INTRODUO

As transaminases (aminotransferases) consistem num significante grupo de

enzimas, responsveis por catalisar a transferncia de um grupo amino de
um aminocido para um cetocido (de Almeida Barbosa, 2010). As enzimas
aspartato aminotransferase AST (transaminase glutmica-oxalactica
TGO) e alanina aminotransferase ALT (transaminase glutmica-pinvica
TGP) catalisam a transferncia reversvel dos grupos amino de um
aminocido para o a-cetoglutarato, formando cetocido e cido glutmico
(Motta, 2000). Para que tais reaes ocorram, necessrio que haja a
presena da coenzima piridoxalfosfato, ocorrendo da seguinte forma:

Tais enzimas exercem funes fundamentais tanto na sntese como na

degradao de aminocidos, podendo atuar como uma ligao entre o
metabolismo dos aminocidos e carboidratos, visto que as reaes
catalisadas por elas envolvem a interconverso dos aminocidos a piruvato
ou cidos dicarboxlicos, ambos intermedirios necessrios no metabolismo
de carboidratos e aminocidos, respectivamente (Motta, 2000).
As enzimas pertencentes ao grupo das aminotransferases podem ser
amplamente encontradas nos tecidos humanos. Sendo que, as atividades
mais elevadas de AST (TGO) encontram-se no miocrdio, fgado, msculo
esqueltico, com pequenas quantidades nos rins, pncreas, bao, crebro,
pulmes e eritrcitos (Motta, 2000).
Segundo Motta, 2003, a ALT principalmente encontrada no citoplasma do
hepatcito, enquanto 80% da AST est presente na mitocndria. Tal
caracterstica pode auxiliar no diagnstico e prognstico de doenas
hepticas. Sendo, a partir disso, possvel afirmar que, em dano
hepatocelular leve, a forma predominante no soro a citoplasmtica (ALT),
enquanto em leses graves h liberao da enzima mitocondrial (AST),
elevando a relao AST/ALT.
O aumento nos nveis de ALT e AST pode indicar leses ou, at
mesmo, destruio das clulas hepticas, liberando estas enzimas para a
circulao. Em desordens hepatocelulares, nveis elevados de ALT e AST
podem ser encontrados na hepatite aguda, onde h maior atividade de ALT
em relao a atividade de AST, sendo a relao AST/ALT menor que 1
(Motta, 2000). Alm disso, tais enzimas podem ter sua atividade aumentada
em condies de cirrose heptica, mononucleose infecciosa e colestase
extra-heptica aguda, alm de outras desordens no hepticas como, por
exemplo, infarto do miocrdio, que pode apresentar nveis elevados de AST
(Motta, 2000).

FUNDAMENTO DO MTODO
TRANSAMINASE (TGO/AST):

Metodologia: Reitmamm e Frankel

A transaminase catalisa a transferncia do grupamento amino de um alfaaminocido para um alfa-cetocido.
L - aspartato + Alfa-cetoglutarato L - glutamato + oxalacetato.
O oxalacetato reage com a dinitrofenilhidrazina. A intensidade de colorao
da hidrazona formada, em meio alcalino, diretamente proporcional
quantidade de oxalacetato, em determinado tempo, que, por sua vez,
funo da atividade enzimtica.

TRANSAMINASE (TGP/ALT):
Metodologia: Reitmamm e Frankel
A transaminase catalisa a transferncia do agrupamento amino de um alfaaminocido para um alfa-cetocido.
L - Alanina + Alfa-cetoglutarato L Glutamato + Piruvato
O piruvato reage com a dinitrofenilhidrazina. A intensidade de colorao da
hidrazona formada, em meio alcalino, diretamente proporcional
quantidade de piruvato, em determinado tempo, que, por sua vez, em
funo da atividade enzimtica.

