Inmunologa Molecular

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Resea
Propiedades moleculares de las subclases de IgG humanas y sus implicaciones en el
diseo de anticuerpos monoclonales teraputicos contra enfermedades infecciosas

Vashti Irania, Andrew J. Guy, Dean Andrew, James G. Beeson, Paul A. Ramsland, Jack S.

Resumen
Anticuerpos monoclonales estn siendo desarrollados como teraputicos para complementar drogas y
vacunas, o para llenar el vaco donde ninguna droga o vacuna existe. Estos anticuerpos teraputicos
(ThAb) pueden ser especialmente importantes para enfermedades infecciosas en las cuales hay
resistencia antibitica, patognesis mediada por toxinas, o patgenos emergentes. La estructura nica
de los anticuerpos determina la naturaleza especfica de sus efectos o funciones, por lo que al
desarrollar ThAb, los efectos o funciones deseados necesitan ser considerados e integrados en los
procesos de diseo y desarrollo para asegurar la mxima eficacia y seguridad. Es crtico tener en
consideracin la subclase de los anticuerpos, y es notable que casi todo ThAb que est licenciado o
actualmente en desarrollo, utiliza una IgG1 como cimiento. Esta resea describe las principales
propiedades estructurales que varan entre cada subclase, cmo es que estas propiedades afectan la
inmunidad funcional, y discute los diferentes acercamientos usados para estudiar la respuesta de las
diferentes subclases a enfermedades infecciosas. Tambin analizamos los factores asociados a la
seleccin de las subclases de anticuerpos durante el diseo de las ThAb y subrayamos circunstancias
donde las diferentes propiedades de las subclases pueden ser beneficiosas al ser aplicadas contra
enfermedades infecciosas especficas. Estos enfoques son crticos para el futuro diseo de ThAb y para
el estudio de la inmunidad naturalmente adquirida y la inducida por vacunas.

1.

Introduccin

El descubrimiento de Emili von Behring de las antitoxinas para

la difteria, ttano y ntrax en 1901, llev eventualmente al
descubrimiento de los anticuerpos. Un siglo despus, el uso
de anticuerpos teraputicos (ThAb) se ha vuelto una de las
reas de mayor crecimiento de la industria farmacutica; aun
as, irnicamente, el desarrollo de ThAb monoclonales contra
enfermedades infecciosas ha sido lento, comparado con la
mayora de otros campos. Queda todava un considerable
vaco de conocimiento en la identificacin de los roles de
ThAb contra enfermedades infecciosas especficas, as como
las propiedades moleculares exactas requeridas para
asegurar que los ThAb induzcan las funciones deseadas,
evitando reacciones adversas. Es bien sabido que los
principales isotipos de inmunoglobulinas humanas tienen
funciones estructurales nicas que les permiten realizar
funciones inmunolgicas especficas (Fig. 1). En esta resea,
nos concentramos en IgG y sus subclases y resaltamos la
compleja relacin estructura-funcin, que es crtica para
desarrollar ThAb monoclonales ms seguros y efectivos
(TablaS1). Situamos este conocimiento en el contexto de
enfermedades infecciosas y resaltamos cmo los estudios
deberan evaluar ahora las mejores subclases de IgG o las
propiedades moleculares

requeridas
para
tratamientos
efectivos
enfermedades infecciosas especficas.

de

Actualmente, un amplio repertorio de ThAb monoclonales

estn licenciados, con cientos ms en desarrollo preclnico y
clnico. Estos ThAb son administrados para un amplio rango
de enfermedades, aunque la gran mayora son usados para
tratar cncer, desrdenes autoinmunes y trasplantes (Fig. 2A y
tabla S2). Es interesante notar que a pesar del claro papel que
los anticuerpos desempean contra muchas infecciones, slo
hay dos ThAb monoclonales licenciados que tienen como
objetivo agentes infecciosos (Palivizumab contra el virus
sincitial respiratorio humano y Raxibacumab contra Bacillus
anthracis) (Tabla 1). La mayora de ThAb licenciados son de
tamao completo en vez de fragmentos Fab (Fig. 2B). Los
beneficios de usar ThAb de tamao completo incluyen mayor
vida media en suero como resultado de la interaccin con
FcRn, efecto o funcin mejorados mediante el acoplamiento
con receptores Fc y, en algunos casos, una neutralizacin ms
efectiva comparada con el fragmento Fab correspondiente. La
mayora de los ThAb aprobados anticuerpos IgG humanizados
o completamente humanos. Anticuerpos quimricos o basados
en murinae (ratas) conllevan un riesgo incrementado de
reacciones anti murinicas en los pacientes., y ha habido un
movimiento general hacia el uso de un andamio humano en el
desarrollo de potenciales ThAb.

Mientras el uso de IgG intacta permite la seleccin de

subclases de IgG para desempear funciones
efectoras especficas, esto no es reflejado en el rango
actual de anticuerpos licenciados en los que la
mayora son IgG1 (Fig. 2D y Tabla S2).
Probablemente, esto es porque la IgG muestra funciones
efectoras potentes, siendo la ms predominante de las
subclases de suero, y fue el cimiento usado en los
primeros ThAb aprobados. Interesantemente, no existen
ThAb de IgG3 aprobadas, con posibilidad de que esto sea
debido a (i) una afinidad aumentada a protelisis debido a
una extensa regin bisagra, (ii) los muchos alotipos de
IgG3 entre diferentes poblaciones, (iii) que las IgG3 no
puedan ser purificadas con protena A, o (iv) la reducida
vida media en suero de la IgG3 comparada con otras
subclases (Tabla S1). En este anlisis, proveemos una
visin concisa del efector conocido de la IgG humana y
propiedades de subclases (Seccin 2) y discutimos cmo
est informacin puede ser usada en el diseo de ThAb
para enfermedades infecciosas (Seccin 3).

