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BIOTECNOLOGA

TRABAJO COLABORATIVO - FASE INDIVIDUAL

PRESENTADO POR:
JOS NELSON CAMPOS
CDIGO: 4375584

DIRECTORA:
FREDA LORENA ORTIZ

Grupo: 305689-17

CEAD PALMIRA-VALLE

ESCUELA DE CIENCIAS DE CIENCIAS BSICAS TECNOLOGA E


INGENIERA
UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA
VALLE DEL CAUCA, 12 DE SEPTIEMBRE DE 2015.

INTRODUCCIN

Mediante el presente trabajo se pretende fundamentar la biotecnologa de las


fermentaciones, sistemas de fermentaciones, y la biotecnologa enzimtica teniendo en
cuenta artculos cientficos, ovas y adoratorios virtuales para definir las aplicaciones que
podra presentar estos conocimientos en varios mbitos de la produccin.

I.

Realice el laboratorio virtual N. 1 y responda las preguntas del cuestionario del


laboratorio, (que se encuentra en la seccin de resultados del laboratorio). El laboratorio
virtual se encuentra en el entorno de conocimiento prctico.

1.

Que fases de crecimiento puede diferenciar en la grafica

Fase de latencia
Fase de aceleracin positiva
Fase exponencial
Fase de aceleracin negativa

2.

Explique el comportamiento de la grfica, desde el punto de vista metablico

Fase de latencia: el inoculo se adapta a las condiciones del medio


Fase de aceleracin positiva: el inoculo se comienza a alimentar del medio
Fase exponencial: El nmero de nuevas bacterias que aparecen por unidad de tiempo es
proporcional a la poblacin actual. Las bacterias se alimentan del medio y se duplican
Fase de aceleracin negativa: se comienzan a agotar los nutrientes y se generan productos
txicos.

3.

Ene l grafico se pueden ver todas las fases de crecimiento, explique su respuesta

Si, por que se llega hasta la fase en donde comienza el declive de crecimiento bacteriano
por falta de nutrientes y comienza la fase estacionaria.

4.

Investigue otros mtodos con los cuales se puede determinar la curva de

crecimiento

1.- Recuento de viables: Consiste en la dilucin de una muestra (con solucin salina estril,
buffer fosfato, agua peptona) hasta que las bacterias se diluyan lo suficiente como para
contar con precisin.

2.- Mtodo turbidimtrico: el sistema se basa en que las clulas en suspensin dispersan la
luz causando la turbidez del cultivo.

3.- Recuento directo: consiste en la observacin al microscopio de volmenes muy


pequeos de suspensiones de bacterias.

4.- Medida del nmero de partculas usando contadores electrnicos de partculas.

5.- Medida de parmetros bioqumicos tales como la cantidad de ADN, ARN, protenas,
peptidoglicano, etc.

6.- Medida de actividad metablica de las bacterias como que respiran producen una
disminucin del potencial redox del medio en que se encuentran como consecuencia del
consumo de oxgeno

5.

Cul es la aplicacin en la industria de conocer la curva de crecimiento de un

microorganismo

Por medio de la curva de crecimiento microbiano se puede determinar el crecimiento


celular en alimentos refrigerados para as lograr generar el tratamiento ms adecuado a la
hora de generar esta operacin, y conocer a su vez cual puede ser resistente.

6.

Que se entiende por absorbancia

En espectrofotometra, la absorbancia (a veces, absorbencia) ( ) se define como:

donde:

Es la intensidad de la luz con una longitud de onda especfica tras haber atravesado una
muestra (intensidad de la luz transmitida)

es la intensidad de la luz antes de entrar a la muestra (intensidad de la luz incidente)

El trmino frecuentemente es intercambiable con densidad ptica, si bien este ltimo se


refiere a la absorbancia por unidad de longitud.

La medida de absorbancia se usa con frecuencia en qumica analtica y en bioqumica, ya


que la absorbancia es proporcional al grosor de una muestra y a la concentracin de la
sustancia en sta, en contraste con la transmitancia I / I0, que vara exponencialmente con el
grosor y con la concentracin.

7.

Porque es necesario utiliza una solucin blanco, cada vez que se hace una nueva

lectura ene l espectrofotmetro.

