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LIGAO GENTICA

(LINKAGE)
Aguinaldo Luiz Simes
15/set/2014

INTRODUO
Segundo o que se convencionou chamar de primeira lei de MENDEL, os pares de genes
alelos segregam-se, isto , separam-se durante a formao dos gametas. Ao estudar dois
lcus concomitantemente, MENDEL observou que a segregao dos alelos de um lcus
no interferia na segregao dos alelos do outro, o que tem sido chamado de lei da
segregao independente. O que ser aqui apresentado demonstra que este segundo caso
freqentemente no verdadeiro.
Considerando-se dois lcus (A e B) independentes, isto , localizados muito distantes
entre si ou em cromossomos diferentes e cada um com dois alelos (A1, A2 e B1, B2,
respectivamente), os descendentes de um cruzamento A1A1B1B1 A2A2B2B2 sero
exclusivamente duplo heterozigotos A1A2B1B2. Os indivduos da gerao parental (F1)
produzem apenas um tipo de gameta A1B1 ou A2B2 e os da gerao seguinte (F2) podem
produzir quatro: A1B1, A2B2, A1B2 e A2B1. Se dois indivduos F1 forem cruzados entre si
podero ser produzidos 16 tipos de descendentes (Quadro 1) classificados em nove
classes genotpicas. Se houver dominncia, todos os F 2 se distribuiro em apenas quatro
classes fenotpicas (Quadro 2)
QUADRO 1. Gentipos possveis na
descendncia de um cruzamento entre dois
indivduos duplo heterozigotos (A1A2B1B2 x
A1A2B1B2).
GAMETAS
FEMININOS

GAMETAS MASCULINOS
A1B1

A1B2

A2B1

A2B2

A1B1

A1A1B1B1

A1A1B1B2

A1A2B1B1

A1A2B1B2

A1B2

A1A1B1B2

A1A1B2B2

A1A2B1B2

A1A2B2B2

A2B1

A1A2B1B1

A1A2B1B2

A2A2B1B1

A2A2B1B2

A2B2

A1A2B1B2

A1A2B2B2

A2A2B1B2

A2A2B2B2

Se os lcus forem independentes, os quatro tipos de gametas descritos no Quadro 1 tero


igual probabilidade de ocorrncia (1/4) e cada um dos tipos em F2 ter freqncia igual a
1/16. Em conseqncia, as classes fenotpicas, se houver dominncia, ocorrero em F2
na proporo 9:3:3:1.

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QUADRO 2. Freqncias das classes


genotpicas e fenotpicas na descendncia de
um cruzamento entre duplo heterozigotos
(A1A2B1B2 x A1A2B1B2). Obs: A1 e B1 so
dominantes.
CLASSES
GENOTPICAS

CLASSES FENOTPICAS

TIPO

FREQNCIAS

TIPO

FREQNCIAS

A1A1B1B1

1/16

A1B1

9/16

A1A1B1B2

2/16

A1B2

3/16

A2B1

3/16

A2B2

1/16

A1A2B1B1

2/16

A1A2B1B2

4/16

A1A1B2B2

1/16

A1A2B2B2

2/16

A2A2B1B2

2/16

A2A2B1B1

1/16

A2A2B2B2

1/16

Um mtodo de cruzamento bem mais simples, que resulta em menor nmero de


classes genotpicas/fenotpicas, analisa o cruzamento de um F1 (duplo heterozigoto =
A1A2B1B2) com um dos parentais (duplo recessivo = A1A1B1B1 ou A2A2B2B2). Apenas
quatro classes genotpicas e mesmo nmero de classes fenotpicas sero produzidas
(Quadro 3) em igual proporo, isto , para cada uma.

Quadro 3: Gentipos e Fentipos obtidos aps unio dos Gametas F1,


com o nico tipo de gametas (A2B2) produzindo duplo recessivo
A2A2B2B2.

GAMETAS F1

GAMETA
PARENTAL

GENTIPOS
F2

FENTIPOS
F2(*)

FREQS.
ESPERADAS

A1B1

A2B2

A1A2B1B2

A1B1

25 %

A1B2

A2B2

A1A2B2B2

A1B2

25 %

A2B1

A2B2

A2A2B1B2

A2B1

25 %

A2B2

A2B2

A2A2B2B2

A2B2

25 %

(*) considerando-se que haja dominncia em ambos os lcus.