2. Propiedades moleculares de las

subclases de IgG relevantes
para anticuerpos teraputicos
Las IgG consisten de dos cadenas pesadas y dos cadenas
ligeras con las principales caractersticas moleculares
descritas en la Fig. 1B. En la IgG, la regin del fragmento de
unin al antgeno (Fab) contiene al paratope, y puede ejercer
diferentes efectos, haciendo posible las interacciones con el
antgeno (por ejemplo, bloqueando una protena de
reconocimiento del hospedero o inhibiendo una toxina/enzima
de un patgeno). Mientras tanto, la regin de fragmento
cristalizable (Fc) interacta con una variedad de molculas
accesorias para mediar funciones efectoras indirectas, tales
como citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos
(ADCC), fagocitosis celular dependiente de anticuerpos
(ADCP) y citotoxicidad dependiente de complemento (CDC)
(Fig. 3A y B). Las funciones efector mediadas por Fc son
especialmente importantes contra enfermedades infecciosas
donde respuestas celulares y de

complemento son importantes para la eliminacin

eficiente del patgeno.
Las propiedades estructurales y funcionales de las subclases
de IgG varan, as como su respuesta se perfila contra
diferentes enfermedades infecciosas, y estas diferencias
pueden ser utilizadas en el desarrollo de ThAb efectivos. A
pesar de que las cadenas pesadas comparten ms del 90%
de identidad en sus secuencias entre las subclases de IgG,
hay diferencias en los residuos expuestos en la superficie en
los dominios constantes (CH1, CH2 y CH3), as como una
variacin sustancial en la regin bisagra [hinge region] (Fig.
3C, D y Tabla S1). Es la estructura de bisagra la que confiere
muchas de las propiedades nicas para cada subclase de IgG,
como estabilidad, flexibilidad y distancias abarcadas por las
dos Fab y la Fc acomodadora. Considerablemente, algunas
reas del Fc y de la bisagra que difieren entre subclases de
IgG, claramente se sobreponen con residuos que se sabe
estan involucrados con unirse con receptores activadores e
inhibidores Fc (FcR), el receptor neonatal para IgG (FcRn) y
el componente complemento C1q (Fig. 3A and B). La
ocurrencia de diferencias en aminocidos clave en los sitios
de unin de estas molculas efectoras, ayuda a explicar las
diferencias observadas en las propiedades efectoras de las
subclases de IgG (Tabla S1). Esta informacin estructural y
molecular es importante al escoger una subclase como base
para un anticuerpo teraputico o para introducir cambios en
aminocidos clave para adaptar anticuerpos para un propsito
especfico.

2.1. Sitio de unin en GgG-Fc para FcyRs activadoras

e inhibidoras
La regin de fragmento cristalizable (Fc) de las IgG
interacta con diversos FcRs para estimular y
regular el flujo de mecanismos efectores. Hay cinco
receptores activadores, llamados FcRI (CD64),
FcRIIa (CD32a), FcRIIc (CD32c), FcRIIIa (CD16a)
y FcRIIIb (CD16b),y un receptor inhibidor, FcRIIb
(CD32b). Las subclases de IgG varan en su
habilidad de unirse a FcR, y esta diferencia en la
unin determina su habilidad para desencadenar un
gran rango de respuestas funcionales.

Fig. 1. Estructura de un anticuerpo y

nomenclatura. (A) Los potenciales
isotipos, subclases y alotipos de
inmunoglobulinas en humanos. Tanto
la letra como el cdigo son provistos
para cada alotipo.

(B)
Esquema
ilustrando
la
estructura bsica de un anticuerpo
y su nomenclatura asociada. La
cadena ligera (en marrn) consiste
de un dominio variable (VL) y uno
constante (CL), mientras que la
cadena pesada (en gris) consiste
de un dominio variable (VH) y tres
dominios constantes (CH1, CH2,
CH3). Uniones de disulfuro
intercatenarias en el rango de la
regin bisagra estabilizan el total
de la estructura del anticuerpo. Las
regiones
determinantes
de
complementariedad (CDR, rayas
cruzadas) determinan especificad
antignica. Los patrones de
glicosilacin
pueden
tambin
afectar la funcin (en verde).

Fig. 2 Estructura y dianas de anticuerpos teraputicos licenciados. La lista actual (2014) de

anticuerpos teraputicos que han sido licenciados para su uso en EE.UU. y la UE los clasifica
en (A) enfermedad para la que fueron aprobados inicialmente, (B) estructura del anticuerpo
(tamao completo o fragmentos Fab), (C) tipo de especie del anticuerpo (e.j. murina, quimrica,
humanisada, totalmente humana), y (D) subclase de anticuerpo. Estas figuras fueron hechas
con datos de la Sociedad de Anticuerpos (2014) y la tabla de datos usada para preparar estas
cifras est provista en los materiales suplementarios (Tabla suplementaria S2). *Panel A: otras
indicaciones incluyen prevencin de cogulos de sangre, prdida de masa sea, asma,
degeneracin macular, hemoglobinuria nocturna paroxstica y sndrome de Mackle-Wells.

