ESPECTROFOTOMETRIA

1. Qu es la espectrofotometra y cul es su objetivo?

ESPECTROFOTOMETRA: Tcnica de medicin de la cantidad de energa radiante que absorbe o
transmite un sistema qumico en funcin de la longitud de onda; es el mtodo de anlisis ptico ms
usado en las investigaciones qumicas y bioqumicas.
OBJETIVO: Permitir medir la densidad ptica o absorbancia, as como la tramitancia.
2. Partes funcionales del equipo. Conocer el esquema de la distribucin y que hace cada parte.
La absorbancia y la tramitancia de una sustancia en disolucin se miden con un aparato denominado
espectrofotmetro, el cual consta bsicamente de los siguientescomponentes:
Fuente de luz: Lmpara que emite una mezcla de longitudes de onda.
Colimador: Conjunto de lentes que enfocan la luz convirtindola en un haz de rayos paralelos
Monocromador: Dispositivo que selecciona luz de una nica longitud de onda.
Detector fotoelctrico: Transductor de luz en electricidad. La luz provoca el desplazamiento de electrones en
el metal del detector, produciendo una corriente elctrica que es proporcional a la intensidad de la luz recibida.
Registrador: Mide la seal del detector, la compara y genera una medida en una escala determinada.

3. Concepto y formula de Tramitancia y absorbancia

Absorbancia: Cantidad de radiacin que absorbe una solucin. Es adimensional.
A= axbxc
I=Intensidad del haz que abandona la celda.
I0= Intensidad de la luz que incide sobre la celda.
a= cte. De proporcianalidad de absortividad
b= longitud interna de la celda (1cm)
c= concentracin de las especies absorbentes.
Tramitancia: Es la razn entre la luz monocromtica transmitida (P) por una
muestra y la energa o luz incidente (Po) sobre ella. Tanto la energa
radiante incidente como la transmitida deben ser medidas a la misma
longitud de onda.
%T = 100 P / P0
4. Ley general de la espectrofotometra, definicin formula y descripcin de cada parte de la formula
La ley se refiere a la Ley de Lambert-Beer que permite hallar la concentracin de una especie qumica a partir
de la medida dela intensidad de luz absorbida por la muestra.
Esta ley se puede expresar en trminos de potencia de luz o de intensidad de luz, asumiendo luz
monocromtica, como:

I0, es la intensidad de la luz que incide sobre la muestra y que proviene de la fuente.
e, es el coeficiente de absortividad molar en unidades de M-3. cm-1
b, es la longitud de la trayectoria del haz de luz a travs de la muestra o el espesor de la celda en cm o lo que
se conoce como paso ptico.
5. Graficas: Espectro de absorcin, espectro de transmisin y curva de calibracin. Que representan, como se
construyen para que sirve.
Espectro de absorcin
Curva de calibracin: grfica que relaciona la concentracin de al menos cinco soluciones
de estndar de concentraciones conocidas, con la absorbancia de cada uno de ellos a
la longitud de onda mxima ( max)
Sirve para para determinar la concentracin de una muestra problema.

6. Factor

de

calibracin: como se halla y en qu casos se utiliza.

El factor de calibracin se halla dividiendo la concentracin del estndar sobre la absorbancia estndar. Es
adimensional. Cumple con la curva de calibracion
En pruebas de determinacin: glucosa, colesterol, etc