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Natural killers (NK) so grandes linfcitos granulares do sistema imune inato que
participam do controle precoce das infeces microbianas e cncer. As clulas NK
podem induzir a morte de clulas autlogas submetidas a diversas formas de estresse,
reconhecendo e fornecendo sinais de "perigo" no-microbianos ao sistema imunolgico.
As clulas NK so amplamente distribudas nos rgos linfides e no linfides. Os
precursores de clulas NK so originrios da medula ssea e passam por um complexo
processo de maturao que leva aquisio de suas funes efetoras, s mudanas em
sua expresso de integrinas e receptores quimiotticos, e sua redistribuio a partir da
medula ssea e gnglios linfticos para o sangue, bao, fgado e pulmo. Aqui,
descrevemos a localizao nos tecidos das clulas NK, utilizando NKp46 como
marcador de clulas NK, e revisamos o conhecimento atual sobre os mecanismos que
regem o seu trfico em seres humanos e em camundongos.
Introduo
As clulas NK so linfcitos do sistema imune inato que podem induzir a morte das
clulas alognicas e das clulas autlogas submetidas a diversas formas de estresse, tais
como as infeces microbianas e a transformao maligna. As clulas NK expressam
uma matriz de ativao e receptores inibitrios, cujo envolvimento lhes permite
discriminar entre as clulas-alvo e no-alvo. O repertrio de receptores das clulas NK
complementar de outros sensores inatos, como os receptores scavanger, os receptores
Toll-like (TLRs) ou de domnio de oligomerizao de nucleotdeos (NOD) protena. As
estratgias de reconhecimento das clulas NK, assim, ampliando a deteco de situaes
patognicas em "sinais de perigo" microbianos esto faltando in vivo, como no caso de
tumores pouco imunognicos.
Coerente com seu papel na vigilncia imunolgica, as clulas NK so amplamente
distribudas no corpo. No est claro, no entanto, se esta ampla distribuio devido a
sua recirculao, devido existncia de subgrupos com diferentes capacidades NK
homing, ou devido ao seu desenvolvimento em locais mltiplos. As clulas NK tambm
podem ser recrutadas em vrios tecidos aps a inflamao. No entanto, em contraste
com as clulas B e T, os mecanismos que regem o trfico de clulas NK permanecem
pouco dissecados.
Ampla distribuio tecidual das clulas NK
Tem sido muito apreciado que as clulas NK so amplamente distribudas em
mamferos. Entretanto, poucos estudos tm precisamente os destinatrios dessa
distribuio. Um primeiro estudo em ratos mostrou que a freqncia de grandes
linfcitos granulares (LGLs), incluindo NK e linfcitos T, foi alta no pulmo e no
sangue perifrico, superior do bao, exsudado peritoneal e gnglios linfticos. LGLs
tambm foram encontrados para estar ausentes no timo e na medula. Estudos posteriores
em ratos demonstraram a presena de clulas NK, definida como NK1.1 + CD3 ou DX5
CD3 + por citometria de fluxo, em vrios rgos, mas nunca focada em sua distribuio.
Ns revisitamos essa questo e medimos o percentual e o nmero de clulas NK do rato
em vrios rgos. Nossos resultados confirmam a ampla distribuio das clulas NK
nos rgos linfides e no linfides. A freqncia de clulas NK em linfcitos foi
considerada a mais elevada em orgos no-linfides, tais como o pulmo e o fgado. Um
fenmeno semelhante foi tambm observado para CD8 + efetores de memria de clula
T, sugerindo mecanismos semelhantes de trfico para esses dois tipos de clulas e da
existncia de um nicho para a interleucina-15 (IL-15) - linfcitos dependentes de rgos
no-linfides. A ordem para a freqncia de clulas NK o fgado> pulmo> clulas
mononucleares do sangue perifrico (PBMCs)> bao> medula ssea (BM)> linfonodos
(LN)> timo, onde as clulas NK so quase indetectveis. Para efeito de comparao
clulas NK1.1+ predominam no fgado, enquanto as clulas T no sangue e linfonodos.
As clulas humanas NK tambm parecem ser freqentes em rgos no-linfides.
O maior nmero de clulas NK do rato, 2-3 milhes, pode ser encontrado no bao.
