INSTITUTO DE BIOQUIMICA

FACULTAD DE CIENCIAS
UNIVERSIDAD AUSTRAL DE CHILE

RADIOISOTOPOS
GUIA DE EJERCICIOS BIOQ. 250

NOTA: Si no se especifca lo contrario, asuma las siguientes eficiencias de conteo:

3

H = 60%

t 1/2 = 12.3

ED = 0.0179 MeV

14

C = 95%

t 1/2 = 5.700 a

ED = 0.1540 MeV

35

S = 90%

t 1/2 = 87.1

ED = 0.1670 MeV

32

P = 98%
t 1/2 = 14.3 d
ED = 1.7180 MeV
----------------------------------------------------------------1.

14

C, 32P, 35S y 3H, son radioistopos comnmente utilizados en investigacin

biolgica. Todos son beta-emisores. Escriba las reacciones nucleares de decaimiento.

2.

Una solucin de (14C)-lisina 0.77 mg/ml contiene 1.2 mCi. Calcule la actividad
especfica de la lisina en trminos de :
(a) mCi/mg, (b) mCi/mol, (c) DPM/mol y (d) CPM/mol.

3.

Se toma 10 l de (14C)-tolueno y mediante centelleo lquido se determina que hay

28.500 CPM. Calcule la concentracin radioactiva (actividad) en trminos de uCi/ml y
la actividad especfica en trminos de DPM/mol.

4. Suponga que posee benceno tritiado que fue preparado el 22 de marzo de 1965. Al
medir hoy, su contenido de radioactividad se encontr que 5 l tenan 5.400 CPM.
Cul es la actividad que haba originalmente?
5. En 20 das ms, se desea tener una solucin de (32P)-Na3PO4 con una AE = 100
uCi/mol. Si prepara esa solucin hoy, qu actividad especfica debera tener?

6. Despus de la muerte de un organismo vivo el recambio de carbono se detiene y el 14C

decae con una vida media de 5.700 aos. En 1923 se descubri la tumba del rey
Tutankamon y al tomar hoy una muestra se encontr que el contenido de 14C
corresponda a una AE = 8.6 DPM/g. En qu ao muri el rey egipcio? Si el
equipo tena un error de conteo de 1%, cuntos aos significa este pequeo error?
No= 14 DPM/g
7.

Cmo procedera Ud. para calibrar una micropipeta de volumen fijo (suponga 10 l),
utilizando una solucin que contenga un material radioactivo?

10. Suponga que posee una muestra marcada con 14C de la que espera obtener
aproximadamente 100 CPM. Si dispone de un contador Geiger y un contador de
centelleo con eficiencias del 22% y 72% para 14C background de 6 CPM y 38 CPM
respectivamente, cul contador debera utilizar? Explique.
11. Describa la preparacin de 100 ml de una solucin de (35S)-Met 10 mM en la
cual el aminocido posea una AE = 1.5 x 105 DPM/mol a partir de (a) una
solucin de metionina fra 100 mM (b) metionina slida. Dispone adems de un stock
de metionina radioactiva con una actividad de 1 mCi/ml.
12. Describa la preparacin de 2 ml de una solucin de (14C)-NAD 0.5 mM y una
actividad especfica de 50 CPM/pmol en 10 das ms. Para ello dispone de una
solucin del nucletido radioactivo que tiene una concentracin de 100 mCi/ml.
Dispone adems de una solucin de NAD fro 10 Mm.
13. Se incub (14C)-Glucosa-1-P (AE = 16.000 CPM/mol) con glicgeno en presencia de
un extracto libre de clulas que contiene la enzima glicgeno fosforilasa. La
radioactividad fue incorporada a una velocidad inicial de 2.550 CPM/min. Calcule la
velocidad de la reaccin enzimtica en trminos de:
moles de glucosa incorporada por minuto (Unidades de Enzima)
mol de glucosa incorporada por minuto por unidad de volumen, si el volumen de
reaccin fue 0.2 ml (Actividad Enzimtica)
c) moles de glucosa incorporada por minuto por cantidad total de proteina, si la
mezcla de incubacin contena 0.35 mg de protena (Actividad especfica de la
enzima).
a)
b)

14. Suponga que inyecta a una persona 10 ml de una suspencin de glbulos rojos
marcados con 51Cr conteniendo una radioactividad total de 3 x 108 CPM. Despus de
10 minutos Ud. toma una pequea muestra de sangre y realiza el conteo encontrando
5 x 104 CPM/ml. (a) Cunta sangre tiene el individuo? (b) Qu sucede si la
muestra de sangre es tomada 120 das despus?.

15. Se desea conocer la cantidad de leucina por glbulo rojo. Para ello se toma 2 ml de
clulas (5 x 106 cel/mm3) y se adiciona 0.1 mg de (14C)-leucina con 1 uCi de
radioactividad. Se aisl 0.165 mg de leucina pura cristalizada con una AE = 2.55
106 CPM/mg. Calcule la cantidad de leucina por ml de glbulos rojos y la cantidad
aproximada de residuos leucina por clula.
16. Se incuba 106 clulas con (3H)-leucina con AE = 1000 CPM/nmol. Despus de
incubar se lava las clulas y se determina una radioactividad de 106 CPM. Podra
Ud. decir que en las 106 clulas hay 1.000 nmoles de leucina? Discuta.
17. 10 uCi de (14C)-Inulina fueron adicionados a 15.0 ml de una suspencin de clulas. La
suspencin fue luego centrigugada
y el sobrenadante eliminado. El pellet de
clulas ocup 0.2 ml y contena 10.000 CPM. (a) Cunto volumen ocupa el
espacio intesticial del pellet de clular? (b) Qu suposiciones habra que tomar en
cuenta para que la respuesta al problema sea vlida?
18. Al cultivar un hongo, se encuentra que ste produce Aureomicina, un antibitico.
Para saber la cantidad que produce, se adiciona 1 mg de (3H)-aureomicina (AE =
120.000 CPM/mg) a 1 litro de cultivo. De la mezcla se aisl el antibitico y despus de
cuatro recristalizaciones se obtuvo 0.17 mg de aureomicina con una radioactividad
total de 861 CPM. Calcule la cantidad de antibitico en 1 litro de cultivo.
19. A un paciente con una enfermedad gentica del metabolismo del glicgeno, se le
extrae un trozo pequeo de hgado (bipsia), correspondiente a 1.34 g. Para
determinar el contenido de glicgeno se homogeniza el tejido y se adiciona 1
mg de polisacrido marcado con 14C que contiene 35.000 DPM. Luego se aisl y
purific 0.42 mg de glicgeno que contena 10.995 CPM. Cunto glicgeno haba
en la bipsia?

20. Se realiz una cromatografa en columna y el eludo fue analizado para (3H)-AMP. Se
efectu un conteo de 0.2 ml de cada fraccin en 0.5 ml de mezcla de centelleo. La
muestra aplicada a la columna fue eluda con un gradiente lineal de KCl, de modo
que la concentracin salina no es constante en cada fraccin. Para corregir el
quenching, se adicion 10 l de (3H)-AMP a cada vial de centelleo antes del conteo.
El blanco fue 0.2 ml de agua. Calcule la radioactividad libre de quenching en cada
vial, considerando los siguientes resultados:

CPM sobre background

VIAL
MUESTRA
MUESTRA + ESTANDAR INTERNO
------------------------------------------------------------------Blanco
5
1.786
Fraccin 50
9
1.610
Fraccin 75
115
1.575
Fraccin 80
5.250
6.630
Fraccin 82
1.589
2.829
Fraccin 85
125
1.285
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