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Bactrias anaerbias

 Aerbios
 Obrigatrios
 Anaerbios
 Facultativos
 Estritos
 Propriamente
Estritos
 Aerotolerantes

Metabolismo na presena de O2
Exigem O2 como aceitador final de electres
Metabolismo na ausncia de O2
Crescem aerobicamente, usando O2 como aceitador final de electres e
anaerobicamente, obtendo energia pela fermentao de compostos orgnicos
Incapazes de usar O2 e inibidas por ele
No tolera [O2] maior que 0,5%
So membros da flora normal
Toleram [O2] at 2-8%
Responsveis pela maioria das infs.

Bactrias anaerbias e toxicidade ao O2


Do metabolismo aerbio bacteriano resultam espcies reactivas de O2
 perxido de hidrognio
 radicais hidroxilo
 anies superoxido
Estas espcies reactivas de O2 tornam-se txicas:
 Causam danos no DNA
 Destroem componentes lipidicos das clulas
 Inactivam enzimas essenciais para as actividades metablicas
Bactrias aerbias e anaerbias facultativas tm enzimas protectoras
 Catalase
 Peroxidase
 Superoxido dismutase
Conceito clssico toxicidade do O2 nos anaerbios dependia da ausncia destas enzimas protectoras.
Actualmente:
 Superoxido dismutase
 Produo induzida pela exposio ao O2 em Bacteroides e outros
 Os nveis de enzima so superiores nos Gram- que nos Gram+
 Correlacionam-se com o grau de tolerncia ao O2 nos anaerbios obrigatrios moderados
 Papel importante na tolerncia ao O2 e na virulncia de alguns anaerbios
 Catalase
 Produo demonstrada em Bacteroides, Peptostreptococcus e Propionibacterium
 No se correlaciona com a tolerncia ao O2
 Peroxidase
 A sua actividade no foi demonstrada em anaerbios.
As razes pelas quais outros anaerbios (Clostridium perfringens) so capazes de sobreviver a exposies
de O2 superiores a 72h ou mais apesar da ausncia de enzimas protectoras so desconhecidas.

 Bactrias anaerbias so predominantes no organismo


 Maioria das inf. so endgenas, provocadas por bactrias que ganham virulncia ou passam para
locais estreis onde se tornam patognicas
 A identidade dos anaerbios associados com infs. especificas pode frequentemente ser previsvel pelo
local do organismo envolvido
 Passagem atravs de barreiras muco-cutneas (trauma ou cirurgia), propagao a partir de zonas
contguas, exp., por aspirao.
 Algumas inf. so exgenas associadas a agentes esporulados:
 Botulismo Clostridium botulinum
 Ttano Clostridium tetani
 Gangrena Gasosa Clostridium perfringes
 Processo infeccioso envolve uma mistura de bactrias que actuam por sinergismo de virulncia e
complementaridade metablica por vezes, associam-se a bactrias aerbias que numa 1 fase lhes
fornece alguns metabolitos.
SNC
Cabea e pescoo
Pleuropulmonar

Intra-abdominais
Tracto genital feminino

Tecidos moles

Abcessos cerebrais
Abcesso periodontal
Outras infs. orais
Pneumonia por aspirao
Abcessos pulmonares
Pneumonia necrosante
Peritonites e abcessos
Abcessos tubo-ovarianos
Abcessos vulvo-vaginais
Aborto sptico
Gangrena gasosa (mionecrose)
Celulite crepitante
Fasceite necrosante

Colheita de amostras
 Por aspirao com agulha e seringa
 Amostra de tecido por bipsia
 Zaragatoas se possvel, devem ser rejeitadas!
 Mais susceptveis de contaminao
 Mais expostas ao O2 e dessecao
 No permitem a preparao de um bom esfregao
 Colheita de pequeno volume de produto para amostra
Local
Sangue
Dentes

