SUMRIO

1.
DADOS
PESSOAIS .......................................................................................... 3
2.
DADOS SOBRE A
EMPRESA ......................................................................... 3
3.
DADOS SOBRE O
ESTGIO ........................................................................... 3
4.
INTRODUO .............................................................................................
.... 4
5.
DESCRIO DO LABORATRIO DE ANLISES CLNICAS LAURYE .......... 4
5.1.
Organograma .................................................................................... 4
5.2.
Planta Baixa ...................................................................................... 5
5.3.
Fluxograma de Atividades Laboratrio do Laboratrio Laurye .......... 6
6.
ATIVIDADES
DESENVOLVIDAS ..................................................................... 7
6.1.
Coleta ................................................................................................ 7

6.2.
Coleta de Sangue ............................................................................. 7
6.3.
Hematologia ...................................................................................... 9
6.4.
Bioqumica Clnica .......................................................................... 17
6.5.
Imunologia....................................................................................... 43
6.6.
Parasitologia ................................................................................... 56
6.7.
Microbiologia ................................................................................... 65
7.
REFERNCIAS .............................................................................................
. 73

INTRODUO
As instalaes nas quais se fazem os exames qumicos e microscpicos
dosangue, outros lquidos do organismo e tecidos so chamados de
laboratriosclnicos. (Walters, et al., 1998)O laboratrio clnico pode ser
grande, oferecendo servios sofisticados eempregando muitos
profissionais habilitados, ou pode ser pequeno, com apenas
umempregado. (Walters, et al., 1998)Dentro do laboratrio clnico pode
existir vrias reas como, por exemplo,Hematologia, Parasitologia,
Microbiologia, Bioqumica Clinica, Urinlise, Sorologia,Enzimologia,
Toxicologia, Micologia e Citologia. Todas de igual importncia
nodiagnstico e tratamento de vrias patologias.
5. DESCRIO DO LABORATRIO DE ANLISES CLNICAS
LAURYE5.1. Organograma
Fig. 1 - Organograma do Laboratrio Semi-Industrial
Irene LourenoPereira
Diretora
Eliana A. Santos
Biomdica
Edna Sgorlon
Enfermeira
Gilberto AlmeidaCustdio
Tcnico delaboratrio
Thais Arago
Estagiria
Maurcio Lopes
Tcnico deLaboratrio


Contagem Manual de Hemcias e Leuccitos
Contagens manuais do nmero de hemcias e leuccitos podem
ser feitas emcmara de Neubauer (Fig. 7), aps uma diluio prvia do
sangue. A contagem realizada utilizando-se apenas um retculo da
cmara, portanto para uma mesmaamostra pode-se utilizar apenas uma
cmara, onde um retculo ser ocupado paraos glbulos vermelhos e um
para os glbulos brancos. Cada um constitudo pornove quadrados de
1mm de rea e com a profundidade de 0,1mm. Essesquadrados so
ainda subdivididos. Os quatro externos possuem dezesseisquadrados
cada e o central possui vinte e cinco quadrados subdivididos em
novosdezesseis quadrados cada (Fig. 8).O mtodo dificilmente usado,
sendo usado em poucos casos de dvidas dametodologia automtica
.Para contagem de hemcias faz-se a seguinte diluio: 20L do sangue
sotransferidos para um tubo de ensaio com 3980L de soluo de
Gower. A mistura homogeneizada por inverso por dois minutos (Fig.
5). 10L so ento transferidospara a cmara onde se deve aguardar
trs minutos para a contagem.Para contagem de leuccitos faz-se a
seguinte diluio: 20L de sangue sotransferidos e homogeneizados
por inverso com 380L de soluo de Turk em umtubo de ensaio
durante dois minutos (Fig. 6).

Fig. 5 - Diluio do sangue para contagem de hemcias

3980

L de sol.Gower20

L desangueAgitar porinverso 2minutos

Transferem-se essas diluies com auxlio de pipeta ou capilar cada

uma paraum retculo (Fig. 7).
Fig. 7- Enchendo a Cmara com sangue diludo
A cmara de Neubauer ento colocada no microscpio com a objetiva
demenor aumento (10x). Focam-se as reas quadriculadas como
observado na Fig. 8.Realiza-se a contagem das hemcias e leuccitos as
reas especficas, comoindicado na figura abaixo:
Fig. 6 - Diluio do sangue para contagem de leuccitos
380

L de sol.Turk20

L desangueAgitar porinverso 2minutos

Fig. 8- rea de contagem de hemcias (E) e leuccitos (L).

A contagem total de hemcias deve ser multiplicada por 10000 para
encontrarno nmero de hemcias por mm
3
. A contagem de leuccitos deve ser multiplicadapor 50 para encontrar o
nmero de leuccitos por mm
3
.


