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Callao, Per
2014
CULTIVO MICROBIOLGICO
1. INTRODUCCIN
Un cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones fsicas,
qumicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada. En
general, podemos distinguir cultivos lquidos y slidos en funcin de las caractersticas
del medio y cultivos discontinuos y continuos en funcin de la disponibilidad de
nutrientes en el medio.
2. OBJETIVOS
Comparar los principales mtodos de cultivo utilizados para los diferentes tipos
de microorganismos.
Conocer los principales mtodos de cultivo utilizados para los diferentes tipos de
microorganismos.
3. MARCO TEORICO
Diferentes mtodos de siembra
4) Por picadura o puncin: Con una aguja se toma el material que se quiere sembrar y
se lo introduce en el tubo, con medio semislido. Introducir la aguja hasta el fondo,
formando un canal de puncin, trayecto por el cual la retiraremos luego. Este mtodo se
utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias.
Medio de cultivo. Semislido
Instrumento: aguja bacteriolgica
Finalidad: Estudiar la movilidad de las bacterias
5) Siembra en TSI: (Por picadura y estras en superficie): el TSI (Triple Sugar Iron)
es un medio que contiene glucosa, sacarosa y lactosa, hierro y un indicador que es el
rojo fenol.
En este medio sembraremos por picadura y estras en superficie, como ya conocemos,
para estudiar los cambios que ocurrirn en superficie y profundidad. A lo largo del canal
se desarrollan los microorganismos, y segn lo hagan en la parte superior o inferior del
tubo, estarn indicando su comportamiento frente a los azucares, los cambios indican lo
siguiente:
MATERIALES
medio de cultivo ya preparado
asa de siembra
mechero
tubo de ensayo 1ml de agua destilada y 9ml de chica de jora 1/10
5. PROCEDIMIENTO
Cuando se utilice exclusivamente el asa de platino o nicrn.
Coger el asa por el cabo, en forma similar, a cuando tomamos el lpiz para
escribir.
Introduzca el asa de alambre de platino o nicrn directamente en la zona de color
azul de la llama del mechero, hasta que se ponga al rojo vivo. Seguidamente,
proceda a introducir lentamente el resto del alambre para lograr el mismo efecto.
Retire el instrumento de la llama y espere de 4 a 5 segundos con el objetivo de
que el asa se enfre.
Con el asa estril y fra tome el volumen o fragmento de la muestra que ser
sembrado y trasldelo de inmediato para el medio del cultivo seleccionado.
Si la siembra se fuera a producir en un medio solidificado en forma de cua en
tubo de ensayo, proceda del siguiente modo:
Con la mano opuesta a la que sujeta el asa, tome el tubo por l porcin inferior.
Con el dedo meique de la mano que sostiene el asa, retire del tubo el tapn de
algodn o la tapa de rosca y retngala(no colocar el tapn o la tapa sobre la mesa
de trabajo)
Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo, pasndola una o dos veces por
la llama del mechero, con el objetivo de eliminar por incineracin, los
microorganismos contaminantes que se encuentran en esa zona, por la parte
externa del tubo. Esta accin calrica, provoca adems una conveccin del
movimiento del oxgeno presente en el interior del tubo hacia afuera, debido a la
desigualdad de calor, lo cual favorece que decrezca el riesgo de contaminacin.
Introduzca el asa con el volumen o fraccin de la muestra en el tubo, hasta el
fondo de la cua. A partir de este momento, la siembra puede realizarse de
Deslizando el asa, desde el fondo hacia arriba, por toda la superficie de la cua,
trazando una lnea longitudinal.
Deslizando el asa por la superficie de la cua desde el fondo hacia arriba,
imprimindole un movimiento de zigzag.
Motiando toda la superficie de la cua con hisopo.
Efectuando cualquiera de las tres variantes explicadas pero adicionalmente
roturando el medio con el asa, haciendo un pequeo corte longitudinal.
Al concluir la siembra se flamea la boca y se taponea nuevamente el tubo
procediendo a esterilizar el asa en las llama del mechero.
