INTRODUCCION:

La lipasa es una enzima ubicua que se usa en el organismo para disgregar las grasas de
los alimentos de manera que se puedan absorber. Su funcin principal es catalizar la
hidrlisis de triacilglicerol a glicerol. Las lipasas se encuentran en gran variedad de seres
vivos. Esta enzima en humanos se encuentra en la leche materna y, segn estudios
bioqumicos, es idntica a la enzima colesterol esterasa (o lipasa pancretica no
especfica), por lo que se supone que el origen es pancretico y llega a las glndulas
mamarias a travs de la circulacin sangunea. La funcin principal de esta lipasa gstrica
es ayudar a la absorcin de grasas. Hay que destacar que la produccin de jugo gstrico
est controlada por dos mecanismos:
Nervioso (sensaciones visuales, gustativas, etc).
Hormonal, a travs de la hormona gastrina.
En microorganismos, las lipasas se encuentran presentes para la digestin de grasas, la
reconstitucin del organismo y el metabolismo lipoproteico. Las clulas vegetales las
producen para fabricar reservas de energa.

OBJETIVOS:
Al finalizar esta prctica, el alumno ser capaz de:

Determinar por titulacin cido-base la cantidad de miliequivalentes de cidos

grasos
libres generados por a accin enzimtico de la lipasa pancretica

Apreciar el efecto de las sales biliares sobre el aceite y la correspondiente

generacin
de los cidos grasos por accin de la lipasa pancretica

PROCEDIMIENTO:
Primero rotulamos cuatro tubos de ensayos con los nombres de blanco (1y2); y tubo (1y2).
Luego con los siguientes datos de la tabla preparamos las soluciones en cada tubo de
ensayo
mL. Aceite neutralizado
mL. Buffer Fosfato 0,1M pH 8
mL. Sales biliares 0.25 % en
buffer
mL. Agua destilada
mL de Pancreatina 1% (en
buffer)

1
1.0
--2.0

B1
----2.0

2
1.0
2.0
----

B2
--2.0
---

2.0
5.0

3.0
5.0

2.0
5.0

3.0
5.0

La Pancreatina es un extracto de enzimas que contiene a la lipasa pancretica. Agitar los

tubos fuertemente por 1 min. Incubar por 1 hora a 37C (Bao Mara).
Mezclar los tubos cada 10 minutos en el la hora de incubacin. Adicionar II gotas de
indicador de fenolftalena a cada tubo antes de la titulacin.

Titular cada tubo con NaOH 0.05N hasta coloracin rosa, anotar el gasto en mL. Restar el
gasto de los tubos blancos (B1 y B2) a los tubos 1 y 2 respectivamente.

RESULTADOS:
Gasto en ml de los cuatro tubos:
GB1
10,3
ml

GB2
7,8 ml

GT1
12,2 ml

GT2
10,4 ml

Restando los gastos:

GT1 GB1
1,9 ml

GT2 GB2
2,6 ml

Expresar la acidez de cidos grasos liberados en miliequivalentes.

Clculo de los resultados:
Se realizan mediante la siguiente expresin:
Miliequivalentes mEqacg = mEqNaOH = N x Greal

1. Miliequivalentes = 0,05 x 1,9 = 0,095 ml

2. Miliequivalentes = 0,05 x 2,6 = 0,13 ml

CONCLUSIONES:
Con respecto a la prctica se puede concluir:
La actividad de la enzima se evala por el incremento en el medio de incubacin de
los cidos grasos libres que se liberan en el curso de la hidrlisis de la grasa por la
lipasa pancretica.

La concentracin de los cidos grasos libres se determina mediante la valoracin

con NaOH 0,05N; en consecuencia a mayor acidez producida, mayor gasto del
titulante y mayor actividad enzimtica.