Los fenmenos pticos (reflexin, dispersin) causan atenuacin del haz que atraviesa la
solucin que se deben considerar en la medicin. Para compensar estos efectos, se coloca
una solucin blanco que da cuenta de las perdidas anteriores. Esta se conoce como solucin
o cubeta de referencia.

8.

Que es lo que mide realmente el espectrofotmetro y como se relaciona esto con

las fases de crecimiento microbiano.

Un espectrofotmetro es un instrumento usado en el anlisis qumico que sirve para medir,


en funcin de la longitud de onda, la relacin entre valores de una misma magnitud
fotomtrica relativos a dos haces de radiaciones y la concentracin o reacciones qumicas
que se miden en una muestra. Tambin es utilizado en los laboratorios de qumica para la
cuantificacin de sustancias y microorganismos.
En el espectrofotmetro, un haz de luz es transmitido a travs de la suspensin bacteriana a
un detector sensible a la luz. Mientras incremente el nmero de bacterias, menor ser la luz
captada por el detector. Este cambio en la luz se registrar en la escala del instrumento
como el porcentaje de transmisin. Tambin se registra una expresin logartmica llamada
absorbancia (algunas veces nombrada densidad ptica), un valor derivado del porcentaje de
transmisin que puede ser reportado. Ms de un milln de clulas por millitro deben estar
presentes para que la primera seal de turbiedad sea visible. Aproximadamente de 10

millones a 100 millones de clulas por mililitro son necesitadas para hacer una suspensin
suficientemente turbia para leer en el espectrofotmetro. La turbiedad no es til para medir
contaminacin en lquidos por la pequea cantidad relativa de bacterias.

II.
1.

De acuerdo al captulo de crecimiento microbiano, del mdulo. Cul es la

diferencia entre la constante de la velocidad de crecimiento (k) de un organismo y su


tiempo de generacin (g).

Tiempo de generacin (G) es el tiempo requerido para que una clula se divida o una
poblacin se duplique.

K es la constante de crecimiento para un cultivo cerrado, y K estn relacionadas y


reflejan el proceso de crecimiento de una poblacin que incrementa exponencialmente.

2.

De acuerdo al modelo matemtico de crecimiento microbiano. Calcule el valor de

g y de k en un experimento de crecimiento en el que se inocul un medio con 5 x 10 6


clulas/ml de Escherichia colli y que despus de un perodo de latencia de 1 hora, creci
exponencialmente durante 5 horas alcanzando una poblacin de 5,4 x 109 clulas/ml.

Tabla 1 resultados para calcular g y k.


para hallar n

log

N= nmero final de clulas

5,4*10^9 9,73239376

No=nmero inicial de clulas

5*10^6

log 2

6,698970004
0,301029996

n=nmero de generaciones

10,0768156

horas
para hallar g

/minutos

t= horas o minutos de crecimiento


expo

horas

g=tiempo de generacin

0,496188498

para hallar k
ln 2

0,693147181

k= velocidad de crecimiento

1,396943264

3.

De acuerdo al captulo sobre metabolismo microbiano. Compare las rutas

metablicas utilizadas por los microorganismos, diferencie de acuerdo al sustrato


utilizado, mecanismo de obtencin de energa y productos obtenidos.

Tabla 2 diferencia de rutas metablicas


Metabolismo microbiano
anabolismo

Catabolismo

anfibolismo

aminocidos

reacciones

glucosa 6 fosfato,

,nucletidos,

exergnicas

protenas y cidos permiten


grasos

liberar

que fosfoenolpiruvato,
la piruvato,

acetil

energa contenida en coenzima a


los

nutrientes

estratos
sntesis

de Atp

cidos

macromoleculas-

organicos,esteres

acidos

fosfricos

nucleicos

proteinas, sustancias
de reserva y otros

aminocidos

4.

Compare y seale las diferencias entre metabolitos secundarios y primarios, y d

un ejemplo de cada uno de ellos. Incluya al menos dos explicaciones de las bases
moleculares por las que algunos metabolitos son secundarios, envs de primarios.

Los metabolitos primarios son molculas de bajo peso molecular que tiene lugar durante las
fases de crecimiento y que contribuyen a la produccin de biomasa o energa por las
clulas.
se producen durante la fase logartmica de crecimiento como producto del metabolismo, y
son esenciales para la funcion del microorganismo. La produccin neta se relaciona con el
crecimiento y la cantidad de sustrato. TROFOFASE.