Reservatrios significativos de clulas NK tambm podem ser encontrados em todos os
rgos testados excluindo o timo. Nos seres humanos, verificou-se que clulas NK em
linfonodos ultrapassam clulas NK no sangue de 10:1, enquanto que uma proporo
estimada 1:1 foi observada no rato. A razo para esta discrepncia pode estar ligada
expresso de CCR7 em um subconjunto de recursos humanos, mas no em clulas NK
do rato, como discutido mais tarde.
A presena de clulas NK em tecidos epiteliais tem sido pouco estudada. H grande
nmero de clulas NK no tero durante a gravidez, tanto em humanos quanto em
camundongos. Em humanos, clulas CD3-CD56 + NK foram detectadas na pele de
doadores saudveis e na linfa de drenagem deste tecido. Uma infiltrao de clulas NK
tem sido relatada em pele com dermatite atpica lesional, na epiderme e na derme, aps
a exposio a Malassezia, e na pele inflamatria durante a fase de induo da
hipersensibilidade de contato em um modelo de rato com dermatite de contato alrgica.
Alm disso, vrios grupos tm relatado o acmulo de clulas que expressam um
fentipo de clulas NK em leses cutneas de psorase. No entanto, novos estudos so
necessrios para determinar claramente se as clulas infiltrantes so realmente clulas
NK ou clulas NK-like um pouco T. Em um intestino humano normal, leuccitos
CD3- intra-epiteliais que expressam marcadores de clulas NK, como CD122, CD161,
CD2, CD94, CD56 ou CD16 tm sido descritos. Finalmente, as clulas CD3 + NK1.1
foram recentemente identificadas junto a clulas em suspenso preparada a partir de
tecido vaginal de rato. Alm disso, a IL-15-/ - e / ou RAG2 / - c - / - de ratos so mais
sensveis infeco ao vrus da herpes genital simples 2 (HSV-2), sugerindo um
potencial das clulas NK no controle da disseminao da infeco em tecidos da
mucosa.
Clulas NK nos seios
A visualizao in situ de clulas NK tem sido dificultado pela falta de reagentes
especficos. Tentativas anteriores para identificar as clulas NK in situ basearam-se na
adoo de transferncia do nvel de fluorescncia das clulas ou marcao com antiNK1.1, anti Ly49G2, ou anti-CD49b (28-32). No entanto, nenhum dos anticorpos acima
so especficos para clulas NK. (NK1.1, CD49b) ou expresso em todas as clulas NK
(Ly49G2, CD49b). Recentemente, descobriu-se que a expresso de superfcie da clula
de ativao do receptor das clulas NK NKp46 (CD336) so definidos melhor em
clulas NK atravs das espcies de mamferos, aumentando a possibilidade de procurar
para as clulas NK in situ nos tecidos seccionados usando anticorpos anti-NKp46 (33).
de clulas NK. Alm disso, um exame cuidadoso das clulas NK tmicas revela que
muitas delas expressam a forma fenotpica CD3 intracelularmente e compartilham
caractersticas funcionais com NK1.11 clulas T, sugerindo na verdade que clulas NK
so como clulas T (41). No entanto, em camundongos o desenvolvimento das clulas T
bloqueado por meios genticos, um muito elevado nmero de clulas NK
desenvolvem no timo, mostrando a capacidade de precursores de clulas T
desenvolverem em clulas NK em condies particulares (40). Alm disso, o fgado
normal contm um nmero substancial de clulas imaturas NK, sugerindo que
precursoras das clulas NK originrias da BM poderiam ser oriundas da periferia e
desenvolverem in situ (42). Assim, possvel que o desenvolvimento extra-medular das
clulas NK podem ter localizados em locais linfopnicos ou outras condies que
continuam a ser dissertado.