Neste tipo de cruzamento, reconhece-se nos gentipos criados qual foi o tipo de gameta
fornecido pelo genitor duplo heterozigoto. Portanto, se os dois lcus segregam
independentemente, cada gameta ser produzido com igual freqncia (25%).

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GENES LIGADOS E RECOMBINAO


(CROSSING OVER)
As propores acima descritas so obtidas apenas quando a segregao de um lcus no
interfere na segregao do outro ou, em outras palavras, os lcus considerados so
independentes entre si. Nos trabalhos de Mendel so descritas apenas caractersticas
condicionadas por lcus independentes.
O exemplo a seguir poderia ser apresentado utilizando-se de nomenclatura genrica,
tal como no item anterior, mas ilustrativo descrever o caso real em que, no j distante
incio do sculo passado, se observou um inesperado desvio das propores em relao
quelas esperadas pela idia de independncia entre os lcus.
Algumas drosfilas, ao invs de apresentarem olhos de cor-vermelha normal,
apresentam olhos de cor marrom; outras apresentam asas anormais, com as pontas
curvadas para trs. O carter olho de cor marrom condicionado por um gene recessivo
bw e a cor vermelha normal determinada por um gene dominante bw+. possvel,
portanto, estabelecer-se uma linhagem constituda exclusivamente por moscas de olhos
de cor marrom, isto , homozigotas bw/bw. A asa anormal condicionada por um gene
recessivo arc e, portanto, pode-se tambm estabelecer uma linhagem em que todas as
moscas apresentam asa anormal isto , sejam homozigotas arc/arc. Ambos os caracteres
comportam-se de acordo com o esperado pela lei da segregao (primeira lei).
Portanto, o cruzamento entre moscas da linhagem selvagem (duplo homozigotas
normais bw+arc+/bw+arc+) com moscas da linhagem mutante (olho marrom e asa
arqueada, ou seja, duplo homozigotas recessivas bw arc/bw arc) produzem descendentes
exclusivamente duplo heterozigotos com olhos e asas normais bw+arc+/bw arc.
Cruzando-se uma fmea F1 bw+arc+/bw arc com macho de olho marrom e asa
arqueada, portanto duplo recessivo bw arc/bw arc, a fmea deve produzir quatro tipos de
gametas, a saber: bw+arc+, bw+arc, bw arc+ e bw arc os quais, aps a fuso com o nico
tipo possvel de gameta bw arc produzido pelo macho duplo recessivo, produzem quatro
fentipos (Quadro 4).
No cruzamento descrito do Quadro 4, apesar de terem sido obtidas as quatro classes
fenotpicas, suas freqncias foram muito diferentes das esperadas: o primeiro fentipo
apresentou uma porcentagem de 47,4%, o segundo e o terceiro, 2,6% e o ltimo, 47,4%.
Note-se que o primeiro fentipo semelhante ao exibido pela me enquanto que o ltimo
semelhante ao do pai e, por esta razo, so chamados fentipos parentais, enquanto que
o segundo e o terceiro fentipos representam uma "mistura" entre os fentipos da me e
do pai, razo pela qual so chamados de fentipos recombinantes.
Quadro 4. Descendncia de cruzamento teste entre fmea
duplo heterozigota e macho duplo homozigoto recessivo para
as caractersticas cor de olho e tipo de asa em drosfila.
GAMETAS
MATERNOS

GENTIPO DA
GERAO F2

FENTIPOS DA
GERAO F2

FREQNCIAS
OBSERVADAS

bw+arc+

bw+arc+/bw arc

Selvagem (olhos
e asas normais)

