I.

PROCEDIMIENTO

a. Coloque las lminas fijadas de microorganismos sobre el soporte para tincin.

b. Extender en una capa fina la capa de muestra
c. Agregar 5 o 6 gotas de cristal violeta y exponerlo al fuego, con el fin de fijarla.
d. Esperar de 1 a 3 minutos para darse la tincin.
e. Una vez cumplido el tiempo, lave cada lmina con la piseta de agua.
f.

Seque las lminas

g. Examinar las preparaciones

h. Elaborar los esquemas de las observaciones destacando las diferencias en
tamao, forma y agrupaciones.
II.

RESULTADOS
-

Se observo bacterias de muestras de abono lquido orgnico, biofowling y agua

estancada.

Utilizndose la tcnica de tincin simple se observo bacterias muertas, levadura y

se distingui sus formas y agrupaciones.

III.

DISCUSIONES

Las bacterias son microorganismos unicelulares que se reproducen por fisin binaria. La
mayora son de vida libre, a excepcin de algunas que son de vida intracelular obligada,
como Chlamydias y Rickettsias. Tienen los mecanismos productores de energa y el
material gentico necesarios para su desarrollo y crecimiento. Las bacterias integran el
reino procariota (pro de primitivo y cariota de ncleo). (Prez & Mota, 2006).
Hay tcnicas que permiten observar los microorganismos en vivo. Segn Granados y
Villaverde (1996) stas son: Examen en fresco, que incluye examen en fresco entre
portaobjetos y cubreobjetos y examen en fresco sobre gota pendiente en porta excavado;
y tincin vital.
En la prctica de laboratorio se realiz un primer ejercicio en examen en fresco entre
portaobjetos y cubreobjetos.
Esta consiste en suspender el microorganismo objeto de estudio en agua destilada o
cualquier otro medio lquido transparente colocndolo en un portaobjetos a fin de poder
posteriormente, mediante microscopa, visualizar su morfologa, disposicin y motilidad.
(Granados y Villaverde, 1996).
En las observaciones hechas en el microscopio hasta 40X era difcil apreciar el tamao y
el color. Se pudo observar las estructuras que adoptaban los microorganismos que
aparecan en distintas muestras: agua de estanque, abonos de distinto tipo, etc. En
cuanto al color, al inicio se observ y se apreciaban muy pocos microorganismos, y sin
movimiento. Esto pudo deberse a que la muestra se expuso demasiado tiempo al
ambiente, lo que mat a los microorganismos.
Adems, Granados y Villaverde (1996) agrega que en esta tcnica se extender la
muestra en el portaobjetos con el fin de homogeneizar la mezcla colocando con cuidado
sobre la suspensin un cubreobjetos formando inicialmente un ngulo de 45 evitando
que se formen burbujas de aire (en nuestra muestra de agua estancada se formaron
pequeas burbujas de aire) al caer el cubreobjetos sobre la suspensin.. Luego se
sellaran con parafina (vaselina) los bordes de los cubreobjetos para disminuir la
evaporacin y evitar corrientes en la preparacin.
En la microscopa ptica se toma en cuenta el factor contraste, porque sin un contraste
adecuado es difcil diferenciar una estructura del fondo que la rodea.

Es as que se usan coloraciones para incrementar el contraste entre el espcimen y el

fondo que lo rodea, pero desafortunadamente las coloraciones dificultan la observacin de
los microorganismos vivos. (Atlas, 1990).
En la mayor parte de las tcnicas de coloracin se pone una suspensin de
microorganismos en un portaobjetos y se deja secar. A la preparacin as obtenida se le
pasar rpidamente sobre una flama para que el calor fije las clulas que se encuentran
all, esto es, las clulas se fijan al portaobjetos de tal manera que no pueden ser
arrastradas al lavar la preparacin. Ms adelante, se agrega colorante, se deja actuar por
algn tiempo, se enjuaga para quitar el exceso de colorante y se observa. (Atlas, 1990).
El segundo ejercicio realizado en la prctica de laboratorio fue de observacin de
bacterias por la tcnica de tincin simple. Se utiliz el azul de metileno que permiti
apreciar de mejor manera las estructuras, como bacilos, espirilos y una gran cantidad de
cocos, en el caso del abono lquido orgnico.
En un procedimiento de coloracin simple, se usa un solo reactivo colorante que no
intenta producir reacciones de coloracin diferenciales para los distintos tipos de
microorganismos o estructuras. Las tcnicas de coloracin simple para microorganismos
son de utilidad cuando el colorante es fijado por las clulas y as los microorganismos
aparecen de color oscuro o coloreados sobre un fondo luminoso o claro, y son negativas
cuando los microorganismos no fijan el colorante, en cuyo caso el fondo es el que se tie
y los microorganismos aparecen brillantes sobre el fondo oscuro.
Estas dos tcnicas dependen del hecho de que las bacterias y otros microorganismos
poseen carga negativa asociada a la capa externa de la clula, principalmente debido a
los grupos PO43- de la membrana celular. (Atlas, 1990).
En los procedimientos de coloracin positiva un colorante cido (catinico), que tiene
cromforo (porcin colorida de la molcula de colorante) cargado positivamente, es
atrado hacia la cubierta externa de la clula cargada negativamente. Colorantes como el
azul de metileno (que fue el colorante utilizado en el ejercicio de laboratorio) tienen una
porcin de la molcula de color azul, que es atrada a la superficie de la clula, dando
como resultado una tincin positiva del microorganismo. (Atlas, 1990).

