TEMA:

IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS POR METODOS CROMATOGRAFICOS

CURSO

: Qumica Orgnica II

DOCENTE

: Daniel aez del Pino

ALUMNO

SECCIN

: FB4M2

karin angeles

LIMA PER

2015
INTRODUCCION
La cromatografa puede definirse como una tcnica que separa una mezcla de solutos
basada en la velocidad de desplazamiento diferencial de los mismos que se establece al

ser arrastrados por una fase mvil (lquida o gaseosa) a travs de un lecho cromatogrfico
que contiene la fase estacionaria, la cual puede ser lquida o slida. Las propiedades de
los componentes de una mezcla determinan su movilidad entre s y con respecto a la fase
mvil. La base de la separacin cromatogrfica ser, por tanto, la diferencia en la
migracin de los mismos.
La palabra Cromatografa significa Escribir en Colores, porque cuando fue desarrollada
los componentes separados eran colorantes. Se define como una tcnica o mtodo fsico
de separacin basado en las diferentes velocidades con que se mueven los solutos
disueltos en un disolvente llamado eluente (fase mvil) a travs de un medio estacionario
o fijo. Los componentes a separar se distribuyen entre la fase estacionaria y la fase mvil
o fluido que pasa a travs o a lo largo de la fase estacionaria. Como los componentes de
la mezcla presentan diferente tendencia a permanecer en cualquiera de las fases, la
separacin se da por el movimiento de la fase mvil en relacin con la estacionaria y de la
distribucin de las sustancias entre las dos fases. Las molculas que "prefieren disolverse"
en la fase mvil sern diluidas ms rpido que las que son preferencialmente solubles en
la fase estacionaria y que tienden a quedar retenidas. En resumen se fundamenta en la
separacin entre la fase estacionaria slida o liquida y la fase mvil liquida o gaseosa (1)

IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS POR METODOS

CROMATOGRAFICOS
I.

MARCO TEORICO

Entre los mtodos cualitativos y cuantitativos para determinacin de carbohidratos, se encuentra la

cromatografa. Esta tcnica es de considerable importancia ya que su efectividad radica en hacer
separaciones de sustancias mucho muy semejantes entre s estructuralmente, como son los ismeros
y los estreos ismeros; as como separar sustancias diferentes. La cromatografa se define como un
mtodo de anlisis adecuado para la separacin delos componentes de una muestra por percolacin
de un lquido sobre un material poroso (papel) finamente dividido (slica gel), producindose as un
intercambio entre las fases. De esta forma, los constituyentes de la mezcla se separarn debido a la

diferencia en sus velocidades de migracin. El agua del solvente forma complejos con las distintas
fibras de celulosa del papel; y a estos complejos formados se pueden unir los azcares mediante
interacciones no covalentes como son los puentes de hidrgeno, fuerzas de Van der Waals o
intercambio de iones. A este proceso se le considera Adsorcin, por este motivo en la cromatografa
en papel intervienen dos fenmenos, la adsorcin y la particin. (2)
El eluyente ascender, por capilaridad, por la placa y arrastrar los componentes a lo
largo de sta produciendo manchas de los componentes. Estas manchas al no ser
visibles se las trata con sustancias especficas que hacen visibles los compuestos
qumicos. Este proceso se llama revelado.
El perxido de es con caractersticas

II. MATERIALES Y REACTIVOS

A) Materiales:

Matraz de 250mL
Pipetas de 5mL y 10mL
Cocinilla elctrica
Centrfuga
Esptula
Beacker 250mL
Pro pipeta
Bagueta
Balanza analtica
Cuba cromatogrfica pequea
Asperjador con bombilla

B) Reactivos:
Acido Sulfrico al 5%
Carbonato de Calcio

Cromatofolio 20 x20 cm
Butanol
Acido actico
Piridina
Acetato de Etilo
Sacarosa Q.P
Almidn Q.P
Antrona
Lugol
Etanol
Revelador de difenilamina
Revelador acido 3.5-dinitrosalisilico

III.-PROCEDIMIENTO

1. En un Beacker pequeo colocamos 1 g de sacarosa y en otro 1 g de

almidn.
Momento en que se esta pesando
1g de almidn

1g de Sacarosa y

2.

A ambos
matraces
aadimos 10 ml de cido sulfrico al 5
%

3. Luego lo Colocamos en un bao mara por un periodo de 20 minutos

4. Probar con el Beacker que contiene almidn si da

coloracin con el yodo.