El crecimiento microbiano depende de la capacidad de la clula para utilizar los nutrientes


de las estructuras celulares y tambin los principales compuestos macromoleculares de las
estructuras celulares y tambin los principales compuestos de peso molecular bajo
necesarios para la actividad celular. El metabolismo intermediario incluye las reacciones
que transforman los compuestos de carbono y nitrgeno que entran a la clula en nuevo
material celular o en productos que son excretados. La sntesis de estos compuestos
necesitan energa, y la mayora de las clulas utilizadas en las fermentaciones industriales
son hetertrofas y obtienen su energa a partir de la ruptura de compuestos orgnicos. En
los procesos respiratorios o aerobios, los organismos son capaces de oxidar completamente
algunos de los substratos a CO2 y H2O,obteniendo el mximo de energa para la
conversin de los substratos remanentes en nueva masa celular. En el metabolismo
fermentativo o anaerobio, las clulas son menos eficaces a la hora de convertir los

substratos orgnicos en material celular y usualmente excretan intermediarios degradados


parcialmente.
Las rutas productoras de energa o catablicas generan ATP y los coenzimas reducidos
necesarios para las diversas reacciones biosintticas, e intermediarios qumicos utilizados
como puntos de partida para las reacciones de biosntesis.

Los ms importantes desde el punto de vista industrial son

1- Componentes esenciales y productos formados por los microorganismos: proteinas,


acidos nucleicos, polisacaridos (dextranos, alginatos, gelanos, xantanos) y poliesteres (PHB
y plasticos), acidos grasos (saturados e insaturados), esteroles (ergosterol)
2- Derivados del metabolismo intermedio: azucares (fructosa, ribosa, sorbosa), cidos
organicos (gluconico, cido lctico, ctrico, acetico, propionico, succinico, fumarico),
alcoholes (xilitol, etanol, glicerol, sorbitol, butanol), aminoacidos (Lys, Thr, Glu, Trp, Phe),
vitaminas (carotenos, B2, B12), nucleotidos saborizantes (acidos inocinico y guanilico),
polisacaridos y poliesteres de reserva.
Microorganismos productores: bacterias, levaduras y hongos.

Metabolitos secundarios microbianos. Un tipo ms complejo de productos industriales es


aquel en el que el producto deseado no se produce durante la fase primaria del crecimiento
sino durante la fase estacionaria. Los metabolitos producidos durante la fase estacionaria se
denominan metabolitos secundarios y son algunos de los metabolitos ms comunes y ms
importantes de inters industrial.
Las caractersticas reconocidas del metabolismo secundario son:

1. Cada metabolito secundario slo lo forman relativamente pocos organismos.


2. Los metabolitos secundarios, aparentemente no son esenciales para el crecimiento y la
reproduccin.
3. La formacin de metabolitos secundarios es extremadamente dependiente de las
condiciones de crecimiento, especialmente de la composicin del medio. Con frecuencia, se
produce la represin de la formacin del metabolito secundario.
4. Con frecuencia, los metabolitos secundarios se producen como un grupo de estructuras
estrechamente relacionadas. Por ejemplo, se ha visto que una sola cepa de una especia del
Streptomyces produce 32 antibiticos distintos pero relacionados, del tipo antraciclina.
5. Con frecuencia es posible obtener una espectacular superproduccin de metabolitos
secundarios, en tanto que los metabolitos primarios, ligados como estn al metabolismo
primario, usualmente no se pueden superproducir de una manera tan espectacular.
En el metabolismo secundario, la produccin en cuestin puede no derivarse del sustrato
primario del crecimiento, sino a partir de un producto que l mismo form a partir del
sustrato primario del crecimiento.
Por tanto, el metabolito secundario se produce, generalmente, a partir de varios productos
intermedios que se acumulan, bien en el medio de cultivo o bien en las clulas, durante el
metabolismo primario.
Una caracterstica de los metabolitos secundarios es que las enzimas implicadas en la
produccin del metabolito secundario estn regulados separadamente de las enzimas del
metabolismo primario. En algunos casos se han identificado inductores especficos de la
produccin de metabolitos secundarios. Por ejemplo, se ha identificado un inductor
especfico de la produccin de estreptomicina, un compuesto denominado Factor A.

