UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTIN

FACULTAD DE INGENIERIA DE PROCESOS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA QUIMICA

LABORATORIO DE ANALISIS INSTRUMENTAL 2

TEMA:

ESPECTROFOTOMETRIA UV VISIBLE DETERMINACION DE

HIERRO

Turno:
Marte de 7:00am a 10:00am

ELABORADO POR:
Ronald Harol Gutirrez Teves

CUI:
20060732

Arequipa 2015

ESPECTROFOTOMETRIA UV VISIBLE DETERMINACION DE

HIERRO
1.- OBJETIVO
- Determinar la concentracin de Fierro en lentejita mediante un mtodo
espectrofotomtrico (complejo Hierro-Ortofenantrolina).
- Comparar los resultados obtenidos por mtodo espectrofotomtrico y
obtener la curva de calibracion que relaciona la Absorbancia con la Longitud
de Onda.
2.- DESCRIPCION TEORICO PRACTICA:
2.1.- ESPECTROFOTOMETRIA UV VISIBLE
Mtodos fisicoqumicos o instrumentales
-

En el anlisis fisicoqumico se utilizan las interacciones energa

materia para efectuar la cuantificacin o cualificacin del analto
(valoraciones instrumentales). Toda vez que para llevar a cabo
experimentalmente las interacciones energa materia se requiere de
instrumentacin ms sofisticada que aquella usada en los mtodos
qumicos, suele llamarse a los mtodos fisicoqumicos mtodos
instrumentales de anlisis.

En esta interaccin energa-materia se utiliza un instrumento para

medir una propiedad fisicoqumica del sistema objeto de anlisis.
As tenemos, por ejemplo:

Mtodos Potenciomtricos: estos miden una diferencia de

potencial causada por el analto. Aqu la variable en estudio es
la variacin del potencial de un electrodo en presencia de una
especie qumica cuya concentracin va variando. Utilizndose
un POTENCIOMETRO.
Mtodos colorimtricos: aqu se mide la intensidad de color que
tiene una sustancia qumica relacionada con el analto, tambin
se mide la absorcin de luz en ciertas longitudes de onda del
campo visible, esta absorcin est relacionada con la
concentracin de inters. Utilizndose un COLORIMETRO.
Mtodos espectroscpicos: basados en la interaccin de una
muestra con diferentes longitudes de onda de energa radiante;
a este grupo pertenecen la espectroscopia de absorcin
atmica, espectroscopia ultra violeta visible, espectroscopia
infrarroja y espectroscopia de resonancia magntica
nuclear(RMN). Utilizndose ESPECTROFOTOMETROS.
Mtodos cromatogrficos: estrictamente es un mtodo de
separacin de mezclas complejas, por arrastre de una fase
mvil a travs de una fase fija. Por medio de patrones
preestablecidos se puede cuantificar la presencia de un analto.
Utilizndose CROMATGRAFOS.

Espectrofotometria

La espectrofotometra UV-visible es una tcnica analtica que permite

determinar la concentracin de un compuesto en solucin. Se basa en que
las molculas absorben las radiaciones electromagnticas y a su vez que la
cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la concentracin. Para
hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotmetro, en el que se
puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solucin y
medir la cantidad de luz absorbida por la misma.
En espectroscopa el trmino luz no slo se aplica a la forma visible de
radiacin electromagntica, sino tambin a las formas UV e IR, que son
invisibles. En espectrofotometra de absorbancia se utilizan las regiones del
ultravioleta (UV cercano, de 195-400 nm) y el visible (400-780 nm).

La regin UV se define como el rango de longitudes de onda de 195 a 400

nm. Es una regin de energa muy alta. Provoca dao al ojo humano, as
como quemadura comn. Los compuestos con dobles enlaces aislados,
triples enlaces, enlaces peptdicos, sistemas aromticos, grupos carbonilos y
otros heterotomos tienen su mxima absorbancia en la regin UV, por lo
que sta
es muy importante para la determinacin cualitativa y cuantitativa de
compuestos orgnicos. Diversos factores -como pH, concentracin de sal y
el disolvente- que alteran la carga de las molculas, provocan
desplazamientos de los espectros UV. La fuente de radiacin ultravioleta es
una lmpara de deuterio.
En la regin visible apreciamos el color visible de una solucin y que
corresponde a las longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe.
El color que absorbe es el complementario del color que transmite. Por
tanto, para realizar mediciones de absorcin es necesario utilizar la longitud
de onda en la que absorbe luz la solucin coloreada.
La fuente de radiacin visible suele ser una lmpara de tungsteno y no
proporciona suficiente energa por debajo de 320 nm.

