22/10/2015

(Universidad Del Per, DECANA DE AMRICA)

MICROOGANISMOS DE IMPORTANCIA
AGROINDUSTRIAL

Blgo.
Blgo. Jos Manuel Bustamante Agreda

Bioprocesos industriales

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Bacterias y hongos de importancia industrial

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Principales clases de productos

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Microbiologa Industrial
Disciplina que utiliza los microorganismos, cultivados
a gran escala, para obtener productos con alto
rendimiento con valor comercial o realizar
importantes transformaciones qumicas.
Desarrollo:
- Procesos de fermentacin alcohlica
- Sntesis de productos farmacuticos (antibiticos),
aditivos alimentarios (aminocidos), enzimas, y
productos qumicos como butanol y cido ctrico.
Biotecnologa
Microbiana

Microbiologa Industrial
Tradicional

Biotecnologa Industrial

Evolucin dirigida

Microorganismos nativos

Microorganismos sintticos

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Un microorganismos de uso
industrial debe:

Producir en grandes cantidades el producto de inters en

un periodo relativamente corto.

Crecer rpidamente sobre un medio de cultivo barato
disponible en grandes cantidades (Commodity chemicals)
o a partir de residuos de la agroindustria (maceracin de
licores, suero de leche, restos de cosecha, etc.
Reproduccin a base de estructuras (esporas, clulas
vegetativas) que facilite la inoculacin.
Ser susceptible a ser manipulado gentica: ingeniera
gentica y mantenerse estable en el tiempo.
No ser patgeno del hombre, plantas ni animales.

Metabolismo
Catabolismo

Anabolismo
Molculas simples como
glucosa, aminocidos,
glicerol y cidos grasos.

Reacciones anablicas
transfieren
energa
del
ATP
hacia
molculas complejas.

Reacciones catablicas
transfieren energa de
molculas
complejas
hacia el ATP.

Molculas
complejas
como
almidn,
protenas y lpidos.

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Metabolismo Microbiano

Respiracin
Celular
Respiracin
Anaerbica

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Respiracin
Celular

1. Ruta Embden Meyerhof (Glicolisis)

Respiracin
Celular

1. Ruta Embden
Meyerhof
(Glicolisis)

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Respiracin
Celular

2. Ciclo de
Krebs (c.
Tricarboxlicos)

Respiracin
Anaerbica

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Respiracin
Anaerbica

Respiracin
Lctica

Respiracin
Alcohlica

Integracin del Metabolismo Microbiano

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Actividad enzimtica

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Metabolitos Primarios y
secundarios

Metabolitos Primarios: Precursores indispensables para la biosntesis

de aminocidos, nucletidos, vitaminas, azcares, cidos grasos.
Metabolitos Secundarios: Antibiticos, micotoxinas, alcaloides,
factores de crecimiento.

Produccin de Metabolitos

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Metabolitos Primarios

Molculas de bajo PM.

Se forman durante la fase
exponencial de crecimiento (producto
final o intermediario)

Esenciales para el crecimiento:
metabolismo energtico.

Producidos por todos los m.o.
Ejm: Produccin de etanol en
levaduras.
Ejemplos:
Alcoholes: Etanol
Aminocidos: c. Glutmico, Lisina,
ornitina
cidos orgnicos: actico, ctrico,
glucnico
Vitaminas: B12, riboflavina
Polioles: glicerol
Nucletidos: purinas, pirimidinas

Metabolitos Secundarios

Se forman al final de la fase de
crecimiento o en fase estacionaria

No son esenciales para el
crecimiento ni sobrevivencia.

Dependen de las condiciones de
cultivo (composicin del medio)

La sobreproduccin
generalmente es alcanzables.

Especficos de un grupo de m.o.
Ejemplos:
Antibiticos: Penicilina,
eritromicina
Alcaloides
Toxinas

Relaciones entre los metabolitos primarios y secundarios

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Finalidades de las regulaciones del

metabolismo microbiano

Coordinacin metablica: desarrollo de procesos vitales.

Sntesis integrada de enzimas uso racional de los
nutrientes.

Evitar sobreproduccin de metabolitos.
1. Induccin
Enzimas constitutivas
Presentes en notable cantidad.
Presentes en cualquier condicin de
crecimiento.
Ejm. Gliclisis: Glucosa a Piruvato.

Enzimas inducibles
Generalmente inactivas
Necesario la presencia del sustrato de
la enzima.
Ejm, Produccin de amilasa por
Aspergillus sp o Rhizopus sp.

2. Represiones y Activaciones ligadas a la tasa de crecimiento

Crecimiento elevado
Metabolismo secundario reprimido

Crecimiento lento o ausente

Metabolismo secundarios activo.
Ejem. Produccin de penicilina por
Penicillium sp. Alcaloides por
hongos.