Fig. 3 Entendimiento estructural para las interacciones Fc y las diferencias entre subclases de IgG. (A)
Un esquema generalizado de un anticuerpo con sitios de adherencia mayores [receptores Fc
(magenta), C1q (cian) y FcRn(morado)] superpuestos. (B) Estructura dristalina de la regin Fc de la
IgG1 (PDB: 1FC1) (Deisenhofer, 1981) con todas las diferencias de aminocidos entre subclases
resaltadas. Los residuos que difieren de la IgG1 estn en negrita. Los allotipos (alelos de un
anticuerpo) usados fueron IgG1 (G1m,17), IgG2 (G2m..) y IgG3 (G3m5*). (D) Alineacin de los
residuos de bisagra entre las cuatro subclases. Los residuos estn numerados usando el esquema de
numeracin de la UE; este esquema est basado en secuencias de IgG1 y por ende no asigna
nmeros para la mayor parte de la secuencia bisagra de IgG3 (por ser muy larga). Las figuras B y C
fueron construidas usando Accrelys Discovery studio visualizer (versin 3.5).
Por ejemplo FcRIIIa es el mayor receptor involucrado en la
activacin de ADCC y la IgG3 seguida inmediatamente de la
IgG1 muestran las afinidades ms altas por este receptor,
reflejando su actividad para inducir potencialmente ADCC.
La regin de unin de FcR en la IgG incluye partes de CH2 y
la bisagra, con la unin influenciada por glicosilacin en N297.
Residuos especficos que interactan con FcR en la IgG han
sido identificados por medio de cristalografa de rayos X de
complejos de IgG1-Fc con los diferentes FcRs. Muchos de
estos estudios han demostrado que hay residuos conservados
en la IgG involucrados en la unin con todos los

FcyRs. Sin embargo, otros residuos de IgG varan en su

interaccin con los diferentes FcyRs y algunos de estos
residuos difieren entre las subclases de IgG, lo que ayuda a
explicar los diferentes perfiles de unin de FcyR en las
subclases de IgG. Esto ha proporcionado una visin especfica
de los residuos requeridos para la interaccion de IgG con los
receptores involucrados en ADCC y ADCP. La posibilidad de
usar secuencias especficas de subclases para adaptar la
unin de diferentes FcyRs debe ser considerada cuando se
desarrolle la IgG teraputica con las funciones efectoras
dependientes de anticuerpos deseados.

2.2 Deposicin del complemento y CDC por IgG

En el clsico camino del complemento, IgG se une al
antgeno para formar complejos inmunes, que luego
interactan con C1 y desencadenan una jerarqua de
interacciones y reacciones enzimticas que pueden llevar
a la formacin del complejo de ataque a la membrana y
CDC, resultando en la liquidacin del patgeno. La
deposicin de C1q (unin a IgG-Fc), ocurre con IgG1, 2 y
3, con IgG3 siendo la ms efectiva; IgG4 no es capaz de
interactuar con C1q. Curiosamente, la eficiencia de
deposiciones de C1q no se correlacionan con la actividad
de CDC, en la que IgG1 es la subclase ms potente de
IgG. El fundamento estructural para esta diferencia entre
la unin de C1q y CDC por las subclases de IgG queda
an irresuelto. Aqu brevemente resumimos lo que es
conocido acerca de la interaccin de IgG y C1q.
El sitio de unin de IgG1 para C1q ha sido localizado en el
dominio CH2 y los residuos especficos implicados en la
interaccin se han estudiado usando mutagnesis de IgG1.
Mostramos la ubicacin del sitio de unin C1q en una
representacin diagramatica de IgG (Fig 3A) y la estructura
cristalina de IgG1-Fc (Fig 3B). Aunque cada IgG tiene dos
sitios de union para C1q en lados opuestos del Fc, slo un
sitio necesita ser implicado en la unin de C1q. Mientras la
estructura cristalina de IgG unida a C1q no se ha determinado,
la estructura cristalina de C1q se ha modelado con IgG1 y
sugiere una conformacin de C1q e IgG1 que tambin puede
implicar el fragmento Fab. Un estudio reciente usando
tomografa crio-electrn sugiere que el antgeno unido a IgG1
puede formar una estructura hexamerica que interacta
eficientemente con el hexmero C1q de una manera
reminiscente a la IgM polimrica.

2.3 La unin de IgG a FcRn determina la vida media y

el transporte de la placenta.
La interaccin de IgG con FcRn es importante en el contexto
del transporte placentario y la vida media en suero. El FcRn
tiene homologa estructural con MHC I y tambin participa en
la presentacin de antgenos. Los residuos responsables

de la unin de IgG a FcRn fueron aclarados utilizando

principalmente las estructuras cristalinas de FcRn de rata
o de humano, y se indican en una representacin de IgG y
en la estructura 3D de la estructura de IgG1-Fc (Fig 3B).
El sitio de unin FcRn en IgG se produce en la unin entre
los dominios CH2 y CH3, un rea rica en residuos de
histidina, en la cual H310 y H435 se considera actan
como sensor de pH en la unin de IgG.
De las subclases de IgG, IgG3 tiene la vida media ms corta
con aproximadamente 7 das, lo cual es debido en gran parte
a una arginina en la posicin 435 que sustituye a la histidina
presente en todas las otras subclases de IgG. Despus de su
absorcin por endosomas recicladores, la unin de IgG3 a
FcRn est competitivamente inhibida por IgG1, que tiene una
mayor afinidad de unin por FcRn; la IgG3 no unida, es
degradada en lugar de ser de vuelta a la circulacin, lo que
explica su vida media ms corta. Un alotipo de IgG3 (G3m15)
con H435 no tiene una vida media reducida, destacando la
importancia de residuos de histidina en la afinidad de unin en
general para FcRn. En consecuencia, la produccin de IgG3
humana con H435 debera conducir a candidatos Thab con
vidas medias largas in vivo similar a otras subclases de IgG.

