Practica 4

Determinacin Cuantitativa Enzimtica Colorimtrica de cido

rico en Suero, Plasma u Orina
INTRODUCCIN
El cido rico es producto del metabolismo de las purinas (componentes de ciertas
protenas) y se produce de forma natural en el organismo.
Al existir ms purinas en el cuerpo, aumentan las concentraciones de cido rico
en sangre. Esto se conoce como hiperuricemia. Las concentraciones normales del
cido rico en sangre son 7mg/dl para hombres y para las mujeres 6 mg/dl. Entre
ms tiempo se mantenga la hiperuricemia, mayor es la posibilidad de llegar a
desarrollar gota, Inflamacin articular aguda o crnica causada por la presencia
de cristales de cido rico dentro de la articulacin.
MATERIALES Y MTODOS
-

6 eppendorfs: 3 puntas amarillas de 2-200 L y 3 azules de 100 a 1000 L para

micro pipetas.

Guantes

Cubreboca

1 Tubo rojo para muestra sangunea

Sistema vacutainer

2 micro pipetas: 1-1000 L

1 reactivo para anlisis de cidorico (RB):

Buffer de fosfatos. pH7.0 50 mmol/L
Acido 3,5-dicloro-2-hidroxibencensulfnico..4 mmol/L
4-aminofenazona.0.3 mmol/L
Peroxidasa..> 1000 U/L

Uricasa.> 200 U/L

-

Estndar de cido rico enzimtico(8 mg/dL)

Estabilizadores y activadores en solucin buffer

1 torniquete

Alcohol

Algodn
-

Muestra de sangre

Equipo a utilizar:
-

Centrifuga

Incubadora

Espectrofotmetro * reemplazado por el equipo automtico Spinlab

PROCEDIMIENTO
1. Ejecutamos la extraccin de sangre en el paciente
2. Se deposit el recipiente (tubo de tapa roja) en la centrifuga (balancear la
centrifuga antes de utilizar, se balancea insertando en cada canaleta tubos
con agua destilada para as balancear el peso) y se centrifuga de un rango
de 10 a 15 minutos.
3. Despus de centrifugar, el plasma estaba encima de los dems compuestos
de la sangre.
4. Se deposito la muestra con el plasma en la incubadora por 10 minutos.
5. Entonces, se procedi con los micrtomos, ajustando las puntas apropiadas
para cada reactivo [Nota: despus de agregar la cantidad de cada
compuesto en cada eppendorf, se etiqueta para as evitar confundirse]
Blanco

Reactivo(RB)

Estndar (E)

Muestra (M)

1.0

1.0

1.0

Reactivo

Muestra

0.02

0.02

*NOTA: El volumen puede ser incrementado si el instrumento requiere

volmenes mayores a 1 mL. Use 2 mL del reactivo y aada 0.05 mL del
estndar o de la muestra.

6. Despus de preparar estos, se procedi a calibrar con el reactivo blanco,

para asi verificar que el espectrofotmetro est listo para proceder a
verificar el Estandar. Al verificar el estandar, se procede a utilizar la
muestra, y se comparan los resultados del estandar con la muestra
7. Se comparan datos, y estos son diferentes segn la marca de
espectrofotmetro, es diferente la ecuacin para el resultado (aunque el
que utilizamos en la prctica arrojaba el resultado sin necesidad de
convertir con ecuacin).
Valores esperados
Rango Normal:
- Hombres: 3.4-7.0 mg/dL
- Mujeres: 2.4-5.7 mg/dL
Orina: 0.5-1.0 g/da (dependiendo del contenido de purinas en la dieta)
Resultados
Paciente: Gabriela Rodrguez Castro
Edad: 19 aos
Estado: en Ayunas
Blanco Reactivo
Standard
Factor Calc.
Resultado

0.111 Abs
0.342 Abs
23.4
25.3 mg/dL

CUESTIONARIO Y ACTIVIDADES
1. Por que se lee a 520 nm la muestra?
De acuerdo al principio (determinado por la marca Lincon R) durante la reaccin
enzimtica se produce un complejo color rojo violeta este color es algo que se
llamamos complementarios pues es el color que para nosotros es visible; dicho
compuesto debe ser ledo a 520nm pues es la longitud de onda que permite
percibir ese color, esto ejemplificado en la siguiente tabla:

2. Cual es la diferencia entre un estndar y un blanco?

Una solucin estndar sirve como referencia o por decirlo as como un punto de
comparacin al momento de realizar la valoracin de la muestra (ya que contiene
cierta concentracin de la sustancia a evaluar); en cambio la solucin blanco es
una forma de calibrar el aparato; pues es una muestra a medir la cual no contiene
nada de la sustancia que se busca cuantificar y sirve para ajustar el aparato a cero
dentro de la escala determinada.
3. Cual es la finalidad de determinar acido rico en sangre u orina?
En el caso de la sangre se utiliza porque la mayor parte del acido rico se disuelve
en la sangre; si tomamos en cuenta que es una prueba cuantitativa. Y en orina por
que esta despus de disolverse se filtra en los riones donde sale atreves de la
orina.
4. Describa los componentes del tejido sanguneo:
El plasma sanguneo es la parte lquida de la sangre. Es salado, de color
amarillento y en l flotan los dems componentes de la sangre, tambin lleva los
alimentos y las sustancias de desecho recogidas de las clulas. El plasma cuando
se coagula la sangre, origina el suero sanguneo.