3. Regulacin catablica por las fuentes de carbono y nitrgeno

Fuente de carbono
Sntesis de enzimas necesarios para
degradar el sustrato ms asimilable.
Despus, actividad de otras enzimas.
Ejm. Sntesis de celulasas por
glucosa,
almidn,
celobiosa
(Metabolismo secundario)

Fuente de nitrgeno
Represin de enzimas que actan
sobre compuestos nitrogenados por
elevadas concentraciones de NH4+ o
aminocidos.
Ejm: Proteasas, nitrato reductasas,
etc. Ciclo del cido ctrico.

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4. Regulacin por el fosfato

Concentraciones elevadas
Represin de algunas enzimas
(ortofosfatos).
Ejm. Biosntesis de alcaloides

5. Regulacin feedback
Inhibicin Feedback
El metabolito final de una va
biosntesis inhibe la accin de una
enzima precoz (la 1ra enzima).

Represin feedback
El metabolito final reprime la sntesis
de todas las enzimas de una
secuencia

Reduccin en la sntesis del metabolismo secundario.

Biosntesis del
C. Ctrico por
Asperigullus
niger

Bajo Mn++

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Diagrama de las operaciones en el proceso de recuperacin de un

producto biolgico a partir de un caldo fermentativo
Intracelular

Clulas, tejido en el
fermentador/reactor

Product
o
En clulas,
etc.

Producto en
caldo
O fase acuosa

Extracelular

Reactor
Separador

Liberacin del
producto o especies
indeseadas desde las
clulas

Separacin
del caldo
Sedimentacin

Desintegracin de
clulas:
Mecnica
Fsica
Qumica
Enzimtica

Filtracin
Centrifugacin

Separadores/
Purificacin
Precipitacin
Extraccin por solvente
Intercambio Inico
Absorcin
Filtracin en gel
Mtodos de Afinidad
Destilacin
Membranas
Electroforesis
Congelamiento
diferencial

Extraccin directa de
clulas completas:
Solvente/detergente
Etc.

Liberacin del producto

de fragmentos

Biomasa,
producto o
desechos

Lixiviacin

Secado
Pureza requerida??
Presencia de compuestos
qumica y fsicamente
parecidos????

Concentracin

Bandeja, rodillo,
Tambor, etc.
Fluidizado: Secado en
cama, Congeladosecado

Evaporacin, Membranas
Precipitacin
Absorcin, intercambio inico, afinidad,
etc.
Congelado-Descongelado, cristalizacin

Operaciones Unitarias de
Recuperacin
El caldo de fermentacin puede ser tratado con los siguientes
mtodos, que se divide en:

Mecnico

Qumico

Filtracin

Absorcin

Centrifugacin

Intercambio Inico

Evaporacin

Cromatografa de
columna

Cristalizacin

Cromatografa de
afinidad

Secado

Extraccin por solvente

Osmosis Reversa

Electroforesis

Ultrafiltracin

Electrodilisis

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I. Operaciones Mecnicas

Filtracin

Centrifugacin

1er en el aislamiento del producto de

fermentacin: Slidos suspendidos
separados de la fase lquida.

2do. en el aislamiento. Slidos

suspendidos separados de la fase
lquida por aumento del asentamiento
gravitacional.

Tiempo requerido para

completar la remocin
de partculas

Lodo lquido
Filtro
Filtro de
algodn
Soporte
Filtrado

Secado
ltimo paso en proceso
de separacin. Remocin
de la humedad o del
solvente de partculas
slidas.
Remocin
de
la
humedad o del solvente
de partculas slidas.
Desventajas:
Inactivacin de materiales
lbiles al calor.

Evaporacin
Remocin del solvente a
travs de vaporizacin del
mismo.
Desventajas:
Dao o destruccin de
productos si son expuestos
a temperaturas muy altas
durante largos periodos de
tiempo.

Cristalizacin
Cambio de solubilidad de uno
de los compuestos disueltos de
tal manera que deja la solucin
como un slido.
Adecuado
para
aquellos
productos de fermentacin que
tienen una baja solubilidad en
el solvente utilizado.

Ventajas:
Mnima
prdida
de
productos
trmicamente
sensibles (Tto. a bajas
temperaturas)

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Microfiltracin

Ultrafiltracin

smosis Reversa

Procesos de separacin a travs de una membrana, barrera entre dos fluidos.

La propiedad de la membrana es su permeabilidad o tasa de transferencia de
un componente a travs de sta.
Mtodo/
Caracterstica

Microfiltracin

Ultrafiltracin

smosis Reversa

Tamao del poro de nm

10 a 300 nm

1 a 1.25 nm

0.3 a 1 nm

Rango de presin
hidrosttica

1 atm.

1 a 10 atm.

10 a 100 atm.

Separacin de un soluto de una solucin forzando al

solvente a fluir a travs de una membrana usando
una gradiente de presin hidrulica.

Lodo lquido
Filtro
Filtro de
algodn
Soporte
Filtrado

El soluto presenta
dimensiones dentro
del
orden
de
magnitud
de
las
dimensiones
del
solvente.

Extraccin por Solventes

Equilibrio entre solventes inmiscibles usualmente agua y un lquido orgnico.
Pasos:
(1) Mezcla ntima de los dos solventes hasta que el solutos
esta distribuido en ambos lquidos
(2) Separacin de las dos fases.