Es interesante observar que aunque el FcRn tambin est

implicado en el transporte placentario, IgG2 se observa a
menudo como el menos eficiente en comparacin con
otras subclases. La razn del transporte placentario
ineficiente de IgG2 no se entiende claramente, pero la
proporcin de isotipos de cadena ligera ( o ) no es un
factor. La comprensin de las interacciones de los
receptores especficos que modulan el transporte
placentario, mas no su vida media en suero, puede ser til
cuando se produce ThAb para uso durante el embarazo.
2.4. La glicosilacin de IgG-Fc impacta en la funcin efectora
Todas las IgG contienen un sitio de glicosilacin conservados
en N297 en CH2, contribuyendo a la conformacin estructural
de la Fc requerido para la unin a FcR, FcRn y C1q (Fig 1B).
Los N-glicanos en Fc son estructuras complejas

principalmente di-antenarios con ncleo de 1-6 fucosilacin

del residuo N-acetil glucosamina (GlcNAc) unido a N297, pero
una gran variedad de glicoformas se han descrito en IgG
normal y recombinante. Estos patrones diferentes de
glicosilacin imparten cambios estructurales en la regin Fc,
que a su vez afecta a la funcin efectora de anticuerpos.
Aunque hay evidencia de que los patrones de glicosilacin
pueden diferir entre subclases, el impacto en las funciones
efectoras de IgG no ha sido bien caracterizado. La
glicosilacin de IgG tambin se ve afectada por un nmero de
factores incluyendo la edad, el embarazo, enfermedad
inflamatoria e infeccin. Les referimos a los lectores que
busquen revisiones detalladas en la glicosilacin de
inmunoglobulina para ms informacin.

El uso de ThAb para enfermedades infecciosas puede

implicar la transferencia pasiva de anticuerpos para la
profilaxis pre/pos exposicin o para el tratamiento. El
ThAb puede derivarse de suero humano agrupado o
anticuerpos monoclonales recombinantes. En esta
revisin, nos centramos en el uso de anticuerpos
monoclonales, pero brevemente discutimos terapias
sricas y preparaciones de anticuerpos policlonales ya
que se han utilizado para el tratamiento de enfermedades
infecciosas. Discutimos la relevancia de las subclases de
IgG en el contexto de las enfermedades infecciosas y
destacamos la adherencia actual de ThAb monoclonal a
los antgenos de organismos infecciosos.
3. Anticuerpos teraputicos para enfermedades infecciosas

2.5. Alotipos de subclases de IgG

La variacin alotpica (polimorfismos) en cadenas pesadas de
IgG (Gm) tiene el potencial de influir en las respuestas de IgG
inducidas tanto naturalmente o por vacunas. El nmero de
alotipos para cada subclase IgG vara: IgG1 tiene 4, IgG2
tiene 2, IgG3 tiene 13 e IgG4 no tiene ninguno (Fig 1A). Estos
alotipos de IgG han sido en ocasiones asociados a una mayor
proteccin contra ciertas enfermedades. Es importante
destacar que se ha sugerido que el alotipo de un ThAb puede
contribuir a la resistencia a la terapia asociada a respuestas
inmunes anti-Thab. Hasta la fecha, slo unos pocos estudios
han investigado claramente los efectos del desajuste del
alotipo en el desarrollo de respuestas anti-Thab. En estos
estudios, no hubo asociacin significativa entre el alotipo de
IgG y la aparicin de respuestas de anticuerpos antimonoclonales. Sin embargo, se necesita ms investigacin
para conclur de forma segura que un alotipo no influye en las
respuestas anti-Thab, sobre todo porque relativamente pocos
alotipos se han probado en la clnica.

2.6. La subclase IgG y la ingeniera de Fc

La ingeniera de Fc ha sido importante para el desarrollo de
anticuerpos teraputicos con actividad potente y especfica,
as reduciendo tanto la dosificacin y los efectos secundarios
potenciales. La comprensin de las diferencias entre las
subclases de IgG se ha utilizado en la produccin de Fc y los
estudios han demostrado que la introduccin de residuos
especficos de una subclase a otra puede transformar ciertas
funciones efectoras, mientras que conserva las dems. Los
ejemplos incluyen la produccin de IgG2 con residuos de IgG4
para la extripacin de las funciones efectoras o la produccin
de IgG3 con residuos procedentes de otras subclases para
aumentar su vida media. Este enfoque se complementa con
otros mtodos tales como la evaluacin de los mutantes de
alanina, mtodos de cribado de alto rendimiento
computacionales o la resolucin de la estructura de los
dominios Fc mutados. Estos enfoques de ingeniera Fc son
pertinentes en el contexto de las enfermedades infecciosas,
como la funcin efectora de anticuerpos especficos es a
menudo crtica en la eliminacin eficiente del patgeno. Los
anticuerpos de Fc tambin se han modificado para eliminar los
sitios de protelisis bacteriana, que se cree es un modo de
evasin inmune de ciertos patgenos. El amplio alcance y las
posibilidades de la ingeniera de Fc han sido revisados en
detalle en otra parte.

3. Anticuerpos teraputicos
enfermedades infecciosas

para

Preparaciones Thab policlonales usados comnmente

consisten en fracciones de inmunoglobulinas purificadas
de cientos a miles de donantes y se entregan por va
intravenosa (IGIV), intramuscular (IMIG) o subcutnea
(SCIG). Nos centramos en el uso de IgG agrupado para
condiciones infecciosas especficas, aunque tambin se
ha utilizado como una transfusin para pacientes con
enfermedades
de
inmunodeficiencia
primaria
o
enfermedades inflamatorias o autoinmunes. Las
principales enfermedades infecciosas que se utiliza IgG
combinada son el ttanos, la hepatitis A, la hepatitis B, el
sarampin, la rubola, la rabia, la varicela, el virus
respiratorio sincitial y el citomegalovirus. Productos
especficos a la enfermedad a veces se enriquecieron
mediante la agregacin de anticuerpos de individuos con
ttulos altos a estos antgenos de enfermedad.
La naturaleza policlonal de IgG combinada permite la
focalizacin de mltiples eptopos (determinante antignico),
lo que es ventajoso en el tratamiento de ciertas enfermedades
infecciosas. Sin embargo, esto crea desafos con
estandarizacin a travs de lotes, aumento de costos,
potencial de contaminacin y la falta de eficacia debido a la
dilucin de anticuerpos funcionales. Un enfoque alternativo es
usar anticuerpos monoclonales dirigidos a eptopos relevantes
y que estn diseados con los cimientos de subclases, que
median la respuesta efectora deseada. Los anticuerpos
monoclonales tienen la ventaja adicional de estar
estandarizados, pueden ser producidos en masa y tienen un
bajo riesgo de contaminacin. Los anticuerpos monoclonales
teraputicos pueden ser particularmente tiles para
aplicaciones tales como la fiebre del dengue, en los que
actualmente no hay medicamentos o vacunas antivirales
autorizadas o licenciadas, y el tratamiento es principalmente
de apoyo. Los anticuerpos monoclonales seran favorables, ya
que podran ser seleccionados para dirigir la neutralizacin de
eptopos comunes en los cuatro serotipos del virus del
dengue. Mas an, la preocupacin por el aumento de la
patognesis impulsado por la mejora dependiente de
anticuerpos (mediado por las interacciones Fc:FcR) podran
ser superados por los anticuerpos monoclonales con
cimientos de IgG4 o mutaciones para eliminar la unin a
FcRs.

