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OBJETIVOS...2
RESUMEN.....2
INTRODUCCIN..2
MARCO TERICO...3
1. El fosforo y los microrganismo
1.1 El fosforo.....3
1.2 microorganismos4
2. Mecanismos de transformacin del fosforo.....4
2.1 Mineralizacin del fosforo orgnico....4
2.2 Enzimas que intervienen en la solubilizacin del fosforo.......5
2.2.1 Enzimas fosfatasas......5
2.2.2 Enzimas Fitasas...5
2.3 Solubilizacin del fosforo.....5
3. Actividades inoculantes basados en el fosforo...5
4. Uso de fertilizantes..6
5. Uso de biofertilizantes.....6
MATERIALES Y MTODOS...6
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Medio pikovskaya....6
Siembra de microorganismos.6
Prueba para la presencia de halo.....7
Caracterizacin microbiolgica.....7
Evaluacin cualitativa de la actividad solubilizadora de fosforo......7
Evaluacin cuantitativa de la actividad solubilizadora de fosforo....7
RESULTADOS...7
1.
2.
3.
4.
5.
Siembra de microorganismos....7
Prueba de halo hidrolisis del medio.....8
Caracterizacin microbiolgica..8
Evaluacin cualitativa..9
Evaluacin cuantitativa...9
DISCUSIN.....10
1. Prueba de halo hidrolisis del medio...10
2. Caracterizacin microbiolgica. .....10
3. Evaluacin cualitativa....10
Aislamiento e identificacin de
microorganismos con capacidad solubilizadora
de fsforo
Gonzlez Algecira Jhonnatan, Lpez Grisales Luisa, Marn Crdoba Valentina, Torres
Garay Evelyn.
OBJETIVOS
RESUMEN
El fsforo es uno de los nutrientes ms limitantes en el crecimiento de las plantas. Dentro de las
funciones que le han sido atribuidas se encuentran la captacin, almacenamiento y transferencia
de energa adems de formar parte de macromolculas tales como cidos nucleicos y fosfolpidos
presentes en la membrana citoplasmtica, Las formas inorgnicas de fsforo son solubilizadas por
un grupo de microorganismos heterotrficos que excretan cidos orgnicos, los cuales disuelven
minerales ricos en fsforo quela en cationes unidos al fsforo liberando a este a la solucin, gracias
a esta habilidad se aislaron microorganismos con capacidad de crecer en un medio selectivo
conocido como pikovskaya, aquellos microorganismos con capacidad de crecer en este medio se le
realizaron varias pruebas una de ellas fue por medio de la identificacin del halo de hidrlisis, pero
finalmente se escogieron aquellos microrganismos que tuvieron en su medio liquido un pH acido
que fuera apto para la solubilizacin del fosforo, de igual manera se determin su capacidad
gracias a un mtodo colorimtrico que con ayuda al espectrofotmetro fue posible determinar la
concentracin de fosforo soluble en el medio, durante el desarrollo del proyecto fue posible la
identificacin de 3 hongos y 1 bacterias con gran potencial para ser solubilizadora de fosforo.
INTRODUCCIN
El suelo se refiere a un material exterior,
formado por cinco componentes principales:
materia orgnica, materia mineral, agua, aire
y organismos vivos que se desarrollan
conjuntamente en varios ciclos. La cantidad
de cada uno de estos componentes no es la
misma en todos los suelos, sino que vara
con su localizacin. Las cantidades de
materia orgnica y materia mineral que forma
parte del suelo son relativamente fijas en un
determinado lugar, las porciones de agua y
aire varan ms frecuentemente. La materia
orgnica slo ocupa del 3% al 6% y la
porcin viviente apenas el 1% siendo esta la
porcin esencial para la produccin de
cultivos y fertilidad del suelo. Para el
desarrollo de los microorganismos en el
suelo, el medio ambiente es nico en
diferentes aspectos; es uno de los sitios ms
dinmicos para la interaccin entre
microorganismos y con la naturaleza. Parte
de estos procesos son la cantidad de
reacciones bioqumicas que descomponen la
materia orgnica, la intemperizacin de las
rocas y nutricin de los cultivos agrcolas.