47,4%

bw+arc

bw+arc/bw arc

Olho normal,
asa arqueada

2,6%

bw arc+

bw arc+/bw arc

Olho marrom e
asa normal

2,6%

bw arc

bw arc/bw arc

Olho marromasa arqueada

47,4%

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Se ao invs de uma fmea F1, for utilizado um macho F1 duplo heterozigoto para o
cruzamento com uma fmea duplo recessiva, sero produzidas somente duas classes
fenotpicas correspondentes aos fentipos parentais, com 50% de freqncia para cada
uma. No h recombinao nos machos de drosfila.
A interpretao dada para estes fatos a de que ambos os genes, bw e arc, se
localizam prximos um do outro no mesmo cromossomo e, desta maneira, tendem a ser
herdados conjuntamente (no segregam independentemente) e so, por isso, chamados de
genes ligados (ou em linkage). Desta forma, no macho do segundo cruzamento, o
cromossomo com os genes bw+ e arc+ foi para um gameta e o outro cromossomo, com os
genes bw e arc foi para outro gameta, no havendo a formao de um gameta
recombinante bw+arc ou bw arc+. Isto explicaria o observado no segundo cruzamento,
mas o caso da fmea F1 do primeiro cruzamento em que foram produzidas as quatro
classes fenotpicas seria explicado pelas existncia, na meiose, de um rearranjo
cromossmico no progenitor heterozigoto, chamado crossing-over ou recombinao.
Lcus ligados, hapltipos, fase de ligao (acoplamento = cis,
repulso = trans)
Resumindo, lcus independentes (localizados em cromossomos diferentes) segregam-se
independentemente. Tambm segregam-se independentemente aqueles situados no
mesmo cromossomo (sintnicos) desde que estejam muito distantes entre si.
Entretanto, aqueles muito prximos, tendem a permanecer juntos na diviso meitica
e so, por isso, chamados de lcus ligados. Os alelos de lcus diferentes, mas sintnicos
(em um mesmo cromossomo), formam o que se chama de hapltipo. No exemplo dado no
Quadro 4, os quatro tipos de gametas correspondem a quatro hapltipos diferentes. Ao
considerar-se um indivduo duplo heterozigoto A1A2 e B1B2 e na ausncia de alguma outra
informao, no ser possvel saber quais os hapltipos presentes ou, em outras
palavras, no se conhece a fase de ligao (cis ou trans).
Frao de recombinao; unidade de mapa (cM)
Em 1911, STURTEVANT props que a freqncia de recombinantes entre dois genes
poderia ser considerada uma medida de distncia entre dois lcus: 1% de recombinantes
( = 0,01) igual a uma unidade de distncia, que ele denominou centiMorgan (cM) em
homenagem a MORGAN que alguns anos antes havia descrito o primeiro caso de ligao
(linkage), apresentado no Quadro 4. Neste caso, os lcus determinantes da cor dos olhos e
o tipo de asa em drosfila distam entre si 5,2 cM. o que representa a soma das
freqncias dos dois recombinantes (2,6% cada um).
A proporo de recombinantes em um cruzamento (no exemplo do Quadro 4 5,2%)
conhecida como frao de recombinao, geralmente designada por (teta, em grego) e,
por ser diretamente proporcional probabilidade de crossing entre os lcus considerados.
Esta proporo conhecida como distncia gentica entre lcus. Observe-se que no se
trata de distncia fsica entre eles. Considerando-se todos os lcus de uma espcie, foi
possvel a elaborao de um mapa gentico em que os lcus so alocados em um
diagrama de acordo com a distncia gentica entre eles e comparar com o mapa
cromossmico que corresponde ao posicionamento fsico.
No desenho dos mapas de ligao, empregada a unidade centimorgan (cM) que nada
mais que 100 . Portanto, a distncia gentica entre lcus medida por cM. As
relaes entre as unidades de mapa de ligao e o tamanho fsico no so lineares, mas
podem ser comparadas. A distncia fsica entre lcus medida pelo nmero de bases ou
pares de base (kb = quilobase: 1000 pares de bases; Mb = megabase: 1.000.000 pares de
base) . Em mdia, 1 cM corresponde a 1 Mb. Considerando que o genoma humano

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composto por aproximadamente 3,3 109 pb, a soma de todas as distncias genticas
de ~3300 cM.
Alguns lcus apresentam-se fisicamente muito prximos entre si, mas no no mapa
gentico, o que significa uma alta taxa de recombinao entre eles. So os chamados
pontos quentes. Tais pontos so mais freqentes nas mulheres, o que resulta em um
comprimento total de mapa de 4.200 cM no sexo feminino contra aproximadamente 3.200
cM no sexo masculino. A ocorrncia de crossing mais rara na proximidade dos
centrmeros e mais freqente nas regies telomricas.
Freqncia mxima de recombinao
Pelos dados apresentados no Quadro 4, conclui-se que na ausncia de recombinao
sero produzidos apenas dois tipos de gametas. Por outro lado, se todas as clulas
germinativas sofrerem permuta entre os dois lcus, sero produzidos quatro tipos de
gametas com a mesma freqncia, 25% cada um, e a soma das freqncias dos
recombinantes ser de 50%. Em outras palavras, quando se considera dois lcus
quaisquer, a freqncia de recombinao entre dois lcus de 50%, no mximo.

