FUNDAMENTO DE HEMATOXILINA Y EOSINA

La Hematoxilina es un compuesto que se obtiene de la planta leguminosa

Haematoxylum campechianum, conocida tambin con el nombre de palo de
Campeche. Es un producto natural que al ser oxidado constituye una substancia de
color morado oscuro denominada hemateina.
Se utiliza en histologa para teir los componentes aninicos (cidos) de los tejidos, a
los que da una coloracin violeta. Tie intensamente los ncleos de las clulas, dado
que estos contienen cidos nucleicos ricos en radicales cidos.
Tal como se obtiene de la planta e incluso luego de sufrir el proceso de oxidacin, su
capacidad de tincin es muy limitada. Por lo tanto, debe combinarse con iones
metlicos, especialmente las sales de hierro (III) o aluminio (II), que actan como
mordientes.
Si bien la hematoxilina es una sal neutra, suele ser denominada como un colorante
bsico, ya que el componente cromgeno reside en el complejo catinico (bsico) de
la misma. Es de notar que la tincin histolgica por hematoxilina no indica tanto la
constitucin qumica de los componentes celulares, sino la densidad de cargas
elctricas negativas de los mismos
La mayora de las clulas y matrices extracelulares no poseen un color propio por lo
que su observacin directa al microscopio ptico no permite observar sus
caractersticas morfolgicas. Para poder observarlos se emplean colorantes,
sustancias dotadas de color que se unen de manera ms o menos especfica a
determinadas estructuras del tejido.
Las tinciones generales se usan habitualmente en los laboratorios de histologa para
obtener una visin general de las muestras de tejido. Normalmente combinan ms de
un colorante. La tincin ms comn es la que combina una sustancia como la
hematoxilina y el colorante cido eosina.

TIPOS DE FIJADORES
La fijacin se utiliza para: Abolir el metabolismo celular, impedir la degradacin
enzimtica de las clulas y los tejidos por autlisis (autodigestin), destruir los
microorganismos patgenos como las bacterias, los hongos o los virus, endurecer el
tejido como consecuencia de la formacin de enlaces cruzados o la desnaturalizacin
de las molculas proteicas.
El fijador de uso ms comn es la formalina, una solucin acuosa de formaldehdo al
37%, en diluciones variadas y en combinacin con otras sustancias qumicas y
amortiguadores (buffers). El formaldehdo preserva la estructura general de la clula y
de los componentes extracelulares al reaccionar con los grupos amino de las protenas
(con mucha frecuencia forma enlaces cruzados entre residuos de lisina). Dado que el
formaldehdo no altera en forma significativa su estructura tridimensional, las protenas
mantienen su capacidad de reaccionar con anticuerpos especficos. Esta propiedad es
importante en los mtodos de tincin inmunocitoqumica.
La solucin comercial estndar de formaldehdo amortiguado con fosfatos (pH 7) acta
con bastante lentitud pero penetra bien en el tejido. Sin embargo, el formaldehdo no
reacciona con los lpidos y, por lo tanto, es un mal fijador de las membranas.
FIJACION
Es un procedimiento cuya finalidad, al aplicarlo es detener la vida de las clulas e
impedir las modificaciones post morten que pueda sufrir la clula (procesos
autolticos), manteniendo la estructura morfolgica de clulas y tejidos sin que ocurran
cambios notables en ellos.
Esto se consigue inmovilizando (por coagulacin o precipitacin) las molculas
protenicas e inhibiendo principalmente las enzimticas hacindolas insolubles. Esta
accin garantiza la integridad de las clulas y tejidos; se efecta por mediante agentes
qumicos denominados fijadores.

LOS FIJADORES SE CLASIFICAN EN DOS GRANDES GRUPOS:

a) Oxidantes: el tetraxido de osmio (cido smico), el bicromato de potasio, cido
crmico, bicloruro de mercurio o sublimado corrosivo, cido pcrico, cido actico.
b) Reductores: el formaldehdo, el glutaraldehdo, el alcohol etlico, el alcohol metlico.
La accin oxidante o reductora de los fijadores le confieren a las clulas ciertas
condiciones que posibilitan una mejor aplicacin de las sustancias colorantes, por
ejemplo: el alcohol etlico absoluto conserva el glucgeno, el bicloruro de mercurio
provoca que las anilinas coloreen de manera ms brillante a las fibras colgenas, el
bicromato de potasio facilita la coloracin de las mitocondrias, el cido actico permite
una mejor tincin de los ncleos, el cloruro de calcio conserva e insolubiliza
parcialmente a los lpidos.
LOS FIJADORES SON:
a) Gaseosos: como el formaldehdo
b) lquidos: como el cido actico, al alcohol etlico, la acetona, etc.
c) slidos: como el bicloruro de mercurio, el bicromato de potasio, etc.