Tambin los compuestos inorgnicos tienen
un notable efecto sobre los microorganismos
especialmente por la influencia en la
disponibilidad de nutrientes, aireacin y
retencin de agua. (Alexander, 1987).
Para poder determinar la fertilidad de un
suelo se debe analizar la interaccin de las
caractersticas fsicas, qumicas y biolgicas
que cuando se encuentran equilibradas
proporcionan un medio adecuado para el
MARCO TERICO
El
uso
qumicos
indiscriminado
de
ha
notoriamente
afectado
fertilizantes
el
crecimiento.(Elsy,2007)
elementos
que
para
ella
son
permite
predecir
que
aquellos
el
fsforo,
acten
como
medios.
de
Sin
tanto
esto
embargo
afecta
con
los
el
uso
cultivos
la
empleo
llegar
ocasionar
esos
componentes
ayudado
un
poco
mantener
la
1.1 El fosforo
limitantes en el crecimiento de las plantas.
Dentro de las funciones que le han sido
se
solubilizadoras
de
se
basa
principalmente
en
la
en
procesos
de
crecimiento
reproduccin de la planta.
de
estos
microorganismos
atribuidas
bacterias
Dentro
de
encuentran
la
captacin,
triclcico,
fosfato
diclcico,
roca
materia
orgnica,
pues
la
biomasa
microbiana contribuye en la formacin del
humus, la conservacin de la estructura del
suelo y la biodegradacin de contaminantes
(Hoffman et al., 2003).
de
microorganismos
incluyendo
con
bacterias
esta
Gram
Pseudomonas
aureofaciens,
de
energa,
la
transformacin
de
fosforo.
Las formas inorgnicas de fsforo son
solubilizadas
por
un
grupo
de
orgnicos,
los
cuales
disuelven
en
la
Enzimas fosfatas:
transformacin
asimilables
por
microorganismos
hasta
compuestos
las
plantas,
juegan
un
los
papel
2.2.2
Enzimas fitasas:
de
los
nutrientes
en
vegetal,
entre
los
que
se
Rhizobium,
Pseudomonas,
fijacin
de
nitrgeno,
induccin
de
sntesis
de
fitohormonas
vegetal,
asociadas
la
del
orgnico.
La
(cido
cetoglucnico,
malnico
glucnico,
cido
cido
gliclico,
succnico),
2-
oxlico,
productos
del
reportados
son
para
estas
Pseudomonas
dos
sp.,
MATERIALES Y MTODOS
MoO 4
PO 412 MoO 3
3 .
Este
ltimo
por
RESULTADOS
1. Siembra de microorganismos:
10
11
3. Caracterizacin microbiolgica:
Se les realizo caracterizacin macroscpica y
microscpica a las cuatro bacterias aisladas
a partir de la prueba de hidrlisis del medio
(Tabla 3), a los hongos que presentaron halo
para la prueba de solubilizacin de fsforo
(Tabla 4) y a los hongos que presentaban un
crecimiento macroscpico similar en varias
cajas de Petri para concluir si se trababa del
mismo o no (Tabla 5). La identificacin de los
hongos se realiz con la ayuda de Juan
Manuel Lpez Fitopatlogo
(Fig.3) La
identificacin de las bacterias se realiz
mediante bibliografas logrando de esta
12
5. Evaluacin cuantitativa:
Los resultados de la evaluacin cuantitativa
fueron los siguientes:
AB
40
50
60
concentracion ppm
AB / Microorganismo
0.44
0.5
0.41
0.36 0.34
0.35
0.4 0.34 0.28
0.31
0.26
0.25
0.3
0.2
0.20.24
0.18
0.2
AB 0.1
0
Microorganismos
4. Evaluacin cualitativa:
Las pruebas cualitativas se determinaron por
la acidificacin de los medios lquidos de
pikovskaya
producido
por
los
microorganismos solubilizadores de fosforo.
