DESARROLLO DE LA ESCHERICHIA COLI EN MEDIO LIQUIDO

OBJETIVO:
Construir una curva de relacin para la medida indirecta del crecimiento
diversas bacterias E. coli
Inocular unos medios de cultivo liquido de la bacteria Escherichia coli
para observar su crecimiento en el tiempo
MARCO TEORICO
Medios lquidos: Son los que se presentan en este estado,
denominndose por esta razn caldos. El medio lquido ms utilizado es
el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente extracto de
levadura, tripteina de soya caldo , cloruro de sodio y agua destilada.
Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtencin de una
suspensin bacteriana de una determinada concentracin. Cuando se
aade una pequea cantidad de clulas vivas a una disolucin lquida
que contiene nutrientes esenciales a pH y temperatura adecuados, el
cultivo crece.
El crecimiento tiene dos manifestaciones diferentes segn la naturaleza
de las clulas implicadas. Para organismos unicelulares, que se dividen
cuando crecen, el aumento de biomasa va acompaado del aumento del
nmero de clulas. Por tanto, el problema se plantea como el de
crecimiento de la poblacin Durante el crecimiento de una clula
ocurren otros dos procesos asociados: captacin de ciertos materiales
del medio y liberacin de productos metablicos finales a los
alrededores.
La velocidad de estos procesos vara mucho a lo largo del crecimiento
celular, y la complejidad de los modelos que proporcionen la descripcin
cintica adecuada depende de la complejidad del cultivo y del objetivo
con el que se plantee la cintica
Fase de latencia, en la que no se produce un aumento sustancial del
nmero de clulas y en la que tiene lugar la adaptacin al medio y
condiciones de cultivo. A continuacin se inicia la fase de crecimiento
exponencial, en la que el crecimiento se efecta a la velocidad
especfica constante. En esta fase se puede considerar que el
crecimiento est balanceado, en el sentido de que no existen
limitaciones y el comportamiento metablico y fisiolgico de las clulas
es bsicamente constante (a veces se define como un comportamiento

pseudoestacionario) Finalmente se llega a una fase de muerte celular,

en la que decrece el nmero de clulas: una vez que se agotan las
reservas de nutrientes, los microorganismos metabolizan su propio
material celular, sin que haya reposicin, de forma que tiene lugar la
destruccin de las clulas (respiracin endgena). Turbidimetra: La
turbidimetra mide la reduccin de la transmisin de luz debido a
partculas de una suspensin y cuantifica la luz residual transmitida.
Estudios tericos y experimentales han mostrado que soluciones diluidas
de diferentes tipos de bacterias, independientemente del tamao
celular, tienen casi la misma absorbancia por unidad de concentracin
de peso seco. Esto quiere decir que, en soluciones diluidas, la
absorbancia
es
directamente
proporcional
al
peso
seco,
independientemente del tamao celular del microorganismo. Sin
embargo, se encuentran absorbancias muy diferentes por partcula o por
UFC (Unidad Formadora de Colonia) cuando los tamaos de las clulas
bacterianas son diferentes. Por esta razn, para estimar el nmero de
microorganismos tota-les o el nmero de microorganismos viables de
una suspensin bacteriana debe realizarse una "curva de calibracin"
con cada tipo de microorganismo, slo de esta forma es posible
relacionar Absorbancia (Densidad Optica) con el nmero de
microorganismos totales o con UFC.

FLUJOGRAMA DE PROCEDIMIENTO
Medio liquido
50 ml

Sembrar una colonia

Incubar a
37C

Agitar peridicamente
Medir la
absorbancia a
640 nm

Utilizar el blanco para

Blanco

Medio lquido
50 ml guardar a
4 C despus
del autoclavado

Calibrar el instrumento

Repetir el proceso 3
veces

Guardar el cultivo bacteriano a 4C

La muestra se utiliza en
la siguiente prctica

CALCULO DE LA PREPARACIN DEL MEDIO DE CULTIVO

Extracto de levadura

Tripteina soya caldo

5g

35g

1000ml
50ml

X= 0,25g

X= 1,75g

Cloruro de sodio
10g
X
X= 0,5g

1000ml
50ml

1000ml
50ml

REGISTRE
EN
LA
TABLA
DE
MEDICIN
ESPECTROFOTMETRO VERSUS ABSORBANCIA
Determinaciones
1
2
3
4

Tiempo horas
1
3
15
19

EN

EL

absorvancia
0,168
1,463
1,440
1,617

1.8
1.6
1.4
1.2
1
absorvancia 0.8
0.6
0.4
0.2
0

Determinaci

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17

OBSERVACIONES
Realizar la practica con cuidados y mediciones correctas para la
preparacin de cultivo.
Tener en cuenta el remover la medio de cultivo cada 90 min para que
siga el crecimiento bacteriano.
Realizar de manera cuidadosa las lectura de en el espectrofotmetro y
evitar la contaminacin del medio.
CONCLUSIONES

Se inocularon correctamente unos medios de cultivo lquido con la

bacteria Escherichia Coli para un posterior anlisis de absorbancia en el
espectrofotmetro, proceso que se repiti cada 90 minutos.
BIBLIOGRAFIA
http://www.ugr.es/~cjl/medios%20de%20cultivo.pdf
https://libroslaboratorio.files.wordpress.com/2012/09/medios-de-cultivoen-un-laboratorio-de-microbiologc3ada.pdf
https://prezi.com/ssnzrtvaxt7r/determinacion-de-la-curva-decrecimiento-de-la-bacteria-esc/

U.A.G.R.
M.
Materia:

Tema

BIOTECNOLOGIA

Trabajo Prctico De

Laboratorio
Nombre:

Docente:

Grupo

Fecha:

Ximena Sanabria Torrez

Dr. Dante Flores
A1
1 de octubre del 2015