Espcimen aceitvel
Sangue
Aspirados endodentarios
Aspirados de coleco purulenta

Faringe
Seios

Aspirados de abcessos com agulhas


Especimens colhidos por interveno cirrgica

Espcimen inaceitvel
Raspados das superfcies
gengivais, dos dentes ou mucosa
vizinha
Zaragatoa
Irrigao ou aspirados
2

perinasais
rea pulmonar

SNC
rea
abdominal
Tracto genital
feminino

Tracto urinrio
Tecidos moles

Aspirao transtraquel
Aspirados de coleces purulentas
Colheira por operao
Aspirao percutnea pulmonar
Liquido pleural
Aspirado por broncoscpio com proteco
terminal
LCR
Aspirados por paracentese
Bile
Colheitas por interveno cirrgica
Culdocentese
Colheita cirrgica
Colheita por laparoscopia
Espcimen da cavidade endometrial com curette
de suco
Aspirado de urina supra-pbico
Aspirados de feridas profundas
Aspirados com agulha atravs de zonas intactas
Colheira cirrgica

Expectorao espectorada
Aspirados nasofarngeos
Broncoscopia vulgar
Aspirado de traqueostomia

Contedo gstrico, Fezes


Amostras intraluminares
Zaragatoa rectal
Descarga vaginal
Amostras cervicais
Corrimento colhido com zaragatoa
Exsudado do endomtrio
Urina
Amostra superficial

Transporte da amostra
 Amostras mantidas a 37C
 Evitar refrigerao das amostras leva diminuio do n microrganismos viveis
 Em caso de atraso de 15-20 mins entre colheita e processamento
 Velocidade de transporte tanto maior quanto menor a amostra colhida
 Usados para pequenas amostras de tecido, fluidos aspirados ou especimens colhidos com zaragatoas
 Tubos fechados ou frascos com uma atmosfera anaerbica e base de agar isotonica que mantm
ambiente hmido Port-A-Cul system, Anaerobic Transport Mdium, Anaport e Anatube
 Tubos de vidro ou plstico, com sistemas catalticos para gerar um ambiente anaerbico depois da
zaragatoa ser inserida Vacutainer anaerobic specimen collector, Anaerobic Culturette system
 Tubos com ambiente anaerbico e meio de transporte reduzido PRAS, anaerobic transport system,
anaerobic transport medium

Exame macroscpico
 Inspeco visual sugerem a presena de bactrias anaerbias:
 Purulncia
 Odor ptrido
 Tecidos necrosados
 Pus com gros de enxofre
 Exame com luz U.V. (360 nm) pesquisa de fluorescncia vermelho tijolo: anaerbios pigmentados
Porphyromonas e Prevotella
3

Exame microscpico
 Esfregao corado pelo Gram observao de morfologia tpica de mts bacts
 Bacteroides bacilo Gram- pouco corado, pleomrfico
 Fusobacterium bacilo Gram- fusiforme e fino
 Veillonella coco Gram- pequeno
 Actinomyces bacilo Gram+ ramificado
 Clostridium perfringens bacilo Gram+ largo e rectangular
 Mtodo de Gram - funciona como um controlo de qualidade
 Se espcimen transportada correctamente
 Se meio de isolamento foi apropriado
 Se sistema de incubao anaerbico foi apropriado
 Se subcultura anaerbica foi feita correctamente
 Se crescimento foi inibido pela presena de outras bactrias ou antibiticos
 Microscopia de campo escuro e contraste de fase demonstrao de espiroquetas
 Imunoflourescncia com anticorpos monoclonais rpida identificao de mts espcies anaerbias,
caro, mts falsos + e , no substitiu cultura

Outros procedimentos
 Cromatografia gs-liquida (GLC) analise directa dos AG de cadeia curta
 Culturas de sangue com algum valor
 Analise directa de material purulento pouco sensvel e especifico
 Testes serolgicos uso limitado, teste de antigenio do ltex para Clostridium difficile

Seleco dos meios de cultura


Maioria das inf. so polimicrobianas
Vai depender tipo de amostra, volume amostra, recursos econmicos
Meios devem ser frescos e/ou pr-reduzidos
 Meios no selectivos devem ser enriquecidos com vit K1 e hemina
 Agar-sangue crescimento de anaerbios estritos e facultativos
 Brucella bacilos Gram- anaerbios
 Brain-heart
 Columbia
 CDC cocos anaerbios
 Schaedler bacilos Gram- anaerbios, alta dose de glicose, favorece crescimento de organismos
sacarolticos
 Fastidious Anaerobe agar Fusobacterium
 Meios selectivos
4