6. CONCLUSIONES
Una vez que ya tenemos los medios de cultivo preparados, hay que inocularlos, y para
ello se necesita:
Medio de cultivo.
Condiciones ptimas de incubacin como temperatura, pH, presin, condiciones
atmosfricas (concentracin de O2).
Estos medios de cultivo son slidos (cultivos en reposo), o lquidos (para cultivos en
agitacin)
Al realizar una siembra de microorganismos, debemos tener en cuenta que tcnica se va
a utilizar, debido a que estas varan respecto a las caractersticas del microorganismo a
tratar. Tambin debe tenerse en cuenta la forma, espacio y el objetivo al que se quiere
llegar, pues dependiendo de esto la tcnica de siembra es diferente. Un microorganismo
se puede sembrar en un medio lquido o en la superficie de un medio slido de agar .Un
cultivo de bacterias o de hongos es con el fin de aislarlas en el medio para lograr un
mejor estudio de ellos.
7. CUESTIONARIO
1. CUANDO REALIZARIA CULTIVO POR DILUCIONES?
Tcnica de las diluciones en serie:
Si el microorganismo que se busca en un cultivo mixto se encuentra en mayos
cantidad que cualquiera de los otros microorganismos, es posible obtenerlo en
cultivo puro mediante una serie de diluciones en tubo, del medio de cultivo
apropiado. Cuando la muestra este muy diluida contendr solamente la bacteria
que buscamos. Aunque es recomendable confirmar mediante el procedimiento
de la siembra en placa la pureza del cultivo que se aisl de la manera descrita.
2. QUE OTRAS FORMAS DE SIEMBRA EXISTEN?
Tcnica por agotamiento de asa
Siembra por estras.
Siembra por puncin.
Siembra volumtrica.
Siembra masiva.
8. BIBLIOGRAFIA
http://html.tecnicas-de-cultivo-microbiologia.html
http://www.slideshare.net/aguero-luna/medios-de-cultivos
http://www.unavarra.es/genmic/microgral/Tema%2002.-%20Cultivo%20de
%20microorganismos.pdf
Medio de
cultivo
Tipo de
medio
Agente
bacteriosttico
Azcar
fermentab
le
Sistema Indicador
ALRF (agar
lactosa rojo
fenol)
Agar Cetrimide
diferencial
(no
selectivo)
selectivo
-----
lactosa
rojo fenol
-------
--------
Agar Mac
Conkey
selectivo y
diferencial
bromuro de
cetiltrimetil
amonio
cristal violeta,
sales biliares
lactosa
rojo neutro
SS agar
(Salmonella
Shigella)
VRBA (violeta
rojo bilis agar)
selectivo y
diferencial
verde brillante,
sales biliares
lactosa
selectivo y
diferencial
cristal violeta,
sales biliares
lactosa
rojo neutro
Manitol Salt
Agar (Chapman)
selectivo y
diferencial
cloruro de
sodio
manitol
rojo fenol
eosina y azul de
metileno
XLD agar
(xilosa lisina
desoxicolato)
selectivo y
diferencial
desoxicolato de
sodio
lactosa,
xilosa,
sacarosa
BiS agar
(bismuto sulfito)
selectivo y
diferencial
glucosa
Baird Parker
agar
selectivo y
diferencial
indicador de sulfito
de Bi y sulfato
ferroso
yema de huevo,
telurito de potasio
TSB + 10%
NaCl
enriquecimie
nto selectivo
verde brillante,
sulfito de
bismuto
Cloruro de litio
y telurito de
potasio
cloruro de
sodio
------
-------
Caldo
Tetrationato
enriquecimie
nto selectivo
Tetrationato,
sales biliares
------
------
------
CLBVB (caldo
enriquecimie verde brillante, lactosa
produccin de gas
lactosa bilis
nto selectivo sales biliares
verde brillante)
MEDIO DE CULTIVO, TIPO DE MEDIO, AZUCAR FERMENTABLE, SISTEMA
INDICADOR