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uso
n
vivo p
a
a la
profilaxis
y
tratamiento
de
enfermedades humanas (Figura
5). Adicionalmente, ya que la fisiologa,
catabolismo y las funciones efectoras de un Ac estn asociados al
fragmento Fc, los AcQ debieran comportarse en forma ptima al ser
administrados en humanos.
La tcnica de "quimerizacin" fue desarrollada por Morrison y col. (73) y
Boulliane (7) a mediados de los aos 80. El procedimiento implica la
clonacin de los genes VH y VL mridos y la insercin de los genes clonados
en vectores de expresin eucariota a los que, previamente, se ha
incorporado los genes codificadores de la porcin constante de las cadenas
pesada y liviana humanas. Estos vectores son finalmente transfectados en
forma estable en una lnea celular seleccionada. La clonacin de los genes
VH y VL se realiza mediante RT-PCR (Figura 5) utilizando como molde ARN
total o ARN mensajero (ARNm) obtenido de un hibridoma secretor de la
especificidad de inters y oligonucletidos complementarios a los extremos
3 y 5 de cada gen como iniciadores. En la actualidad, se encuentran
disponibles familias de oligonucletidos para la clonacin de los genes V H y
VL del ratn, del humano y otras especies. Estas familias son capaces de
amplificar la mayora, sino la totalidad, de los genes V funcionales de estas
especies y, usualmente, contienen sitios de reconocimiento para enzimas de
restriccin, las cuales facilitan la identificacin, manipulacin e insercin en
los vectores de expresin de los genes V amplificados por PCR (2, 12, 19,
30, 58-60, 66, 80, 93, 95, 111, Montao y Morrison). Una serie de vectores
tipo "cassette" estn disponibles donde los genes V pueden ser fcilmente
clonados en el contexto de cualquier isotipo de cadena liviana y pesada
humana (18, Montao y Morrison). De forma similar, avances en el campo
de la tecnologa de transferencia de genes tambin han facilitado, y hecho
ms eficiente, el proceso de insercin de ADN forneo en diferentes lneas
celulares eucariotas.