3.2 Relevancia de las

enfermedades infecciosas

subclases

de

IgG

en

Las interacciones diferenciales de las cuatro subclases de IgG

con diversas molculas efectoras inmunes sugiere roles
especficos para cada subclase durante una infeccin natural.
Esto es reflejado en las caractersticas de perfiles de

subclases observados en individuos despus de la exposicin

a agentes infecciosos. En este contexto, las respuestas de las
subclases pueden diferir de acuerdo con el patgeno, el
antgeno, o incluso el eptopo (discutido en la Seccin 4.1). La
importancia de las subclases de IgG en las enfermedades
infecciosas es apoyada tambin por el estudio en individuos
con ciertas deficiencias en estas subclases de IgG. Las
deficiencias selectivas en subclases estn entre las cuatro
deficiencias inmunitarias ms comunes en pediatra. Los
sndromes ms comunes observados clnicamente han sido
aquellos en las que la deficiencia de IgG2 se asocia con un
mayor riesgo de infecciones, causadas por bacterias
encapsuladas; y la deficiencia de IgG3 se asocia con
infecciones respiratorias recurrentes. Sin embargo, estos
estudios describen la asociacin y no necesariamente
causalidad, y pueden ser confundidos con ciertas deficiencias
de subclases de IgG que se producen en combinacin con
otras inmunodeficiencias. En consecuencia, las respuestas de
las subclases de IgG pueden afectar la inmunidad a
patgenos y esto debe ser investigado ms a fondo para
avanzar en el desarrollo de ThAb especialmente en
enfermedades infecciosas.

3.3 ThAb monoclonal

infecciosas en desarrollo

en

las

enfermedades

Actualmente, slo hay dos ThAb monoclonales

autorizados para su uso contra las enfermedades
infecciosas, con aproximadamente 36 etapas preclnicas y
clnicas de desarrollo. Estos ThAb tienen como objetivo
aproximadamente a 14 especies diferentes de virus y
bacterias, mientras solo 2 tienen como objetivo hongos y
ningno a organismos parasitarios. Los que estn en
desarrollo tienen como objetivo organismos similares a los
de los productos IgG humano agrupados existentes,
reflejando el paso de productos a base de sangre hacia
anticuerpos monoclonales recombinantes. Adems, las
combinaciones de anticuerpos monoclonales para el
mismo organismo estn siendo evaluados para aumentar
su eficacia y para prevenir el escape de organismos
mutados que pueden causar resistencia (Tabla S3).
Curiosamente, casi todos los ThAb en desarrollo se basan
en el cimiento de IgG1 humano con una la ausencia de la
mayora de las otras subclases de IgG (Tabla 1).
El uso de ThAb monoclonal se pueden aplicar a una amplia
gama de patgenos y marcos clnicos (Tabla 2). Esto incluye:

(1) la configuracin de un organismo especfico para

tener esporas, toxinas o biopeliculas como objetivo
(ecosistema microbiano);

Tabla 2
Situaciones en las que ThAb sera til contra enfermedades infecciosas.
Situacin
Organismo especifico
Patognesis a travs de esporas
Patognesis a travs de la toxina
Formacin de biopelculas
Entorno clnico
Ajustes nosocomiales / iatrognicas
Resistencia a las drogas
Epidemia / brotes pandmicos
Bioterrorismo
Enfermedades emergentes
En nios pequeos
En individuos inmunocomprometidos
Las infecciones en los bebs prematuros
Profilaxis en personas de alto riesgo
Las infecciones en pacientes con
trasplante
En la transmisin maternoinfantil de un
enfermedad
Terapia adjunta para el tratamiento de
enfermedad grave
La falta de otros tratamientos
Vacunas / medicamento no est disponible
Aumente la ventana teraputica de
antibiticos
Publique profilaxis de exposicin

Ejemplo
Bacillus anthracis
Escherichia coli (toxina Shiga)
Pseudomonas aeruginosa

Clostridium difficile
Staphylococcus aureus (VRSA)
Virus del bola
Bacillus anthracis
Nipah o virus Hendra
Virus sincitial respiratorio
Retinitis por citomegalovirus en
Pacientes con VIH
Staphylococcus aureus
Virus de la gripe
Hepatitis C
Virus VIH
Plasmodium falciparum
Virus Marburg
Bacillus anthracis
virus de la rabia

