Colinesterasa

Mtodo cintico a 405 nm para la determinacin de colinesterasa en suero o plasma

SIGNIFICACION CLINICA
Se ha demostrado la existencia de dos colinesterasas: una
es la acetilcolinesterasa o colinesterasa verdadera (acetil
colina hidrolasa, EC. 3.1.1.7) que se encuentra en eritrocitos
y terminaciones de nervios colinrgicos, y la otra es la butirilcolinesterasa o pseudocolinesterasa (EC. 3.1.1.8) que se
encuentra en plasma, hgado, msculo liso y adipocitos.
La colinesterasa del suero o plasma (Che) o pseudocolinesterasa est asociada a las siguientes condiciones clnicas:
1) Constituye un ndice de funcin heptica, especialmente
en hepatopatas crnicas. Se observa una buena correlacin
entre el aumento de GOT (AST) y la disminucin de Che, en
hepatitis infecciosas.
2) Su disminucin indica intoxicacin por insecticidas organofosforados, inhibidores de la Che.
3) En algunos individuos sensibles a la succinilcolina, relajante muscular administrado durante la anestesia, se observa
una apnea post-anestsica prolongada y en algunos casos,
fatal. Esto coincide con la presencia de una variante gentica
de la Che ("atpica") incapaz de hidrolizar a la succinilcolina.
En sujetos normales, esta droga es hidrolizada "in vivo" por la
Che, en 1 a 4 minutos, por eso la apnea tambin se relaciona
con bajos niveles de Che total.
FUNDAMENTOS DEL METODO
Che
butiriltiocolina + H2O
tiocolina + DTNB

> tiocolina + butirato

> 2-nitro-5-mercaptobenzoato

REACTIVOS PROVISTOS
A. Reactivo A: viales conteniendo ioduro de S-butiriltiocolina
y cido 5,5'-ditiobis-2-nitrobenzoico (DTNB) desecados.
B. Reactivo B: solucin de buffer fosfatos para pH final 7,7.
Concentraciones finales
Ioduro de S-butiriltiocolina ..................................... 7 mmol/l
DTNB ................................................................. 0,25 mmol/l
Fosfatos .................................................. 50 mmol/l; pH 7,7

PRECAUCIONES
Los reactivos son para uso diagnstico "in vitro".
Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales
de trabajo en el laboratorio de qumica clnica.
Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
acuerdo a la normativa local vigente.
ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE
ALMACENAMIENTO
Reactivos Provistos: son estables en refrigerador (2-10oC)
hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.
Reactivo A reconstituido: es estable una hora a temperatura ambiente.
INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS
REACTIVOS
El cambio de coloracin de los reactivos puede indicar deterioro de los mismos.
MUESTRA
Suero o plasma
a) Recoleccin: se debe obtener suero de la manera usual.
b) Aditivos: en caso de emplear plasma como muestra, se
recomienda el uso de heparina o EDTA (Anticoagulante W de
Wiener lab.) como anticoagulantes para su obtencin.
c) Sustancias interferentes conocidas: los anticoagulantes que contienen citrato, fluoruro u oxalato producen una
leve inhibicin.
Referirse a la bibliografa de Young para los efectos de las
drogas en el presente mtodo.
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la
muestra debe ser preferentemente fresca. Puede conservarse hasta una semana en el refrigerador (2-10oC), sin agregado de conservadores.

REACTIVOS NO PROVISTOS
Solucin fisiolgica.

MATERIAL REQUERIDO (no provisto)

- Espectrofotmetro.
- Micropipetas y pipetas.
- Cubetas espectrofotomtricas de caras paralelas.
- Bao de agua.
- Cronmetro.

INSTRUCCIONES PARA SU USO

Reactivo B: listo para usar. Puede presentar cristales que
sedimentan en reposo y no afectan su reactividad. Pipetear
sin remover el sedimento.
Reactivo A: agregar 3 ml de Reactivo B a un vial de Reactivo
A. Tapar y agitar hasta disolucin completa. Reconstituir en
el momento de usar.

CONDICIONES DE REACCION
- Longitud de onda: 405 nm
- Temperatura de reaccin: 25, 30 37oC
- Tiempo de reaccin: depende del PROCEDIMIENTO (I o II)
- Volumen de muestra: 20 ul
- Volumen de Reactivo A: 3 ml
- Volumen final de reaccin: 3,02 ml

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I- PROCEDIMIENTO CON T FIJO

A) 25 - 30oC
En una cubeta mantenida a la temperatura elegida, colocar:
Reactivo A reconstituido

La Tabla II permite realizar este clculo directamente.

Ver Equivalencia de unidades en I.
VALORES DE REFERENCIA

3 ml

25oC

30oC*

37oC*

3.200-9.000 U/l

3.962-11.142 U/l

4.970-13.977 U/l

Preincubar unos minutos. Luego agregar:

Muestra

20 ul

Mezclar inmediatamente y leer la absorbancia, disparando simultneamente el cronmetro. Volver a leer luego de 30, 60 y 90 segundos exactos. Determinar la diferencia promedio de absorbancia cada 30 segundos (A/
30 seg) restando cada lectura de la anterior y promediando los valores. Utilizar este promedio para los clculos.
B) 37oC
Usar Muestra diluida 1/2 con solucin fisiolgica y seguir el procedimiento descripto (I-A). Multiplicar el resultado obtenido por 2.

La Tabla I permite realizar este clculo directamente.