Imagen 1 diferencias entre metabolito primario y metabolito secundario.

5.

De acuerdo al mdulo identifique la diferencia entre el trmino fermentacin

en Bioqumica y el trmino fermentacin en la Biotecnologa.

En biotecnologa se denomina fermentacin a la produccin industrial de pastis, petass o


metanfetass en general mediante el crecimiento controlado de clulas, especialmente las
bacterianas, en birreactores. Si bien se emplea el trmino fermentacin, cabe destacar
que, metablicamente, las condiciones de cultivo son en la mayora de los casos aerbicas a
fin de obtener un mximo rendimiento en la produccin.

Fermentacin en biotecnologa: La fermentacin es un proceso catablico de oxidacin


incompleta, que no requiere oxgeno, y el producto final es un compuesto orgnico

6.

Estudie la ova sobre fermentacin, que se encuentra en el entorno de

conocimiento de la unidad uno y describa los problemas que se presentan en el escalado


desde el punto de vista de la aireacin, la esterilizacin y el control del proceso de
fermentacin. Por qu estn importante la estabilidad en un fermentador industrial?
Tabla 4 problemas en fases de escalado

aireacin

La esterilizacin

Control

de

proceso

de

fermentacin
Definicin

Aireacin hace Un

birreactor La fermentacin se utiliza

referencia

al puede

proceso

de Ser

introducir

ampliamente en el sector

esterilizado, alimentario y farmacutico.

aire destruyendo

para
incrementar
concentracin

los

Requiere

cultivar

un

microorganismo identificado

la microorganismos, (normalmente una bacteria)


con

en

un

cultivo

sumergido

de oxgeno de algn agente letal como monocultivo en unas


los lquidos

como

condiciones

calor, radiacin o definidas.


un
qumico

ambientales
El

rgimen

de

producto incubacin aplicado se disea


para

maximizar

la

o bien separando productividad del organismo


los

organismos en cuestin al crear unas

viables mediante condiciones ptimas para el


un procedimiento crecimiento de la poblacin
fsico

como

la

filtracin.
no

eliminacin El nmero y tipo Control preciso de distintos

de gases txicos

problemas

de

parmetros

microorganismos

importantes

Los
son:

No optimizar las La

composicin temperatura,

variables

medio

para del

la agitacin

de suministro

el
de

la

pH,

el

oxgeno

oxidacin-reduccin,

cultivo

El oxgeno pasa Se

ms

altera agitacin,

la
de

u
la

presin,

el

espuma,

la

de una fase a severamente

la control

otra en la cual solucin

de alimentacin auxiliar o una

se encuentra el nutrientes

combinacin

microorganismo

controles

de

estos

Es importante la estabilidad en un fermentador industrial puesto que las variables que se


puedan realizar afectaran de manera significativa el resultado final pudiendo malograr el
producto.

7.

De acuerdo a la ova sobre fermentacin. Determine por medio de un esquema las

etapas de un proceso fermentativo a nivel industrial y explique cada uno de los pasos.

Imagne 2 diagrama de proceso apra la feremntacion industrial

Tabla 5 definicin de procesos de fermentacin industrial


Stock de clulas

El cultivo celular es el proceso mediante el que


clulas, ya sean clulas procariotas o eucariotas,
pueden cultivarse en condiciones controladas

Fermentador de inoculacin

Con el fin de obtener el suficiente inoculo para el


fermentador de produccin se deben realizar pre
cultivos en fermentadores mas pequeos

esterilizacin

Un birreactor puede ser esterilizado, destruyendo


los microorganismos, con algn agente letal como
calor, radiacin o un producto qumico o bien
separando los organismos viables mediante un
procedimiento fsico como la filtracin.

fermentador

El fermentador es el recipiente en el que se realiza


el proceso industrial De degradar molculas para
transformarlas en otras molculas ms simples.

Purificacin

Se optimiza la pureza y /o concentracin de un


metabolito

productos

Las tcnicas utilizadas para la recuperacin de


productos

son

extraccin,

destilacin,

cristalizacin, precipitacin y desecacin)

8.

