Fundamento lia

En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el
sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio, son los indicadores de la produccin de
cido sulfhdrico. El purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5.2, y de color violeta a pH igual o mayor a 6.8.
Por decarboxilacin de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. La decarboxilacin de la lisina, tiene
lugar en medio cido, por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada.
Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son fermentadores de la glucosa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al amarillo, pero a las 24
hs de incubacin se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo.
La produccin de sulfuro de hidrgeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formacin de sulfuro de hierro.
Las cepas de los gneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella, desaminan la lisina, esto produce un cido alfa-ceto-carbnico, el cual, con la sal de hierro y bajo la
influencia del oxgeno forma un color rojizo en la superficie del medio.

Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Peptona de gelatina

5.0

Extracto de levadura

3.0

Glucosa

1.0

Lisina

Citrato de hierro y amonio

10.0

0.5

Tiosulfato de sodio

0.04

Prpura de bromocresol

0.02

Agar

15.0

Suspender 35 g del medio deshidratado en un litro

de agua destilada. Dejar embeber unos 15 minutos.
Calentar cuidadosamente, agitando con frecuencia y
hervir durante un minuto hasta la disolucin
completa. Distribuir y esterilizar a 121C durante 15
minutos. Enfriar en pico de flauta dejando un fondo
vertical apto para la puncin.

pH final: 6.7 0.2

1- Decarboxilacin de la lisina:
-Prueba Positiva: Pico violeta/fondo violeta.
-Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo.
2-Desaminacin de la lisina:
Pico rojizo/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del gnero Proteus, Providencia y alguna cepas de Morganella spp.
3-Produccin de cido sulfhdrico:
-Prueba positiva: Ennegrecimie

nto del medio (especialmente en el lmite del pico y fondo)

Color en el pico de flauta

Color en la base del

tubo

Ennegrecimiento del medio

Proteus mirabilis ATCC 43071

Rojo

Amarillo

Negativo

Salmonella typhimurium ATCC 14028

Prpura

Prpura

Positivo

Salmonella enteritidis ATCC 13076

Prpura

Prpura

Positivo

Providencia spp.

Rojo

Amarillo

Negativo

Citrobacter freundii

Prpura

Amarillo

Positivo

Morganella spp.*

Rojo

Amarillo

Negativo

Edwarsiella spp.

Prpura

Prpura

Positivo

Microorganismos

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603

Prpura

Prpura

Negativo

Escherichia coli ATCC 25922

Prpura

Prpura

Negativo

*Algunas especies de Morganella spp., pueden desaminar la lisina. Medio preparado: color violeta.

CITRATO
Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como nica fuente de carbono y energa.
Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y el citrato de sodio es la nica fuente de carbono. Ambos
componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimtico. El
cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio de
cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como
nica fuente de nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a travs del ciclo del cido tricarboxlico. El
desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en presencia de un medio alcalino, da origen a cidos
orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es
indicativo de la produccin de citrato permeasa.

Frmula (en gramos por litro)

Citrato de sodio

2.0

Cloruro de sodio

5.0

Fosfato dipotsico

1.0

Instrucciones

Suspender 24,2 g del medio deshidratado

por litro de agua destilada. Dejar reposar
5 minutos y mezclar calentando a
ebullicin durante 1 o 2 minutos. Distribuir
en tubos y esterilizar en autoclave a
121C durante 15 minutos. Enfriar en
posicin inclinada.

Fosfato monoamnico

1.0

Sulfato de magnesio

0.2

Azul de bromotimol

0.08

Agar

15.0

pH final: 6.9 0.2

citrato
Resultados
-Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.
-Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color.

Microorganismo

Citrato permeasa

Color del medio

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603

Positivo

Azul

S. typhimurium ATCC 14028

Positivo

Azul

E. coli ATCC 25922

Negativo

Verde

S. flexneri ATCC 12022

Negativo

Verde

Mac Conkey Agar.