LIGAO GENTICA NA ESPCIE HUMANA


(traduo parcial do cap.6 de Methodology in Medical Genetics,
de A.E.H.Emery,1986)
Nos anos recentes, uma grande variedade de tcnicas forneceu grande quantidade de
informao sobre a localizao gnica no homem. Entretanto, a anlise de heredogramas
sempre ser de utilidade, particularmente na localizao dos genes que determinam
caractersticas que no se expressam em clulas em cultura e para medir a distncia
entre os lcus.
O mtodo adotadopara a determinao da ligao a estimativa por mxima
verosimilhana da frao de recombinantes (usualmente referida como ) baseada na
probabilidade relativa (PR) de que ocorra a famlia tal como ela se apresenta no estudo.
Este valor obtido calculando-se a probabilidade de se obter as vrias combinaes
possveis do carter em questo, assumindo-se que no haja ligao ( e
comparando-se com os valores obtidos variando-se o valor desde = zero at 0,5, isto :
PR = P (famlia, variando de zero a 0,5) / P (famlia, dado = 0,5)
Por convenincia, PR freqentemente expresso como seu logaritmo. O logaritmo decimal
(log10) da probabilidade relativa chamado log of the odds ou lod score (Morton, 1955). A
estimativa de por mxima verosimilhana pode ser obtida colocando-se em um grfico
a soma dos lod scores (ou as probabilidades relativas) para todas as famlias estudadas
contra vrios valores de (de 0,00 a 0,50): o valor de correspondente ao pico da curva.
Os lcus localizados no mesmo cromossomo so chamados sintnicos e os lcus
sintnicos que exibem uma frao de recombinantes menor do que 50% ( < 0,50) so
ditos ligados.
Ligao autossmica. Famlias com trs geraes.
Fase de ligao uma expresso que se refere ao fato de estarem os genes no mesmo
cromossomo (fase de acoplamento ou cis) ou em homlogos diferentes (fase de repulso ou
trans). Em famlias de trs geraes, a fase da ligao nos indivduos da segunda gerao
pode ser bvia pela simples inspeo do heredograma. Assim, na famlia da Figura 1,
onde os smbolos cheios representam distrofia miotnica (uma doena dominante) e os
alelos do sistema secretor so representados por Se (dominante e determina o carter
secretor, isto , determina o aparecimento das substncias ABH nas secrees) e se

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(recessivo e determinante do carter no secretor), pode-se constatar que II1 deve ser
heterozigoto para ambos os lcus e que tem os genes para distrofia miotnica e o carter
secretor em acoplamento. Portanto, na terceira gerao, os indivduos III2-6 so todos no
recombinantes, enquanto que III1 recombinante.
1

I
Secretor

No secretor
1

II
Secretor

No secretor

III
Secretor

No secretor No secretor

Secretor No secretor

Secretor

Figura 1. Famlia na qual segregam a distrofia miotnica (dominante) e o carter secretor.

Nesta situao, a frao de recombinantes 1/6 ou 0,17. De fato, o estudo de um grande


nmero de famlias nas quais puderam ser estudados o carter secretor e a distrofia
miotnica revelou um valor de prximo a 0,07.
Ligao autossmica. Famlias com duas geraes.
Quando esto disponveis informaes de apenas duas geraes de uma famlia, a medida
da ligao um pouco mais complexa e exige alguns recursos matemticos para sua
determinao. Se G e g so alelos do lcus principal (no caso, a doena) e T e t so alelos
do lcus teste (marcador gentico), ento se um indivduo com o gentipo GT/gt (isto ,
em acoplamento) pode produzir quatro tipos possveis de gameta: dois no recombinantes
(GT e gt) e dois recombinantes (Gt e gT). Se a freqncia de recombinantes , tem-se que:
freqncia de gametas no recombinantes

= 1-

portanto, freqncia de gametas GT ou gt

e a freqncia de gametas recombinantes ser

o que implica na freqncia de gametas Gt ou gT

= /2

(1 - )/2

Se estes dois lcus no estiverem no mesmo cromossomo (isto , no forem sintnicos) ou


se estiverem no mesmo cromossomo mas muito distantes entre si ( >0,5), haver igual
nmero dos quatro tipos de gametas.
Consideremos agora uma famlia na qual o grupo sangneo Lutheran e o carter
secretor estejam segregando. Os alelos Lutheran so Lua e Lub, sendo o primeiro
dominante (veja Figura 2).
Neste heredograma, a me deve ter o gentipo Lub se/Lubse e o pai deve ser Lua
Se/Lubse ou Lua se/LubSe; se o pai tiver o primeiro gentipo, as quatro primeiras
crianas sero consideradas no recombinantes (Figura.3).