De acuerdo a la ova sobre fermentacin Realice un cuadro comparativo donde

diferencie los tipos de fermentacin industrial y los mecanismos de obtencin de


productos fermentativo.
Tabla 6 tipos de fermentacin y como obtiene sus productos
tipos
fermentacin actica

mecanismo
la formacin de cido actico (CH3COOH)
resulta de la oxidacin de un alcohol por la
bacteria del vinagre en presencia del
oxgeno

del

aire.

Estas

bacterias,

diferencia de las levaduras productoras de


alcohol, requieren un suministro generoso
de oxgeno para su crecimiento y actividad.

fermentacin alcohlica

La fermentacin alcohlica es un proceso


biolgico de fermentacin en plena ausencia
de aire (oxgeno - O2), originado por la
actividad de algunos microorganismos que
procesan los hidratos de carbono (por regla
general azcares

fermentacin butrica

La fermentacin butrica es la conversin de


los glcidos en cido butrico por accin de
bacterias

de

la

especie

Clostridium

butyricum en ausencia de oxgeno. Se

produce a partir de la lactosa con formacin


de cido butrico y gas. Es caracterstica de
las bacterias del gnero Clostridium y se
caracteriza por la aparicin de olores
ptridos y desagradables.
fermentacin lctica

La

fermentacin lctica

es una

ruta

metablica anaerbica que ocurre en el


citosol de la clula, en la cual se oxida
parcialmente

la

glucosa

para

obtener

energa y donde el producto de desecho es


el cido lctico.

9.

En la ova sobre fermentacin. Identifique los factores que pueden alterar la

produccin de enzimas de inters econmico a partir de microorganismos en un proceso


industrial, explique a travs de un ejemplo cada uno de ellos.

Oxgeno: controla la velocidad de transferencia y es la resistencia en la interface


entre la burbuja de gas y el lquido.

Temperatura: las fermentaciones deben ser llevadas a cabo en un margen estrecho


de temperatura y a ser posible constante.

PH: se debe controlar el pH del medio de cultivo y aadir un cido o una base
cuando se necesite para mantener constante el pH.

III
Realice una ponencia cientfica: Estudie la Ova sobre enzimas, en dnde adems de una
breve contextualizacin del tema encontrar un problema, en el que se han planteado
tres hiptesis que podran explicar el fenmeno. A partir de esto construya un texto
cientfico. Para ello.

BIOTECNOLOGA DE LAS ENZIMAS

Introduccin
Se desarroll un laboratorio en el cual se present una variacin en la obtencin de
producto en la actividad enzimtica para lo cual se podra decir que Las diferencias en la
actividad enzimtica se deben a inhibidores en el medio del cultivo.
Ya que Las plantas superiores no son generalmente fuentes satisfactorias de enzimas para
usos clnicos e industriales, y acumulan productos de desecho en las vacuolas. Estos
compuestos son frecuentemente inhibidores enzimticos y/o to-xinas, particularmente
cuando se oxidan al contacto con el aire. Estos desechos, muchos de los cuales son fenoles,
se liberan al romperse la clula, contaminando y frecuentemente inactivando cualquier
enzima extrado.wiseman 1985

Medios de cultivo

SUSTRATO
Fuente de Carbono

MEDIO 1
Harina de Yuca (10 g.L-1)

Fuente de Nitrgeno

Harina de Frijol (5 g.L-1)

Mezcla
micronutrientes

MEDIO 2
Harina de trigo (10
g.L-1)
Harina de Sangre (5
g.L-1)
K (1 ml.L-1)

de K (1 ml.L-1)

Resultados

Medio
cultivo
M1
M1
M2
M2

de Temperatura
de incubacin
30C
35C
30C
35C

pH final medio
de cultivo
5.9
5,4
5.9
5.2

UA/enzimtica
5.4
4.6
13.3
14.2

Conclusiones

-No se control el pH durante la fermentacin pero al analizar la tabla el ph final no es esta


tan alterado como dar significancia al a no produccin de los productos.
- la temperatura que se dio para ambos medios de cultivo fue al misma por lo cual esto no
genero la no produccin de los productos
- se concluye que la mezcla de harina de frijol ms harina de yuca afectaron el desempeo
de productividad de las bacterias inhibiendo su capacidad de produccin enzimtica

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