Universidad de Santiago de Chile

Facultad de Qumica y Biologa

Tcnico Universitario en Anlisis Qumico y Fsico
Qumica Orgnica

Informe Laboratorio N 4
Separacin de aminocidos
por cromatografa en capa delgada.

Francineth Mora Martnez.

Leslie Prez Beas

Objetivos
Objetivos Generales

Extraer, separar e identificar aminocido en medio acuoso por cromatografa en capa

delgada.
Comportamiento cido base de los grupos funcionales de un aminocido frente a cambios
de pH.

Introduccin
Los aminocidos son compuestos orgnicos que se combinan para formar protenas.
Cuando las protenas son digeridas, los aminocidos se acaban. El cuerpo humano requiere
de muchos aminocidos para crecer y para descomponer los alimentos.
Los aminocidos se clasifican en dos grupos:

Aminocidos esenciales: el cuerpo no los puede producir y tienen que ser

suministrados por los alimentos. Estos aminocidos abarcan: cistena, lisina y
triptfano. Las fuentes de estos aminocidos esenciales comprenden la leche, el
queso, los huevos, ciertas carnes, las verduras, las nueces y los granos.
Aminocidos no esenciales: son producidos por el cuerpo a partir de los
aminocidos esenciales o la descomposicin normal de las protenas y abarcan el
cido asprtico, el cido glutmico y la glicina.

Se denomina titulacin al procedimiento para determinar la concentracin de un cido o

una base en solucin, por medio de la adicin de una base o un cido de concentracin
conocida.
Durante la titulacin, el punto en que se neutraliza un cido o una base se denomina punto
de equivalencia
La cromatografa de reparto se basa en la distribucin de un soluto entre dos fases
lquidas. La fase estacionaria es una pelcula delgada de un lquido, generalmente agua,
adsorbida sobre un slido y la fase mvil es un sistema de solventes orgnicos con una
pequea proporcin de agua que fluye a travs del lquido-slido.
Se llama cromatografa e capa delgada (CCD) cuando el slido est formado por
partculas finas, formando una capa delgada sobre una placa de soporte inerte.

Datos Experimentales
Procedimiento experimental
1.- Cromatografa de aminocidos
-

Se exprimi una naranja y un limn, filtrndose los extractos a travs de un algodn

y se sembr, en placas de celulosa o de slice.

Se realiz primero las cromatografas de los patrones: alanina y valina disueltos en

un mnimo volumen de agua (15mg/mL), en cada uno de los solventes propuestos.
Las cubetas para realizar las cromatografas. Se revel y calcul la Razn de Frente
(Rf) de cada aminocido y se compar con la literatura.

Sistema de solventes
a) Amoniaco: etanol: agua 1: 8: 1 v/v
Alanina
Rf: 1.7 cm./4.1cm = 0.4146
Valina
Rf: 4.2cm/5.5cm= 0.76
Jugo de naranja
1 Rf: 0.5cm/4.4cm= 0.1136
2 Rf: 1.4cm/4.4cm = 0.3182
3 Rf: 2.2cm4.4cm= 0.5
4 Rf: 3.3cm/4.4cm= 0.75
Jugo de limn
1 Rf: 0.7cm/4.8cm= 0.14
2 Rf: 1.8cm/4.8cm= 0.37
3 Rf: 2.7cm/4.8cm = 0.56
b) cido actico: 1- butanol: agua 15: 60: 25 v/v
f) Amonaco: 1- propanol 7: 3 v/v
Alanina
Valina

Jugo de naranja
Rf: 2,5/3,6= 0,69
Jugo de limn c) Fenol: agua 100: 25 p/p
d) Amonaco: 1- propanol: agua 2: 30: 2 v/v
e) 1- butanol: acetona: cido actico: agua 35: 35: 20: 10 v/v
Alanina
Rf: 1,81/4,6=0, 391
Valina
Rf: 2,3/4,2=0,476
Jugo de naranja
Rf: 2,0/4,2 =0,476
Rf: 1,5/4,2= 0,357
Rf: 0,9/4,2= 0,214
Rf: 0,2/ 4,2= 0,048
Jugo de limn
Rf: 1/ 4,4= 0,227
Rf: 0,6/4,4= 0,136
Rf: 3/3 = 0,83 peridico
Valor terico Rf
Alanina: 0.38
Valina: 0.61
La fase mvil utilizada por nuestro grupo fue la letra a, pero en comparacin con los datos
obtenidos con otras fases mviles, teniendo como referencia los rf tericos, la fase mvil e
fue la tuvo mejor recuperacin.
En esta experiencia pudimos detectar la presencia de valina y probablemente alanina en el
jugo de naranja no as en el jugo de limn.

2. Valoracin cido base de un aminocido

En un matraz enlenmeyer de 250 mL, se coloco 25 mL de una solucin 0,1 M de un
aminocidoHCl. Se agregaron 70 mL de NaOH 0,1 M, en porciones de 1,0 mL y se midi
el pH cada vez. Construir una tabla de
valores y realizar un grfico de mL de OH (o equivalentes) vs pH medido. Identificar los
puntos importantes
del grfico, y relacionarlos con la especie protonada, neutra y desprotonada del aminocido.
ML NAOH 0,1 M
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39

PH
1,6
1,69
1,76
1,83
1,89
1,96
2,01
2,08
2,14
2,2
2,26
2,32
2,39
2,46
2,54
2,6
2,67
2,75
2,85
2,95
3,06
3,21
3,38
3,66
4,3
8,53
9,11
9,41
9,61
9,76
9,89
9,99
10,1
10,18
10,26
10,33
10,41
10,43
10,54
10,62

40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70

10,69
10,75
10,83
10,9
10,98
11,06
11,16
11,26
11,37
11,5
11,68
11,81
11,97
12,13
12,28
12,39
12,48
12,55
12,62
12,68
12,72
12,77
12,81
12,84
12,87
12,9
12,92
12,94
12,96
12,98
13

El rea protonada corresponde a mL 0 pH 1,60

El rea neutra corresponde al mL 24 pH 4,30
El rea desprotonada corresponde al mL 25 pH 8,5