Hematcrito
Com a amostra original, um capilar (heparinizado para sangue capilar ou
noheparinizado para sangue de tubos com anticoagulante)
preenchido at mais detrs quartos de seu volume. O capilar limpo e a
extremidade no preenchida fechada por chama. Colocado ento na
microcentrfuga, com a extremidade fechadavoltada para fora,
rotacionado a 11000rpm por cinco minutos.A leitura realizada pela
comparao do hematcrito com uma rgua especfica.O resultado
obtido em porcentagem (Fig. 9).
Fig. 9 - Leitura do hematcrito

5679Como o substrato forma um produto colorido, a alterao de cor

monitoradavisualmente ou por meio de espectroftometro, que
determina a relao entre aintensidade da cor e a quantidade do que
est sendo analisado na amostra. (Vaz, etal., 2007)A amostra,
preferencialmente soro ou plasma, deve ser processada nadiluio em
que uma pequena variao resulte em um grande aumento da
densiadeptica. A amostra ideal deve ser lmpida, sem hemlise e no
lipmica,conservadapor at sete dias entre 2 a 8C ou congelada a
-20C, desde que evitadosprocessos de congelamento e
descongelamento frequentes. (Vaz, et al., 2007)

Teste de HIVAmostras so incubadas em poos da microplaca

recobertos com antgenosrecombinantes de HIV-1 e HIV-2 (1). Se a
amostra contiver anticorpos anti-HIV-1/2/O, estes se ligaro aos
antgenos adsorvidos na placa (2). Aps a lavagem pararetirar o excesso
de amostra (3), so adicionados antgenos recombinantes de HIV-1e HIV2 marcados com enzima (conjugado) (4). O conjugado se ligar
aosanticorpos na etapa anterior (5). Aps novo procedimento de
lavagem para removero excesso de conjugado (6), adicionada soluo
contendo o substrato da enzima eo cromgeno(8). A intensidade da cor
formada proporcional concentrao deanti-HIV-1/2/O presente na

amostra (9). (Labtest Diagnstica, 2007)Isto est esquematizado na

figura abaixo.
Fig. 19-Esquema das reaes imunoenzimticas do Elisa
= antgenos recombinantes de HIV-1 e HIV-2= Anticorpos anti-HIV1/2/O= Antgenos recombinantes de HIV-1 e HIV-2 marcados com
enzima(conjugado)
PPLavagemAg conj
.Amostra
PPSubstrato ecromogenoPPLavagemPP
81234

Fig. 30 - Hemaglutinao indireta: o antgeno adsorvido permite

a deteco semiquantitativa deanticorpos especficos (A) com a
formao de um tapete (B), mostrando em (C) a interao
especfica doanticorpo com o antgeno adsorvido na hemcia. O
teste negativo se apresenta como um botosedimentado no
fundo da placa (D). O teste controle (E) mostra a interao
inespecfica de anticorpos daamostra com antgenos da clula, o
que invalidaria o teste.
A leitura observada geralmente aps perodo de 30 a 90 minutos
deincubao, tempo suficiente para que as hemcias no-aglutinadas
sedimentem nofundo da placa. Em paralelo ao ensaio-teste, deve ser
realizado teste-controle, que o teste utilizando clulas nosensibilizadas. A finalidade do ensaio-controle verificar se na amostra
h anticorpos heterfilos que interagem com antgenos daclula e no
com os antgenos ligados a clula, resultando em falso-positivos.
6.6. Parasitologia
Parasitologia clnica o estudo dos parasitas ou doenas parasitrias,
dosmtodos de diagnstico, dos controles das doenas parasitrias e a
relao ntima eduradoura entre os indivduos de duas espcies distintas
a nvel histolgico. Namaioria dos casos um organismo (o hospedeiro)
passa a constituir o meio ecolgicoque vive o outro organismo (o
parasito). A parasitologia engloba: os filos Protozoa(protozorios), do
reino Protista e Nematoda (nematdes), Annelida

(aneldeos),Platyhelminthes (platelmintos) e Arthropoda (artrpodes), do

reino Animal.Os principais mecanismos de transmisso de parasitoses
so: fecal-oral,penetrao ativa pela pele, vetorial ou por hospedeiros
intermedirios, contatopessoal e congnito.