(2) entornos clnicos en los que puede haber brotes

nosocomiales / iatrognicos, resistencia a los medicamentos,
brotes pandmicos, ataques bioterroristas, enfermedades
infecciosas emergentes, y uso en grupos de alto riesgo o en
enfermos graves; (3) cuando hay una falta de opciones de
tratamiento disponibles; y (4) como terapias adjuntas que
tienen funciones anti-inflamatorias o inmunomoduladoras.
(Esto podra incluir ThAb contra TNF y otros mediadores
inmunolgicos en humanos y no se analiza en esta revisin).
Algunas de estas aplicaciones se ilustran mediante el uso
autorizado de ThAb contra la toxina de B. anthracis. La B.
anthracis es una bacteria gram positiva, forma esporas,
productora de toxinas, que representa una amenaza
bioterrorista. Los ThAb contra la B. anthracis

podran ser particularmente tiles, porque un ThAb tiene una

vida media ms larga que los antibiticos y los antibiticos
slo se dirigen a las bacterias, mas no a la toxina, y requieren
un tratamiento de 60 das que plantea retos importantes para
su cumplimiento. Adems, la vacunacin requiere dosis
repetidas por aproximadamente 4 semanas para inducir un
anticuerpo eficaz.
Claramente, ThAb no tienen aplicacin para todas las
enfermedades infecciosas. En los casos donde hay un
beneficio teraputico potencial, las ventajas y desventajas
relativas de ThAb deben ser consideradas y sopesadas contra
opciones teraputicas alterativas (Tabla 3).En muchos casos,
los factores que son ms probables de limitar

aplicaciones para las ThAb incluyen: (1) la caracterizacin

especfica de Ab monoclonal con respecto a objetivos de
los eptopos y las respuestas efectoras funcionales; (2) los
costos de desarrollo y produccin; (3) la necesidad de la
administracin parenteral; y (4) la capacidad de ofrecer un
nivel suficiente de ThAb de mxima efectividad. La
seleccin de las subclases de IgG en el desarrollo de
ThAb es a menudo infravalorado, pero puede tener
implicaciones importantes para asegurar que se obtengan
respuestas funcionales, los efectos adversos se
minimicen, y la vida media del anticuerpo se optimice.

4. Seleccin de subclases de IgG para las ThAb

contra enfermedades infecciosas.
4.1 Subclases y respuestas natural inmune
La exposicin a la mayora de los microorganismos conlleva a
la induccin de una respuesta por anticuerpos, muchas de las
cuales mediarn proteccin clnica, pero otras son no
funcionales y simplemente reflejan la exposicin. En ambos
casos, estas respuestas adquiridas naturalmente van a ser,
con frecuencia, altamente sesgadas con respecto al isotipo y

la subclase. Entender las caractersticas de esta respuesta

adquirida naturalmente es el primer paso en la seleccin de la
subclase apropiada para un efectivo ThAb. El sesgo en la
subclase IgG que ocurre para diferentes microorganismos ha
sido demostrado por la respuesta de la IgG a polisacridos
bacterianos, lo que indica una predominancia de IgG2, con
reducidas cantidades de IgG1 e IgG3 (Chudwin et al., 1987;
Islam et al., 1995). En contraste, la respuesta de anticuerpos
contra VIH, el virus del bola, Coxiella burnetii (fiebre Q) y
plasmodium falciparum (malaria), han demostrado contener
principalmente IgG1 e IgG3 (Camacho et al., 1995; Leroy et
al., 2001; Raux et al., 2000; Richards et al., 2010), mientas que
las
respuestas
a
Schistosoma
mansoni
son
predominantemente de IgG4 (Boctor and Peter, 1990).
Adems, se ha observado diferencias en las respuestas de las
subclases segn la edad y el gnero (Perez-Perez et al., 2010;
Simon et al., 2013), que pueden diferir para diferentes
antgenos del mismo patgeno o diferente dominio del mismo
antgeno (Richards et al., 2010; Stanisic et al., 2009).

Este conocimiento de las respuestas de subclases

adquiridas naturalmente puede, entonces, ser utilizado en
ensayos funcionales para determinar su posible
significancia en la induccin de la inmunidad protectora.

Tabla 3
Ventajas y desventajas de desarrollar ThAb contra enfermedades infecciosasa
Ventajas

Alta especificidad
No afecta la flora normal
Poca toxicidad
Funciones biolgicas dirigidas que pueden incluir
neutralizacin, ADCC, ADCP o CDC
Variedades de isotipos y subclases opcionales para
desarrollar ThAb con las funciones deseadas
Acta sinrgicamente con antimicrobianos
Provisin rpida de inmunidad pasiva comparada
con los largos periodos requeridos para las
respuestas inducidas por vacunas
Conjugar toxinas o molculas teraputicas con
ThAb para dirigir estas respuestas de manera ms
precisa

Desventajas

Requiere conocimiento detallado de la

patognesis de los microorganismos, eptopos
protectores y respuesta inmune efectiva

Puede no reconocer mutantes virales de escapeb u

organismos con antgenos polifrmicos.

Costo de produccin, almacenamiento y

despacho; adems del riesgo de contaminacin.

Requiere administracin sistemtica (parenteral,

subcutnea, IV o intramuscular)

Requerimiento para administrar cantidades

teraputicas de ThAb

El ThAb debe ser administrado tempranamente

durante la infeccin para una mxima eficacia.

ADCC: citotoxina celular dependiente de anticuerpos; ADCP: fagocitosis celular dependiente de anticuerpos; CDC:
citotoxicidad dependiente de complemento
a
.
Tabla resumida usando lecturas de Casadevall et al. (2004).
b
.
Los combinados con diferentes monoclonales pueden compensar esto.

4.2. Valoracin funcional de las subclases aisladas de

la respuesta inmune natural:
Discriminar entre anticuerpos que reflejan exposicin y
aquellos que median la proteccin funcional puede ser
desafiante, pero el uso de ensayos funcionales patgenoespecficos in vitro puede ser informativo. Muchos campos
que estudian microorganismos dependen solo de un puado
de ensayos funcionales aceptados. (por ejemplo, ensayo de
neutralizacin para influenza o ensayo de inhibicin de
crecimiento para malaria), y se necesitan ms ensayos
funcionales para usar en valoraciones sistemticas de las
funciones de los anticuerpos. Estos ensayos sern luego
comparados con los resultados clnicos para determinar si las
respuestas medidas mediaron proteccin in vivo. Los ensayos
funcionales bien validados pueden ser usados posteriormente
para valorar la significancia de la subclase IgG al purificar los
anticuerpos especficos de esa subclase.