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I
Lu a
Secretor

Lu b
No secretor

b
Lu
No secretor

a
Lu
Secretor

b
Lu
Secretor

II

Figura 2. Segregao do carter secretor e grupo sangneo Lutheran.

Neste caso, tem-se as seguintes probabilidades:


3 crianas Lub se/Lubse = ((1-)/2)3
1 criana Lub se/LuaSe = (1-)/2
1 criana Lub se/LubSe = /2
Portanto, a probabilidade de que uma famlia deste tipo exista, dado que o pai tem o
gentipo Lua Se/Lubse , ser de:
= ((1-)/2)3 (1-) / 2 (/2)
= (1-)4/32
I
a
b
Lu Se / Lu se

II

b
b
Lu se / Lu se

b
b
Lu se / Lu se

b
a
Lu se / Lu Se

No recombinantes

b
b
Lu se / Lu Se
Recombinantes

Figura 3. Gentipos da famlia da famlia da fig.2, considerando


um dos gentipos possiveis para o pai.

Consideremos agora a outra possibilidade, isto , quando o pai tem o gentipo


Luase/LubSe. Aqui, as primeiras quatro crianas so todas recombinantes e a ltima,
no recombinante (Fig.4).
I
a
b
Lu se / Lu Se

II

b
b
Lu se / Lu se

b
b
Lu se / Lu se

b
a
Lu se / Lu Se

Recombinantes

1
b
b
Lu se / Lu Se
No recombinante

Figura 4. Gentipos da famlia da famlia da fig.2, considerando


o outro gentipo possvel para o pai.

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Neste caso, tem-se as seguintes probabilidades:


3 crianas Lubse/Lubse = (/2)3
1 criana Lubse/LuaSe = /2
1 criana Lubse/LubSe = (1-/2
Portanto, a probabilidade de que esta famlia exista, dado que o pai tem o gentipo Lua
se/LubSe :
(/2)3 /2 (1 /2 = 4 (1 )/32
Neste ponto, o que se tem de decidir qual a probabilidade de se obter os fentipos
observados nas crianas sob duas condies diferentes: os genes do pai esto em fase de
acoplamento ou repulso. Desde que o acoplamento e a repulso so igualmente
provveis, a probabilidade de que exista uma dada famlia como esta dada pela mdia
aritmtica entre os dois valores obtidos considerando-se, primeiro, o acoplamento e,
depois, a repulso:
P

= 1/2 { [ (1-)4 /32]+[ 4(1-)/32] }

Se for assumido = 0,2, tem-se:


P0,2 = 0,001 300
E se for assumido = 0,5:
P0,5 = 0,000 976
Portanto, a razo entre as probabilidades ( PR ), quando = 0,2, ser:
= 0,001 300/0,000 976
= 1,3320
Este procedimento ento repetido variando-se de 0,0 a 0,5 , obtendo-se os valores da
tabela abaixo:
Grupo sangneo Lutheran / carter secretor: probabilidades relativas e lod scores para diferentes
valores de .
Valor de
Frequencia de recombinantes)

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

Probabilidade

0,001027

0,0013

0,001214

0,00105

0,000977

PR = Pi / P0,5

1,0512

1,3312

1,2432

1,0752

lod score (LOG10(PR)

0,022

0,124

0,095

0,031

0,00

As probabilidades relativas e respectivas fraes de recombinantes so colocadas em


grfico e, desse modo, obtida a estimativa de por mxima verosimilhana (Figura 5).
No exemplo dado, a estimativa de por este mtodo aponta um valor aproximado de 0,21.
De fato, o estudo de um grande nmero de famlias nas quais puderam ser estudados o
grupo sangneo Lutheran e o carter secretor indicou que o valor de de
aproximadamente 0,15.

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1,4

Probabilidade relativa (P )
R

1,2

1,0

0,8

0,6

0,4
= 0,21

0,2

0,0
0,10

0,20

0,30

0,40

0,50

Frao de recombinao
Figura 5. Probabilidades relativas de ligao para diversos valores da frao de recombinantes.

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