Transmitancia y absorbancia
Cuando un rayo de luz de una determinada longitud
de onda de intensidad el incide perpendicularmente
sobre una disolucin de un compuesto qumico que
absorbe luz o cromforo, el compuesto absorber
una parte de la radiacin incidente (Io) y dejar
pasar el resto (It), de forma que se cumple:
Io = Ia + It
La Transmitancia (T) de una sustancia en solucin es la relacin entre la
cantidad de luz transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado
la muestra, It, y la cantidad de luz que incidi sobre ella, I, y se representa
normalmente en tanto por ciento:
% T = It/Ioo x 100
La Transmitancia nos da una medida fsica de la relacin de intensidad
incidente y transmitida al pasar por la muestra. La relacin entre %T y la
concentracin no es lineal, pero asume una relacin logartmica inversa.
La Absorbancia (A) es un concepto ms relacionado con la muestra puesto
que nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como
el logaritmo de 1/T, en consecuencia:
A = log 1/T = -log T = -log I
Cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales (Io = It), la
Transmitancia es del 100% e indica que la muestra no absorbe a una
determinada longitud de onda, y entonces A tiene un valor de: log 1 = 0.
La cantidad de luz absorbida depender de la distancia que atraviesa la luz
a travs de la solucin del cromforo y de la concentracin de ste.
Ley de Lambert-Beer
Esta ley expresa la relacin entre absorbancia de luz monocromtica (de
longitud de onda fija) y concentracin de un cromforo en solucin:
A = log I/Io = ecl
La absorbancia de una solucin es directamente proporcional a su
concentracin (a mayor nmero de molculas mayor interaccin de la luz
con ellas); tambin depende de la distancia que recorre la luz por la solucin
(a igual concentracin, cuanto mayor distancia recorre la luz por la muestra
ms molculas se encontrar); y, por ltimo, depende de e, una constante
de
proporcionalidad (denominada coeficiente de extincin) que es especfica de
cada cromforo. Como A es adimensional, las dimensiones de e dependen
de las de c y l. La segunda magnitud (l) se expresa siempre en cm mientras
que la primera (c) se hace, siempre que sea posible, en M, con lo que las
dimensiones de e resultan ser M-1cm-1.

Este coeficiente as expresado, en trminos de unidades de concentracin

molar (o un submltiplo apropiado), se denomina coeficiente de extincin
molar (eM). Cuando, por desconocerse el peso molecular del soluto, la
concentracin de la disolucin se expresa en otras unidades distintas de M,
por ejemplo, gL-1, las dimensiones de e resultan ser distintas, por ejemplo,
g-1Lcm-1, y al coeficiente as expresado se denomina coeficiente de
extincin especfico (e).
La ley de Lambert-Beer se cumple para soluciones diluidas; para valores de
c altos, e vara con la concentracin, debido a fenmenos de dispersin de
la luz, agregacin de molculas, cambios del medio, etc.

Instrumentacin para la medicin de absorbancias de la luz visible y

ultravioleta: espectrofotmetro UV-visible
La medicin de absorbancia de la luz por las molculas se realiza en unos
aparatos llamados espectrofotmetros. Aunque pueden variar en diseo, en
especial con la incorporacin de ordenadores para el anlisis de datos,
todos los espectrofotmetros constan, segn se indica en la figura, de:
1. Una fuente de energa radiante: lmpara de deuterio y tungsteno.
2. Un monocromador para la seleccin de radiaciones de una determinada
longitud de onda: filtros, prismas, redes de difraccin.
3. Un compartimento donde se aloja un recipiente transparente (cubetas o
tubos) que contenga la muestra Pueden ser de vidrio, cuarzo o plstico
transparente. Para medir en UV se deben usar las de cuarzo o slice fundido,
porque el vidrio no transmite la radiacin UV.
4. Un detector de luz y un amplificador convertidor de las seales luminosas
en seales elctricas.
5. Un registrador o sistema de lectura de datos.
Desde el punto de vista operativo, el primer paso es seleccionar la fuente de
luz y longitud de onda a la que se va a realizar la medida. Hay
espectrofotmetros de un solo haz (con una sola celdilla para alojar la
cubeta con la muestra) y de doble haz (con dos celdillas para dos cubetas);
en nuestro caso se trabajar con los de un solo haz.
Se mide primero la absorbancia del disolvente (conocido como blanco) y al
que se le asigna el valor de cero mediante el ajuste del mando, de forma
que la intensidad incidente y transmitida sean iguales (Io = I), y por tanto la
absorbancia es cero. A continuacin, se pone en la celdilla la cubeta con la
muestra y se lee la absorbancia de sta.