Por ejemplo, en un estudio reciente se compar una subclase

purificada de anticuerpos en un ensayo de neutralizacin del
virus del Herpes Simplex, y se determin que IgG3 e IgG4
tienen la mayor capacidad de neutralizar el virus incluso
cuando no fueron la subclase predominante (Mathiesen et al.,
1988). Estudios similares para el VIH purificaron IgG1 e IgG3 y
compararon la habilidad de los anticuerpos para neutralizar el
virus aislados de muestras individuales o en conjunto con
mltiples individuos (Cavacini et al., 2003; Scharf et al., 2001).
Curiosamente, IgG3 demostr ser ms efectivo que IgG1 en la
neutralizacin del VIH-1 cuando se usaron muestras
conjugadas, pero esto no se evidenci en muestras
individuales, indicando que la especificidad del eptopo
tambin juega un papel importante en la neutralizacin. Un
estudio adicional sobre las respuestas contra el enterovirus 71
humano us fracciones especficas de subclases purificadas
de IgG a partir de inmunoglobulinas agrupadas y

encontr que las fracciones de IgG1 e IgG2 son ms efectivas

en la neutralizacin, y que IgG3 conllevaba a una infeccin
aumentada (Cao et al., 2013). Estos estudios resaltaron el
valor potencial de la purificacin de subclases especficas del
suero de individuos infectados naturalmente y el estudio de
estos anticuerpos en ensayos funcionales para entender mejor
su contribucin a la proteccin clnica o a la patogenia de la
enfermedad. Estudios como estos tambin necesitan ser
complementados con experimentos en donde variantes en el
cambio de subclases son generadas y valoradas en ensayos
funcionales.

4.3 Variantes en el cambio de subclases:

Las variantes en el cambio de subclases usan los mismos
dominios variables, pero son expresadas en los cimientos de
cadenas pesadas de las diferentes subclases. Entonces, las
variantes en el cambio de subclases son anticuerpos monoclonales
que se unen al mismo epitopo, permitiendo la contribucin de las
diferentes subclases evaluadas en ensayos funcionales patgenoespecficos in vitro y, en modelos in vivo, para determinar las
diferencias en su funcin efectora.

Las variantes en el cambio de subclases han sido evaluadas

usando tanto subclases humanas como murinae para: (1)
virus incluyendo VIH (Cavacini et al., 1995; Kunert et al., 2000;
Liu et al., 2003; Miranda et al., 2007), virus de la fiebre
amarilla (Schlesinger and Chapman, 1995; Schlesinger et al.,
1993), virus del Nilo Occidental (Mehlhop et al., 2007), y virus
de Varicela Zoster (Lloyd-Evans and Gilmour, 2000);
(2) bacterias incluyendo Staphylococcus aureus (Brown et al.,
2009; Kelly-Quintos et al., 2006; Varshney et al., 2014),
Streptococcus de grupo A(Cooper et al., 1991, 1993), B.
anthracis (Abboud et al., 2010; Hovenden et al., 2013),
Pseudomonas aeruginosa (Pollack et al., 1995; Schreiber et
al., 1993), y Escherichia coli (Akiyoshi et al., 2010; Oishi et al.,
1992; Pelkonen and Pluschke, 1989); (3) hongos incluyendo
Cryptococcus neoformans (Sanford et al., 1990; Yuan et al.,
1995); y (4) parsitos como P. falciparum
(Lazarou et al., 2009). Estos estudios de variantes en el
cambio de subclases han utilizado anticuerpos humanos, de
ratones y ratas; un resumen de las variantes en el cambio de
subclases humanas se muestra en la tabla 4. En ciertas
instancias, estos estudios han indicado claras diferencias
entre subclases en la mediacin de la neutralizacin del VIH
(Cavacini et al., 1995; Miranda et al., 2007), fagocitosis por
opsonizacin de S. Aureus (Kelly-Quintos et al., 2006), y en
estudios funcionales con P. aeruginosa (Eichler et al., 1989;
Schreiber et al., 1993), E. coli (Oishi et al., 1992), virus de la
fiebre amarilla (Schlesinger et al., 1993), virus de varicela
zoster (Lloyd-Evans and Gilmour, 2000) y Cryptococcus (Yuan
et al., 1995, 1998). En otras, el cambio de subclases no
demostr tener mayor efecto en el resultado de los estudios
funcionales (Bachmann et al., 1997; Brown et al., 2009;
Cavacini et al., 1995; Kelly-Quintos et al., 2006; Kunert et al.,
2000; Liu et al., 2003; Sanford et al., 1990). Esto sugiere que
la subclase de ThAb no es siempre crucial y que otros
factores, como los niveles de anticuerpos, tambin pueden ser
importantes. (Bachmann et al., 1997). Un inconveniente en la
valoracin de las variantes en el cambio de subclases es que
las subclases de ratones y otros animales no son equivalentes
directos de las humanos debido a la diversificacin de IgG en
subclases despus de la especiacin (Butler, 2006). Por lo
tanto, las diferencias observadas en las funciones de las
subclases especificas obtenidas de modelos animales no
pueden ser inferidas directamente en humanos (Mestas and
Hughes, 2004. Por ejemplo, la IgG de murinae es una
respuesta prominente para muchos patgenos, y la mayora
de anticuerpos monoclonales murinos son IgG1, pero el IgG1

murino no se involucra con FcyRs activantes o el

complemento en ratones. Sin embargo, interacciones y
mecanismos efectores determinados para las subclases
de IgG humanos y sus sistemas efectores (FcyRs, FcRn y
C1q humanos) son relevantes en el desarrollo de ThAb
para tratar enfermedades infecciosas

4.3.1 El uso de modelos murinos para guiar el

desarrollo de anticuerpos teraputicos
A pesar de la dificultad de transferir los descubrimientos de
estudios de variantes de cambio de subclase murinos a
humanos, tales estudios pueden ser tiles en el desarrollo de
ThAb al incrementar el conocimiento de los mecanismos
protectores del sistema inmune y por su aplicacin en
modelos animales in vivo. Ejemplos incluyen estudios murinos
que han indicado que ThAb debe incluir una funcin FcyR
para efectivamente inducir la neutralizacin de la toxina del
anthrax y que inducir fagocitosis opsonica es ms importante
que la actividad mediada por el complemento para protegerse
contra C. neoformans.

