Tcnicas de estudio de la clula

Qu es LA Microscopa? La microscopa es la tcnica de producir imgenes

visibles de estructuras o detalles demasiado pequeos para ser percibidos
a simple vista. En este campo ha habido gran impulso por parte de la
fsica.
Microscopa ptica
Un microscopio ptico es un microscopio basado en lentes pticas que
nos permiten observar objetos de pequeo tamao. El desarrollo de este
aparato suele asociarse con los trabajos de Antony Van Leeuwenhoek.
Los microscopios de este tipo generalmente producen un aumento de
1000 veces el tamao original. El lmite lo tienen en unas 2000 veces
Principio de funcionamiento
Las lentes de un microscopio ptico son el condensador, el objetivo
y el ocular.
La luz que entra en el sistema debe enfocarse sobre la preparacin y
para esto se utiliza el condensador. Elevando o bajando el
condensador puede alterarse el plano del foco de luz y elegirse una
posicin que consiga el foco preciso.
El objetivo es la lente situada cerca del objeto que se observa. El
aumento primario del objeto es producido por la lente objetivo y la
imagen se transmite al ocular.
En el ocular se realiza el aumento final.
Aumento y resolucin
Es importante recordar que un microscopio, aparte de tener la
capacidad de dar AUMENTO al tamao de la imagen de la muestra,
tambin tiene PODER RESOLUTIVO, esto es la capacidad de mostrar
distintos y separados dos puntos muy cercanos.
Cuanto mayor sea el poder resolutivo, mayor ser la definicin de
un objeto. Los microscopios de gran poder resolutivo son
especialmente buenos para ver pequeas estructuras.
OPTICOS

 De campo claro
Campo Oscuro
Contraste de fase
Confocal
Fluorescencia
ELECTRONICOS
Transmisin
Barrido

Microscopio ptico de campo claro

El campo claro es la forma ms simple de microscopa donde la luz pasa a
travs y refleja el espcimen.
Tinciones
Pigmentos naturales
Especmenes altamente contrastados montados en un porta
objetos.
El espcimen es iluminado desde abajo y observado desde arriba, aparece
brillante, pero ms oscuro que el brillante fondo, usada en patologa para
ver secciones de tejidos fijos o pelculas celulares/frotis.
No es muy til para clulas vivas sin teir o secciones de tejido sin teir.
Microscopio ptico de campo oscuro
Utiliza un haz de luz muy intensa en forma de un cono hueco
concentrado sobre el espcimen.
El objeto iluminado dipersa la luz y se hace as visible contra el
fondo oscuro que tiene detrs, como las partculas de polvo
iluminadas por un rayo de sol que se cuela en una habitacin
cerrada.
Las porciones transparentes del espcimen quedan oscuras,
mientras que las superficies y partculas se ven brillantes.

Microscopa de Fluorescencia
Es una variacin del microscopio ptico, dotado de luz ultravioleta en el
que los objetos son iluminados por rayos de una determinada longitud de
onda.
La imagen observada es el resultado de la radiacin electromagntica
emitida por las molculas que han absorbido la excitacin primaria y
reemitido una luz con mayor longitud de onda.
Para dejar pasar slo la emisin secundaria deseada, se deben colocar
filtros apropiados debajo del condensador y encima del objetivo.
Se usa para detectar sustancias con autofluorescencia (vitamina A) o
sustancias marcadas con fluorocromos
Microscopio de contraste de fases
Es un microscopio ptico modificado que permite contrastar
sustancias de diferente grosor o densidad.
Mediante un condensador y un objetivo especial se controla la
iluminacin de tal manera que vaya en diferentes rutas a travs de
las distintas partes de una clula.
El resultado es una imagen con diferentes grados de brillo y
oscuridad.
Con este mtodo, el material denso aparece brillante, mientras que
las partes de la clula que tienen una densidad cercana al agua
(citoplasma) aparecen oscuras.
Se utiliza para visualizar estructuras celulares sin necesidad de usar
colorantes o matar microorganismos.
Microscopio confocal
El microscopio confocal es en principio un microscopio ptico que
incluye como fuente de luz un lser y un sistema electrnico que
ayuda a la captacin de imgenes.
Debido a esto, el microscopio confocal consigue un aumento en la
resolucin y obtener imgenes de secciones pticas
extremadamentes finas, eliminando as la interferencia que produce
la luz que llega de los diferentes campos pticos de todo el grosor