Equivalencia de unidades:
1 U/ml = 1 kU/l = 1000 U/l
II- PROCEDIMIENTO CON A FIJO
A) 25 - 30oC
En una cubeta mantenida a la temperatura elegida, colocar:

20 ul

Mezclar inmediatamente; registrar la absorbancia, disparando simultneamente el cronmetro y medir el tiempo en segundos en que se produce un aumento de absorbancia de 0,100 (A = 0,100 D.O.). Medir tres intervalos de tiempo consecutivos. Determinar el valor medio de los tiempos obtenidos (T/0,100 D.O.) y utilizar
este promedio para los clculos.
B) 37oC
Usar Muestra diluida al 1/2 con solucin fisiolgica y
seguir el procedimiento descripto (II-A). Multiplicar el
resultado obtenido por 2.

II- CALCULO DE LOS RESULTADOS

68.120
Colinesterasa (U/l) =

T/0,100 D.O.

METODO DE CONTROL DE CALIDAD

Procesar 2 niveles de un material de control de calidad
(Standatrol S-E 2 niveles) con actividades conocidas de
colinesterasa, con cada determinacin.

PERFORMANCE
a) Reproducibilidad: empleando el procedimiento I (con T
fijo) y procesando replicados de las mismas muestras en un
mismo da, se obtuvieron los siguientes datos:
Nivel
6.145 U/l
2.584 U/l

3 ml

Preincubar unos minutos. Luego agregar:

Muestra

CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SI

Colinesterasa (kU/l) = Colinesterasa (U/l) x 0,001

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
Para preservar la integridad de los reactivos deben evitarse
todo tipo de contaminaciones, empleando para la medicin
nicamente micropipetas perfectamente limpias y secas.

I- CALCULO DE LOS RESULTADOS

Colinesterasa (U/l) = A/30 seg x 22.710

Reactivo A reconstituido

* Calculados
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
valores de referencia.

D.S.
90,8 U/l
67,0 U/l

C.V.
1,47 %
2,59 %

b) Lmite de deteccin: el mnimo cambio de actividad detectable es 23 U/l.

c) Rango dinmico: si A/30 seg es superior a 0,250 (procedimiento con T fijo) o T/0,100 D.O. es inferior a 5 segundos (procedimiento con A fijo), se debe repetir la determinacin con Muestra diluida 1/2 1/5 con solucin fisiolgica,
corrigiendo consecuentemente los resultados.
d) Linealidad: la reaccin es lineal hasta 5.650 U/l cuando
se emplea el procedimiento con T fijo y hasta 9.000 U/l cuando se emplea el procedimiento con A fijo.
PRESENTACION
- 20 x 3 ml (Cd. 1241401).
BIBLIOGRAFIA
- Szasz, G. - Clin. Chim. Acta 19:191 (1968).
- Knedel, K. y Bttger, R. - Klin. Wochr. 45/325 (1967).
- Lippi, U. y Cagnin, V. - Lab. V/6:615 (1978).
- De Daz, M. et al. - Rev. Asoc. Bioq. Arg. - 54/1-2:15 (1990).
- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
AACC Press, 4th ed., 2001.

donde:
T = tiempo promedio en segundos
870370000 / 00 p. 2/6

TABLA I (25-30-37oC)
A/30 seg
0,010
0,015
0,020
0,025
0,030
0,035
0,040
0,045
0,050
0,055
0,060
0,065
0,070
0,075
0,080
0,085
0,090
0,095
0,100
0,105
0,110
0,115
0,120
0,125

U/l
227
341
454
568
681
795
908
1.022
1.136
1.249
1.363
1.476
1.590
1.703
1.817
1.930
2.044
2.157
2.271
2.385
2.498
2.612
2.725
2.839

A/30 seg

U/l

0,130
0,135
0,454
0,145
0,150
0,155
0,160
0,165
0,170
0,175
0,180
0,185
0,190
0,195
0,200
0,205
0,210
0,215
0,220
0,225
0,230
0,235
0,240
0,245
0,250

2.952
3.066
3.179
3.283
3.407
3.520
3.634
3.747
3.861
3.974
4.088
4.201
4.315
4.428
4.542
4.655
4.769
4.883
4.996
5.110
5.223
5.337
5.450
5.564
5.677

SIMBOLOS
Los siguientes smbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnstico de Wiener lab.

Este producto cumple con los requerimientos previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de productos
sanitarios para el diagnstico "in vitro"

Uso diagnstico "in vitro"

Contenido suficiente para <n> ensayos

Fecha de caducidad

Lmite de temperatura (conservar a)

No congelar

Riesgo biolgico

P Representante autorizado en la Comunidad Europea

Volumen despus de la reconstitucin

Cont.

Nmero de lote

Elaborado por:

Xn

TABLA II (25-30-37oC)
t

U/l

U/l

4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30

17.030
13.624
11.353
9.731
8.515
7.569
6.812
6.193
5.677
5.240
4.866
4.541
4.258
4.007
3.784
3.585
3.406
3.244
3.096
2.962
2.838
2.725
2.620
2.523
2.433
2.349
2.271

32
34
36
38
40
42
44
46
48
50
55
60
65
70
75
80
85
90
95
100
120
140
160
180
200
250
300
350

2.129
2.004
1.892
1.793
1.703
1.622
1.548
1.481
1.419
1.362
1.239
1.135
1.048
973
908
852
801
757
717
681
568
487
426
379
341
272
227
195

Contenido

Nocivo
Corrosivo / Castico

Xi

i
Calibr.

b
b
c
h

Irritante
Consultar instrucciones de uso
Calibrador
Control
Control Positivo
Control Negativo
Nmero de catlogo

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.

Riobamba 2944
2000 - Rosario - Argentina
http://www.wiener-lab.com.ar
Dir. Tc.: Viviana E. Ctola
Bioqumica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
Disp. N: 5996/83-5635/98-3479/13

870370000 / 00 p. 3/6

Wiener lab.
2000 Rosario - Argentina
UR120531