4.3.2. Funciones especficas de subclases varan de

acuerdo a las caractersticas del eptopo
Identificar eptopo objetivos que median la inmunidad
funcional es claramente un componente clave en el desarrollo
de una ThAb. De forma interesante, el impacto de subclases
de anticuerpos en tales eptopos funcionales puede variar
dramticamente entre eptopos, incluso dentro de los mismos
organismos. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales IgG3
humanos que tienen por objetivo gp120 han mostrado tener
una habilidad neutralizadora mayor para VIH que sus
contrapartes en IgG1, pero tales diferencias de subclase no
fueron encontradas en anticuerpos monoclonales contra gp41.
La relacin entre el objetivo especfico de un eptopo y la
subclase de anticuerpos tambin depende probablemente en
la densidad de los eptopos y la flexibilidad de diferentes
subclases de anticuerpos para interactuar con dichos
eptopos. Por ejemplo, estudios usando variantes de cambio
de subclase contra P. aeruginosa y el grupo A streptococcus
sugiere que la densidad antignica influencia fuertemente la
habilidad de algunas subclases de anticuerpos para unirse
efectivamente, por tanto resaltando la importancia de
investigar respuestas de subclases usando ensayos que
reflejen la conformacin nativa antignica y su densidad.
Existe tambin evidencia que el efecto funcional de diferentes
subclases puede variar de acuerdo a la cepa del organismo,
indicando que es importante tambin investigar una variedad
de cepas cuando se desarrolle ThAb.

4.3.3. Evaluando las respuestas de subclases usando

ensayos funcionales in vitro
Como fue mencionado anteriormente, existe necesidad para
un grupo mayor de ensayos funcionales que pueda evaluar
sistemticamente el rol de subclases de IgG para muchas
enfermedades infecciosas. El uso de tales evaluaciones
funcionales necesitar ser combinado con la validacin de
estas evaluacin como indicadores de una proteccin in vivo
real. Estudios en respuestas de subclases murinas contra C.
neoformans han demostrado fuertes discrepancias entre
ensayos funcionales in vitro y modelos in vivo. Caudn
Oposible, ensayos funcionales deben reflejar el mecanismo
probable de la actividad mediada por anticuerpos in vivo. Por
ejemplo, la proteccin in vivo contra la E. coli es asociada

con la limpieza mediada por el complemento; por tanto ThAb

debera ser evaluada usando ensayos funcionales que reflejen
este mecanismo. Sin embargo, P. aeruginosa es capaz de
resistir la lisis mediada por el complemento, y por tanto, un
ensayo del complemento no predecira adecuadamente la
proteccin in vivo. Ensayos funcionales bien-validados pueden
tambin ser usados para determinar si diferentes subclases de
IgG tienen el potencial de interferir

con accin de otras subclases de IgG, por ejemplo,

bloqueando anticuerpos. De forma similar, los ensayos
funcionales pueden ser usados para evaluar la habilidad
de algunos anticuerpos de tener efectos dainos al
aumentar la infeccin, como es observado en el virus del
dengue, el virus del oeste del Nilo, VIH, y hongos
incluyendo Candida albicans y C. neoformans.

Tabla 4: Ejemplos de estudios usando variantes de cambio de subclases humanas de IgG

5. Conclusiones
Existen ms de 40 ThAb con licencia pero solo dos que
tienen como objetivos patgenos asociados con
enfermedades infecciosas. Casi todos los ThAb licenciados,
as como aquellos en desarrollo clnico, tienen dominio Fc
IgG1 humano. La diversidad de respuestas de subclase
contra infecciones naturales y la estructura nica y funcional
de las 4 subclases de IgG disminuye la importancia de
considerar las propiedades de subclases cuando se
desarrolla y se prueba ThAb, especialmente contra
enfermedades infecciosas. A pesar de que existen
aproximadamente 36 nuevos ThAb contra enfermedades
infecciosas en desarrollo preclnico, la investigacin en este
campo ha sido lenta comparada con el desarrollo en cncer y
autoinmunidad. Existe una multitud de conformaciones
potenciales para la aplicacin de ThAb contra enfermedades
infecciosas y los pros y cons deberan ser cuidadosamente
evaluados para cada conformacin teraputica. Conocimiento
de los perfiles de cada subclase contra los patgenos y
antgenos de inters sera

beneficioso. Esta evaluacin debera incluir el estudio de

las respuestas de anticuerpos naturalmente adquiridas,
anticuerpos derivados del suero, y variantes de cambio de
subclase en estudios in vitro funcionales relevantes y
estudios in vivo donde sea apropiado. Tales estudios han
indicado que las subclases de IgG individuales pueden
tener efectos funcionales diferentes contra diferentes
patgenos, con ninguna subclase siendo singularmente
importanteal mediar proteccin contra enfermedades. Ms
an, la naturaleza del eptopo especfico es
extremadamente importante para respuestas efectivas y
funcionales, y la densidad del eptopo o cepa patgena
usada en el ensayo puede afectar profundamente los
resultados. Por ende es ms importante examinar un
rango de estos factores. Finalmente, el conocimiento
obtenido en los estudios de cambio de subclase,
combinado con un entendimiento molecular de las
propiedades de las subclases de IgG permitir la
preparacin y desarrollo de ThAb monoclonales altamente
efectivos especficos para patgenos.