Electrofores

Separacin de
ismolculas cargadas o iones usando un campo elctrico.
Migracin diferencial de solutos en este medio (soluciones acuosas, suspensiones o
geles) debido a la fuerza elctrica que separa los solutos. Mayor grado de resolucin al
incorporar un elemento de discontinuidad (gradiente de pH, membranas cargadas,
geles)
Mtodo/
Electroforesis
Electrodilisis
Caracterstica
Tipo de separacin

Acenta pequeas diferencias en la

movilidad inica en un campo
elctrico usando un transportador de
fluido en movimiento.

Concentra
componentes
sobre la base de la
electromigracin a travs
de membranas inicas.

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Adsorcin

Intercambio
Inico

Cromatografa
de columna

Cromatografa
de afinidad

Tcnicas de separacin en el cual los compuestos removidos o solutos

establecen un equilibrio en sitios de un material de fase slida (columna)
y la solucin.
Mtodo/
Caracterstica

Adsorcin

Intercambio
Inico

Cromatografa
de columna

Cromatograf
a de
afinidad

Tipo de unin a Polaridad

o Intercambio de Absorcin,
la fase slida
Unin qumica iones entre la Intercambio
(columna)
dbil
fase lquida y inico
o
slida
material Sieve
molecular .

Unin
con
alto nivel de
selectividad a
ligandos
covalentemen
te unidos a la
matriz slida.

1ro. Unin a la columna

del
material
de
separacin.
2do.
Elucin
en
fracciones
separadas
colectadas

Principales productos de la Microbiologa

Industrial
Vitaminas
Vitamina B12

Riboflavina

Vitamina B12
Producido por por: Propionibacterium y Pseudomonas (Cobalto)
Importancia: Nutricin del Hombre y animales. Deficiencia produce
anemia perniciosa (B12).
Rivoflavina
Producido por: Mohos, levaduras y bacterias
Importancia: precursor del FAD y FMN (reacciones de oxido reduccin)
Medio de cultivo: Co regula la alta produccin de B12.

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Aminocidos
Aminocidos de uso alimentario: aditivos alimentarios, en medicina, en la
industria qumica.
AA ms importante: c. Glutmico (glutamato monosdico)
Ac. Aspartico y fenilalanina: Edulcorante artificial de bebidas dietticas
Aspartamo.
Lisina: AA esencial para el hombre y animales.
Ejm. AA lisina por Brevibacterium flavum

Cepas
mutantes

Resitentes al anlogo lisina Saminoetil cistena

Biotransformacin microbiana
Esteroides: Cortisona e Hidroxicortinosa
Uso de microorganismos como biocatalizadores de reacciones qumicas a
travs de su cultivo en fermentadores donde acta sobre un compuesto
qumico (esteroles).
Ejm. Produccin de Hidroxiprogesterona por Rhizopus nigricans
Purificacin del caldo fermentativo

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Enzimas
Extracelulares

Intracelulares
Presentes en interior celular
Accin: Rx Anablicas y Catablicas

Presentes en el medio de cultivo.

Medio de cultivo: Celulosa, Almidn,
Protenas
Industria: Alimentaria, lctica, txtil,
Farmacutica, Agrcola

Proteasas, amilasas y glucosa isomerasa

Proteasas: Mayor produccin industrial. Ejemplo detergentes (lipasas, amilasas, etc.).
Microorganismos productores alcalfilos: Bacillus licheniformis (pH: 9 -10)
Amilasas y glucoamilasas: Produccin de glucosa a partir del almidn.
Glucosa isomerasa: Produccin de fructuosa a partir de glucosa (edulcorantes, jarabes)
produccin supera los 10000 millones de kilogramos anuales.

Enzimas

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Extremoenzimas: A partir de m.o. extremfilos

Investigacin:
- PCR (Taq polimerasa)
Produccin:
- Proteasas, amilasas,
celulasas, xilanasas,
pululanasas

cidos orgnicos
Vinagre: c. Actico
Yogurt: c. Lctico
c. ctrico

Vinagre
Conversin del etanol en c. Actico
Por bacterias del cido acticos:
Acetobacter y Gluconobacter. Poseen
la enzima Ubiquinona (quinonas).
Proceso aerbico
Materia prima: vino, cerveza, arroz
fermentado, sidra

c. ctrico
A. niger
Previo tratamiento con Sacarosa
(Fructuosa + Glucosa)
Materia: Melaza, jarabe de glucosa,
hidrolizados de almidn, sacarosa,
jarabe de caa de azcar, remolachas.
Proceso aerbico

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Produccin de Biomasa
Clulas de levaduras
Condicin aerbica
Produccin en fermentadores
Sustrato: Melaza, c. Fosfrico, sulfato de amonio

Industria del vino, pan

Alcohol

Fermentacin alcohlica
Condicin anaerbica

Produccin de etanol

Produccin de Biomasa

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FERMENTACIONES INDUSTRIALES

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