 BBE agar (Bacteroides bile esculin agar) crescimento selectivo de B. fragilis, ocasionalmente
outras bactrias crescem: Fusobacterium, Klebsiella, Enterococcus
 KVLB agar (agar sangue lisado com vancomicina e kanamicina) crescimento selectivo de
Bacteroides e aumenta a produo de pigmento nos Bacteroides pigmentados (Prevotella e
Porphyromonas); bacilos Gram- resistentes kanamicina podem crescer neste meio
 Agar sangue de carneiro com lcool fenietil crescimento da maioria dos anaerbios Gram- e +;
inibe bacilos anaerbios facultativos Gram Agar sangue com colistina e acido nalidixico crescimento dos anaerbios estritos e facultativos
Gram +; maioria das bactrias Gram- so inibidas
 Caldos se sistema de incubao anaerbico falhar, a espcimen em cultura no ser perdida
 Meio de tioglicolato enriquecido com hemina e vit K1 isolamento de anaerbios de crescimento
lento, como Actinomyces
 Chopped meat broth (caldo de carne) para isolamento de anaerbios

Preparao das amostras para sementeiras


 Volume liquido concentrao por centrifugao, semear o sedimento
 Zaragatoa extracao suave num pequeno volume (0,5-1ml) de caldo de tioglicolato; semear o
espcimen no meio de cultura usando uma pipeta
 Tecidos homogeneizao em 1ml caldo de tioglicolato suave e rpido, para evitar exposio ao O2
 Usar sempre pipetas e ansas esterilizadas na inoculao dos meios

Incubao em anaerobiose
Composio habitual 5% H2, 5% CO2, 90% N2
Sistemas produo de anaerobiose:
Jarra de anaerobiose

Saco de
anaerobiose
Baixo
Alto

Cmara de
anaerobiose
Alto
Moderado
Moderado
Moderado-grande
Sistema em
anaerobiose por
catalisador
palladium, reactivo
pelo calor a
160C/2h, ambiente
mantido seco por
gel de slica (pode
empobrecer
crescimento bact)
Placas
inspeccionadas a

Custo inicial
Custo de
manuteno
Tempo
Espao
Outras
caractersticas

Moderado
Moderado
Baixo
Moderado
Sistemas de vlvulas
Sistema de evacuaosubstituio
Sistema gerador de gs
Sistema Gs-Pak
catalisador palladium e
indicador de
anaerobiose

Baixo
Pequeno
1 ou 2 placas,
crescimento pode
ser detectado
examinando as
placas pelo saco
transparente

Vantagens

Simples, conveniente,
permite uso de tcnicas

Placas
inspeccionadas a

Roll tube
Moderado
Moderado
Moderado
Moderado
ptimo p/ espcies
extremamente
sensveis ao O2,
no conveniente
para isolamento de
anaerbios
obrigatrios
moderados
associados s infs.
humanas
Tubos
inspeccionados a
5

convencionais

Desvantagens

qq momento sem
perturbar as
condies de
anaerobiose;
simples,
conveniente,
permite uso de
tcnicas
convencionais
Uso de apenas 2
placas,
possibilidade de
exposio
prolongada das
placas ao O2
durante
subculturas

Possibilidade de
exposio prolongada
das placas ao O2
durante
inspeco/subculturas

qq momento sob
condies de
anaerobiose,
isolamento
segundo tcnicas
tradicionais

qq momento sem
perturbar as
condies de
anaerobiose

Ocupa mt espao,
custo inicial
elevado, consumo
de tempo elevado

Tecnicamente
difcil, difcil
isolamento de
estirpes em cultura
pura, no permite
obs da morfologia
celular tpica

Identificao das bactrias anaerbicas


Presumptiva:
 TSA colistina, vancomicina, kanamicina
 Provas bioqumicas - catalase, produo de indol, reduo de nitratos, polianetolsulfonato de sdio,
crescimento em 20% bile, alanina peptidase, discos verdes brilhantes, urease, licitinase e lipase
 Testes cromognios kits de identificao rpida (4-24h) -glicosidase, -galactosidase, glicosidase, -fucosidase
Definitiva
 Cromatografia gs-liquida (GLC) analise directa dos ac. gordos de cadeia curta
 Testes bioqumicos PRAS determinar actividade sacaroltica
 Placas Presempto testes diferenciais nos quadrantes das placas I, II e III