13
pH / Microorganismo
7
8
5.1 5.6 5.1 5.4
6 3.7 4.1 3.6 4.1 3.5 3.6 3.5 3.5 4
DISCUSIN
4
2
pH 0
Grafica 1.
4: Relacin
entrede
pH yhalo
concentracin
de fsforodel
soluble en el medio
Prueba
e hidrlisis
comprobando que el microorganismos H11 posee buenas caractersticas
medio:
solubilizadora.
Microorganismos
Microorganismos
2. Caracterizacin microbiolgica:
14
La
caracterizacin
microscpica
y
macroscpica
de
los
respectivos
microorganismos se realiz segn la
respectiva tcnica para cada uno de ellos
descrita en la metodologa, la cual permiti
identificar los microorganismos (Tabla 3, 4 y
5)
y con la ayuda de Juan Manuel,
Fitopatlogo; se logr la identificacin de los
hongos que presentaron halo; siendo
identificado el hongo 1 (H1) como Aspergillus
spp. el hongo 5 (H5) como Beauveria sp. y el
hongo que presento crecimiento en la
mayora de cajas (H3, H7, H1, H7 T1) pero
que no present halo fue identificado como
Trichoderma sp. (Figura 3). Algunos autores
como Cunnimgham y Kuiak 1992, mencionan
que existe la actividad fosfato solubilizadora
por diferentes hongos saprofitos del suelo
tales como Aspergillus niger, Penicillium bilaii,
P. simplicissimun, Trichoderma harzianum,
Cladosporium herbarum y hongos micorrizos,
principalmente del genero Glomus; lo cual
segn los resultados obtenidos confirma que
hongos como Aspergillus spp. y Trichoderma
sp. Son hongos solubilizadores de fsforo.
Los hongos solubilizadores ms estudiados
son Penicillium y Aspergillus (ChunChao et
al., 2007; ElAzouni, 2008; Pandey et
al., 2008). Uno de los mecanismos de
solubilizacin empleado por estos hongos es
la produccin de diversos cidos orgnicos,
como el ctrico, oxlico, mlico y glucnico, y
la quelacin de los minerales que forman los
complejos insolubles con el fsforo (Alam et
al., 2002; ChunChao et al., 2007; Dighton,
2007).
Mediante la caracterizacin macroscpica y
microscpica de las bacterias se logr
identificar una cepa como Pseudomona sp.
(Bacteria 15 N 3) Tabla 3, adems mediante
el uso de una linterna al respaldo de la caja
petri se observ que la cepa 15 daba visos al
contraste con la luz lo cual es caracterstico
15
4. Prueba cuantitativa:
Los microorganismos seleccionados son
aquellos que mejor solubilizan el fosforo
insoluble en un rango de pH 4-5.1 (Grafica 3)
esto se detecta utilizando un mtodo
colorimtrico. (Rittman, 2001).
Este mtodo es el de Molibdato, se utiliza
para la determinacin de fosforo soluble en
solucin acuosa, con el principio de la
formacin del cido fosfoantimolibdeno azul
en la presencia de cido ascrbico (Murphy
y Riley, 1962); en solucin sulfrica los iones
ortofosfato (fsforo soluble) reaccionan con
los iones molibdato, dando como resultado
cido molibdofosfrico, el cual se reduce por
el cido ascrbico a fosfomolibdeno
presentando al cabo de 5 minutos una
coloracin azul en la solucin. Es con esta
solucin con la que se puede cuantificar el
fsforo solubilizado en solucin, en el
CONCLUSIONES
Se logr identificar 13 microorganismos con
posible
capacidad
solubilizadora,
determinado por la acidificacin de los
medios.