Assim, a maioria dessas parasitoses poderiam ser controlados atravs

deaes educativas sobre higiene, tcnicas de saneamento melhoradas
e medidas decontroe de insetos. Todavia, em muitas partes do mundo,
principalmente aquelasonde as condies sanitrias so precrias, os
parasitas continuam sendo o maiorcausa de doenas e mortes.Na clnica
a amostra mais frequentemente examinada so as fezes, nas
quaisencontra-se, mais comumente as seguintes formas:
Nematodas

Ascaris lumbricoides
Larva:
macho mede de 20 a30cm de comprimento comextremidade
posteriorrecurvada, fmea de 30 a
40cm e apresenta extremidadeposterior reta. Parasita ointestino
delgado.Ovo frtil: cerca de 55 x40

m, camada mamelonada eembrio hexacanto nodesenvolvido.Ovo

infrtil: cerca de 90 x40

m e apresenta uma massaamorfa com casca fina.


Trichuris trichiura

Ancylostoma duodenale e Necator americanus

Enterobius vermicularis.
Ovo frtil embrionado: cercade 55 x 40

m e apresentacamada mamelonada comembrio.Ovo: Casca grossa,

embriohexacanto no desenvolvido,tampos hialinos nas
regiespolares.Ovo: formato ovaladopresena de blastmeros nointerior
e tamanho de 50x 30

m.Ovo: formato grosseiro deD por apresentar um ladoachatado e outro

cncavo,casca fina e transparente, etamanho de 55 por 25

m.

Abaixo est representada uma placa de Elisa aps adio da soluo

deparada responsvel por parar a reao entre o substrato e a enzima
para realizar aleitura da intensidade da cor.
Fig. 20-Placa de Elisa
(Fonte:http://www.cnpgc.embrapa.br/publicacoes/naoseriadas/b
abesia/babesia.html)
Para a leitura no espectroftometro deve-se ajustar o zero da leitora com
opoo do branco a 450 nm e medir a absorbncia em cada um dos
poos no prazomximo de 30 minutos. (Vaz, et al., 2007)Para diferenciar
as amostras positivas das negativas necessrio determinaro limite de
reatividade ou
cut of
. Normalmente esse
cut of
determinado pelo valordas mdias das absorbncias dos controles
negativos multiplicado por umaconstante. A positividade ou
negatividade da amostra avaliada pela proporoentre o seu valor de
absorbncia e o
cut of
, por exemplo, o teste de HIV da Labtestconsiderada o seguinte quadro
para avaliar as amostras:
Tabela 7- Limites de resultados para teste de HIV do Kit ref.: 419
da Labtest (Fonte: Labtest, 2007).
Amostra Relao absorbncia/
cut-of
REATIVA ou POSITIVA


1,10NO-REATIVA ou NEGATIVA < 0,90INCONCLUSIVA ou
INDETERMINADA

0,90 e < 1,10

Um resultado positivo indica infeco pelo vrus HIV-1 ou HIV-2.
Entretanto,para que um indivduo seja diagnosticado como portador do
vrus HIV, outros testesconfirmatrios devem ser realizados, como a
Imunofluorescncia Indireta (IFI),ImunoBlot (IB) ou Western Blot (WB).
(Labtest Diagnstica, 2007)

6.5.2. Elisa-Immnunoblot

A tcnica um ensaio imunoenzimtico realizado sobre a superfcie de

umamembrana de nitrocelulose sobre a qual so imobilizados
imungenos especficos(poliprotenas antigncias) atravs de
eletroforese em gel de poliacrilamida.(Mackenzie-LAC, 2009) (Vaz, et al.,
2007)Para realizar o teste a amostra contendo anticorpos incubada
com amembrana de nitrocelulose contendo as protenas especficas para
o que sepretende diagnosticar, separadas por tamanho molecular. Aps
a lavagem para aretirada dos componentes no-fixados, adicionado o
conjugado enzimticoantiimunoglobulina humana, que se fixa
imunoglobulina da amostra. Uma novalavagem realizada para a
retirada do excesso de conjugado, seguida a adio dosubstrato
cromognico para o desenvolvimento de cor insolvel. A reao
interrompida pela retirada do substrato e lavagem da membrana com
gua, e aleitura realizada visualmente. Essa sequencia de eventos
est esquematizado naFig. 21 abaixo. (Vaz, et al., 2007)A interpretao
do resultado feita pela anlise da presena de
bandas(desenvolvimento de cor sobre antgeno fixado) que revelam a
presena deanticorpos especficos. (Vaz, et al., 2007)

Cocos Gram Negativos

Fig. 38 - Visualizao de Cocos Gram Negativos por Microscopia
Se observado cocos Gam negativos na microscopia com colorao de
Gramdeve ser feito semeadura das colnias em Agar EMB ou
MacConkey, incubado poruma noite.Fazer colorao de Gram da bactria
crescendo no Agar EMB ouMacConkey, o que confirmar a bactria Gram
negativa, j que ambos inibemcrescimento de organismos Gram
positivos.Pelas caractersticas das colnias pode-se identificar o
microrganismo poismuitas bactrias Gram negativas tem morfologia de
colnia distinta em meiosseletivos ou indicadores. As espcies de
Klebsiella
tm colnias caractersticas,rseas, mucides.
E. coli
forma um brilho verde metlico no EMB.
6.7.2. Teste de suscetibilidade aos antibiticos (Antibiograma)
Suspensopadronizadado organismoa ser testadoSwab umedecido
nasuspensoSemear naplaca deMueller-Hinton comoindicado naFig.
39Colocar osdiscosimpregnadoscomantibitico(Fig. 40)Incubar poruma
noite a35-37C