Anaerbios

Morfologia

Esporos

Dupla zona de
-hemolise

kanamicina

colistina

vancomicina

Crescimento
em 20% bile

catalase

Alanina
peptidase

Produo de
indol

Reduo de
nitratos

urease

lipase

lecitinase

Mobilidade

 Sistemas rpidos de identificao API 20 A, Minitek system, API-ZYM system

B. fragilis
B. pigmentados
B. ureolyticus
Fusobacterium
Veillonella
Peptostreptococcus
C. perfringens
C. difficile
Propionibacterium
Eubacterium

B
CB/B
B
B
C
C
B
B
B
CB/B

+
+
-

+
-

R
R
S
S
S
V
S
S
S
S

R
V
S
S
S
R
R
R
R
R

R
V
R
R
R
S
S
S
S
S

+
V
+
+
-

V
V
V
+
-

+
+
V
+/V

V
V
V
V
+/-

+
+
V
+
+

V
-

V
V
-

+
-

V
+
-

Bactrias
anaerbias

Bacilos anaerbios,
Gram +,
formadores de
esporos

Bacilos anaerbias,
Gram +, no
formadores de
esporos

Actinomyces
Mobiluncus
Bifidocterium
Eubacterium
Propionibacterium
Lactobacillus

Cocos anaerbios
Gram +

Bactrias
anaerbias
Gram

 Pele e mucosas (oral, TGI, genital) do Homem


e animais
 Mts so oportunistas
 Inf. graves com risco de vida
 Crescimento lento

Actinomyces









Anaerbios estrictos ou facultativos


Produo de inf. crnicas de desenvolvimento lento
Desenvolvimento de filamentos ou hifas semelhante aos fungos
Crescimento lento em cultura 2 semanas
A. israelli, A. meyeri, A. naelundii, A. odontolyticus, A. viscosus
Colonizam tracto resp. sup, TGI, TGU feminino
Baixa virulncia traumatismos, cirurgia, infs.
Actinomicose macroscopicamente: gros de enxofre amarelos ou laranja
 Cervicofacial, torcica, abdominal, plvica, SNC
 Sensveis penicilina e resistentes ao metronidazole
Propionibacterium

Mobiluncus

 Bacilos pequenos Gram + em cadeias curtas


 Na pele, conjuntiva, ouvido externo,
orofaringe, TGU feminino
 Anaerbios facultativos ou estritos, imveis,
catalase +, fermentadores de carbohidratos co
produo de c. proprinico
 P. acnes acne e inf. oportunistas
 P. propionicus - canaliculite lacrimal e
abcessos






Anaerbios obrigatrios de crescimento lento


Gram varivel ou Gram
Bacilos encurvados com extremidades afiladas
Classificados como Gram +
 Parede celular Gram+
 Falta de endotoxina
 Susceptvel vancomicina, clindamicina,
eritromicina e ampicilina
 Resistente colistina
 Vaginose bacteriana

Lactobacillus
 Bacilos anaerbios facultativos ou obrigatrios
 Boca, estmago e TGU (o + comum na uretra)
 Frequentemente isolado na urina e sangue
 Resistente vancomicina
 Bacteremia, endocardite, septicemia
oportunista
 Tratamento penicilina + aminoglicosdeo

Bifidobacterium e Eubacterium
 Orofaringe, clon e vagina
 Baixa virulncia raramente causam infs.

Bactrias
anaerbias

Bacilos anaerbios,
Gram +,
formadores de
esporos

Bacilos anaerbias,
Gram +, no
formadores de
esporos

 Eram classificados como Peptostreptococcus


 Colonizam cavidade oral, TGI, TGU e pele
 Infs ocorrem qd bacts. Passam destes locais
para outros estreis
 Tracto resp. sup. sinusite e inf.
pleuropulmonares
 TGI inf. intrabdominais
 TGU endometrite, abcessos plvicos,
salpingite
 Pele celulite, infs. tecidos moles
 Sangue infs. sseas
 Dx lab difcil:
 Necessrio meio de transporte para
prevenir contaminao com outros agente que
colonizem as mucosas
 Meio de transporte sem oxignio
 Meios de cultura nutricionalmente ricos
 Incubao 5-7 dias
 Sensveis penicilina, metronidazole,
imipenem e cloramfenicol
 Resistentes aos aminoglicosdeos (tds
anaerbios)
 Anaerococus, Fingoldia, Micromonas,
Peptostreptococcus, Schleiferella