2.2.- DETERMINACION DE FIERRO 3+

Fundamento Terico
Uno de los primeros anlisis colorimtricos fue el mtodo Nessler para el
amoniaco en 1856, Nessler observo que cuando se aada una solucin
alcalina de HgI2 a una disolucin de amoniaco, se produca un coloide
amarillo o pardo rojizo, dependiendo de la concentracin de amoniaco. Para
determinar la concentracin, se utiliz la comparacin del color de la
muestra con la de una serie de patrones, los colores se comparaban
mirando los tubos que los contenan desde arriba, y estos estaban
colocados en una gradilla con iluminada. La colorimetra en que una
muestra absorbe luz visible, es un ejemplo del anlisis espectrofotomtrico.
A finales del siglo XIX la espectrofotometra se limitaba a la absorcin,
emisin y dispersin de la radiacin electromagntica visible, ultravioleta e
infrarrojo. Durante el siglo XX, el mtodo se fue ampliando para incluir otras
formas de radiacin electromagnticas como los rayos X, las microondas y
las ondas de radio, as como partculas de energa tales como los electrones
y los iones.

Diagrama de curva de calibracin del complejo Fierro-Ortofenantrolina

Determinac
in simultanea de Fierro 3+, en primer lugar y luego como presencia
negativa de Fierro 2+.

3.- PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

3.1.- Pesar aproximadamente 5 gramos de la muestra.
3.2.- Tarar el crisol.
3.3.- Calcinar la muestra a 550 C.

3.4.- Retirar la muestra, enfriar y agregarle 5 - 10ml de cido Clorhdrico

(HCl 1:1). Calentar la muestra con el cido suavemente para ayudar a la
disgregacin.
3.5.- Pasar a un vaso de precipitados, lavando con agua lo que quede en el
crisol, luego llevar a ebullicin el contenido del vaso hasta reducir a la mitad
del volumen.
3.6.- Filtrar si es necesario y enrazar en una fiola de 100ml.
3.7.- Preparar el Stock de Fierro de 200ppm, con sulfato ferroso y amonio,
pesar 0.7021 gramos y disolver con agua destilada en una fiola de 500ml.
3.8.- Preparar los estndares de 2, 4, 6ppm de Fierro en 100ml cada uno a
partir del stock preparado.
3.9.-Extraer 10ml del stock de Fierro y verterlo en un vaso de precipitado y
agregar 0.5ml de Acetato de Sodio, al 5%, 1.0ml de clorhidrato de
hidroxilamina al 1%, 1ml de ortofenantrolina al 0.1% y verificar el pH que
este aproximadamente a 3.5 en caso de no estar, regular agregando gota a
gota de acetato de sodio, contando el nmero de gotas.
3.10.- Preparar el blanco de la siguiente manera:

10ml. De agua destilada.

0.5ml. de acetato de sodio.
1ml. De clorhidrato de hidroxilamina.
1ml de Ortofenantrolina.

3.11.- Preparar la curva de calibracin con los estndares de 2, 4, y 6 ppm.

Leyendo a una absorbancia de 508nm, de la siguiente manera:
3.12.- De cada estndar extraer 10ml verterlo a un tubo de ensayo y a cada
uno de ellos agregar:
0.5ml de acetato de sodio ms el volumen (gotas) de acetato de
sodio, que fueron necesarios para llegar al pH = 3.5, en la prueba del
paso 3.9.
1ml de clorhidrato de hidroxilamina.
1ml de ortofenantrolina.
Dejar en reposo durante 10 minutos y efectuar las lecturas.
9.13.- Tomar 10ml de la muestra y verterlo a un vaso de precipitado y
agregar 0.5ml de acetato de sodio, 1ml de clorhidrato de hidroxilamina, 1ml
de ortofenantrolina, verificar el pH que este aproximadamente a 3.5 en caso
de no estar, regular agregando gota a gota de acetato de sodio, contando el
nmero de gotas.
9.14.- Tomar 10ml de la muestra y agregar:
0.5ml de acetato de sodio ms el volumen utilizado para regular el
pH.
1ml de clorhidrato de hidroxilamina.