Ainda desconhecido como e onde as clulas NK completam a sua maturao. Entre os
estgios de maturao das clulas Nk podem ser definidos em ratos baseados na
expresso de CD11b, CD11bhighCD27high (abreviado como DP), e CD11bhigh
CD27dull (abreviado como CD27dull, o mais maduro) (43-45). DP e clulas NK
CD27dull mostram forte funes efetoras que as clulas NK CD11bdull (113). A
distribuio das NK trs subpopulaes de clulas do tecido distribuio variada. Onde
CD11bdull clulas NK predominam na BM e LN, DP e, especialmente, CD27dull
clulas NK prevalecer no sangue, fgado, bao e pulmo (44). Como discutido mais
adiante, a expresso de receptores quimiotxicos diferentes participa nas capacidades
distintas homing das clulas NK subconjuntos. Em humanos, dois subconjuntos de
clulas NK tm sido descritas, CD56dim e clulas NK CD56bright, que partilham
muitas caractersticas com CD11bdull e clulas NK DP/CD27dull, respectivamente
(45). Esta semelhana e outras observaes (12, 46) sugerem que CD56bright poderia
ser precursores das clulas NK CD56dim. Tal como os seus homlogos mouse, as
clulas NK so CD56bright preferencialmente encontradas no LN, enquanto que as
clulas so mais CD56dim abundante no sangue e bao (12).
Ainda desconhecido como e onde as clulas NK completar a sua maturao. Como os
trs subpopulaes de clulas NK so encontrados em todos os rgos,
provvel que os precursores de clulas NK ou clulas imaturas NK (Fase CD11bdull)
so semeados do BM para a periferia, onde se desenvolver no local sob a influncia do
microambiente fatores
Recirculao das clulas Natural Killer
BM: Medula ssea (Bone Marrow)
LN: Linfonodo (Lymph Node)
Poucos dados esto disponveis sobre a recirculao das clulas NK entre os rgos.
Ser que as clulas NK trafegam atravs de rgos perifricos? Elas saiam de rgos
linfides e no linfides, ou elas residem em tecidos? Um estudo anterior (47) mostrou
que na transferncia por via intravenosa em ratos receptores, LGLs marcadas por radio
elemento ficavam preferencialmente nas paredes alveolares do pulmo e da polpa
vermelha do bao. Contudo LGLs foram achadas ausente no ducto torcico e LN ( 47).
Mais tarde, experincias de transferncia adotiva em camundongos mostraram que as
CXCR4) quanto das E / P se4lectins / L. Se este tambm o caso das clulas NK, isto
requer uma investigao mais aprofundada.
Como as clulas NK atingir rgos no-linfides?
A distribuio de subpopulaes de clulas NK no sangue, bao, fgado e pulmo
muito semelhante, com a maioria das clulas NK CD27dull. Deficincia de SIPs afeta
as clulas NK desses compartimentos da mesma forma. Este achado sugere, aps a sua
exportao de Sips dependentes para a periferia, que as clulas NK so arrastadas pelo
fluxo de sangue em uma maneira independente de SIPs (fig6). A frao de clulas NK
CD11bDull poderia patrulhar sinusides hepticos atravs da interao de CXCR6 com
CXCL16 endotlio-bound (bound= obrigado- Nao entendi isso)
O trfego de clulas NK durante condies inflamatrias
A cerca da inflamao, em ratos, as clulas NK podem ser recrutadas de vrios rgos,
tais como LN, pulmo, fgado ou sistema nervoso central (CNS) e podem, ento,
extravasar pelo parnquima ou pelas cavidades. A migrao de leuccitos para a luz
vascular de tecidos depende de uma srie de interaes moleculares seqenciais entre
leuccitos e clulas endoteliais, envolvendo receptores de seletinas, integrinas e
quimiocinas.
Seletinas:
No rato, glicoprotenas L-seletina e P-seletina ligantes 1 (PSGL-1) so expressadas por
nveis similares de subconjuntos de clulas NK. L-seletina necessria para o homing
de clulas NK em ratos e recrutada do NL. Em humanos, CD56 bright mas no
amadurecidas CD56dirn CD16+ clulas NK tambm expressam l- sectina. Sialyl estgio
embrionrio especfico do antgeno 1 e uma caracterizao sLex comportando o
receptor pode servir como ligantes de E-seletina. Embora PSGL-1 seja, expressado em
clulas NK de humanos recm-isoladas, somente uma pequena populao de clulas NK
ligam-se a P-selectina-imunoglobulina (Ig).Clula NK humana diferenciada
acompanhada da expresso da superfcie celular de uma glicoprotena mucina-like que
ostenta uma keratan clulas NK restrita a lactosamina sulfato relacionado, o eptopo
PEN5. O carboidrato PEN5 acrescenta-se ao PSGL-1, criando um stio de ligao
exclusivo para L-sectina, o qual independente da PSGL-1 tirosina sulfato. A analogia
para a habilidade dos neutrfilos circulantes para capturar neutrfilos de fluxo livre na
PSGL-1: a espcie de L-sectina- dependente, o eptopo PEN5 pode permitir que clulas
NK interajam com outras L-selectinas + leuccitos (e. g. neutrfilos, moncitos ou
linfcitos T ou B) ligado ao endotlio inflamatrio para amplificar a resposta imune.