Cocos anaerbios
Gram +

Bactrias
anaerbias
Gram

 Colonizam tracto resp.sup, TGI, TGU


(prevalentes)
 Patognicas possuem catalase e superxido
dismutase toleram exposio ao O2
 Produzem enzimas citotxicas
 Causam infs. endgenas
 Tracto resp.
 Abcessos cerebrais
 Intrabdominais
 Ginecolgicas
 Cutneas e dos tecidos moles
 Bacteremia
 Gastroenterite
 Meios selectivos
 Enriquecidos com bile
 Enriquecidos com sangue lisado estimula
produo de pigmento por Prevotella e
Porphyromonas
 Bacteroides bacilos, crescimento estimulado
em meios com 20% bile, crescimento rpido (2
dias), sem endotoxinas
 B.fragillis pleiomrfico, o + virulento,
produz BFT e -lactamases , identificao:
 Gram e morfologia das colnias
 Resistncia kanamicina, vancomicina e
colistina
 Crescimento estimulado em meios com
20%bile
 Fusobacterium
bacilos alongados,
produzem -lactamases
 Porphyromonas bacilos assacarolticos, bilesusceptivel, pigmentados, produzem -lactamases
 Prevotella bacilos pequenos sacarolticos,
bile-susceptivel, pigmentados e no-pigmentados,
produzem -lactamases

Bactrias
anaerbias

Bacilos anaerbios,
Gram +,
formadores de
esporos



Clostridium 

Bacilos anaerbios,
Gram +, no
formadores de
esporos

Cocos anaerbios
Gram +

Bactrias
anaerbias
Gram

Anaerbios estritos
Ubiquitrios solo, gua, TGI de humanos e animais
Maioria comensais
Capacidade de patogenicidade
 Sobrevivncia em condies adversas pela esporulao
 Crescimento rpido em meios sem O2, enriquecidos nutricionalmente
 Produo
 Toxinas histoliticas
 Enterotoxinas
 Neurotoxinas

Clostridium perfringens
 Bacilos grandes, rectangulares, Gram +
 Esporos raramente obs (in vivo/in vitro)
 Imveis, crescimento tpico de bacts. mveis
 Hemolticos zona dupla de hemolise pelas
toxinas e em agar-sangue
 Produo de toxinas letais: , , ,
 5 tipos (A-E): A infs. + freq
C enterite necrosante
 Produo de lecitinase (PLC) = -toxina (lise)
 Da por exposio exgena ou endgena
 Infs. tecidos moles, celulite, miosite
supurativa, mionecrose ou gangrenas gasosas,
gastroenterite, intoxicao alimentar (autolimitada), enterite necrosante
 Tratamento penicilina
Clostridium tetani
 Bacilo mvel, com esporos nas extremidades
 Difcil crescimento anaerbios estritos
 Proteoliticos, no fermentam carbohidratos
 2 toxinas:
 Tetanolisina hemolisina, oxignio-labil
 Tetanospasmina neurotoxina termo-labil
provoca Ttano por desregulao da actividade
excitatria neuronial paralisia espstica
 Vacinao com toxoide tetnico
 Testes de neutralizao antitoxina tetnica
 Ttano:sistmico, localizado, ceflico,neonatal

Clostridium difficile
 Anaerbios estritos
 Infs. endgenas
 Diarreia ps-antibioterapia
 Colite pseudomembranosa
 Produo:
 Toxina A = enterotoxina
 Toxina B = citotoxina
 Hialuronidase
 Factores de adeso
 Diagnstico deteco de enterotoxina ou
citotoxina nas fezes
 Tratamento vancomicina e metanizadole
Clostridium botulinum
 Anaerbios estritos
 Crescimento lento
 Produo de 1 de 7 toxinas (A-G) toxinas
botulinicas (termo-labeis)
 Estirpes que causam da produzem lipase,
protenas digerem leite, gelatinases, fermentam glicose
 Da humana toxinas A, B, E e F
 Botulismo bloqueio da libertao de Ach
paralisia flcida
 Isolar bacts 10 mins a 80C
 Toxinas inactivadas se 10 mins a 60-100C