Fig. 39 - Semeando a placa de Mueller-HintonFig. 40 - Colocando

os discos de antibiticos sobre agar Mueller-Hinton

Interpretando o Teste de Suscetibilidade aos AntibiticosAs placas so

lidas para inibio de crescimento em torno dos discos deantibiticos. As
zonas de inibio podem ser medidas usando paqumetos ou
rguatransparente (Fig. 41).

Fig. 41 - Medindo a zona de inibio usando uma rgua

Cada antibitico produz um tamanho especfico para cada organismo.
Otamanho da zona ou halo de inibio classificar o organismo como
sensvel (S),resistente (R) ou intermedirio (I). Esta informao
fornecida nas istrues de usodos discos de antibiticos. (Walters, et al.,
1998)Um antibitico que produza uma zona sensvel dever ser prescrito
para ainfeco. (Walters, et al., 1998)

7. REFERNCIAS
NOVALGINA: dipirona s

dica. S

o Paulo: Hoechst, [ 199?]. Bula derem

dio.

6.7.1. Cultura de Urina

A cultura de urina um dos mais freqentes testes pedidos no
laboratrio debacteriologia. Os mdicos requisitam uma cultura de urina
quando o paciente temsintomas de infeco do trato urinrio como:
freqncia de mices, dor e sensaode ardncia quando urinando,
sangue na urina, s vezes febre e dor nos rins.As infeces do trato
urinrio ocorrem quando bactrias migram uretra acimapara a bexiga,
ou at mais adiante, aos rins. O microorganismo mais
comumenteresponsvel
Escherichia coli.
Outros microorganismos encontrados so
Pseudomonas, Proteus, Klebsiella e Staphylococcus saprophyticus.

Coletando a Amostra- A amostra a ser semeada deve ser coletada

por jato mdio;- Rotular frasco com identificao do paciente
e a hora da coleta.

Semeando a Placa para Contagem de Colnias

Fig. 36 - Semeando uma placa de cultura de urina
Flambar a alacalibrada e esfriarMergulhar na urinaFazer estria
verticalsobre o centro daplaca de gar sangue(Fig.36)Fazer de quinze
avinte estrias nahorizontal cruznado aestria vertical (Fig. 36)Flambar
ala eguard-laIncubar a placa poruma noite a 35-37C


Interpretando a cultura de urinaAps o perodo de incubao as placas
so removidas da estufa e observadoo crescimento. Quaisquer
caractersticas especficas do crescimento, assim comocor da colnia ou
morfologia, hemlise no agar sangue, devem ser amotadas.Contar as
colnias e multiplicar por 1000 se foi utilizdo ala de 0,001 mL
oumultiplicar por 100 se foi utilizado ala de 0,01mL. Uma contagem de
100000/mL oumaior evidncia de infeco urinria, tenha ou no o
paciente sintomas.

Identificando o microorganismo.- Fazer um Gram dos organismos

da placa de Agar sangue, segundo ofluxograma abaixo:
Selecionar uma colnia e tocar
esta comuma ala reviamente fl ambada e resfriada
Secar uma lmina e pingarsoluo fisiolgicaHomogeneizar a colnia
sobre asoluo fisiolgica
Proceder a colorao
Analisar em microscpio

Cocos Gram Positivos

Fig. 37 - Visualizao de Bactrias Gram Positivas por
Microscopia

Se observar um organismo Gram positivo como na figura acima (Fig. 37),

necessrio fazer um teste de catalase para diferenci-lo entre
Streptococcus e Staphylococcus.
Se a bactria catalase positiva, cocos Gram positivos arranjados na
formade cachos de uva, observados na microscopia, deve ser feito um
teste de coagulasepara diferenciar
Staphylococcus aureus
de outros estafilococos.
Coletar umaporo da colniacom ala ou palitode madeiraLmina
demicroscpio limpaGotejar perxidode hirognioBorbulha
Staphylococcus
No-Borbulha
Streptococcus
Coletar umaporo da colniacom ala oupalito de madeiraLmina
demicroscpiolimpaPlasma comercialpara coagulaseFormao
degrumos
Staphylococcusaureus
No Formagrumos
Staphylococcussp.