PRODUCCIN BIOTECNOLGICA DE CIDO CTRICO

El cido ctrico es un producto qumico que puede ser utilizado en varios mbitos
cuya produccin industrial se lleva a cabo preferentemente mediante el uso de
un microrganismo llamado Aspergillus Niger,
El cido ctrico es un producto intermedio del ciclo de Krebs, es producido a partir de
glucosa segn la va de Embden-Meyerhof (o glucolisis o glicolisis, diferentes nombres
para la misma va metablica), que en ambiente aerbico da como resultado la
produccin de acetil-coenzima A. Esta coenzima entra en el ciclo de Krebs en donde
reacciona con el cido oxalactico para formar cido ctrico.
Materias Primas
Como materia prima, a nivel industrial se puede utilizar la melaza de caa de azcar o
de remolacha azucarera, sustancias amilceas del maz, o soluciones de glucosa
y sacarosa.
Pre-tratamiento:
1.

Filtracin y tratamiento de la materia prima con resinas de intercambio inico.

(con el objetivo de eliminar iones metlicos como el magnesio, el zinc, el hierro y
sobretodo el manganeso que favorece la produccin de cido oxlico.)

2.

Esterilizacin e inmisin en el fermentador en donde tambin se introduce el

inculo incubado apropiadamente.

pH comprendido entre 2,8 y 1,5

temperatura comprendida entre 28oC y 33oC

Rendimiento: 70 80% del carbohidrato inicial.
Duracin:
Entre 6 y 15 das. (Segn la materia prima utilizada)
Recuperacin de cido ctrico:

1.

Filtracin (para remover clulas y otros residuos slidos)

2.

Precipitacin del citrato de calcio agregando hidrxido de calcio.

3.

Filtracin para separar el precipitado que luego se disuelve con cido sulfrico.

4.

Formacin de cido ctrico y sulfato de calcio, separados por filtracin

Purificacin: Columnas con carbn activado, columnas con resinas de intercambio
inico.
Concentracin, cristalizacin, centrifugacin, secado.
A continuacin el esquema de esta produccin:

Produccin de insulina
Las bioseparaciones para la produccin de insulina por el mtodo de la protena
intracelular, constan de las siguientes etapas de recuperacin, concentracin,
purificacin y acabado.
Recuperacin
Cosecha celular. El primer paso de la ruta de bioseparacin consiste en la
recuperacin de las clulas por centrifugacin.
Rompimiento celular y recuperacin de cuerpos de inclusin (CI). En
este caso, el producto es intracelular y se requiere el rompimiento de las
clulas por el medio de homogeneizadores de alta presin para liberar los CI.
Solubilizacin de CI. La suspensin que contiene los CI se transfiere a un
reactor recubierto de vidrio, donde se hace reaccionar con urea y 2mercaptoetanol. La urea es un agente caotrpico que disuelve las protenas

desnaturalizadas de los CI y el 2-mercanoptoetanol es un agente que reduce

los enlaces disulfuro. Las partculas finas remanentes se eliminan en el filtro
para evitar problemas en los equipos de cromatografa.
Concentracin.
Cromatografa de intercambio inico. La proinsulina (S-SO3) se hace pasar
por tres columnas de intercambio catinico de S-sefarosa. En la elucin de la
columna se utiliza una solucin de urea para prevenir el replegamiento.
Replegamiento. Esta operacin permite la remocin de los grupos sulfito (SO 2
3

), la formacin de los enlaces disulfuro y el plegamiento correcto de la

proinsulina en su forma nativa.

Conversin enzimtica. La remocin de la cadena C de la proinsulina que
conecta las cadenas A y B, se realiza enzimticamente utilizando tripsina y
carboxipeptidasa.
Purificacin
Cromatografa de intercambio inico. La insulina se purifica mediante una
secuencia

cromatografa

multimodal

basada

en

diferencias

de

carga,

hidrofobicidad y tamao entre la insulina y sus contaminantes.

Cromatografa de fase reversa. La purificacin contina utilizando la
columna de cromatografa de alta resolucin de fase reversa de cido fenil
bornico.
Cromatografa de filtracin en gel. La purificacin se completa en una
columna de filtracin en gel en donde la insulina se obtiene prcticamente
pura.
Acabado
Cristalizacin.

La

solucin

obtenida

se

alimenta

un

cristalizar

enchaquetado, donde se mezcla con acetato de amonio y cloruro de zinc.

Secado. Finalmente, los cristales se secan en el liofilizador (3).
Produccion de penicilina

La produccin de penicilina G o V es llevada a cabo por fermentacin en medios

lquidos. En una fermentacin de penicilina tpica, la mayora de la masa celular
es obtenida durante las primeras 40 horas de fermentacin. Durante la
fermentacin se debe controlar si el suministro de oxgeno es el requerido para
mantener el valor deseado de qp. Otro parmetro importante es la temperatura, y
en este caso el diseo y operacin del reactor es importante por el calor generado
por el crecimiento y la agitacin. Actualmente la extraccin con solventes es la
base para la separacin y purificacin de la penicilina. El primer paso consiste en
separar el micelio del medio de cultivo empleando un filtro rotatorio a vaco tipo
cilndrico. El filtrado rico en penicilina es luego enfriado en un intercambiador de
calor a 0 4 C con el objeto de disminuir la degradacin enzimtica y qumica
durante las etapas de extraccin posteriores. Las penicilinas G y V son cidos
fuertes. Las formas cidas son solubles en muchos solventes orgnicos y se
pueden extraer con un alto rendimiento en acetato de amilo o de butilo a pH 2.5
3.0. La extraccin se puede realizar en operaciones continuas, a contracorriente en
extractores centrfugos en etapas mltiples, a temperaturas de 0 3 C. Otra
posibilidad es el empleo de mezcladores estticos o decantadores, los cuales
tienen en menor costo de inversin.
Se debe tener en cuenta que tanto la penicilina G como la V se degradan en medio
cido con una cintica de primer orden a una velocidad proporcional a la
temperatura y recproca con respecto al pH. La extraccin de penicilina se puede
realizar en una o ms etapas sucesivas, con una acidificacin del caldo filtrado con
H2 SO4 o H3PO 4 al 10% P/V y con el agregado de un agente surfactante (0,003
0,1% P/P, en el solvente), realizndose la extraccin y concentracin en extractores
centrfugos. Dependiendo de las especificaciones de uso final, el solvente
conteniendo penicilina se puede tratar con carbn para separar pigmentos y otras
impurezas. Esta etapa actualmente no se realiza debido a las bajas impurezas de
los caldos y a los altos rendimientos obtenidos.
La cristalizacin se puede realizar desde la fase acuosa si se desea, siendo los
valores crticos las concentraciones de sodio o potasio, la temperatura, la
concentracin de penicilina y el pH. En caso de hacerse la cristalizacin a partir de
un solvente se requiere tambin un exceso de Na + o K+ , siendo los cristales
recuperados en un filtro rotatorio a vaco. Estos cristales son lavados y presecados
con un solvente voltil que tambin separa impurezas coloreadas. El secado
definitivo se puede realizar con aire caliente, vaco o calor radiante.

La penicilina cristalina G o V as obtenida puede ser empleada como tal o como

intermediario que es convertido a 6-APA para obtener nuevas penicilinas
semisintticas, cuidando en todos los casos que los productos debern tener un
grado farmacutico.

Fuente: Apuntes de Microbiologa Industrial del Programa Regional de Desarrollo

Cientfico y Tecnolgico de la OEA

Anlisis

cido Citrico

Penicilina

Insulina