de la muestra que se observa, consiguiendo as que el enfoque se

realice sobre un nico plano (confocal).
Las imgenes obtenidas son digitales.
Microscopio electrnico
En el Microscopio Electrnico la luz se sustituye por un haz de
electrones que pasan por un tubo (con vaco para mejorar el paso
de los electrones).
Permite la observacin de las estructuras interiores de las clulas.
Sirve para visualizar virus.
Tiene una resolucin de 10 A (se pueden ver objetos muy
pequeos, incluyendo algunas molculas).
Un haz de electrones es lanzado por un can en el que se
establece una diferencia de potencial, entre el ctodo y el nodo.
El chorro de electrones pasa a travs de la muestra a observar, que
est colocada en una rejilla.
Los electrones chocan con la muestra y se desvan, y estas
desviaciones son recogidas por la pantalla.
Observamos la imagen a travs de una pantalla que es excitada por
los electrones que llegan a ella (mecanismo similar a la televisin).
Las imgenes las recogemos mediante una placa fotogrfica que es
impresionada directamente por los electrones.
principio de funcionamiento
En un microscopio ptico, la potencia amplificadora est limitada
por la longitud de onda de la luz visible.
El microscopio electrnico utiliza electrones para iluminar un
objeto; los electrones tienen una longitud de onda mucho menor
que la de la luz, y pueden mostrar estructuras mucho ms
pequeas.
La longitud de onda ms corta de la luz visible es de alrededor de
4.000 A (1 A es 0,0000000001 metros). La longitud de onda de los

electrones que se utilizan en los microscopios electrnicos es de

alrededor de 0,5 A.
Existen dos tipos bsicos de microscopio electrnico:
1. Microscopio electrnico de transmisin (TEM)
2. Microscopio electronico de barrido (SEM)

Microscopio electrnico de transmisin (TEM)

Principio de funcionamiento:
Emite un haz de electrones dirigido hacia el objeto que se
desea aumentar.
Una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el
objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada
de la muestra.
Para utilizar un microscopio electrnico de transmisin debe
cortarse la muestra en capas finas, no mayores de un par de
miles de ngstroms.
Los microscopios electrnicos de transmisin pueden
aumentar un objeto hasta un milln de veces.
El primer microscopio electrnico de transmisin fue
desarrollado entre 1931 y 1933 por Ernest Ruska y sus
colaboradores.
El primer microscopio electrnico de transmisin comercial lo
construy la compaa Siemens en 1939.
VENTAJAS
Son ampliamente utilizados en la biologa celular.
Aunque permite una menor capacidad de aumento que el
microscopio electrnico de transmisin, permite apreciar con
mayor facilidad texturas y objetos en tres dimensiones que hayan
sido pulverizados metlicamente antes de su observacin.

 Por esta razn solamente pueden ser observados organismos

muertos, y no se puede ir ms all de la textura externa que se
quiera ver.
Los microscopios electrnicos slo pueden ofrecer imgenes en
blanco y negro puesto que no utilizan la luz.
Este instrumento permite la observacin y caracterizacin
superficial de materiales inorgnicos y orgnicos, entregando
informacin morfolgica del material analizado.

DESVENTAJAS
Elevados costos de los equipos y una infraestructura inadecuada no
permiten el uso de la tcnica en cualquier laboratorio.
Altos costos de procesamiento de las muestras
La manipulacin de reactivos se torna peligroso por la elevada
condicin toxica de los mismos.
Procesamiento tedioso de la muestra. Creacin de artefactos
La complejidad de los equipos requiere de personal tcnico
especializado.