ANEXO 3

Anticuerpos monoclonales
Los anticuerpos generados en un animal por inmunizacin activa, (natural o artificial),
son heterogneos ya que tienen diferentes especificidades y afinidades. Proceden de distintos
clones de linfocitos B estimulados, por lo que constituyen un conjunto policlonal de
anticuerpos. Esta respuesta policlonal representa una ventaja adaptativa, permitiendo disponer
de Ac capaces de unirse a una gran variedad de antgenos, de expresar diferentes funciones
biolgicas y de evolucionar adaptndose al curso de la respuesta inmunitaria.
Por ser reactivos especficos (hacia un antgeno), los Ac pueden ser tambin utilizados
por el hombre para diversos fines, por ejemplo, para diagnstico, en teraputica o para separar
molculas con fines industriales. Tradicionalmente, un Ac hacia un antgeno se obtiene
inmunizando animales y obteniendo su suero, fuente principal de Ac. Los conejos y los
caballos han sido y an son muy usados como productores de sueros inmunes. Recordemos
que stos son reactivos policlonales.
Para algunos usos, sin embargo, la heterogeneidad de los Ac de un suero puede ser una
desventaja. Adems, cada preparacin de suero es diferente, an cuando se usen animales
genticamente idnticos, inmunizados con la misma preparacin de antgeno y con el mismo
protocolo de inmunizacin. Dicho en otros trminos: cada respuesta inmunitaria es nica. Por
lo tanto es imposible usar reactivos serolgicos idnticos en una larga serie de pruebas.
Estas desventajas pueden ser salvadas por los anticuerpos monoclonales, que, como su
nombre lo indica, derivan de un nico clon de linfocitos B y son por lo tanto especficos para
un epitope determinado e idnticos entre s, constituyendo una poblacin homognea.
Como no es posible purificarlos a partir de un suero policlonal, G. Khler y C. Milstein
desarrollaron en 1975 un mtodo para su preparacin, que se basa en la fusin de un linfocito
B normal con una clula plasmtica tumoral (clula de mieloma). La clula hbrida resultante
(llamada hibridoma) hereda de la clula de mieloma la capacidad de crecer indefinidamente in
vitro, y del linfocito B la de secretar anticuerpos.
Luego de la fusin, las clulas hbridas deben separarse de las que no se fusionaron y de
las que se fusionaron con otra clula del mismo tipo. Esto se logra usando clulas de mieloma
deficientes en una enzima requerida para la sntesis de nucletidos y cidos nucleicos por una
va alternativa que reutiliza las purinas. Por lo tanto, si luego de la fusin las clulas se
cultivan en un medio que contiene un inhibidor de la va de sntesis de novo de los
nucletidos (medio HAT), slo podrn desarrollar las clulas que puedan utilizar la va de
sntesis alternativa (es decir, los hibridomas, porque heredan del linfocito la capacidad de
utilizar esta va). Las clulas de mieloma que no se fusionaron o se fusionaron entre ellas no
se multiplicarn porque no poseen la va alternativa, y a su vez, los linfocitos B que no se
fusionaron o se fusionaron entre ellos tampoco se multiplicarn ya que no tienen la capacidad
de crecer indefinidamente in vitro.
El paso siguiente es la seleccin de los clones que secreten el Ac con la especificidad
deseada, para lo cual se analiza el sobrenadante del cultivo de cada hibridoma mediante
pruebas serolgicas como ELISA y RIA.
Una vez detectados los hibridomas productores del Ac deseado, y controlada su clonalidad,
cada clon se cultiva para producir el Ac monoclonal deseado. El cultivo puede hacerse in
vitro (en medios apropiados para clulas) o bien in vivo, inyectando intraperitonealmente las
clulas del hibridoma en ratones y obteniendo tiempo despus el lquido asctico acumulado,
que contendr una elevada concentracin del Ac monoclonal. Los hibridomas por su parte, se
conservan indefinidamente por congelacin, pudiendo descongelarse y cultivarse todas las
veces que se desee, obteniendo siempre el mismo Ac.
Como cada hibridoma es un clon derivado de la fusin de un nico linfocito B, todas las
molculas de Ac que produce son idnticas en estructura y por lo tanto tienen el mismo sitio
de unin al antgeno e isotipo.

Antgeno

Aislar
clulas
del bazo

Seleccin

Fusin

Suero
Linfoblastos

Cl. de mieloma

Hibridomas

Ac4

Ac1
Ac1

Ac1

Ac2

Ac3

Ac4

Ac3

Ac2
Ac3

Ac2

Ac4

Anticuerpos policlonales

Anticuerpos monoclonales

Diferencias entre anticuerpos monoclonales y policlonales

Epitopes que
reconocen

Ac policlonales (suero)

Ac monoclonales

Varios *

Unico

Especificidad

Vara entre animales y entre

sangras.

Afinidad

Variable entre sangras.

Rendimiento

Concentracin media 1 mg/ml

Volumen variable (segn especie)

Fija
Bajo en cultivo de tejidos.
Alto (hasta 20 mg/ml) en
lquido asctico)

Costo relativo

Bajo

Alto

No vara.
Alta especificidad.

*Sin embargo, cada uno de los Ac presentes en el suero reconoce un nico epitope.
Aplicaciones de los anticuerpos monoclonales
-

Investigacin (purificacin y deteccin de antgenos)

Diagnstico in vitro (de preez, microorganismos patgenos, medicin del nivel de ciertas
drogas en sangre, estudios de histocompatibilidad, deteccin de antgenos tumorales) e in
vivo (deteccin de antgenos tumorales).
Fines teraputicos (inmunotoxinas compuestas por Ac monoclonales especficos de
clulas tumorales unidos a una toxina letal).

Bibliografa:
- Kuby, J. 1997. Immunology. 3rd. ed. W. H. Freeman and Company, New York. p. 131-135.
- Campbell, A. M. 1984. Monoclonal antibody technology. 1st. ed. Elsevier Science Publishers B.V.,
Amsterdam. p. 1-30.
- Janeway, C. A. and Travers, P. 1997. Immunobiology. The immune system in health and disease.
3rd. ed. Current Biology Ltd. and Garland Publishing Inc., London. p. 2:17-2:18.