FIJADOR SIMPLE
FORMOL O FORMALINA.- Est considerado como la sustancia fijadora de mayor uso
en los laboratorios que realizan tcnica histolgica. El formol comercial consiste en
una solucin acuosa del gas formaldehido al 39 - 40%. Se presenta como un lquido
claro, incoloro, que emite vapores sumamente irritantes para las conjuntivas y la
mucosa respiratoria. Su accin fijadora se ejerce coagulando las protenas.
Es un fijador que posee un buen poder de penetracin y difusin. Mantiene de manera
adecuada la estructura y facilita la coloracin posterior de los componentes celulares y
tisulares. Endurece bien las muestras. Conserva bastante bien a las grasas.
El tiempo de fijacin de las muestras, dependiendo del tamao de ellas, debe ser de
24 a 48 horas como mnimo y si es posible, en refrigeracin.

FIJADORES COMPUESTOS.
Una sola sustancia fijadora difcilmente rene todas las condiciones para ejercer una
buena fijacin, por lo tanto es aconsejable usar mezclas fijadoras a travs de las

cuales se acrecientan las cualidades de un fijador y se atenan sus defectos y

desventajas.

FORMOL - FOSFATO (FORMOL TAMPONADO)

- solucin de formaldehdo (37% a 40%)

ml

100

- agua destilada
ml

900

- fosfato de sodio monobsico (NaH2PO4 - H2O)

4.0 gr

- fosfato de sodio dibsico (Na2HPO4)

6.5 gr

Suele emplearse como un fijador de rutina, al igual que el formol

al 10%. Posee un pH de 6.8 a 7.0 aproximadamente. Es ligeramente hipotnico.

FORMOL - BICLORURO DE MERCURIO

- solucin de formaldehdo (37% a 40%)

150 ml

- agua destilada

850 ml

- bicloruro de mercurio

50 gr

Es recomendable usarlo para fijar tejidos hematopoytico y

linftico reticular. El material nuclear se fija de manera precisa y
ntida. Facilita la tincin de fibras colgenas y clulas conjuntivas
mediante el empleo de colorantes que tienen como base a las
anilinas. Se utiliza para los tejidos en los que se aplicar tcnicas
inmunohistoqumicas.

FORMOL - CLORURO DE CALCIO

- solucin de formaldehido (37% a 40%)

100 ml

- cloruro de calcio

10 gr

- agua destilada

900ml

Se recomienda fijar las muestras en esta solucin cuando se desean preservar lpidos,
especialmente fosfolpidos: Antes de obtener los cortes, las muestras se incluyen en
gelatina o se congelan directamente para seccionarlas con empleando micrtomos de
congelacin o el criostato.

LQUIDO FIJADOR DE BOIN

- solucin acuosa saturada de cido pcrico

750 ml

- solucin de formaldehido (37% a 40%)

250 ml

- cido actico glacial

50 ml

Es un buen fijador de uso rutinario. Tiene un buen poder de

penetracin y de difusin. Ofrece resultados satisfactorios con
ciertos tricrmicos como el de Masson. Pueden fijarse piezas de
un centmetro de grosor y dos o tres centmetros de longitud. Se le
emplea con resultados ptimos en la fijacin de embriones y fetos
pequeos pues ejerce cierto poder descalcificante.

LQUIDO FIJADOR DE HELLY

- solucin madre (stock) de Zenker

90 ml

- solucin de formaldehido (37% a 40%)

10 ml

El formol se debe agregar antes de usar la mezcla, pues la accin reductora del formol
inhibe la actividad fijadora del bicromato de potasio. Las muestras deben ser pequeas
y fijarse por un lapso no mayor de 24 horas, porque se endurecen en exceso, se
disminuye la basofilia de los ncleos y se incrementa la acidofilia del citoplasma. Tiene
una ventaja: preserva muy bien a los eritrocitos y a los grnulos de las clulas de
glndulas endocrinas.

FIJADOR DE CARNOY

- alcohol etlico absoluto

60 ml

- cloroformo

30 ml

- cido actico glacial

10 ml

Posee un excelente poder de penetracin y de difusin. Las

muestras delgadas de tejidos y rganos se fijan en dos o tres
horas. Produce lisis de los eritrocitos. Es el fijador adecuado
cuando se desea demostrar glucgeno y la tincin de ncleos y
especialmente cromosomas.