a
obteno de hidrolisados alimentcios a
partir de macromolculas como protenas e carboidratos, processo chamado de
catlise enzimtica, diz Luciano Silva.
Segundo ele, essas enzimas no so ainda
aplicadas em larga escala em funo do
alto custo operacional para a sua utilizao. Com o processo de imobilizao,
esse custo ficaria bem menor, explica.
Um outro modelo de sntese biolgica
que tem sido testado com bons resultados so as partculas polimricas estruturadas a partir da quitosana, substncia
encontrada na carapaa de crustceos,
para o transporte tanto de macromolculas como de metablitos secundrios
visando aplicaes na biomedicina e na
agropecuria. Uma das molculas que
transportamos nesse sistema polimrico a melitina, aminocido extrado do
veneno de abelha, com atividade antibacteriana, antifngica e anticancergena,
diz Luciano Silva. No modelo testado pela
aluna de doutorado Kelliane Almeida de
Medeiros, foram investigados in vitro os
efeitos de partculas polimricas contendo melitina sobre clulas tumorais de
cncer de mama. Atualmente esto sendo
realizados os primeiros testes em camundongos com resultados promissores. n

Artigo cientfico
Bonatto, C. C., Silva; L. P. Higher temperatures speed
up the growth and control the size and optoelectrical
properties of silver nanoparticles greenly synthesized
by cashew nutshells. Industrial Crops and Products.
v. 58, p. 46-54. jul. 2014.

pESQUISA FAPESP 223 z 73