Se logr identificar 3 hongos con
capacidades solubilizadoras los cuales
fueron: Aspergillus spp,
Beauveria sp,
Trichoderma sp. De igual manera se logr
determinar una bacteria; Pseudonoma spp.
16
REFERENCIAS
1. Rengel, Z; Marschner P. 25 2005.
Nutrient
availability
rizophere:
differences.
exploiting
New
in
the
genotypic
Phytologyst
168:305-312.
2. Idriss, EE; Makarewicz, O; Farouk,
A; Rosner, K; Greiner, R;Bochow,
H; Richter, T; Borriss, R. 2002.
Extracellular phytase activity of
Bacillus amyloliquefaciens FZB45
contributes to its plant-growthpromoting effect. Microbiology
148:2097-2109.
3. Salimpour, S; Khavazi, K; Nadian,
H; Besharati, H; Miransari, M. 2010.
Enhancing
phosphorous
capable
of
Instituto
Colombiano
17
Innovacin
y
Tecnologa.
Universidad
Tcnica
Federico
Santa Mara. Santiago, Chile. 2010,
182-235 p.
11. (12) Cui F, Li Y, Xu Z, Xu H, Sun K,
Ta, W. Optimization of the mdium
composition for production of
mycelial biomass and exo.plymer
by Grifola frondosa GF9801 using
response surface methodology.
Bioresource Techology. 2006; 97,
1209-1216.
12. Castao, C. (ed.). 2002. Pramos y
ecosistemas
altoandinos
de
Colombia en condicin Hotspot y
Global climatic tensor. Instituto de
Hidrologa,
Meteorologa
y
Estudios Ambientales (Ideam).
Bogot. 387 p.
13. Filip,
Z.
2002.
International
approach to assessing soil quality
by ecologically-related biological
parameters. Agr. Ecosys. Environ.
88, 169-174.
14. Hoffman, J., J. Bezchlebov, L.
Dusek, L. Dolezal, I. Holoubek, P.
Andel, A. Ansorgov y S. Maly.
2003.
Novel
approach
to
monitoring of the soil biological
quality. Environ. Intl. 28, 771-778.
15. Van Elsas, J.D., P. Garbeva y J.
Salles.
2002.
Effects
of
agronomical measures on the
microbial diversity of soils as
related to the suppression of soilborne
plant
pathogens.
Biodegradation 13, 29-40.
16. Das, A.C., A. Debnath y D.
Mukherjee. 2003. Effect of the
herbicides
oxadiazon
and
oxyfluorfen
on
phosphates
solubilizing microorganisms and
their persistence in rice fields.
Chemosphere 53, 217-221.
17. Pankhurst, C. y B.M. Doube. 1997.
Biological indicators of soil health.
CAB International, Washington.
451 p.
18. Torres, D.; Florentino, A. y Lpez,
M. 2006. Indicadorese ndices de
calidad de suelo en un ultisol bajo
diferentes prcticas de manejo
conservacionista
en
Gurico,
Venezuela.
Bioagro.
Volumen
18(2):83-91.
19. Arrieche, I.; Mora, O. 2005. Efecto
de la aplicacin de residuos
orgnicos sobre el cultivo del maz
en suelos degradados del Estado
Yaracuy,
Venezuela.
Bioagro.
17(3):155-159.
20. Alexander, M. 1980. Introduccin a
la Microbiologa del Suelo. Wiley.
Estados Unidos.
21. Navarro
G.
(2003).
Qumica
agrcola: el suelo y los elementos
qumicos esenciales para la vida.
Ediciones Mundi Prensa. Madrid.
Espaa.
22. Havlin J., Beaton J., Tisdale S.L.,
and Nelson W. 1999. Soil Fertility
and Fertilizers. An Introduction to
Nutrient
Management.
Prentice
2012.
Manejo
de
18
Universidad
Nacional
de
19
determination of
natural waters.
phosphate
in
20
21
22