IV.
-

CONCLUSIONES
En la observacin de bacterias en forma directa; para las muestras del abono
lquido orgnico, biofowling y agua estancada se observaron colonias de bacterias
de diferentes formas desplazndose. Se distinguan formas de cocos y bacilos,
pero no claramente.

En la observacin de bacterias utilizndose la tcnica de tincin simple se observo

cocos (en forma aislada, diplococos, estreptocos) y bacilos (aislados, diplobacilos
y estreptobacilos). Tambin se observaron levaduras aisladas y en conjunto. Todas
las especies estaban quietas y de un color azul violeta. Se distinguan claramente.

V.

CUESTIONARIO

1. Cules son las asociaciones ms frecuentes en bacterias?

Segn Burdon y Williams (1971) entre los cocos, y tambin con menor frecuencia
entre bacilos y espirilos, las clulas que crecen rpidamente tienden a ordenarse
en gurpos caractersticas. El aspecto de cada agrupamiento segn se observa en
el microscopio, es una importante ayuda para reconocer las especies.
Tenemos:
-

Diplococos: Cocos en parejas. Generalmente los lados adyacentes de los

organismos apareados son achatados.

Estreptococos: Cocos en cadena.

Estafilococos: Cocos en masas irregulares que semejan racimos de uvas. Se

dividen en ms de un plano del espacio y permanecen fuertemente adheridos,
formando masas irregulares.

Ttradas: Cocos en grupos de cuatro. Estos cocos se dividen en dos planos que
forman ngulo recto entre s.

Sarcinas: Cocos en bloques cbicos.

Grupos de bacilos y espirilos: El crecimiento caracterstico de algunas especies de

bacilos es por parejas (diplobacilos). Otros pueden formar largas cadenas
(estreptobacilos). Algunos muestran una disposicin muy sorprendente de clulas
paralelas; otros crecen en una masa entretejida y enmaraada. Los espirilos no se
agrupan en ninguna forma caracterstica, sino que crecen en forma de cadenas

largas y ondulantes. A veces el espirilo no logra encadenarse y aparece el

filamento como una forma de ovillo retorcido.

2. En qu rango de tamao se definen las bacterias?

Segn Granados y Villaverde (1996), el tamao de las bacterias se mide en m
(0.000001 m) y oscila entre 0.2 y 2 m.
El tamao de las bacterias oscila entre las 0.5 y 3 m, pudiendo llegar en algunos
tipos a 10 m. Solo son visibles entonces, al microscopio ptico o microscopio
electrnico. Para observarlas con el microscopio ptico se usa el objetivo de
inmersin (100X), sumergiendo esta lente en una gota de aceite (aceite de
inmersin) en el preparado a observar. A modo comparativo, una clula eucariota
mide ms de 5 m, mientras que un reo virus mide menos de 0.1 m. (Prez &
Mota, 2006).
3. Cules son las formas bacterianas ms frecuentes?
Antes de que se comience a utilizar el secuenciamiento del ADN, las bacterias
eran clasificadas basndose en sus formas y en sus propiedades bioqumicas. Al
clasificarlas de acuerdo a su forma o a su estructura morfolgica, la mayora de las
bacterias pertenecen a las tres formas bsicas y principales: barras, esferas y
espirales. Los otros dos tipos, menos comunes, son los de rickettsia y
mycoplasma.
BACILOS: (bacterias con forma de barras)
Con forma de barras o varillas, los bacilos suelen ser bacterias de tipo Gram
positiva o negativa. Los ejemplos ms populares son los de las bacterias de E.Coli
y la salmonella, que comnmente, tambin son las responsables de males como la
intoxicacin por alimentos y la fiebre tifoidea. Dentro de los bacilos tambin