 1ml de ortofenantrolina.
Dejar en reposo durante 10 minutos y efectuar la lectura de
absorbancia a la misma longitud de onda.
9.15.- Expresar los resultados en mg de Hierro /100g de muestra. Realizando
el clculo mediante la curva de calibracin, por regresin lineal y mediante
la expresin A=Ebc.
4.- OBTENCION Y PROCESEAMIENTO DE DATOS
TABLA 1: Lectura de absorbancias a 508nm.
Nombre de la
Concentracin
Absorbancia
Muestra
Blanco
0
0
Muestra
?
0.016
Estndar 1
2 ppm
0.183
Estndar 2
4 ppm
0.231
Estndar 3
6 ppm
0.392
4.1.- Conversin de unidades de ppm a mol/L. (Peso Molecular del Fierro:
55.85 g/mol.)
Para el estndar 1, concentracin 2ppm:
2ppm = 2mg/L = 0.002g/L

0.002 g /L

C1= 55.85 g/mol

= 3.58x10-5 mol/L.

Para el estndar 2, concentracin 4ppm:

4ppm = 4mg/L = 0.004g/L

0.004 g / L

C2= 55.85 g/mol

= 7.16x10-5 mol/L.

Para el estndar 3, concentracin 6ppm:

6ppm = 6mg/L = 0.006g/L

0.006 g / L

C3= 55.85 g/mol

Aplicacin de la ley d Lambert y Beer

A
A
( a ) c= (b)
cb
b

Donde:
C = Concentracin (mol/L).
A = Absorbancia.
b = Trayecto de celda (cm).

Absortividad molar especifica.

= 10.74x10-5 mol/L.

Determinacin de la Absortividad molar especifica

1=

0.183
(3.58 x 10 mol/ L) x 2.54 cm

= 2012.49 L/mol cm

2 =

0.183
(7.16 x 10 mol/ L) x 2.54 cm

= 1006.25 L/mol cm

2 =

0.183
(10.74 x 10 mol /L) x 2.54 cm

= 670.83 L/mol cm

Estndar
nombre de la
muestra
Blanco
Muestra
Estndar 1
Estndar 2
Estndar 3

TABLA 2. Ley de Lambert y Beer (incompleta)

C
C
Absorbanc

(ppm (mol/L)
ia
(Absortividad
)
molar especifica)
0
0
0
0
?
?
0.016
?
2
3.58x1
0.183
2012.49
ppm
0-5
4
7.16x1
0.231
1006.25
ppm
0-5
6
10.74x10
0.392
670.83
-5
ppm

Curva de calibracin:
Con los datos de la tabla 2 (Concentracin en mol/L y Absorbancia)
generamos nuestra curva.

Por regresin lineal obtenemos nuestra ecuacin y reemplazando en ella

hallamos el valor de concentracin de nuestra muestra problema:
Y = 3419*X + 0.0179

Y = 0.016
X=

0.0179 0.0160
3419

= 5.557x10-7mol/L

Convirtiendo la concentracin a mg/L:

5.557x10-7mol/L x 55.85g/mol x 1000mg/g = 0.031 mg/L de Fe = 0.031ppm
de Fe.
Ahora se puede completar la tabla 2:
Estndar
nombre de la
muestra
Blanco
Muestra
Estndar 1
Estndar 2
Estndar 3

TABLA 3: Ley de Lambert y Beer (Completa)

C
C
Absorbanc

(ppm)
(mol/L)
ia
(Absortividad
molar
especifica)
0
0
0
0
0.031
5.557x10
0.016
129838.1
-7
ppm
2 ppm
3.58x10-5
0.183
2012.49
4 ppm
7.16x10-5
0.231
1006.25
-5
6 ppm
10.74x10
0.392
670.83

La muestra inicial se toma de 5g de lentejas, en el procedimiento

experimental (paso 3.6) se diluy la muestra en 100ml y (paso 9.13) se
tom 10ml de esta muestra en solucin. Tomando esto en consideracin se
procede a determinar la concentracin de Fierro en 100g de lenteja, de la
siguiente forma:

0.031mg/ L de Fe x 100
0.31 mgFe
mgFe
=
x 100=6.2
10
5 g de Lenteja
100 g Lenteja

5.- CONCLUSIONES
Se puede afirmar que existe una relacin directamente proporcional
entre la absorbancia y la concentracin, y adems una relacin
inversamente proporcional entre la absorbancia y la Absortividad
molar especifica.
Se demostr que tanto por curva de calibracin (espectrofotmetro),
como por la Ley de Lambert y Beer se obtienen valores de
concentracin semejantes.
La concentracin de Fierro en lentejas es de aproximadamente 6
mg/100g de Lenteja. Este valor est un poco alejado del bibliogrfico
(3.5mg/100g de Lenteja), debido a inconvenientes en el
procedimiento experimental, como el exceso al agregar acetato de
sodio incluso como sal solida no contemplado en el procedimiento
experimental original.