PROCEDIMENTOS:
TRANSAMINASE (TGO/AST):
Inicialmente, foi preparada uma soluo de hidrxido de sdio de uso (0,4 n)
com a finalidade de ser usada no final da reao. O objetivo da adio de
hidrxido de sdio intensificar a cor do produto formado, uma vez que
este apenas estvel em meio alcalino, estabilizando a colorao do meio.
Em seguida, foi construda uma curva de calibrao, obedecendo os
seguintes critrios:

A cada tubo foi adicionado 1,0 mL de Reagente de Cor N2,

homogeneizando os tubos que permaneceram em repouso por 20 minutos
temperatura ambiente. Em seguida, foram adicionados 10,0 mL de
hidrxido de sdio de uso (0,4 N) aos tubos, homogeneizando-os e deixando
em repouso por 5 minutos. As absorbncias foram determinadas a 505 nm,
acertando o zero com gua destilada. A curva de calibrao foi traada,
colocando na ordenada os valores de absorbncia e na abcissa, os valores
de unidades/mL, como mostrado a seguir:

Curva de Calibrao TGO/AST

0.3
f(x) = 0x + 0.11
R = 0.95

0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0

20

40

60

80

100 120 140 160 180 200

Feito isto, o tubo de ensaio para dosagem da TGO foi identificado,

procedendo como a seguir:

O tubo foi homogeneizado e deixado em repouso por 5 minutos,

temperatura ambiente. Posteriormente, o contedo foi transferido para a
cubeta, medindo a absorbncia em 505 nm, acertando o zero com gua
destilada.

TRANSAMINASE (TGP/ALT):
Assim como realizado para TGO/AST, inicialmente foi preparada uma
soluo de hidrxido de sdio de uso (0,4 n) com a finalidade de ser usada
no final da reao, com o objetivo de intensificar a cor do produto formado
pelo mecanismo j explicado.
Feito isto, foi construda uma curva de calibrao, obedecendo os seguintes
critrios:

Sendo adicionado a cada tubo 1,0 mL de Reagente de Cor N 2,

homogeneizando os tubos que permaneceram em repouso durante 20
minutos temperatura ambiente. Em seguida, foram adicionados aos tubos

10,0 mL de hidrxido de sdio de uso (0,4 N), homogeneizando-os e

submetendo-os a repouso por 5 minutos. Feito isto, foram determinadas as
absorbncias em 505 nm, acertando o zero com gua destilada. Por fim, a
curva de calibrao foi traada, colocando na ordenada os valores de
absorbncia e na abcissa, os valores de unidades/mL, como observado a
seguir:

Curva de Calibrao TGP/ALT

0.3

f(x) = 0x + 0.1
R = 0.93

0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0

20

40

60

80

100

120

140

160

importante salientar que cada reagente, do N 1 ao N 4 consistem nas

seguintes substncias:
Nmero 1 - Substrato de TGP ou ALT - Contm: Tampo Fosfato 0,1
mol/L pH 7,4, L-Alanina 0,2 mol/L, cido Alfa Cetoglutrico 2 mmol/L e Azida
Sdica 7,7 mmol/L.
Nmero 2 - Reagente de Cor - Contm: 2,4-Dinitrofenilhidrazina 1,0
mmol/L e cido Clordrico 1,0 mol/L.
Nmero 3 - Hidrxido de Sdio Concentrado - Contm: Hidrxido de
Sdio 5 mol/L.
Nmero 4 - Padro - Contm: Piruvato de Sdio 2,53 mmol/L, Tampo
Fosfato 0,1 mol/L pH 7,4 e Azida Sdica 7,7 mmol/L.

Realizados todos os procedimentos j descritos pata TGP/ALT, procedeu-se a

identificao do tubo de ensaio para dosagem da TGP como a seguir:

Aps tal procedimento, o tubo contendo a amostra foi homogeneizado e

permaneceu em repouso durante 5 minutos, temperatura ambiente. Em
seguida, a amostra foi transferida do tubo para a cubeta, a fim de medir a
absorbncia em 505 nm, acertando o zero com gua destilada.