podemos nombrar a dos de las bacterias ms peligrosas que existen: el Bacillus

anthracis, que causa la mortal enfermedad pulmonar del ntrax y el Clostridium,
que causa el botulismo, el ttanos y la gangrena.
COCOS: (bacterias con forma de esferas)
Con su caracterstica forma esfrica, las bacterias conocidas como cocos tienen la
capacidad de vivir como clulas individuales o bien de enlazarse hasta forman
cadenas y racimos. El Staphylococcus y el Streptococcus son los dos tipos de
bacterias ms comunes dentro de esta clasificacin y ambas suelen ser Gram
positivas. Igualmente, stas bacterias no suelen tener beneficios, sino que por el
contrario, siempre nos resultan perjudiciales. Pueden causar infecciones en la piel,
intoxicacin alimenticia y tambin amigdalitis, entre otras cosas.
ESPIRILOS: (bacterias con forma de espirales)
Los espirilos, como bien nos indica su nombre, poseen una marcada forma de
espiral. stas son bacterias Gram negativas y terribles para la salud. Un claro
ejemplo es la Treponema, que causa la enfermedad de transmisin sexual de la
sfilis.

4. Qu diferencia una tincin directa de una tincin negativa?

Las tcnicas de coloracin simple para microorganismos son de utilidad cuando el
colorante es fijado por las clulas y as los microorganismos aparecen de color
oscuro o coloreados sobre un fondo luminoso o claro, y son negativas cuando los
microorganismos no fijan el colorante, en cuyo caso el fondo es el que se tie y los
microorganismos aparecen brillantes sobre el fondo oscuro. (Atlas, 1990).
En los procedimientos de coloracin positiva un colorante cido (catinico), que
tiene cromforo (porcin colorida de la molcula de colorante) cargado
positivamente, es atrado hacia la cubierta externa de la clula cargada
negativamente. (Atlas, 1990).
En los procedimientos de coloracin negativa, se utiliza un colorante bsico
(aninico), que posee cromforo cargado negativamente el cual es repelido por el
microorganismo con carga negativa. La nigrosina y la tinta china a menudo se

usan para coloraciones negativas de clulas microbianas y este tipo de

coloraciones son particularmente tiles para observar algunas estructuras como
las cpsulas que rodean algunos microorganismos. (Atlas, 1990).
En la tincin simple se busca observar la morfologa de la bacteria y la agregacin
o tipo de distribucin bacteriana mientras que en la tincin negativa hay una
determinacin morfolgica rpida y se evidencia la presencia de cpsulas.
5. Qu importancia le atribuye a las diferencias en reactividad de los
colorantes empleados?
En el caso del azul del metileno, este tipo de tincin es muy importante en
microbiologa para detectar rpidamente en agua la actividad metablica de las
bacterias reductoras de sulfato. Sin embargo, en un campo ms amplio, este
reactivo es til para examinar ARN o ADN presentes en algn organismo.
En el caso del cristal violeta, de sta depende la clasificacin de las bacterias en
Gram positivas y negativas, luego de realizar la prueba y la tincin con este
compuesto. Las bacterias gram positivas absorben por tener un mayor porcentaje
de cidos teicoicos en su estructura, lo que permite identificar adems la
composicin de su pared celular y dems estructura.
VI.

BIBLIOGRAFA

ATLAS, R. 1990. Microbiologa. Fundamentos y aplicaciones. Compaa Editorial

Continental, S.A de C.V. Mxico D.F, Mxico. Pp 55-62.
BURDON, W & WILLIAMS, R. 1971. Microbiologa. Primera edicin en espaol.
Publicaciones Cultural. Mxico D.F, Mxico. Pp 131-135.
GRANADOS, R & VILLAVERDE, C. 1996. Microbiologa. Bacteriologa.
Caractersticas y clasificacin bacteriana. Virologa. Caractersticas y tcnicas
bioqumicas. Editorial Paraninfo. Madrid, Espaa. Pp 9-10, 216-220
PREZ, M & MOTA, M. 2006. Temas de Bacteriologa y Virologa mdica. Captulo
2: Morfologa y estructura bacteriana. Segunda edicin corregida. Universidad de
la Repblica. Facultad de Medicina. Departamento de Bacteriologa y Virologa.
Instituto de Higiene. Montevideo, Uruguay. Pp 23-26.
http://docsetools.com/articulos-para-saber-mas/article_41069.html