Vimos que con la Sacarosa es cuando nos dio un cambio de color (amarillo tenue),
mientras que el almidn no presento ningn cambio su color se mantuvo blanco.
5. Enfriar los hidrolizados con agua corriente y neutralizarlos con suficiente
cantidad de carbonato de calcio.

Luego de enfriar
la muestra agregamos una pisca de
carbonato de Ca
en ambas muestras quien nos ayudara
de esta manera
lograr un pH neutro para proceder con
el siguiente paso; pero nos dimos cuenta que no logrbamos llegar a alcanzar el pH neutro
entonces agregamos mas carbonato de Ca hasta lograr el pH deseado.

6. Probar el pH en ambas muestras y es tos deben indicar un pH neutro

7. En un tubo de ensayo (1 para el almidn y otro

para la sacarosa)se recogi las muestras de
sacarosa y almidn

8. Centrifugar

filtrar,

identificacin de los azcares por Cromatografa en capa fina.

Proceso para la Cromatografa por absorcin

a) Preparacin del Solvente(2.6 ml)
N-Butanol: 1.3 ml

cido Actico: 0.3 ml

utilizarlo

para

Agua: 1 ml

b) Sembrando en el silica gel patrones de glucosa versus los hidrolizados

para luego ser colocado en el solvente de la cuba cromatogrfica.

c) Revelar el cromatograma pulverizando con Antrona (0,150g)

Nos brindara un resultado sin color.

Se llevara a calor para obtener el color del recorrido.

d) Preparacin del Acido 3.5-Dinitrosalisilico como revelador para nuestro

resultado final.

Pulverizar los cromatogramas con 0,100 g de cido 3,5 - dinitrosaliclico y

0,800 g de hidrxido de sodio disueltos en 20 mL de agua.

Ac.Asperjando
3,5
NaOH:
+
0.800g
Agua 20ml. los cromatogramas con el nuevo revelador y luego llevar

Dinitrosaliclico:
0.100g las
calentar

placas a 110 C por 5 minutos en estufa.

IV.-RESULTADOS

Los azcares reductores dan manchas de color marrn sobre un fondo

amarillo paja.

Valores
del
recorrido de la
sacarosa 3.1
Valores
recorrido
almidn 1.2

Rf= Distancia recorrida por el compuesto

Distancia recorrida por el disolvente

del
del

Rf Sacarosa =

Rf Almidn =

3.6
5.1

=0.7

2.6
5. 1

=0.51

CONCLUSION

Gracias a este mtodo cromatogrfico pudimos determinar cmo obtener un

determinado azcar reductor.

Gracias a esta prctica hemos logrado un nuevo conocimiento.

DISCUSION

Seguir los pasos del procedimiento indicado de forma estricta como medir de forma
exacta los reactivos, excipientes, etc. para evitar as un resultado fallido.

CUESTIONARIO
1. Indique otros reveladores para identificar azcares por
cromatografa en capa Fina.

Ensayo de Molish:
Reaccin de furfural e hidroximetil-furfural con alfa naftol, dando lugar a derivados de color prpura. Es una
prueba general de azcares.

Ensayo de Bial:
Reaccin del furfural e hidroximetil-furfural con orcinol en medio con HCl, dando lugar a derivados de color azul.
Es una prueba especfica de pentosas.

Ensayo de Seliwanoff:
Reaccin del furfural e hidroximetil-furfural con resorcinol dando lugar a derivados de color rosa-rojo. Es
una prueba especfica de hexosas. Las cetosas en medio cido se deshidratan ms rpidamente que las aldosas,
por lo que ambos grupos pueden diferenciarse en
funcin del tiempo que tarda en aparecer el producto coloreado.

2. Qu otros mtodos cromatogrficos se aplican para identificar

carbohidratos. De ejemplos (Adjunte cromatogramas, grficos o
figuras)

 Cromatografia de gas-liquido

Cromatografia de intercambio ionico

BIBLIOGRAFIA
1. http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/crom
atografia.htm/26-05-2014.
2. http://es.scribd.com/doc/174865307/Cromatografia-en-Papel-de-Carbohidratos/2605-2014.

3. http://www.buenastareas.com/ensayos/Separaci%C3%B3n-e-Identificaci%C3%B3nDe-Carbohidratos-Por/2533017.html/26-05-2014