CLCULOS E RESULTADOS
TRANSAMINASE (TGO/AST):
O valor de TGO foi calculado atravs da curva de calibrao, utilizando a
equao da reta obtida.
y = 0,001x + 0,1101
A absorbncia da amostra foi 0,114. Desta maneira, foi aplicada na equao
da reta da seguinte forma:
0,114 = 0,001x + 0,1101
0,114 0,1101 = 0,001x
0,0039 = 0,001x
x = 0,0039/0,001
x = 3,9 U/mL

De acordo com o kit utilizado, os valores de referncia para TGO/AST, em

U/mL, para indivduos sadios deve ser entre 4 a 36 U/mL. Considerando o
valor obtido a partir da amostra utilizada, possvel observar que este se
encontra dentro da faixa de valores esperados. Vale ressaltar que, valores
altos de atividade da enzima aspartato amino transferase - TGO/AST pode
indicar a ocorrncia de leso heptica, atravs da leso membrana
plasmtica, liberando ento enzimas citoplasmticas e, no caso da TGO/AST
uma possvel leso mitocondrial, visto que esta enzima pode ser encontrada
tambm na mitocndria. Vale ressaltar que leses crnicas elevam o nvel
de TGO/AST na corrente sangunea em relao ao nvel de TGP/ALT, devido
leso mitocondrial. Alm disso, o aumento da atividade da TGO/AST, pode
sugerir alteraes de vrios tecidos, visto que tal enzima encontra-se em
alta concentrao no corao, fgado, msculo esqueltico, rins e pncreas.
Grandes alteraes nos seus nveis podem ocorrer em casos de hepatites
virais, txicas, doenas necrticas hepticas, mononucleoses, colestase
intra-heptica e distrofias.

TRANSAMINASE (TGP/ALT):
A partir da curva de calibrao, o valor de TGP pode ser calculado atravs
da equao da reta a seguir, obtida na curva de calibrao:
y = 0,0014x + 0,103
Foi obtido 0,136 como valor de absorbncia da amostra, sendo aplicado na
equao da reta como mostrado a seguir:
y = 0,0014x + 0,103
0,136 = 0,0014x + 0,103

0,136 0,103 = 0,0014x

0,033 = 0,0014x
x = 0,033/0,0014
x = 23,57 U/mL

Tendo como base o kit utilizado, os valores de referncia para TGP/ALT, em

U/mL, para indivduos sadios deve estar situado entre 4 a 32 U/mL. Desta
maneira, possvel afirmar que a amostra utilizada se encontra dentro dos
valores considerados normais para TGP/ALT. Caso o valor da enzima TGP/ALT
estivesse aumentado, isso indicaria uma possvel leso heptica, visto que
em casos de hepatite viral e txica, bem como em outras doenas
hepticas, associadas necrose heptica os nveis de atividade dessa
enzima encontram-se aumentados.

CONCLUSO
A partir dos testes de determinao da atividade enzimtica da aspartato
aminotransferase, AST (Transaminase glutmica-oxalactica, TGO) e alanina
aminotransferase, ALT (transaminase glutmica-pinvica, T GP), foram
obtidos resultados dentro das faixas aceitveis, indicando que o
metabolismo heptico ocorre de maneira adequada. Caso os valores dessas
enzimas estivessem alterados, isso poderia indicar uma leso heptica ou,
at mesmo, destruio da membrana plasmtica heptica, gerando o
extravasamento de tais enzimas para a corrente sangunea.

REFERNCIA

MCPHERSON, Richard A. Diagnsticos clnicos e tratamento por mtodos

laboratoriais. 21 Ed. Barueri, SP: Manole, 2012.
MOTTA, Valter T. Bioqumica clnica: princpios e interpretaes. Editora: Mdica Massau,
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Motta V T. Bioqumica Clnica para o Laboratrio: princpios e interpretaes. 4 ed. So Paulo:

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de Almeida Barbosa, Anderson, et al. "Perfil da aspartato aminotransferase e

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