Quimiotacinas:
O papel dos receptores quimiotticos nas clulas NK recrutadas, no rato, para stios
inflamatrios tem sido estudadas usando linhagens acontecimentos (knockout strains) e
anticorpos bloqueados (25, 64-67, 82-92). Em humanos, a expresso das
quimiotacinas e dos receptores de stios inflamatrios tem tambm providenciado
algumas informaes.
aumento do fgado clulas NK, clulas NK conta diminuir no bao e no BM, sugerindo
que esses rgos funcionam como reservatrios de clulas NK, em caso de inflamao
(65). receptores de quimiocinas diferentes podem orquestrar essa contratao. CXCR3
parte necessria a mobilizao de splenn clulas NK, enquanto CCR1 necessrio para
o acmulo de clulas NK no fgado (65). Para ganhar uma introspeco no mecanismo
de mobilizao de clulas NK do bao, realizamos experimentos de imunofluorescncia
em cortes congelados de bao obtidos de camundongos injetados com
lipopolissacardeo (LPS) ou con-A. A redistribuio das clulas NK do bao foi
observada em resposta injeo de Con-A (Fig7). clulas NK parecem migrar a partir
da polpa vermelha para a zona marginal. Esta Relocalization de clulas NK no foi
observada quando os ratos foram tratados com LPS, embora esse estmulo provoca uma
redistribuio macia de clulas dendrticas (fig7.4 e dados no mostrados). Aps a
injeo de Con-A, as clulas NK so, portanto, encontrado em estreito contacto com os
macrfagos da zona marginal (fig8). Ser de
interesse para testar se CXCR3 est envolvido neste processo. Este fenmeno
transitrio, como 48h aps a injeo de Con-A, a distribuio das clulas NK no splenn
normal. Recrutamento de clulas NK a LN inflamatrio
A contratao em massa das clulas NK observado na LN drenagem em resposta a
uma injeo de grandes patas leishmania (29), TRL 08/07 ligantes, ou LPS-ativao de
clulas dendrticas (87). Este recrutamento dependente CXCR3 (87). ligantes CXCR3
como CXCL9 so expressos na superfcie de HEVs inflamatrios (112). Em condies
inflamatrias, a maioria das clulas NK so recrutados preferencialmente para a zona de
clulas T do LN, HEVs prximo, em estreita proximidade com as clulas dendrticas
(29). Recrutamento de clulas NK necessrio para ajudar a T-polarizao das clulas T
nave ativado dentro do LN (87). Em outro sistema, verificou-se que CD62L tambm
era necessrio para o recrutamento no LN inflamatrias em resposta a uma injeo
subcutnea de clulas tumorais (72).
Observaes finais
O conhecimento preciso da anatomia do sistema imunolgico , obviamente,
fundamental para nossa compreenso da imunidade. Em contraste com a T, B e clulas
dendrticas, o trfico de clulas NK em condies normais e de doena pouco
caracterizado. No entanto, parece que linfide patrulha NK clulas e rgos nolinfides. Em um estado estacionrio, as clulas NK presentes em uma freqncia
elevada na circulao, pronto para extravasar para os tecidos em condies
inflamatrias. Alm dos papis de SIP5 e receptores de quimiocinas, o conjunto de
molculas que govem trfico de clulas NK in vivo ainda no foram identificados. A
disseco dos mecanismos que regulam a migrao das clulas NK pode provavelmente
fornecer novas perspectivas para a manipulao dessas clulas para fins teraputicos,
como exemplificado pelo uso do agoist S1P, FTY720, como T-imunossupressor de
clula-B e.