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que
utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla
de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.
Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorcin en las
colonias, y la precipitacin de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Peptona

17.0

Pluripeptona

3.0

Lactosa

10.0

Mezcla de sales biliares

1.5

Cloruro de sodio

5.0

Agar

13.5

Suspender 50 g del polvo por litro de agua

destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta
uniformar. Calentar suavemente y hervir 1 a 2
minutos hasta disolver. Esterilizar en autoclave
a 121C durante 15 minutos.

Rojo neutro

0.03

Cristal violeta

0.001

pH final: 7.1 0.2

Resultados

Microorganismos

Colonias

Escherichia coli ATCC 25922

Rojas con halo turbio

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603

Rosadas mucosas

Salmonella typhimurium ATCC 14028

Incoloras, transparentes

Shigella flexneri ATCC 12022

Incoloras, transparentes

Proteus mirabilis ATCC 43071

Incoloras, transparentes

Enterococcus faecalis ATCC 29212

Diminutas, incoloras, opacas

Caractersticas del medio

Medio preparado: rojo prpura

TSI Agar
Medio universalmente empleado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a la produccin de cido
sulfhdrico.
Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son
los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la
fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el
cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.
Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol,el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato
de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.

Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Extracto de carne

3.0

Pluripeptona

20.0

Cloruro de sodio

5.0

Lactosa

10.0

Sacarosa

10.0

Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar

bien y calentar con agitacin frecuente, hervir 1 o 2 minutos
hasta disolucin total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos
de ensayo. Esterilizar a 121C por 15 minutos. Enfriar en pico
de flauta profundo.

Glucosa

1.0

Sulfato de hierro y amonio

0.2

Tiosulfato de sodio

0.2

Rojo de fenol

0.025

Agar

13.0

pH final: 7.3 0.2

Resultados1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido sulfhdrico.

Microorganismo

Pico/Fondo

Produccin de gas

Produccin decido
sulfhdrico

E. coli ATCC 25922

A/A

K. pneumoniae ATCC 700603

A/A

A: cido
MEDIO PREPARADO COLOR ROJO
K: alcalino

P. mirabilis ATCC 43071

K/A

S. typhimurium ATCC 14028

K/A

S. enteritidis ATCC 13076

K/A

S. flexneri ATCC 12022

K/A

P. aeruginosa ATCC 27853

K/K

Christensen Medio (Urea Agar Base).

Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad uresica.
Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus spp., otras enterobacterias y estafilococos.

Fundamento
En el medio de cultivo, la triptena y la glucosa, aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y
el rojo de fenol es el indicador de pH.
Algunas bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa liberando amonaco y dixido de carbono. Estos productos alcalinizan el medio haciendo virar
el rojo de fenol del amarillo al rojo. En este medio, la fermentacin de la glucosa activa la enzima ureasa, acelerando la velocidad del metabolismo en aquellos
organismos que hidrolizan lentamente la urea, como especies de Enterobacter o Klebsiella.
Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Triptena

1.0

Glucosa

1.0

Cloruro de sodio

5.0

Fosfato monopotsico

2.0

Suspender 24 g de polvo en 950 ml de agua

destilada. Dejar reposar 2 minutos. Esterilizar
en autoclave a 121C durante 15 minutos.
Enfriar a 50C y agregar 50 ml de una solucin
de urea al 40% previamente esterilizada por
filtracin o cloroformo. Fraccionar en tubos de
hemlisis y solidificar en pico de flauta con

Rojo de fenol

0.012
fondo profundo.

Agar

15.0
pH final: 6.8 0.2

Resultados
Microorganismo

Actividad uresica

Color del medio

Proteus mirabilis ATCC 43071

Positiva

Rojo-Rosado

K. pneumoniae ATCC 700603

Positiva dbil

Rojo-Rosado

Escherichia coli ATCC 25922

Negativa

Amarillo

S. flexneri ATCC 12022

Negativa

Amarillo

S. typhimurium ATCC 14028

Negativa

Amarillo

Limitaciones
-Bacterias que hidrolizan lentamente la urea, como ser Klebsiella, Enterobacter y Citrobacter, viran al color rojo-rosado de todo el medio de cultivo luego de varios
das de incubacin.
-No calentar o sobrecalentar el medio de cultivo porque la urea se descompone facilmente.
Caractersticas del medio
Medio preparado: amarillo