Partes Formes o Clulas Sanguneas

Glbulo Rojo
Eritrocito: Se parece a un plato o una rosquilla pero sin el agujero del centro. Los
glbulos rojos slo miden de 7 a 8 micrones de dimetro, pero son las partculas
ms pesadas de la sangre, contienen hemoglobina, una protena que transporta el
oxgeno.
Glbulos Blancos: son un conjunto de clulas sanguneas cuya funcin
principal es la defensa del organismo de sustancias ajenas o agentes
infecciosos.
Leucocito Granulocitos: son un tipo de glbulo blanco que incluye
neutrfilos, eosinfilos y basfilos. Se denominan granulocitos debido a que
estn compuestos de pequeos grnulos que contienen protenas
importantes, ayudan al cuerpo a combatir infecciones bacterianas.

Neutrfilo: Miden de 9 a 12 m, Es una clula muy mvil y su consistencia

gelatinosa le facilita atravesar las paredes de los vasos sanguneos para migrar
hacia los tejidos, ayudando en la destruccin de bacterias y hongos y
respondiendo a estmulos inflamatorios.
Basfilo: Miden alrededor de unos 10 m, son los responsables del inicio de la
respuesta alrgica.
Eosinfilo: Miden 10-12 m, interaccionan con otras clulas por la expresin de
mltiples receptores en su superficie. Adems, son clulas fagocitarias que
demuestran especial afinidad por los complejos antgeno-anticuerpo, por lo que la
mayora de los eosinfilos son atrados por quimiotaxis.
Leucocitos Agranulocitos: comprende a linfocitos y monocitos cuyo
citoplasma carece de granulaciones
Linfocito: Mide entre 7 y 15 m son los encargados de producir anticuerpos y
sintetizan en el citoplasma las diferentes gamaglobulinas.
Monocito: Mide de 9-12 m, su funcin principal es remover y procesar partculas
extraas.
Macrfagos: los monocitos son sus precursoras y tienen como funcin actuar en
los procesos de fagocitosis, inflamacin, presentacin de antgenos y la
hemostasia.
Plaquetas
Las plaquetas, tambin llamadas trombocitos, son fragmentos celulares derivados
del megacariocito. Tienen un tamao de 2-3 micras y un aspecto discoidal.
Carecen de ncleo y su funcin consiste en la formacin de cogulos para evitar la
prdida de sangre. En su interior poseen varios tipos de vesculas secretoras.
Cuando se produce una lesin que desencadena el proceso de coagulacin.

CONCLUSIN
El paciente presento un valor elevado de acido rico o bien altos niveles de
actividad de la enzima uricasa en suero o plasma. En esta prctica se logr hacer
la determinacin de urea ( la cual es el resultado final del metabolismo de las
protenas)en suero (debido a que si se utiliza la sangre entera, es decir plasma +
suero, en estos hay una gran diferencia de valores que existe entre el suero y los
eritrocitos, por lo que se prefiere el suero o en su defecto el plasma para esta
determinacin) mediante una reaccin colorimtrica en donde la urea presente en
las muestras reaccion con el o-ftalaldehido en medio cido (solucin de
boratos, que son sales o steres de cido brico) originando as un complejo
coloreado (rosa) que se cuantific espectrofotomtricamente dando as como
producto a la isoindolina, la cual le proporcion la coloracin a la muestra y de
esta manera la intensidad del color formado por la reaccin fue proporcional a la
concentracin de urea en la muestra ensayada.

Discusin de los resultados

Despus de vistos los resultados, se determin que las personas a las que se
extrajo las muestras salieron muy bien en cido rico. No padecer de problemas
por una alta concentracin de cido rico.
El espectrofotmetro no se puede calibrar con agua destilada, se tiene que calibrar
con un blanco, el cual fue en esta ocasin, nuestro reactivo blanco. La muestra fue
de la sangre de una mujer, puesto que la cantidad de cido rico es diferente en el
otro sexo por una gran cantidad. Tambin, esta cantidad puede variar segn el
estado de salud de la persona y el tamao que esta tenga, aparte de su peso.

Referencias:
http://www.cimascientific.com/4250S.htm
http://ocw.usal.es/ciencias-experimentales/analisis-aplicado-a-laingenieriaquimica/contenidos/course_files/Tema_3.pdf
http://www.todoexpertos.com/categorias/ciencias-eingenieria/quimica/respuestas/1363718/tubo-blanco-control-estandar
http://answers.yahoo.com/question/index?qid=20070620101816AA5R8yb
http://answers.yahoo.com/question/index?qid=20060926074447AAdayzG
http://www.mvzunipaz.edu.co/documentos/bloques/patologia/charlas/globulosrojos-y-blancos.pdf